ORT İnfeksiyonları ORNİTOBAKTERİYOZ

Transkript

1 ORT İnfeksiyonları ORNİTOBAKTERİYOZ

2 Hindi ve tavuklar solunum sistemine ait bozukluklar mortalite ıskarta oranları yumurta üretimi yumurta kabuğu kalitesi kuluçka verimi tedavi masrafları büyük ekonomik kayıplar

3 Ornithobacterium rhinotracheale Gram negatif, pleomorfik, sporsuz, hareketsiz, çomak In vitro üremesi yavaş (özellikle üremenin 24. saatinde kolonilerin çok küçük olması nedeni ile E.coli, Proteus ve Pseudomonas türleri gibi hızlı üreyen bakteri türleri tarafından üreme maskelenebilmekte bu nedenle de rutin incelemelerde etkenin izolasyonu gözden kaçabilmekte)

4 O.rhinotracheale nin optimal üremesi 37 C de, %5-10 koyun kanlı agarda, %5-10 CO 2 li ortamda, 48 saatlik inkübasyonla 18 serotip Serotip A-R Serotip A, B, D, E en yaygın

5 Tavuk ve hindiler duyarlı (beç tavuğu, ördek, devekuşu, kaz, sülün, keklik ve ekin kargalarında) Mortalite %2-11 Genç Ergin İnfeksiyon genellikle erkeklerde dişilerden daha şiddetli seyretmekte, aynı cinsiyet içinde ise besili hayvanlar daha fazla etkilenmektedir Özellikle kış aylarında

6 **İnfeksiyonun yayılmasında en önemli yol horizantal bulaşmadır solunum yolu **yumurtalık ve yumurtalık kanalından etkenin izole edilmesi yumurta yolu ile bulaşma **Hastalığın tüm dünya üzerinde hızlı bir şekilde yayılması embriyolu yumurtanın transferi???

7 Semptomlar Broylerlerde 4-6 haftalık yaşta *yem tüketiminde azalma *depresyon *sinüzit *burun ve göz akıntısı *solunum bozuklukları *Bazı olgularda subklinik seyir Damızlık broylerlerde *çoğunlukla haftalık yaşta *yumurta veriminin pik seviyede olduğu dönemde ya da yumurta üretimine girmeden hemen önce görülür *Ölüm oranı değişken olup komplike olmamış olgularda düşüktür

8 Broylerlerde Akciğerlerde pnömoni, Plöritis Hava kesesi yangısı Hava keselerinde çoğunlukla yoğurt benzeri ya da kaymak gibi bir eksudat birikimi Subklinik infeksiyonlarda Sadece hava kesesinde yangı

9 Hindilerde lezyonlar genellikle akciğerlerde (fibrinopürülent eksudatla + akciğerlerin tek ya da çift taraflı sertleşmesi + ödem) Perikarditis, airsakkulitis, peritonitis, enteritis Bazı olgularda ise karaciğer ve dalakta şişme

10 İnfeksiyon Tavuk kolerası, İnfeksiyöz Bronşitis, Klamidyoz, Hindi rhinotracheitis, İnfeksiyöz laringotracheitis, Newcastle infeksiyonları ile karışabilir. Kesin tanı etkenin izolasyon ve identifikasyonu (Etken izolasyonunun infeksiyonun ilk 10 günü içerisinde daha başarılı olduğu belirtilmiştir) Bakteriyolojik ekim için en uygun dokular Subklinik infeksiyonlarda trachea, akciğerler ve hava keseleridir tracheadan alınan svaplar

11 Örneklerden izolasyon İzole edilen koloniler API 20 NE API ZYM, RapiD NF Plus %5-10 gentamisinli ve/veya gentamisinsiz koyun kanlı agara ekimler 37 o C de, %5-10 CO 2 (mumlu kavanoz) 48 saat inkübasyon Gram boyama, katalaz ve oksidaz testleri Mac Conkey agarda üreme. biyokimyasal test besiyerlerine ekim gibi ticari test kitleri önerilmiştir özellikle API 20 NE ile AGP testinin kombinasyonu

12 Serolojik tanı ELISA ve AGP testi Serotiplendirme AGP AŞI İnaktif aşı Hollanda da geliştirilmiş ve deneysel olarak yapılan çalışmalarda genç broylerlerin inaktif aşı ile aşılanması etkili bulunmuştur. Damızlıkların ölü aşı ile ve bu damızlıklardan elde edilen civcivlerin ise yaklaşık 3 haftalıkken canlı aşı ile aşılanmasının broylerlerde O. rhinotracheale infeksiyonuna karşı en iyi koruma sağladığı bildirilmiştir

13 Bordetellozis (Hindi Korizası)

14 Genç hindiler (2-6 haftalık) Düşük mortalite & yüksek morbidite Okulonasal akıntı, aksırık, solunum güçlüğü, yüzde şişlik, hırıltılı solunum, trakeal kollaps ve ağırlık kaybı, üst solunum sistemi hastalığı Ticari hindiler oldukça duyarlıdırlar Ekonomik önem!

15 Bordetella avium Gram negatif kokobasil, hareketli, sporsuz, kapsülsüz, nonfermentatif, aerob Kanlı agar, MacConkey agar, TSA, BHI 37 C, aerob, 2-3 gün

16 Temas, aerosol, indirekt kontak Sindirim, solunum Kontamine altlık, folluk, yem

17 İnkubasyon periyodu: 7-10 gün Öksürük, Burun akıntısı, Yüzde şişkinlik, Hırıltılı solunum, Tüylerde kabarma, Durgunluk, İştahsızlık, Depresyon

18 Nekropsi ÜSY lokalize Burun deliklerinde mukoid salgı Sinüzit Laringit Trakeit Pnömoni

19 Etken izolasyonu Serolojik testler ELISA IFAT MAT

20 Sağaltım / Koruma Antibiyogram (Tetrasiklin, Oksiterasiklin, Niasin) AŞI: İnaktif ya da aktif aşı Genel önlemler

21 İnsan ve hayvanların intestinal içerik, mide ve iç organlarında bulunan ve birçok hastalığa neden olduğu saptanmış helikal ya da spiral şekilli mikroorganizmalardır.

22 Helicobacter pullorum Gram negatif, Sporsuz, Kapsülsüz, Monopolar kılıfsız flagellaya sahip, Safraya dirençli, Hafif kıvrımlı çomaklar

23 Asemptomatik etçi tavukların sekumundan, vibrionik hepatitli yumurtacı tavukların karaciğer ve intestinal içeriğinden, gastroenteritli insanların dışkı örneklerinden Campylobacter Like Organism (CLOs) Dot-Blot DNA hibridizasyon metodu ile diger Campylobacter lerden ayrıldığını 16S rrna gen dizisini incelediklerini, sonuçları relatif DNA homoloji testleri ve total protein modelleriyle destekleyerek bu izolatların Helicobacter cinsi Helicobacter pullorum Stanley ve ark. 1994

24 1 mm çapinda pigmentsiz yari-şeffaf gri-beyaz α-hemolitik

25 Marmara bölgesinin farklı illerinde yetiştirilen ve kesime sevk edilen 96 tavuğa ait sekum ve kolon örneklerinde H. pullorum un izolasyonu ve DNA sının varlığının saptanması amaçlandı.

26 Örneklerin her birinden bir gram içerik ve doku kazıntısı Birebir oranında FTS ile sulandırıldı BHI broth (At serumu ve glukoz katkılı) Brucella agar (%5 koyun kanı katılmış) 0.65 µm filtre bu karışımdan 150 µl 37 C 1 saat mikroaerobik Filtre kaldırıldı, filtrat yayıldı Anaerobik jarda Campygen kit ( % 5 CO2, % 90 N2, % 2 H2 ) 37 C 7 gün

27 Şüpheli koloniler Brucella agarda saflaştırıldı. Gram boyanma özellikleri, Katalaz ve oksidaz aktiviteleri, Üreaz ve DNaz aktiviteleri, Hippurat ve İndoksil asetat hidrolizi, Nitrat redüksiyonu, TSIA da H2S oluşumu, 25 C, 37 C ve 42 C de üreme özelliği, % 1 safra katkılı Brucella agar, % 1 glisin katkılı Brucella agar, % 3.5 tuz katkılı Brucella agar, % 7 koyun kanlı agarda üreme özellikleri Çeşitli antibiyotiklere duyarlılıkları saptandı. Şüpheli izolatların identifikasyonunda kontrol amacıyla referans suş kullanıldı!

28 PCR DNA Ekstraksiyonu QIAGEN Dneasy Blood & Tissue kit

29 PCR DNA Amplifikasyonu Her örnekten alınan 4 µl kalıp DNA, 16 µl PCR karışımına ilave edildi. PCR karışımı: 1 µl Primer R, 1 µl Primer F, 2 µl 10X Buffer, 0.8 µl dntp, 0.4 µl MgCl2, 10.6 µl RNaz, DNaz free Distile Su, 0.2 µl Taq Polymerase

30 PCR DNA Amplifikasyonu 94 C de 5 dakika ön denatürasyonu takiben, toplam 35 siklus 94 C de 1 dakika (denatürasyon), 60 C de 90 saniye (baglanma), 72 C de 90 saniye (sentez) siklusların sonunda 72 C de 5 dakika final sentez aşaması

31 PCR Elektroforetik Separasyon ve DNA nın Saptanması Agaroz jelde 90 Voltta 60 dakika

32 PCR Sonuçların Yorumlanması Pozitif kontrolde 447 bp moleküler ağırlığında spesifik bantın oluşumu, negatif kontrolde ise bantın olmaması yapılan PCR testinin doğruluğunu gösterdi. Örneklerin H. pullorum spesifik DNA pozitif olarak değerlendirilmesi, 447 bp lik DNA bandının varlığına göre yapıldı.

33 İzolasyon ve İdentifikasyon Bulguları İncelenen sekum ve kolon örneklerinden H. pullorum izole edilmedi.

34 PCR Bulguları M N P M 96 tavuğun 53 ünde (% 55.21) 447 bp lik bantlar saptandı.

35 H. pullorum un prevalansı etçi tavuklarda % 55.21

36 Avian chlamydiosis (Kanatlı Klamidyozu)

37 Evcil ve yabani kuşlarda görülen sistemik, bulaşıcı, zoonoz, nadiren ölümcül infeksiyondur kuşlarda Klamidyoz, insanlarda ise Psittakoz terimi tercih edilmektedir Kanarya ve nonpsittacine... Ornithoz Psittacidae fam. kuşlarda... Psittakoz Klamidyoz Papağanlarda...parrot fever

38 Chlamydia psittaci Gram negatif kokoid Obligat intraselüler bakteriler Direct fluorescent antibody stain of a mouse brain impression smear showing C. psittaci. Morfolojik formları (üreme siklusunda görülen fazlarda meydana gelirler) 1. elementer cisim (EB) 2. retiküler cisim (RB) 3. Ara cisim (IB)

39 Üreme CANLI ORTAMLARDA duyarlı hücre kültürleri McCOy, HeLa, Vero ve L929 embriyolu tavuk yumurtaları 6-7 günlük SPF laboratuvar hayvanları Fare, kobay

40 C. psittaci kümes hayvanları Psittacidae familyasına ait kuşlar (papağan türleri ve muhabbet kuşları) Güvercinler, kumrular, kanaryalar, hindi, ördek, sülünler, su kuşları, deniz ve sahil kuşları (infekte doğal taşıyıcılar) infekte etmektedir Sığırcık gibi kuşlar bazı tür kumrular intermitent konakçı (bu kuşlar infekte doğal taşıyıcılarla kısa süreli temasla ara sıra infekte olarak kısa zaman periyodu boyunca taşıyıcı olurlar ve organizmayı saçarlar)

41 BULAŞMA Duyarlı sağlam hayvanlara etken Vertikal bulaşma fekal-oral solunum yoluyla *Yavruların beslenmesi sırasında anne-babadan yavruya oral, tracheal ya da nasal eksudatlarla da bulaşma olabilmekte ** indirekt olarak etkenle bulaşık yem, su, kümes ekipmanları ve yabani kuşlar da hastalığın yayılışında önemidir

42 İnfekte hayvanlar ve portörler dışkı ve burun akıntıları çevre Yabani hayvanların klinik bulgu göstermeden hastalığı taşıdıkları ve diğer hayvanlara bulaştırdıkları bildirilmiştir. En duyarlı hindi ve ördekler!

43 Çalışma : İstanbul ve yöresindeki pet kuşlarında C. psittaci varlığı ve prevalansı saptandı. Dışkı örnekleri C. psittaci nin izolasyonu ve spesifik DNA sının saptanması amacıyla kullanıldı. İzolasyon amacıyla dışkılardan hazırlanan inokulumlar altı günlük embriyolu tavuk yumurtası sarısına inokule edildi. Üç kör pasajdan sonra yumurta sarısı zarlarından hazırlanan preparatlar Modifiye Gimenez boyama ve direkt FAT ile incelendi. Dışkıda spesifik DNA nın saptanması için PCR kullanıldı.

44 İncelenen 96 dışkı örneğinin 33 ü (%34.4) PCR, 21 i (%21.9) Modifiye Gimenez, 29 u (%30.2) FAT ile pozitif PCR ile pozitif saptanan 33 örnekten 28 i FAT ile, 20 si MGB ile pozitif bulundu çalışma sonucunda kanatlı Chlamydiosis inin prevalansının pet kuşları arasında oldukça yüksek olduğu, Chlamydial izolasyonda karşılaşılan zorluklar nedeniyle PCR ın tarama testi olarak uygulanabileceği, pozitif olgularda gerekiyorsa izolasyon yöntemlerinin de tanıyı desteklemek amacıyla kullanılması

45 72 saat inokulasyondan sonra embriyolu tavuk yumurta sarısı zarında görülen hemorajiler.

46 72 saat inokulasyondan sonra açılan embriyolu tavuk yumurtalarında saptanan allantoik sıvıdaki bulanıklık.

47 C. psittaci kuşlardan insanlara bulaşma nazal ya da göz sekresyonlarından gelen damlacıkların ve dışkı tozlarının solunması **İnfekte evcil kuşlar, kümes hayvanları ve güvercinler insanlar için önemli infeksiyon kaynakları olup, özellikle bu hayvanlarla bir şekilde temas kuranlarda infeksiyon (Psittacosis) görülmektedir

48 Ateş İnsanlarda görülebilen semptomlar; Üşüme titreme nöbetleri Baş ağrısı Fotofobi Öksürük Yaşamı tehdit eden atipik pnömoni EN RİSKLİ; pet kuş sahipleri ve üreticileri karantina merkezinde çalışanlar veteriner hekimler, veteriner teknisyenler, laboratuvar çalışanları, kanatlı kesim ve işleme fabrikalarında çalışanlar, hayvanat bahçesi çalışanları, güvercin tutkunları ve yabani kuşlarla temas halindeki işçiler

49 Kuşlarda inkubasyon süresi... 3 gün - birkaç hafta latent infeksiyonlarda aktif hastalıkların infeksiyondan yıllar sonra görülebildiği İnsanlarda 7-21 gün, 3 aya kadar uzayabilir

50 Akut, subakut, kronik ya da asemptomatik Yüksek derecede virulent suşla infekte mukopurulent nazal ve konjuktival akıntılar, sık işeme, iştahsızlık, zayıflama, solunum güçlüğü ve durgunluk bazılarında ishal, bazılarında sarımsı-yeşil dışkı Düşük derecede virulent olan suşların klinik bulgular benzer, ama daha hafif seyir Asemptomatik form organizmanın bulaşmasında en tehlikeli grup dışkı ile saçılma

51 Tanı *izolasyon ve identifikasyonu *ELISA, PCR, FAT