UYGULAMA NOTU. HPLC ile Gıda Ürünlerinde Fenolik Bileşen Analizi. Yüksek Performanslı Sıvı Kromatografi HAZIRLAYAN

Ebat: px

Şu sayfadan göstermeyi başlat:

Download "UYGULAMA NOTU. HPLC ile Gıda Ürünlerinde Fenolik Bileşen Analizi. Yüksek Performanslı Sıvı Kromatografi HAZIRLAYAN"

Derya Önder
5 yıl önce
İzleme sayısı:

1 UYGULAMA NOTU Yüksek Performanslı Sıvı Kromatografi L018 HPLC ile Gıda Ürünlerinde Fenolik Bileşen Analizi HAZIRLAYAN Uzm. Kim. Ozan Halisçelik ve Kim. Ömer H. Turmuş Ant Teknik Cihazlar Ltd. Şti.

KONU: Bu prosedür gıda maddelerinde fenolik bileşiklerin miktarının saptanması amacıyla kullanılacak olan standart çalışma yöntemini açıklamaktadır.

2 KONU: Bu prosedür gıda maddelerinde fenolik bileşiklerin miktarının saptanması amacıyla kullanılacak olan standart çalışma yöntemini açıklamaktadır. ÇALIŞMANIN AMACI: Bu analiz metodu; meyve suyu, şarap, bal, yoğurt, peynir vb. ürünleri kapsar. METOD VE MATERYALLER: Bu çalışmamızda Shimadzu HPLC sistemiyle gıda maddelerinde fenolik bileşiklerin analizi yapılmıştır. Fenolik bileşiklerin, deney numunesinden Metil Alkol ve Su karışımı ile ekstrakte edildikten sonra ters faz yüksek işlevli sıvı kromotografi ile tespit edilmesi ilkesine dayanır. LC-20A Prominence HPLC Yüksek Performanslı Sıvı Kromatografi Sistemi

3 Alet-Ekipman: 1. HPLC 2. Dedektör (Photodiode array - PDA) 3. HPLC Kolonu (ODS3-25 cm uzunluk 4.6 mm çapında) 4. Analitik Terazi (0.001 g hassasiyette) 5. Ultra Saf Su Cihazı 6. Membran filtre kağıdı 7. Mobil Faz Süzme Aparatı 8. Otomatik Pipet (0-1 ml) 9. Laboratuvar Cam Malzemeleri 10. Karıştırıcı 11. Enjektör (20 ml lik tek kullanımlık) 12. Vial (renkli 1.5 ml lik) Kullanılan Kimyasallar ve Kimyasalların Hazırlanması: HPLC Mobil Faz: Mobil fazlardan biri Asetik Asit (%2 suda hazırlanmış), diğeri ise; Metanoldür ve bunlar gradient program ile kullanılır. Çözücü: %50 Metanol: %50 Su karışımı Standart Ana Stok Çözeltisi (1000 ppm): Metanol-saf su (50-50)karışımı ile 100 mg fenolik asit standartlarından alınıp, 100 ml lik balon jojede çözülür.(1000 ppm ) konsantrasyonda stok çözelti hazırlanır. Fenolikler: Gallik Asit/Kateşin /Kafeik Asit/Vanilik Asit/Kafeik Asit/Epikateşin/p-Kumarik Asit/Ferrulik Asit/Hidroksi Sinamik Asit/Kuersetin Çalışma Standartların Hazırlanması: 100 ppm lik çalışma standartı: Ana stok çözeltiden 10 ml alınır ve 100 ml lik balon jojeye aktarılır 75 ppm lik çalışma standartı: Ana stok çözeltiden 7.5 ml alınır ve 100 ml lik balon jojeye aktarılır 50 ppm lik çalışma standartı: Ana stok çözeltiden 5 ml alınır ve 100 ml lik balon jojeye aktarılır 25 ppm lik çalışma standartı: Ana stok çözeltiden 2.5 ml alınır ve 100 ml lik balon jojeye aktarılır 5 ppm lik çalışma standartı: Ana stok çözeltiden 0.5 ml alınır ve 100 ml lik balon jojeye aktarılır 1 ppm lik çalışma standartı: Ana stok çözeltiden 0.1 ml alınır ve 100 ml lik balon jojeye aktarılır

4 ANALİTİK KOŞULLAR: LC Koşulları Cihaz Model Kolon Dedektör Mobil Faz Akış Hızı Enjeksiyon Hacmi Dalgaboyu Numuneye ait Dilüsyon : Shimadzu : Prominence LC-20A HPLC : ODS/ODS-3 (250X4.6mm i.d., 5um) : PDA dedektör : 1.0 ml/min : 20 ul : 280, 320 ve 360 nm : 20 Gradient Tablosu EKSTRAKSİYON: 100 ml lik balon jojeye, katı örnekten 5 gr, sıvı örnekten 5 ml homojenize edilmiş örnek alınır. Örnek üzerine 50 ml metil alkol ilave edilir sn çalkalanır. Yaklaşık 45 ml saf su ilave edilir. Tekrar çalkalanır ve soğuyup hacim sabitlenince saf su ile çizgisine tamamlanır ml süspansiyon kaba filtre kağıdından süzülür ve ilk 10 ml süzüntü atılır. Süzüntü enjektöre alınır ve 0.45 um filtreden viallere süzülür. Eğer numune gazlı bir ürünse analize başlamadan ultrasonik banyoda gazı degaze edilir. HESAPLAMA: Numune değerlendirmesi ilk olarak kalitatif olarak ve ardından dış standart - kalibrasyon eğrisi metoduyla kantitatif olarak tayini gerçekleşmiştir.

5 10 PPM STANDART KROMATOGRAMLAR:

6 ALTERNATİF METOD ANALİTİK KOŞULLAR: LC Koşulları Cihaz Model Kolon Dedektör Mobil Faz Akış Hızı Enjeksiyon Hacmi Dalgaboyu Mobil Faz A Mobil Faz B : Shimadzu : Prominence LC-20A HPLC : ODS/ODS-3 (250X4.6mm i.d., 5um) : PDA dedektör : 1.0 ml/min : 20 ul : 280, 320 ve 360 nm : Asetonitril : %2 lik Asetik Asit Gradient Tablosu Zaman Modül Komut Değer Pumps Solvent B Conc Pumps Solvent B Conc Pumps Solvent B Conc Pumps Solvent B Conc Pumps Solvent B Conc Pumps Solvent B Conc. 5 60,00 Controller Stop ALTERNATİF METOD 1 PPM STANDART KROMATOGRAMLAR:

7 Bu Aplikasyon Notu uygulamanın gerçekleştirildiği tarihe ait bilgiler ışığında oluşturulmuştur. Bu yayında yer alan bilgilerin referans gösterilerek başka bir yerde kullanılması Ant Teknik in iznine tabidir. Aplikasyon Notu Ant Teknik tarafından önceden bildirilmeksizin değiştirilebilir. antteknik.com

Benzer belgeler

HPLC ile Elma Suyunda HMF Analizi

UYGULAMA NOTU Yüksek Performanslı Sıvı Kromatografi L019 HPLC ile Elma Suyunda HMF Analizi HAZIRLAYANLAR Kim. Akın Osanmaz ve Uzm. Kim. Ozan Halisçelik Ant Teknik Cihazlar Ltd. Şti. KONU: Elma suyu numunelerinde,