/11 1. KULLANIM AMACI

Transkript

1 Platelia Rubella IgM 1 plaka İNSAN SERUM VEYA PLAZMASINDA ENZİM İMMÜNOASSAY YÖNTEMİ İLE IgM ANTİKORLARININ RUBELLA VİRUSÜ İLE KALİTATİF TESPİTİ /11 1. KULLANIM AMACI Platelia Rubella IgM, insan serum veya plazmasındaki rubella virüsü ile IgM antikorlarının kalitatif belirlenmesi için immonocaptur formatını kullanan immunoassay bir testtir. 2. KLİNİK DEĞERİ Rubella tüm dünyada görülen ve kızamıkcık olarak bilinen viral bir hastalıktır. Rubella infeksiyonu,çocuklarda ve yetişkinlerde ağırlıklı olarak görülen hafif bir hastalıktır. Klinik belirtileri,düşük derecede ateş,başağrısı,boğaz ağrısı ve genel olarak deri döküntülerini içerir. Buna rağmen,rubella infeksiyonu hamilelik süresince çok ciddidir, sağırlık,katarak,zihinsel gerilik ve fetal ölümü içeren çoklu konjenital komplikasyonları belgelenmiştir. Okul öncesi çocukların savaşçıl immünizasyonu Rubella epidemiklerinin sıklığını büyük çoğunlukla azaltır.immün durumun doğru gözlemlenmesi, özellikle çocuk doğurma yaşındaki kadınlar için hala gereklidir. Gebe kalmadan önce kadınlarda Rubella IgG antikorlarının görülmesi, hamilelik esnasında olası Rubella viral infeksiyonundan fetali korunmanın garantisini sağlar. Aşının etkisi, serumdaki bağışıklıkdan sonra Rubella IgG antikorlarının belirlenmesi ile saptanabilir de Rubella virusünün izolasyonundan beri,spesifik Rubella antikorlarının tespiti virusün teratojenik riskinden dolayı büyük ilgi uyandırdı. Geçmişte,serum nötralizasyonu,kompleman bağlanması ve immünofloransı içeren çok çeşitli test metodları geliştirildi. Bu deneyleri rutin laboratuvar düzeneklerinde gerçekleştirmek zordu ve düzensiz veya stabil olmayan sonuçlar elde edilmekteydi. Hemaglütinasyon inhibisyon teknikleri, akut infekte durumda ve hastanın immün durumunda hızlı teşhis sağlar de Engvall ve Perlman ilk enzim immünossay prosedürünü geliştirdi. Enzim immünoassay prosedürünün gelişmesi, antijen ve antikorların yaygın çeşitliliklerinin tespitinde hassasiyet ve özgüllüğün gelişmesine katkıda bulundu. Minumum üç hafta ara ile alınan iki hasta numunesinde IgG antikor titresinin önemli derecede (titrasyonda ikiye katlanma) artış göstermesi veya IgM varlığının gösterilmesi, serolojik testlerin ardışık yorumlanması, klinik verilerde bu infeksiyonun işaretlerinin olmaması halinde bile Rubella virüsünü yorumlama kanıtı olarak değerlendirilmelidir. 3. TESTİN PRENSİBİ Platelia Rubella IgM, IgM in katı halde tutulumu ile enzim immunoassay yöntem kullanılarak insan serum veya plazmasındaki rubella virüsü ile IgM antikorlarını belirlemek için kullanılan bir test tir. Mikroplet in kuyucukları katı halde anti-insan µ zincir antikorları ile kaplanır. Peroksidaz olarak isimlendirilen monoclonal anti rubella antijen antikoru ve rubella antijeninin karışımı konjugat olarak kullanılır. Test aşağıda belirtilen adımlara göre çalışılır. İlk Adım Hasta numunelerini ve kalibratörleri 1/21 oranında dilüe edilir ve mikroplet in kuyucukklarına dağıtılır. 37 C de bir saat inkübe edilir. Bu esnada numunede bulunan IgM antikorları, mikroplet in kuyucuklarının üzerinde bulunan anti µ antikorlarına bağlanır. İnkübasyondan sonra IgG ve serumda bulunan diğer proteinler yıkama ile uzaklaştırılır. İkinci Adım Konjugat (peroksidaz olarak isimlendirilen anti rubella monoclonal antikorları ve rubella antijeninin karışımı) mikroplet'in kuyularına eklenir. 37 C de 1 saatlik bu inkübasyon esnasında, konjugat, son olarak mikroplet de yakalanan özel IgM anti rubella antikorlarına bağlanır. Bağlanmayan konjugat, inkübasyonun sonunda yıkamalar ile uzaklaştırılır. Üçüncü Adım Immün kompleksin varlığı (anti insan µ zincirleri/ IgM anti rubella/rrubella antijeni/ anti rubella monoclonal antikorı peroksidaz olarak isimlendirilir), enzimatik geliştirme solüsyonunun herbir kuyucuğa eklenmesiyle gösterilir. Dördüncü Adım Oda ısında inkübasyondan sonra ( C) enzimatik reaksiyon, 1N sülfirik asit solüsyonunun eklenmesi ile durdurulur. 450/620 nm ye ayarlanmış bir spektrofotometre ile elde edilen optic yoğunluk okumaları, serumda bulunan Rubella IgM antikorlarının miktarı orantılıdır.

2 4. KİTİN BİLEŞENLERİ Kitin malzemelerin miktarları 96 test yapacak şekilde hesaplanmıştır. Tüm kitler yalnızca in-vitro diyagnostik kullanım içindir. Etiket Kitin Tabiatı Tanıtım R1 Microplate Mikroplet:(Kullanıma hazır): anti-insan µ zincirleri ile kaplı, 8 kırılabilir kuyulu,12 strip 1 R2 R3 R4 R5 R6a R6b R7 Concentrated Washing Solution (20x) Negative Control Calibrator Positive Control Antigen Conjugate (101x) Diluent Konsantre yıkama solüsyonu (20x):TRIS- NaCl buffer Yıka (ph 7.4),%2 Tween 20 Solusyonu (x20) Koruyucu: 0,04% ProClin 300 Negatif Kontrol: Rubella IgM antikorları için negatif HbsAg,antiHIV1,antiHIV2,antiHCV için negatif Insan serumu Koruyucu: 0,1% ProClin 300 Kalibrator: anti HCV, anti HIV1, anti HIV2 ve HbsAg antijeni için negatif ve Rubella IgM antikorları Için pozitif insan serumu Koruyucu: 0,1% ProClin 300 Pozitif Kontrol: Rubella IgM antikorları için reaktif HbsAg antijeni,antihiv1,antihiv2,antihcv için negatif Insan serumu Koruyucu: 0,1% ProClin 300 Rubella Antijen: Liyofilize Rubella antijeni Koruyucu: 0,36% ProClin 300 Konjugat (101x): Peroksidaz isimli Murin monoclonal anti Rubella antikoru Koruyucu: 0,16% ProClin 300 Numune ve Konjugat için Dilüent (Kullanıma hazır):tris-nacl buffer (ph 7.6), bovine serum albumin,%0.1 tween 20 ve fenol kırmızı Koruyucu: 0,15% ProClin x 70 ml 1 x 0,75 ml 1 x 0,75 ml 1 x 0,75 ml 4 x q.s. 8,0 ml 1 x 0,4 ml 1 x 80 ml R9 Chromogen TMB Kromojen (Kullanıma hazır): tetrametilbenzidine (<0.1%),H2O2 (<1%) 1 x 28 ml R10 Stopping Solution Durdurma Solüsyonu (Kullanıma hazır):1n sülfirik asid solusyonu Saklama koşulları ve son kullanım tarihleri için lütfen kutunun içinde belirtilen talimatlara uyunuz. 1 x 28 ml 5. ÖNLEMLER VE UYARILAR Sonuçların güvenilirliği, aşağıda belirtilen iyi laboratuvar pratiklerinin doğru uygulanmasına bağlıdır: Son kullanma tarihi geçmiş kitleri kullanmayın. Bir verilen test çalışmasında farklı lotlardan kitleri karıştırmayın. Uyarı:Yıkama solusyonu için(r2,etiket tanımlama:20 x yeşil renkli), Kromojen (R9, etiket tanımlama:tmb solusyonu,turkuaz renkli) ve durdurma solusyonu (R10,etiket tanımlama: 1N,kırmızı renkli), kitin içerdiği bu lot lardan başka lotlarla da kullanılabilir, bu reaktifler tamamen eşit sağlanmıştır ve çalışmada aynı lot numarası kullanılır. Uyarı: İlave olarak yıkama solüsyonu (R2, etiket tanımlama:20x yeşil renkli) çeşitli Bio-Rad kitlerinin içinde bulunan diğer iki yıkama solüsyonları ile karıştırılabilir (R2, etiket tanımlama: 10x mavi renkli veya 10x turuncu renkli).bu solüsyonların doğru hazırlanmasına dikkat edilmelidir. Verilen bir test çalışması için sadece bir karışım kullanılmalıdır. Kullanmadan önce kitlerin oda ısısına getirilmesi için 30dk beklenmelidir. ( C) Herhangi bir kontaminasyondan sakınarak kitleri dikkatli çözün veya dilüe edin. Reaktif buharlarının (asid,alkalin,aldehid buharları) veya tozun bulunduğu ortamda konjugatın enzimatik aktivitesi değişebileceğinden testi gerçekleştirmeyin. Deiyonize su ile yıkama ve arındırma boyunca cam malzeme kullanın,tercihen tek kullanımlık. Bu işlemde mikroplet in yıkanması kritik bir adımdır. Önerilen sayıda yıkama yapın ve tum kuyuların tamamen doldurulduğundan ve tamamen boşaltıldığından emin olun. Yanlış yıkama hatalı sonuçlara neden olabilir. Kit dağıtımı ve yıkama işleminin sonunda mikropletin kurumasına izin vermeyin. Geliştirme solüsyonunu ve konjugatı dağıtmak için asla aynı kabı kullanmayın.

3 Enzimatik reaksiyon metallere veya metal iyonlarına karşı çok hassastır. Bundan dolajı kromojen veya konjugat içeren çeşitli solusyonlar ile metal elementlerinin temas etmesine izin vermeyin. Kromojen solüsyonu (R9) renksiz olmalıdır. Mavi rengin oluşmaya başladığı görüldüğünde rektif kullanılamaz ve yenisi ile değiştirilmelidir. Her numune için yeni bir pipet ucu kullanın. Pipetlerin ve diğer ekipmanların doğruluğunu ve güvenilirliğini kontrol edin. SAĞLIK VE GÜVENLİK TALİMATLARI Reaktiflerin hazırlanmasında insan kaynaklı metaryaller kullanılmaktadır ve bu reaktifler HbsAg, anti HCV, anti HIV1/2 testleri için negatif olarak bulunmuştur. İnfeksiyon ajanlarının yokluğunu kesinlikle garanti edebilen hiç bir yöntem olmadığından insan kaynaklı reaktiflerin ve hasta numunelerinin kullanımında potansiyel infekte hastalık taşıyabilirmiş gibi muamele edin. Yıkama solüsyonu dahil herhangi bir materyal, numune ile direkt temas eden maddeler ve insan kaynaklı maddeleri içeren reaktiflerin infeksiyon hastalıkları bulaştırabileceği göz önünde bulundurulmalıdır. Reaktifleri ve numuneleri kullanırken eldiven giyiniz. Ağız ile pipetleme yapmayın. Numuneler veya numuneleri içeren solusyonların dökülmesinden sakının. Döküntü,%10 dilüe çamaşır suyu ile temizlenmelidir. Eğer döküntü sıvı bir asid ise, önce sodyum bikarbonat ile nötralize edilmelidir daha sonra çmaşır suyu ile temizlenmeli ve emici kağıt ile kurutulmalıdır. Temizlik için kullanılan materyal mutlaka kontamine atık konteynırına atılmalıdır. İnsan kaynaklı numuneler,kitler ilave olarak kontamine materyal ve ürünler dekontaminasyondan sonra atılmalıdır. Sadece ikisinden birinde tutulmalıdır. -30 dk,sodyum hipokloridin %5lik konsantrasyonuna batırma -veya 121 C de min. 2saat otoklavlama DİKKAT:sodyum hipoklorid içeren solüsyonları otoklavlamayın. Tehlikesiz olanlar dahil reaktiflerin cilt veya mukoza ile temasından sakının. Kimyasal ve biyolojik atıklar iyi Laboratuvar pratiklerine göre ambalajlanmalıdır ve atılmalıdır. Kitin içindeki tüm reaktifler sadece vitro diyağnostik kullanım içindir. Bu test kitinde bulunan kimyasal komponentlerle ilgili tehlikeler ve bunlardan korunma yöntemleri konusunda öneriler için lütfen etiketler üzerinde bulunan ve ayrıca bu kullanım talimatlarının sonunda yer alan resimli grafiklere başvurun. Güvenlik Veri Sayfası adresinde bulunabilir. 6. NUMUNELER 1. Tavsiye edilen numune tipleri serum veya plazmadır (EDTA,sitrat ve heparin) 2. Kan numunelerinin saklanması, işlenmesi ve taşınması için aşağıdaki tavsiyeleri uygulayın Rutin önlemler doğrultusunda kan numunelerini toplayın. Serum için, numunelerin santrifüjden önce tamamen pıhtılaşmasına izin verin. Tüpleri herzaman kapalı tutun. Santrifüjden sonra, pıhtıları ve eritrositleri serum veya plazmadan ayırın ve serumları küçük ve kapaklı tüpde saklayın. Eğer çalışma 7 gün içerisinde yapılacak ise, numuneler 2-8 C saklanmalıdır. Eğer 7 gün içerisinde çalışma yapılmayacak ise veya numuneler gönderilecek ise,-20 derecede veya daha soğukta dondurun. Numuneleri 5 defadan fazla çözündürüp kullanmayın. Önceden dondurulan numune çözündükten sonra, çalışma yapılmadan iyice karıştırılmalıdır g/l albumin, 100mg/l unconjugated bilirubin, 36g/l trigliseride kadar lipemik numuneler,10g/l hemoglobine kadar hemolize numunelerden sonuçlar etkilenmez. 4. Numuneleri ısıtmayın. 7-UYGULAMA PROSEDÜRÜ 7.1GEREKSİNİLEN FAKAT SAĞLANMAYAN MATERYAL Vortex tipi karıştırıcı Mikroplet okuyucu cihaz(450nm ve 620nm filtreli) Mikroplet inkübatör, termostatik olarak 37 C± 1 e ayarlı. Otomatik,yarı otomatik veya manual mikroplet yıkayıcı sistem. Steril distile veya deiyonize su Tek kullanımlık eldiven Emniyet gözlüğü Emici kağıt 10,1000 μl ve 1,2,10ml dağıtım kapasiteli otomatik, yarı otomatik, ayarlanabilir veya sabit pipetler. Dereceli silindirler 25,50,100,100ml kapasiteli.

4 Sodyum hipoklorid ve sodyum bikarbonat Kontamine atıklar için konteynır. Tek kullanımlık tüpler Önerilen ekipmanlar hakkında daha fazla bilgi için teknik servisimizle irtibata geçin. 7-2.KİTLERİN HAZIRLANMASI R1: Poşeti açmadan önce 30 dakika oda ısısına ( C) gelmesini sağlayınız. Taşıyıcı tepsiyi çıkartın. Kullanılmayan stripleri derhal poşetine geri yerleştirin ve kurutucu maddenin varlığını control edin. Poşeti tekrar dikkatlice kapatın ve 2-8 C de saklayın. R2: R2 yıkama solüsyonunu 1/20 oranında distile su ile seyreltin. Örnek olarak kullanıma hazır yıkama solüsyonunu elde etmek için; 50 ml R2 ve 950 ml distile su karıştırılır. Eğer manual yıkama yapılacak ise,12 stripin 1 pleti için 350 ml dilüe wash solüsyonu hazırlanır. R3, R4, R5: Dilüent R7 ile 1/21 oranında dilüe edilir (örnek: 300 µl R µl kalibratör veya kontrol). R6a: Rubella antijeni liyofilizedir. 3 sitrip çalışmak için bir şişe antijen kullanılır. Antijen 8 ml dilüent (R7) ile çözündürülür. İyice karıştırın. Dilüe edilen antijen solüsyonu (R6a+ R7) tamamen temiz olmalıdır. R6 (R6a+R6b): Konjugat çalışma solüsyonu: Çözündürülmüş rubella antijeninin (dilüe R6a) her bir şişesine, 80 µl konjugat (R6b) eklenir. İyice karıştırılır. Konjugat çalışma solüsyonu, kullanılmadan en az 1 saat önce hazırlanmalıdır. 7.3 AÇILAN VEYA ÇÖZÜLEN REAKTİFLERİN ONAYLANMASI VE SAKLANMASI Kit 2-8 C de saklanmalıdır. Kit 2-8 C de açılmadan saklandığında kitin içindeki her malzeme kutunun dış etiketinin üzerinde yazan son kullanma tarihine kadar kullanılabilir. R1: Sitripler bir kez açıldığında ve 2-8 C de aynı kapalı poşette dikkatlice (kurutucu maddenin varlığını control edin) saklandığında 8 hafta stabil kalır. R2: Yıkama solüsyonu bir kez dilüe edildiğinde 2 hafta 2-30 C de tutulabilir. Bir kez açılan konsantre yıkama solüsyonu 2-30 C de saklanır. Kontaminasyon olmadığı sürece etiketin üzerinde yazan son kullanım tarihine kadar stabildir. R3, R4, R5, R6b, R7: Bir kez açılan ve kontamine olmayan reaktifler 2-8 C de saklanır ve 8 hafta stabildir. R6 (R6a+R6b): Dilüe edilen konjugat çalışma solüsyonu oda ısısında ( C) saklandığında 8 saat, 2-8 C de saklandığında 2 hafta stabildir. R9: Bir kez açılan ve kontamine olmayan reaktif 2-8 C de 8 hafta stabildir. R10: Bir kez açılan ve kontamine olmayan reaktif 2-8 C de saklandığında etiketin üzerinde yazan son kullanım tarihine kadar stabildir. 7.4 UYGULAMA Sunulan prosedürü ve iyi laboratuvar pratiklerini sıkı sıkıya takip edin. Kullanmadan önce reaktiflerin oda ısısına ( C) gelmesini sağlayın. Kırılabilir kuyucukların kullanımı taşınma esnasında özel bir dikkat gerektirir. Çalışma sonuçlarını geçerlendirmek için herbir çalışmada kalibratörleri ve kontrolleri kullanın. 1. Hasta numuneleri, kontroller ve kalibratörler için tanımlama ve dağıtım planını dikkatli oluşturun. 2. Dilüe yıkama solusyonunu hazırlayın.(r2)(bölüm 7.2 ye bakın) 3. Taşıyıcı tepsi ve stripleri (R1) koruyucu torbasından çıkarın (bölüm 7.2 ye bakın). 4. Konjugat çalışma solüsyonu R6(R6a+R6b) hazırlayın (bölüm 7.2 ye bakın). 5. Tek tek belirlenmiş tüplerde kalibratör ve kontrolleri (R3, R4, R5) ve hasta numunelerini (S1,S2, ) 1/21 oranında dilüent (R7) ile dilüe edin. 300 µl R7 dilüent ve 15 µl numune (bölüm 7.2 ye bakın). Dilüe numuneleri vorteksleyin. 6. Aşağıda belirlenen sırayı sıkı sıkıya takip edin. Her bir kuyucuğa 200 µl dilüe kalibratör, control ve hasta numunesi koyun A R3 S5 S13 B R4 S6 C R4 S7 D R5 S8 E S1 S9 F S2 S10 G S3 S11 H S4 S12 7. Mikroplet yapışkan film kapakları ile kaplanır, sıkı kapanmasını sağlamak için plet kuvvetlice bastırılır. Mikroplet ivedilikle, bir termostat kontrollü su banyosu ve kurutma inkübatöründe 37 C± 1 de 1saat ± 5 dakika inkübe edilir. 8. İlk inkübasyon periyodunun sonunda yapışkan filmi geri alın. Tüm kuyuların içeriklerini biyolojik atıklar için kullanılan bir konteynıra (sodium hipoklorid içeren) boşaltın. Yıkama solüsyonundan 350 µl kullanılarak (R2) 4 kez mikroplet yıkanır. Kalan sıvının uzaklaştırılması için emici kağıt üzerine mikroplet nazikçe tersyüz edilir. 9. Çalışma konjugat solüsyonunun (R6) 200 μl si derhal tüm kuyulara dağıtılır. Solüsyon kullanmadan önce çalkalanmalıdır. 10. Mikroplet yapışkan film ile kaplanır, sıkı kapanmasını sağlamak için plet kuvvetlice bastırılır. Mikroplet ivedilikle, bir termostat kontrollü su banyosu ve kurutma inkübatöründe 37 C± 1 de 1saat ± 5 dakika inkübe edilir. 11. İkinci inkübasyon periyodunun sonunda yapışkan filmi geri alın, tüm kuyuların içindekileri çekin ve biyolojik atık kabına (sodium hipoklorid içeren) atın. Yıkama solüsyonundan 350 µl kullanarak (R2) 4 kez mikroplet yıkanır. Kalan sıvının geri alınması için emici kağıt üzerinde mikroplet nazikçe tersyüz edilir.

5 12. İvedilikle ve ışıkdan uzakda, her kuyuya 200 μl kromojen solüsyonu (R9) boşaltılır. Oda ısında ( C), 30±5 dk, karanlıkta reaksiyon gelişimi sağlanır. Bu inkübasyon süresince yapışkan film kullanmayın. 13. Her bir kuyuya 100 µl sonlandırma solüsyonunun (R10) eklenmesi ile enzimatik reaksiyon durur. Geliştirme solüsyonu için de aynı sırayı ve dağıtım oranını kullanın. 14. Dikkatlice pletin tabanı temizlenir. Durdurucu reaksiyondan sonra 30 dk içerisinde, bir plet okuyucu kullanarak 450/620 nm de optik yoğunluk okunur.(stripler okumadan önce daima ışıktan uzak tutulmalıdırlar.) 15. Sonuçları rapor etmeden önce numunelerin ve plet in dağıtım planını ve okumalar arasındaki uyumu kontrol edin. 8-SONUÇLARIN YORUMLANMASI 8.1- Eşik Değerinin Hesaplanması (CO) Eşik değeri (CO), kontrolün (R4) eşik değerinin (OD) optik yogunluklarının ortalama değerine göre hesaplanır. CO = ortalama OD R4 8.2-Numune Oranının Hesaplanması Numune sonucu aşağıdaki formül kullanılarak oran olarak ifade edilir. Numune Oranı: Numune OD/CO 8.3- Kalite Kontrol Tüm kalibratörler dahil her test çalışması ve her bir mikroplet için elde edilen sonuçları analiz eder. Deneyin geçerliliği için, aşağıdaki kriter ie karşılaşılmalıdır. Optik yoğunluk değerleri: - CO x CO < OD R4 Okuma 1 <1.2 x CO x CO < OD R4 Okuma 2 <1.2 x CO R4 kontrol eşik değerinin her bir okumasının OD si, CO değerinin %20 sinden farklı olmamalıdır. Optik Yoğunluk Oranları: - Oran R3 (OD R3/CO) Oran R5 (OD R5/CO) 1.5 Eğer özellikler uymuyorsa, test çalışması tekrarlanmalıdır. 8.4 Sonuçların Yorumlanması Numune Oranı Sonuç Yorumlama oran< 0.8 Negatif 0.8 oran <1.0 Şüpheli oran 1.0 Pozitif Numune için, Rubella IgM antikorlarının varlığı negatif olarak değerlendirilir. Numune için, Rubella IgM antikorlarının varlığı şüpheli olarak değerlendirilir. Sonuç mutlaka ilk çalışmadan en az 3 hafta sonra başka bir test yöntemi ile ikinci bir numune alınarak konfirme edilmelidir. Numune için, Rubella IgM antikorlarının varlığı pozitif olarak değerlendirilir. 8.5 Problem Çözme Rehberi Geçerliliği olmayan veya tekrarlanamayan reaksiyonlar genelllikle aşağıdaki nedenlerden kaynaklanır: Mikroplet in yetersiz yıkanması Negatif serum veya plazma numunelerinin yüksek bir antikor titresi ile kontamine olması. Geliştirme solüsyonunun kimyasal ajanlar (çamaşır suyu, metal iyonları) ile kontamine olması. Durdurma solüsyonunun kontamine olması. 9. PERFORMANSLAR 9.1. Yaygınlık Anti-Rubella IgM antikorlarının yaygınlığı, Platelia Rubella IgM (72851) kullanılarak 347 tane hamile kadından alınan örnekler ile araştırıldı. Bu örneklerin 2 tanesi anti-rubella IgM antikorlarının pozitif olduğu gözlemlendi. Platelia Rubella IgM nin yaygınlığı %0.6 (2/347) olarak hesaplandı. Platelia Rubella IgM nin performansı, kan dönerleri ve hamile kadınlar olmak üzere 2 farklı tipte toplam 809 numune kullanılarak değerlendirildi. Bir tarafdan Platelia Rubella IgM TMB (72922) kullanılarak karşılaştımalı çalışma yapıldı. Diğer tarafdan da Platelia Rubella IgM nin performansı, mevcut diğer ticari EIA testlerine karşı değerlendirildi.

6 9.2. Karşılaştırma Çalışması (Yöntem 1) Platelia Rubella IgM nin performansı aşağıda belirtilen numune gruplarından 399 numune kullanılarak değerlendirildi. 172 numune kan donörlerinden 151 numune hamile kadınlardan 76 numune anti Rubella IgM si pozitif ticarileştirilmiş panelden Platelia Rubella IgM TMB (72922) Negatif Şüpheli Pozitif Toplarn Platelia Rubella IgM (72851) Negatif Şüpheli Pozitif Toplarn Genel Uyum: 396/399 %99.25 (IC%95= % %99.84) İlgili Özgüllük: 319/321 %99.38* (IC%95= % %99.92) İlgili Hassasiyet: 77/78 %98.72 (IC%95= % %99.97) *pozitif olarak şüpheli olduğu düşünüldü. (IC%95)= %95 güvenilirlik sınırı. İlave olarak, 7 tane aşılı hastadan (iki çeşit aşı yapılmış) 60 serum alınarak iki kit ile değerlendirildi. Anti Rubella IgM nin varlığında iki kit için aynı tablo izlendi. 9.3 Performanslar (Yöntem 2) Platelia Rubella IgM nin performansı 350 numune kulanılarak test edildi. Numuneler aşağıdaki gibi sınıflandırıldı. 15 yaşın altındaki 47 çocukdan (27 kız, 20 erkek) 299 yetişkinden (1 erkek, 298 hamile veya yeni doğum yapmış kadından). Yetişkin kadın numuneleri; hamile kadınlardan veya doğumdan bir kaç hafta sonra doğum sonrası muayanelere gelen kadınlardan alındı. Fransa milli kalite control araştırmasından bir serum alındı. Sonuçlar; referans olarak kullanılan mevcut diğer ticari EIA testleri ile karşılaştırıldı. Diğer EIA testi Negatif Şüpheli Pozitif Toplarn Platelia Rubella IgM (72851) Negatif Şüpheli Pozitif Toplarn İlgili Özgüllük: 44/345 %99.71* (IC%95= % %99.99) *pozitif olarak şüpheli olduğu düşünüldü. (IC%95)= %95 güvenilirlik sınırı. 5 pozitif örnek içersinde: 4 uyumlu pozitif numune aynı kişiden farklı zamanlarda alındı. 1 farklı pozitif serum, aşıdan 4 hafta sonra alınan numunede mümkün olan üçüncü bir ticari EIA testi ile pozitif olarak konfirme edildi Çapraz Reaksiyon 212 numune ile çalışıldı, bu numunelerden 164 tanesi toxoplazmosis, CMV, EBV, HSV, VZV, kabakulak, kızamık ve HIV için pozitif idi. 48 tanesinin RF, oto-antikor, hetrofil antikorları pozitif idi. Bu numuneler Platelia Rubella IgM (72851) ve Platelia Rubella IgM TMB (72922) ile test edildi. Bu numunelerin içinde 1 numune CMV IgM için uyumsuz pozitif bulundu. 6 numune, RF testi için her iki yöntem ile pozitif veya şüpheli bulundu. 6 numunenin 4 ü diğer ticari EIA testleri ile negative olarak konfirme edildi Doğruluk Çalışma içi doğruluk(tekrarlanabilirlik): Çalışma içi tekrarlanabilirliği ölçmek için bir negatif ve üç pozitif numune aynı çalışmada 30 defa çalışıldı. Her bir numunenin oranı (numune OD/CO) belirlendi. Her bir numunenin oranlarının ortalaması, standart sapma (SD) ve değişim katsayısı(%cv) aşağıdaki tabloda listelendi.

7 Çalışma içi doğruluk(tekrarlanabilirlik) N=30 Negatif Numune Düşük Pozitif Numune Oran (numune OD/CO) Pozitif Numune Yüksek Pozitif Numune Ortalama SD %CV %2.7 %1.8 %2.5 %2.7 Çalışmalar arası Doğruluk (tekrarlanabilirlik): Çalışmalar arası tekrarlanabilirliği hesaplamak için; bir negatif, üç pozitif numune kullanıldı. Her gün 2 çalışma halinde 2 defa çalışıldı. 20 gün çalışmalara devam edildi. Her bir numunenin oranı (numune OD/CO) belirlendi. Her bir numunenin oranınınn ortalaması, standart sapma (SD) ve değişim katsayısı (%CV) aşağıdaki tabloda listelendi. Çalışmalar arası Doğruluk (tekrarlanabilirlik) N=30 Negatif Numune Düşük Pozitif Numune Oran (numune OD/CO) Pozitif Numune Yüksek Pozitif Numune Ortalama SD %CV %12.7 %2.8 %2.6 % PROSEDÜRÜN SINIRLAMALARI Rubella infeksiyonunun teşhisi sadece klinik ve biyolojik bulguların birleşimine dayandırılarak oluşturulabilir. Anti-Rubella IgM antikorlarının titrasyonunun tek bir test sonucu, rubella virüsünün yeni inferksiyonunun teşhisi için yeterli kanıt oluşturmaz. Yeni infeksiyonun teşhisi sadece klinik ve biyolojik bulgular dahil tüm hasta bilgileri ile yapılabilir. (Aynı hastadan 3 hafta ara ile numune alınır ve anti Rubella IgG antikorlarında önemli bir artış görülür ve anti Rubella IgM varlığı önemli derecede olmalı ve düşük anti- Rubella IgG avidity görülür.) Anti Rubella IgM antikorlarının varlığı yeni infeksiyon olduğunu kanıtlayan yeterli bir bilgi değildir. Çünkü IgM infeksiyondan bir kaç ay ve hatta yıllar sonra oluşabilir. IgM belirlendiğinde anti Rubella IgG antikorlarının kantitatif belirlenmesi yapılmalıdır. Hiç olmazsa üç hafta sonra 2. bir numune alınarak anti Rubella antikorlarının gelişiminin takip edilmesi gerekir. 11. Eğer numune yeni ilk infeksiyondan önce test edilirse anti Rubella IgM antikorları henüz oluşamamışdır. Şüpheli bir durum var ise 3 hafta sonra ikinci bir numune alınarak IgM testi tekrarlanmalıdır. 12. RF nin varlığı ile pozitif olan numuneler, yalancı pozitif olabilir. 11. ÜRETİCİLERİN KALİTE KONTROLÜ Tüm üretilen reaktifler, ham maddeden başlayarak son olarak ticari ürün haline gelene kadar bizim kalite sistemimize göre hazırlanmıştır. Her bir lot kalite kontrol e tabi tutulmuştur ve kabul edilebilir sınırlar içinde olan ürünler pazara sunulmuştur. Her bir lot için kalite kontrol kayıtları Bio-Rad da tutulmaktadır. 12.REFERANSLAR 1. COOPER, L.Z., BUIMOVICI-KLEIN, E : Rubella. In Virology: Edited by Fields, B.N., et al. New York, New York: Raven Press. 2. DORSETT, P.H., MILLER, D.C., GREEN, K., BYRD, F : Structure and function of the Rubella virus proteins. Reviews of Infect. Dis., 7 (Suppl. 1): S 150-S FORSGREN, M : Standardization of techniques and reagents for the study of Rubella antibody. Rev. Infect. Dis., 7 (Suppl. 1): S 129-S KALKKINEN, N., OKER-BLOM, C., AND PETTERSSON, R.F : Three genes code for Rubella virus structural proteins El. E2a, E2b, and C. J. Gen. Virol, 65: LUCAS, G., et al. April 17-20, : Serological diagnosis of IgG immunoglobulins ant-rubella by immunoenzymatic assay in a commercially available kit. Nice: 4th European Congress of Clinical Microbiology. 308/PP MAURIN, J : Le virus de la rubéole. Bulletin de l Institut Pasteur 1969, 67, Virologie médicale, chap. 34, Flammarion Médecine Sciences. 7. NCCLS Document I/LA6-T Tentative Guideline December 1992 : Evaluation and Performance Criteria for Multiple Component Test and Product intended for the Detection and Quantitation of Rubella IgG Test Products. 8. PETTERSSON, R., et al : Molecular and antigenic characteristics and synthesis of Rubella virus structural proteins. Reviews of Infect. Dis., 7 (Suppl. 1): S 140-S WOLINSKY J.S. : Rubella. In Virology, 1990, 2nd Ed Edited by Fields, B.N., and al. New York: Raven Press, Ltd.

8

9

10 Bio-Rad 3, boulevard Raymond Poincare Marnes-la-Coquette - France Tel. : +33 (0) /11 Fax : +33 (0)