TÜRKÝYE HALK SAÐLIÐI KURUMU

Transkript

1 ISSN (Basili / Printed) ISSN (Çevrimiçi / Online) T.C. Saðlýk Bakanlýðý Türkiye Halk Saðlýðý Kurumu TÜRKÝYE HALK SAÐLIÐI KURUMU < Cilt/Vol 72 < Sayý/Number 3 < Yýl/Year 2015

2

3 T.C. SAĞLIK BAKANLIĞI TÜRKİYE HALK SAĞLIĞI KURUMU T.R. THE MINISTRY OF HEALTH PUBLIC HEALTH INSTITUTION OF TURKEY ISSN (Basılı / Printed) ISSN (Çevrimiçi / Online) TÜRK HİJYEN ve DENEYSEL BİYOLOJİ DERGİSİ Cilt/Vol 72 Sayı/Number 3 Yıl/Year 2015 TURKISH BULLETIN OF HYGIENE AND EXPERIMENTAL BIOLOGY Turk Hij Den Biyol Derg

4 TÜRK HİJYEN ve DENEYSEL BİYOLOJİ DERGİSİ TURKISH BULLETIN OF HYGIENE AND EXPERIMENTAL BIOLOGY Sahibi / Owner Türkiye Halk Sağlığı Kurumu adına On behalf Public Health Institution of Turkey İrfan ŞENCAN, Başkan (President) EDİTÖR / EDITOR IN CHIEF Hasan IRMAK EDİTÖR YARDIMCILARI / DEPUTY EDITORS Yavuz UYAR Ayşegül TAYLAN-ÖZKAN Demet CANSARAN-DUMAN Nurhan ALBAYRAK Pınar KAYNAR YAYIN KURULU / EDITORIAL BOARD Fatih BAKIR Mehmet Kürşat DERİCİ Mestan EMEK Şule ŞENSES-ERGÜL Arsun ESMER Sibel KARACA Selin NAR-ÖTGÜN Dilek YAĞCI-ÇAĞLAYIK Dilek DİKMEN Gülsen TOPAKTAŞ Sinan BULUT TEKNİK KURUL / TECHNICAL BOARD Ahmet Murad BAYRAM Murat DUMAN Zeynep KÖSEOĞLU Selahattin TAŞOĞLU TÜRKİYE HALK SAĞLIĞI KURUMU PUBLIC HEALTH INSTITUTION OF TURKEY ANKARA-TÜRKİYE Yılda dört kez yayınlanır / Published four times per year Asitsiz kağıt kullanılmıştır / Acid free paper is used Tasarım - Dizgi / Design - Editing : Türkiye Halk Sağlığı Kurumu / Public Health Institution of Turkey Destek Hizmetleri / Supportive Services Satınalma ve İdari İşler Daire Başkanlığı / Purchasing and Administrative Affairs Department Baskı ve Cilt / Press and Binding : Koza Basım~Yayın Özveren Sok. No: 13/A Kızılay-Ankara Tel: e-posta: anilgroupkoza@hotmail.com Yayın Türü / Type of Publication : Yerel Süreli Yayın / Periodical Publication Basım Tarihi / Date of Publication : 2015

5 TÜRK HİJYEN ve DENEYSEL BİYOLOJİ DERGİSİ TURKISH BULLETIN OF HYGIENE AND EXPERIMENTAL BIOLOGY ULUSLARARASI BİLİMSEL DANIŞMA KURULU / INTERNATIONAL SCIENTIFIC ADVISORY BOARD Ali MIRAZIMI, Sweden Anna PAPA, Greece Aziz SANCAR, USA Cristina DOMINGO, Germany Daniel MOTLHANKA, Botswana Dwight D. BOWMAN, USA Isme HUMOLLI, Kosovo Isuf DEDUSHAJ, Kosovo Iva CHRISTOVA, Bulgaria Johan LINDH, Sweden Kosta Y. MUMCUOĞLU, Israel Manfred WEIDMANN, U.Kingdom Paul HEYMAN, Belgium Pauline MWINZI, Kenya Roberto Caneta VILLAFRANCE, Cuba Sıraç DİLBER, Sweden Susana RODRIGUEZ-COUTO, Spain Takashi AKAMATSU, Japan Varalakshmi ELANGO, India ULUSAL BİLİMSEL DANIŞMA KURULU / NATIONAL SCIENTIFIC ADVISORY BOARD A. Gülçin SAĞDIÇOĞLU-ÇELEP, Ankara Ahmet ÇARHAN, Ankara Ahmet KART, Ankara Akçahan GEPDİREMEN, Bolu Ali ALBAY, Ankara Ali Kudret ADİLOĞLU, Ankara Ali Naci YILDIZ, Ankara Alp ERGÖR, İzmir Alper AKÇALI, Çanakkale Arsun ESMER, Ankara Aşkın YAŞAR, Ankara Ateş KARA, Ankara Aydan ÖZKÜTÜK, İzmir Ayhan FİLAZİ, Ankara Aykut ÖZKUL, Ankara Ayşegül TAYLAN ÖZKAN, Çorum Banu ÇAKIR, Ankara Bekir ÇELEBİ, Ankara Belgin ÜNAL, İzmir Berrin ESEN, Ankara Birce TABAN, Ankara Bülent ALTEN, Ankara Celal F. GÖKÇAY, Ankara Cemal SAYDAM, Ankara Çağatay GÜLER, Ankara Delia Teresa SPONZA, İzmir Demet CANSARAN DUMAN, Ankara Dilek ASLAN, Ankara Dilek DİKMEN, Ankara Dilek YAĞCI ÇAĞLAYIK, Ankara Diler ASLAN, Denizli Doğan YÜCEL, Ankara Duygu ÖZEL DEMİRALP, Ankara Duygu TUNCER, Ankara Dürdal US, Ankara Ender YARSAN, Ankara Erhan ESER, Manisa Erkan YILMAZ, Ankara Fatih BAKIR, Ankara Fatih KÖKSAL, Adana Fügen DURLU ÖZKAYA, Ankara Fügen YÖRÜK, Ankara Gönül ŞAHİN, Ankara Görkem MERGEN, Ankara Gül ERGÖR, İzmir Gül Ruhsar YILMAZ, Ankara

6 TÜRK HİJYEN ve DENEYSEL BİYOLOJİ DERGİSİ TURKISH BULLETIN OF HYGIENE AND EXPERIMENTAL BIOLOGY ULUSAL BİLİMSEL DANIŞMA KURULU / NATIONAL SCIENTIFIC ADVISORY BOARD Gülberk UÇAR, Ankara Gülnur TARHAN, Adıyaman Gülsen TOPAKTAŞ, Ankara Hakan ABACIOĞLU, İzmir Hakan LEBLEBİCİOĞLU, Samsun Haluk VAHABOĞLU, İstanbul Hasan TEZER, Ankara Hilal ÖZDAĞ, Ankara Hürrem BODUR, Ankara Işıl MARAL, İstanbul İ.Mehmet Ali ÖKTEM, İzmir İrfan EROL, Ankara İrfan ŞENCAN, Ankara İsmail CEYHAN, Ankara Kemal Osman MEMİKOĞLU, Ankara Koray ERGÜNAY, Ankara Levent AKIN, Ankara Mahinur AKKAYA, Ankara Mehmet Ali ONUR, Ankara Mehmet Kürşat DERİCİ, Ankara Mestan EMEK, İzmir Metin KORKMAZ, İzmir Mithat ŞAHİN, Kars Muhsin AKBABA, Adana Murat DİZBAY, Ankara Murat GÜNAYDIN, İstanbul Murat HÖKELEK, İstanbul Mustafa KAVUTÇU, Ankara Mutlu ÇELİK, Kocaeli Mükerrem KAYA, Erzurum Nazmi ÖZER, Ankara Nilay ÇÖPLÜ, Ankara Nur AKSAKAL, Ankara Nur Münevver PINAR, Ankara Nuran ESEN, İzmir Nurhan ALBAYRAK, Ankara Nuri KİRAZ, İstanbul Oğuz GÜRSOY, Denizli Orhan BAYLAN, İstanbul Orhan YILMAZ, Ankara Ömer Faruk TEKBAŞ, Ankara Özlem KURT AZAP, Ankara Pınar KAYNAR, Ankara Pınar OKYAY, Aydın Rahmet GÜNER, Ankara Recep AKDUR, Ankara Recep KEŞLİ, Afyon Recep ÖZTÜRK, İstanbul Rıza DURMAZ, Ankara S. Aykut AYTAÇ, Ankara Sami AYDOĞAN, Kayseri Seçil ÖZKAN, Ankara Seda KARASU YALÇIN, Bolu Seda TEZCAN, Mersin Selçuk KAYA, Trabzon Selçuk KILIÇ, Ankara Selim KILIÇ, Ankara Selin NAR ÖTGÜN, Ankara Sema BURGAZ, Ankara Sercan ULUSOY, İzmir Sibel KARACA, Ankara Sinan BULUT, Ankara Sultan ESER, İzmir Suzan ÖZTÜRK YILMAZ, Sakarya Süheyla SÜRÜCÜOĞLU, Manisa Sümer ARAS, Ankara Şule SENSES ERGÜL, Ankara Tevfik PINAR, Kırıkkale Yavuz UYAR, İstanbul Yeşim ÇETİNKAYA ŞARDAN, Ankara Yeşim ÖZBAŞ, Ankara Yeşim TUNÇOK, İzmir Zafer ECEVİT, Ankara Zafer KARAER, Ankara Zati VATANSEVER, Kars Zehranur YÜKSEKDAĞ, Ankara Zeynep GÜLAY, İzmir

7 TÜRK HİJYEN VE DENEYSEL BİYOLOJİ DERGİSİ YAZIM KURALLARI Dergide yayımlanmak üzere gönderilen yazılar, Türk Hijyen ve Deneysel Biyoloji Dergisi yazım kurallarına göre hazırlanmalıdır. Başvurular adresinden Çevrimiçi Makale Gönder, Takip Et, Değerlendir Programı aracılığıyla on line olarak yapılabilir. Gönderilen yazılarda aşağıdaki kurallara uyum aranır. Kurallara uymayan yazılar daha ileri bir incelemeye gerek görülmeksizin yazarlarına iade edilir. 1. Telif Hakkı Devir Formu tüm yazarlarca imzalanarak onaylandıktan sonra dergimizin makale kabul sistemine yüklenmelidir. 2. Makale başlığı, İngilizce başlık, kısa başlık, yazar adları, çalışılan kurumlara ait birimler, yazışma işini üstlenen yazarın açık adresi, telefon numaraları (sabit ve cep), elektronik posta adresi belirtilmelidir: a. Yazının başlığı kısa olmalı ve küçük harfle yazılmalıdır. b. Sayfa başlarına konan kısa başlık 40 karakteri geçmemelidir. c. Çalışma bilimsel bir kuruluş ve/veya fon ile desteklenmişse dipnot veya teşekkür bölümünde mutlaka belirtilmelidir. d. Makale, kongre/sempozyumda sunulmuşsa sunum türü ile birlikte dipnot veya teşekkür bölümünde mutlaka belirtilmelidir. 3. Yazılardaki terimler mümkün olduğunca Türkçe ve Latince olmalı, dilimize yerleşmiş kelimelere yer verilmeli ve Türk Dil Kurumu nun güncel sözlüğü kullanılmalıdır. Öz Türkçe ye özen gösterilmeli ve Türkçe kaynak kullanımına önem verilmelidir. 4. Metin içinde geçen mikroorganizma isimleri ilk kullanıldığında tam ve açık yazılmalı, daha sonraki kullanımlarda kısaltılarak verilmelidir. Mikroorganizmaların orijinal Latince isimleri italik yazılmalıdır: Örneğin; Pseudomonas aeruginosa, P. aeruginosa gibi. Yazıda sadece cins adı geçen cümlelerde stafilokok, streptokok gibi dilimize yerleşmiş cins adları Türkçe olarak yazılabilir. Antibiyotik isimleri dil bütünlüğü açısından okunduğu gibi yazılmalı; uluslararası standartlara uygun olarak kısaltılmalıdır. 5. Metin içerisinde bahsedilen birimlerin sembolleri Uluslararası Birimler Sistemi (SI) ne göre verilmelidir. 6. Yazılar bir zorunluluk olmadıkça geçmiş zaman edilgen kip ile yazılmalıdır. 7. Metnin tamamı 12 punto Times New Roman karakteri ile çift aralıkla yazılmalı ve sayfa kenarlarından 2,5 cm boşluk bırakılmalıdır. 8. Yazarlar araştırma ve yayın etiğine uymalıdır. Klinik araştırmalarda, çalışmaya katılanlardan bilgilendirilmiş olur alındığının gereç ve yöntem bölümünde belirtilmesi gerekmektedir. Gönüllü ya da hastalara uygulanacak prosedürlerin özelliği tümüyle anlatıldıktan sonra, kendilerinin bilgilendirilip onaylarının alındığını gösterir bir cümle bulunmalıdır. Yazarlar Helsinki Bildirgesi nde ana hatları çizilen ilkeleri izlemelidir. Yazarlar, bu tür bir çalışma söz konusu olduğunda, uluslararası alanda kabul edilen kılavuzlara ve yürürlükte olan tüm mevzuatta belirtilen hükümlere uymalı ve Etik Kurul Onayı nı göndermelidir. 9. Hayvanlar üzerinde yapılan çalışmalar için de gereken izinler alınmalı; yazıda deneklere ağrı, acı ve rahatsızlık verilmemesi için neler yapıldığı açık bir şekilde belirtilmelidir. 10. Hasta kimliğini tanıtacak fotoğraf kullanıldığında, hastanın yazılı onayı gönderilmelidir. 11. Araştırma yazıları; Türkçe Özet, İngilizce Özet, Giriş, Gereç ve Yöntem, Bulgular, Tartışma, Teşekkür (varsa) ve Kaynaklar bölümlerinden oluşmalıdır. Bu bölüm başlıkları sola yaslanacak şekilde büyük harflerle kalın yazılmalıdır. İngilizce makalelerde de Türkçe başlık, kısa başlık ve özet bulunmalıdır. a) Türkçe Özet: Amaç, Yöntem, Bulgular ve Sonuç, alt başlıklarından oluşmalıdır (yapılandırılmış özet) ve en az 250, en fazla 400 kelime içermelidir. b) İngilizce Özet (Abstract): Türkçe Özet bölümünde belirtilenleri birebir karşılayacak şekilde Objective, Method, Results, Conclusion olarak yapılandırılmalıdır. c) Anahtar Kelimeler: 3-8 arasında olmalı ve Index Medicus Medical Subject Headings-(MeSH) de yer alan kelimeler kullanılmalıdır. Türkçe anahtar kelimelerinizi oluşturmak için adresini kullanınız. d) Giriş: Araştırmanın amacı ve gerekçesi güncel literatür bilgisi ile desteklenerek iki sayfayı aşmayacak şekilde sunulmalıdır. e) Gereç ve Yöntem: Araştırmanın gerçekleştirildiği kurum/kuruluş ve tarih belirtilmeli, araştırmada kullanılan araç, gereç ve yöntem sunulmalı; istatistiksel yöntemler açıkça belirtilmelidir. f) Bulgular: Sadece araştırmada elde edilen bulgular belirtilmelidir. g) Tartışma: Araştırmanın sonunda elde edilen bulgular, diğer araştırıcıların bulgularıyla karşılaştırılmalıdır. Araştırıcı, kendi yorumlarını bu bölümde aktarmalıdır. Türk Hijyen ve Deneysel Biyoloji Dergisi Türkiye Halk Sağlığı Kurumu h) Teşekkür: Ana metnin sonunda kaynaklardan hemen önce yer almalıdır. Teşekkür bölümünde çalışmaya destek veren kişi, kurum/kuruluşlar yer almalıdır. i) Kaynaklar: Yazarlar kaynakların eksiksiz ve doğru yazılmasından sorumludur. Kaynaklar, metnin içinde geçiş sırasına göre numaralandırılmalıdır. Numaralar, parantez içinde cümle sonlarında verilmelidir. Kaynakların yazılımı ile ilgili aşağıda örnekler verilmiştir. Daha detaylı bilgi için Uniform Requirements for Manuscripts submitted to Biomedical Journals (J Am Med Assoc 1997; 277: ) ( bakılmalıdır. Süreli yayın: Yazar(lar)ın Soyadı Adının baş harf(ler)i (altı veya daha az yazar varsa hepsi yazılmalıdır; yazar sayısı yedi veya daha çoksa yalnız ilk altısını yazıp et al. veya ve ark. eklenmelidir). Makalenin başlığı, Derginin Index Medicus a uygun kısaltılmış ismi, Yıl; Cilt (Sayı): İlk ve son sayfa numarası. Standart dergi makalesi için örnek: Demirci M, Ünlü M, Şahin Ü. A case of hydatid lung cyst diagnosed by kinyoun staining of bronco-alveolar fluid. Turkiye Parazitol Derg, 2001; 25 (3): Yazarı verilmemiş makale için örnek: Anonymous. Coffee drinking and cancer of the panceras (Editorial). Br Med J, 1981; 283: 628. Dergi eki için örnek: Frumin AM, Nussbaum J, Esposito M. Functinal asplenia: Demonstration of splenic activity by bone marrow scan (Abstract). Blood, 1979; 54 (Suppl 1): 26a. Kitap: Yazar(lar)ın soyadı adının baş harf(ler)i. Kitabın adı. Kaçıncı baskı olduğu. Basım yeri: Yayınevi, Basım yılı. Örnek: Eisen HN. Immunology: an Introduction to Molecular and Cellular Principles of the Immun Response. 5th ed. New York: Harper and Row, Kitap bölümü: Bölüm yazar(lar)ın soyadı adının başharf(ler)i. Bölüm başlığı. In: Editör(ler)in soyadı adının başharf(ler)i ed/eds. Kitabın adı. Kaçıncı baskı olduğu. Basım yeri: Yayınevi, Basım yılı: Bölümün ilk ve son sayfa numarası. Örnek: Weinstein L. Swarts MN. Pathogenic properties of invading microorganisms. In: Sodeman WA Jr, Sodeman WA, eds. Pathologic Physiol ogy: Mechanism of Disease. Phidelphia. WB Saunders, 1974: Web adresi: Eğer doğrudan web adresi referans olarak kullanılacaksa adres ile birlikte parantez içinde bilgiye ulaşılan tarih de belirtilmelidir. Web erişimli makalelerin referans olarak metin içinde verilmesi gerektiğinde DOI (Digital Object Identifier) numarası verilmesi şarttır. Kongre bildirisi: Entrala E, Mascaro C. New stuructural findings in Cryptosporidium parvum oocysts. Eighth International Congress of Parasitology (ICOPA VIII). October,10-14, Izmir-Turkey Tez: Bilhan Ö. Labirent savakların hidrolik karakteristiklerinin deneysel olarak incelenmesi. Yüksek Lisans Tezi, Fırat Üniversitesi Fen Bilimleri Enstitüsü, GenBank/DNA dizi analizi: Gen kalıtım numaraları ve DNA dizileri makale içinde kaynak olarak gösterilmelidir. Konuyla ilgili ayrıntılı bilgi için National Library of Medicine adresinde National Center for Biotechnical Information (NCBI) bölümüne bakınız. Şekil ve Tablolar: Her tablo veya şekil ayrı bir sayfaya basılmalı, alt ve üst çizgiler ve gerektiğinde ara sütun çizgileri içermelidir. Tablolar, Tablo 1. şeklinde numaralandırılmalı ve tablo başlığı tablo üst çizgisinin üstüne yazılmalıdır. Açıklayıcı bilgiye başlıkta değil dipnotta yer verilmeli, uygun simgeler (*,+,++, v.b.) kullanılmalıdır. Fotoğraflar jpeg formatında ve en az 300 dpi olmalıdır. Baskı kalitesinin artırılması için gerekli olduğu durumlarda fotoğrafların orijinal halleri talep edilebilir. 12. Araştırma Makalesi türü yazılar için kaynak sayısı en fazla 40 olmalıdır. 13. Derleme türü yazılarda tercihen yazar sayısı ikiden fazla olmamalıdır. Yazar(lar) daha önce bu konuda çalışma ve yayın yapmış olmalı; bu deneyimlerini derleme yazısında tartışmalı ve kaynak olarak göstermelidir. Derlemelerde Türkçe ve İngilizce olarak başlık, özet (en az 250, en fazla 400 kelime içermelidir) ve anahtar kelimeler bulunmalıdır. Derleme türü yazılar için kaynak sayısı en fazla 60 olmalıdır. 14. Olgu sunumlarında metin yedi sayfayı aşmamalıdır. Türkçe ve İngilizce olarak başlık, özet ve anahtar kelimeler ayrıca giriş, olgu ve tartışma bölümleri bulunmalıdır. Olgu sunumu türü yazılar için kaynak sayısı en fazla 20 olmalıdır. 15. Editöre Mektup: Daha önce yayımlanmış yazılara eleştiri getirmek, katkıda bulunmak ya da bilim haberi niteliği taşıyacak bilgilerin iletilmesi amacıyla yazılan yazılar, Yayın Kurulu nun inceleme ve değerlendirmesinin ardından yayınlanır. Editöre Mektup bir sayfayı aşmamalı ve kaynak sayısı en fazla 10 olmalıdır. 16. Bu kurallara uygun olmayan metinler kabul edilmez. 17. Yazarlar teslim ettikleri yazının bir kopyasını saklamalıdır. Tel : (0312) Faks : (0312) e-posta : turkhijyen@thsk.gov.tr

8 WRITING RULES OF TURKISH BULLETIN OF HYGIENE AND EXPERIMENTAL BIOLOGY Articles should be prepared according to the rules of the Turkish Bulletin of Hygiene and Experimental Biology. Submissions can be made online at the address through the Online Manuscript Submission, Tracking, Evaluation Program. Manuscripts are checked according the following rules. If the rules are not adhered to, manuscripts will be returned to the author. 1. The Copyright Transfer Form (Copyright Release Form) after being signed by all authors should be uploaded using the article accepting system of the journal. 2. The title of article, short title, author name(s), names of institutions and the departments of the authors, full address, telephone numbers (landline and mobile) and address should be given: a. The title should be short and written in lower case. b. The short title should not exceed 40 characters. c. The study supported by a fund or scientific organisation must be mentioned in a footnote or in the acknowledgements. d. The study presented in a conference/symposium must be mentioned with the type of presentation in footnotes or in the acknowledgements. 3. For Turkish studies; Terms used in articles should be in Turkish and Latin as much as possible, according to the latest dictionary of the Turkish Language Institution. Importance should e given to use pure Turkish language and as many as Turkish references. 4. Latin names of microorganisms used for the first time in the text have to be written in full. If these names are used later, they should be abbreviated in accordance to international rules. The original Latin names of microorganisms should be written in Italic: for example, Pseudomonas aeruginosa, P. aeruginosa. Names of antibiotics should be abbreviated in accordance with international standards. 5. Symbols of the units mentioned in the text should be according to The Système International (SI). 6. Articles should be written in one of the past perfect, present perfect and past tenses and in the passive mode. 7. Only one side of A4 paper should be used and should have a 2.5 cm margin on each side. 12 pt, Times New Roman font and double line space should be used. 8. The Turkish Bulletin of Hygiene and Experimental Biology expects the authors to comply with the ethics of research and publication. In human research, a statement of the informed consent of those who participated in the study is needed in the section of the Materials and Methods. In case of procedures that will apply to volunteers or patients, it should be stated that the study objects have been informed and given their approval before the study started. In case the authors do not have a local ethics committee, the principles outlined in the Declaration of Helsinki should have been followed. Authors should declare that they have followed the internationally accepted latest guidelines, legislation and other related regulations and should sent Approval of the Ethics Committee. 9. In case animal studies, approval also is needed; it should be stated clearly that the subjects will be prevented as much as possible from pain, suffering and inconvenience. 10. In case patient photos are used which shows his/her ID, a written informed consent of the patient on the use of the photos must be submitted. 11. Research Articles; Research papers should consist of Turkish abstract, English abstract, Introduction, Materials and Methods, Results, Discussion, Acknowledgements (if any), and References sections. These sections should be written in bold capital letters and aligned left. English articles should have a Turkish abstract and title in Turkish. (If the all of the authors from abroad the manuscript and abstract can be write English language). a) Turkish Abstract should consist of the subheadings of Objective, Methods, Results and Conclusion (Structured Abstract). It should be between 250 and 400 words. b) English Abstract: The abstract should be structured like the Turkish abstract (Objective, Methods, Results, and Conclusion). It should be between 250 and 400 words. c) Key words The number of keywords should be between 3-8 and the terminology of the Medical Subjects Headings (Index Medicus Medical Subject Headings-MeSH) should be used. d) Introduction: The aim of the study, and references given to similar studies should be presented briefly and should not exceed more than two pages. e) Materials and Methods: The date of the study, institution that performed the study, and materials and methods should be clearly presented. Statistical methods should be clearly stated. f) Results: The results should be stated clearly and only include the current research. g) Conclusions: In this section, the study findings should be compared with the findings of other researchers. Authors should mention their comments in this section. h) Acknowledgements should be placed at the end of the main text and before the references. In this section, the institutions/departments which supported the research should be stated. i) References: Authors are responsible for supply complete and correct references. References should be numbered according to the order used in the text. Numbers should be given in brackets and placed at the end of the sentence. Examples are given below on the use of references. Detailed information can be found in Uniform Requirements for Manuscripts Submitted to Biomedical Journals (J Am Med Assoc : ) and at general/text/requirements/1.htm. Periodicals: Author(s) Last Name initial(s) name of author(s) (if there are six or fewer authors, all authors should be written; if the number of authors are seven or more, only the first six of the authors should be written and the rest as et al ). The title of the article, the abbreviated name of the journal according to the Index Medicus, Year; Volume (Issue): The first and last page numbers. Example of standard journal article: Demirci M, Unlü M, Sahin U. A case of hydatid cyst diagnosed by kinyoun staining of lung bronco-alveolar fluid. Türkiye Parazitol Derg, 2001; 25 (3): Example of an article with authors unknown: Anonymous. Coffee drinking and cancer of the pancreas (Editorial). Br Med J, 1981; 283:628. Example of journal supplement: Frumin AM, Nussbaum J, Esposito M. Functional asplenia: Demonstration of splenic activity by bone marrow scan (Abstract). Blood, 1979; 54 (Suppl 1): 26a. Books: Surname of the author(s) initial name(s) of author(s). The name of the b o o k. T h e e d i t i o n n u m b e r. P l a c e o f p u b l i c a t i o n : P u b l i s h e r, P u b l i c a t i o n y e a r. Example: Eisen HN. Immunology: an Introduction to the Principles of Molecular and Cellular Immune Response. 5th ed. New York: Harper and Row, Book chapters: The author(s) surname of the chapter initial(s) letter of the name. Section title. In: Surname of editor(s) initial (s) letter of first name(s) ed / eds. The name of the book. Edition number. Place of publication: Publisher, year of publication: The first and last page numbers of the chapter. Example: Weinstein L. Swarts MN. Pathogenic properties of invading microorganisms. In: Sodeman WA Jr, Sodeman WA, eds. Pathologic Physiology: Mechanism of Disease. Phidelphia. WB Saunders, 1974: Web address: If a web address is used as the reference address, the web address date should be given in brackets with the address. The DOI (Digital Object Identifier) number must be provided, when a web access article used in the text as a reference. Congress papers: Entrala E, Mascaro C. New structural findings in Cryptosporidium parvum oocysts. Eighth International Congress of Parasitology (ICOPA VIII). October, 10-14, Izmir-Turkey Thesis: Bilhan Ö. Experimental investigation of the hydraulic characteristics of labyrinth weir. Master Thesis, Science Institute of Firat University, GenBank / DNA sequence analysis: DNA sequences of genes and heredity numbers should be given as references in the article. For more information, check National Library of Medicine and National Center for Biotechnical Information (NCBI). Figure and Tables: Each table or figure should be printed on a separate sheet, the top and bottom lines and if necessary column lines must be included. Tables should be numbered like Table 1. and the table title should be written above the top line of the table. Explanatory information should be given in footnotes, not in the title and appropriate icons (*,+,++, etc.) should be used. Photos should be in jpeg format. In case the quality of the photos is not good for publication, the originals can be requested. 12. Research articles should have up to 40 references. Turkish Bulletin of Hygiene and Experimental Biology Public Health Institution of Turkey 13. In reviews, it is preferred to have not more than two authors. Author(s) must have done research and published articles previously on this subject; they should discuss their experience and use as reference in the review. Reviews should have Turkish and English titles, abstracts (it should contain minimum 250, maximum 400 words) and key words. Reference numbers for the review should be maximum Case reports should have a maximum of seven pages of text. Case report should have a Turkish and English title, abstract, keyword(s) and also introduction, case description and discussion sections should be given. Number of references should be maximum Letters to Editor: Written to make criticisms, additions to previously published articles or scientific updates are published after review and assessment of the Editorial Board. Letters should not exceed one page of text and must be supported with up to 10 references. 16. The articles which do not comply with the journal rules are not accepted. 17. Authors should keep a copy of the article that they submit. Tel : Fax : turkhijyen@thsk.gov.tr

9 TÜRK HİJYEN VE DENEYSEL BİYOLOJİ DERGİSİ YAYIN İLKELERİ Türk Hijyen ve Deneysel Biyoloji Dergisi, Türkiye Halk Sağlığı Kurumu yayın organıdır. Dergi üç (3) ayda bir çıkar ve dört (4) sayıda bir cilt tamamlanır. Dergide biyoloji, mikrobiyoloji, enfeksiyon hastalıkları, farmakoloji, toksikoloji, immünoloji, parazitoloji, entomoloji, kimya, biyokimya, gıda, beslenme, çevre, halk sağlığı, epidemiyoloji, patoloji, fizyopatoloji, moleküler biyoloji, genetik, biyoteknoloji ile ilgili alanlardaki özgün araştırma, olgu sunumu, derleme, editöre mektup türündeki yazılar Türkçe ve İngilizce olarak yayımlanır. Dergi Yayın Kurulu tarafından uygun görülen yazılar, konu ile ilgili en az iki Bilimsel Danışma Kurulu Üyesinden olumlu görüş alındığında yayımlanmaya hak kazanır. Bu kurulların, yazının içeriğini değiştirmeyen her türlü düzeltme ve kısaltmaları yapma yetkileri vardır. Yazıların bilimsel ve hukuki sorumluluğu yazarlara aittir. Yazarlar araştırma ve yayın etiğine tam olarak uyum göstermelidir. Dergide yayımlanan yazıların yayın hakkı Türk Hijyen ve Deneysel Biyoloji Dergisi ne aittir. Yazarlara telif ücreti ödenmez. Dergiye, daha önce başka yerde yayımlanmamış ve yayımlanmak üzere başka bir dergide inceleme aşamasında olmayan yazılar kabul edilir. YAZAR(LAR) İÇİN MAKALE KONTROL LİSTESİ Bütün yazarlarca isim sırasına göre imzalanmış telif hakkı devir formu eksiksiz olarak dolduruldu. Yazar isimleri açık olarak yazıldı. Her yazarın bağlı bulunduğu kurum adı, yazar adının yanına numara verilerek başlık sayfasında belirtildi. Yazışmalardan sorumlu yazarın adı, adresi, telefon-faks numaraları ve e-posta adresi verildi. Türkçe ve İngilizce başlıklar ile kısa başlık yazıldı. Türkçe ve İngilizce özetlerin kelime sayısı ( arası) kontrol edildi. Türkçe ve İngilizce anahtar kelimeler (MeSH ve Türk Tıp Terimleri Sözlüğü ne uygun) verildi. Tüm kısaltmalar gözden geçirildi ve standart olmayan kısaltmalar düzeltildi. Metin içerisinde geçen orijinal Latince mikroorganizma isimleri italik olarak yazıldı. Metin içerisinde bahsedilen birimlerin sembolleri the Système International (SI) e göre verildi. Yazılar miş li geçmiş zaman edilgen kip ile yazıldı. Metnin tamamı 12 punto Times New Roman karakteri ile çift aralıkla yazıldı. Metin sayfanın yalnız bir yüzüne yazılarak her bir kenardan 2,5 cm boşluk bırakıldı. Tablolar, şekiller yazım kurallarına uygun olarak ve her biri ayrı bir sayfada verildi. Fotoğraflar JPEG formatında aktarıldı. Kaynaklar cümle sonlarında parantez içinde ve metin içinde kullanım sırasına göre ardışık sıralandı. Kaynaklar, makale sonunda metin içinde verildiği sırada listelendi. Kaynaklar gözden geçirildi ve tüm yazar adları, ifade ve noktalamalar yazım kurallarına uygun hale getirildi. Ayrıca aşağıda belirtilen maddeleri dikkate alınız. Etik kurul onayı alındı. Bilimsel kuruluş ve/veya fon desteği belirtildi. Kongre/Sempozyumda sunumu ve sunum türü belirtildi. Varsa teşekkür bölümü oluşturuldu.

10 TURKISH BULLETIN OF HYGIENE AND EXPERIMENTAL BIOLOGY EDITORIAL POLICY The Turkish Bulletin of Hygiene and Experimental Biology is a publication of the Public Health Institute of Turkey (Türkiye Halk Sağlığı Kurumu) of Ministry of Health. The Journal is published every three months and one volume consists of four issues. The journal publishes biology, microbiology, infectious diseases, pharmacology, toxicology, immunology, parasitology, entomology, chemistry, biochemistry, food safety, environmental, health, public health, epidemiology, pathology, pathophysiology, molecular biology, genetics, biotechnology in the field of original research, case report, reviews and letters to the editor are published in Turkish and English. Articles which are not previously published in another journal or not currently under evaluation elsewhere can be accepted for the journal. Articles approved by the Scientific Committee and Editorial Board are eligible to be released after receiving at least two positive opinions from the Scientific Committee members. Those committees have the authority to make all corrections and abbreviations but not to change the content of the article. The authors have the all the scientific and legal responsibilities of the articles. The authors must fully obey the ethics of research and publication. The copyright of the article published in the Turkish Bulletin of Hygiene and Experimental Biology belongs to the Journal. Copyright fee is not paid to the authors. CHECKLIST OF THE ARTICLE FOR AUTHOR(S) Copyright transfer form is completed in full and signed by all authors according to the name order. Author names are written clearly. Affiliated institutions of the all authors are given on the title page by the number stated after the author's name. The name, address, phone-fax numbers and mail address of the author responsible for correspondence are given. Turkish, English titles and short title are written. The number of words in Turkish and English abstracts (between ) is checked. Turkish and English keywords (according to MeSH) are given. All abbreviations are reviewed and non-standard abbreviations are corrected Original Latin names of microorganisms are written in italic. Symbols are mentioned according to the units in the Système International (SI). The article is written in passive mode and given one of the past perfect, present perfect or past tenses. Text is written in12 pt Times New Roman characters and with double line spacing. Text is written only on one side of the page and has 2.5 cm space at each side. Tables and figures are given on each separate page according to the writing rules. Photos are in JPEG format. References are given at the end of the sentence in brackets and are listed in order of use in the text. References are listed at the end of the article in the order given in the text. References are reviewed, and the name of all authors, spelling and punctuation are controlled according the writing rules. Furthermore, please check. Ethics Committee Approval is given. Support to a study by a fund or organization is mentioned. Congress / Symposium presentations and the type of presentation are stated. Acknowledgement is given, if there is.

11 Türk Hijyen ve Deneysel Biyoloji Dergisi ne adresinden online olarak makale gönderilebilir. Submissions can be made online at the address to Turkish Bulletin of Hygiene and Experimental Biology. Türk Hijyen ve Deneysel Biyoloji Dergisi (Turk Hij Den Biyol Derg); CAB Abstracts (Abstracts on Hygiene and Communicable Diseases, Diagnosis of Human Diseases, Tropical Diseases Bulletin, Global Health, AgBiotech, Veterinary Abstracts, Food Contamination, Residues and Toxicology, Human Toxicology and Poisoning), DOAJ (Directory of Open Access Journals), Index Copernicus, CAS (Chemical Abstracts Service), Google Scholar, Google, Open J-Gate, Ulrichsweb and Serials Solutions, NewJour, Genamics JournalSeek, Academic Journals Database, Scirus Scientific Database, Ovid Link Solver, BASE (Bielefeld Academic Search Engine), EBSCOhost Electronic Journals Service (EJS), Libsearch, Medoanet, SCOPUS, CrossRef, Türkiye A tıf Dizini, Akademik Türk Dergileri İndeksi, Türk - Medline ve TUBITAK - ULAKBIM Türk Tip Dizini nde dizinlenmektedir. The Turkish Bulletin of Hygiene and Experimental Biology (Turk Hij Den Biyol Derg) is indexed in CAB Abstracts (Abstracts on Hygiene and Communicable Diseases, Diagnosis of Human Diseases, Tropical Diseases Bulletin, Global Health, AgBiotech, Veterinary Abstracts, Food Contamination, Residues and Toxicology, Human Toxicology and Poisoning), DOAJ (Directory of Open Access Journals), Index Copernicus, CAS (Chemical Abstracts Service), Google Scholar, Google, Open J-Gate, Ulrichsweb and Serials Solutions, NewJour, Genamics JournalSeek, Academic Journals Database, Scirus Scientific Database, Ovid Link Solver, BASE (Bielefeld Academic Search Engine), EBSCOhost Electronic Journals Service (EJS), Libsearch, Medoanet, SCOPUS, CrossRef, Türkiye Atıf Dizini, Turkish Academic Journals Index, Türk - Medline, and TUBITAK - ULAKBIM Türk Tip Dizini. İ L E T İ Ş İ M Türkiye Halk Sağlığı Kurumu Türk Hijyen ve Deneysel Biyoloji Dergisi C O R R E S P O N D E N C E Public Health Institution of Turkey Turkish Bulletin of Hygiene and Experimental Biology Sağlık Mahallesi Adnan Saygun Caddesi No: 55 Refik Saydam Yerleşkesi Sıhhiye/ANKARA - TÜRKİYE Tel: Faks: e-posta: turkhijyen@thsk.gov.tr http: w w w. t u r k h i j y e n. o r g

12

13 İÇİNDEKİLER Araştırma Makalesi / Original Article 1. Türkiye de mikrobiyoloji laboratuvarlarının kültür ve antibiyotik duyarlılık testi performans değerlendirmesi ve Ulusal Antimikrobiyal Direnç Sürveyans Sistemine veri sağlayacak laboratuvarların seçimi: Anket uygulaması Performance evaluation of the microbiology laboratories in Turkey for culture and antibiotic susceptibility tests and the selection of laboratories to provide data for National Antimicrobial Resistance Surveillance System: Questionnary application / CONTENTS Ayşegül GÖZALAN, Nilay ÇÖPLÜ, Dilber AKTAŞ, Hüsniye ŞİMŞEK, Gül Bahar ERDEM, İpek MUMCUOĞLU Doi: /TurkHijyen (Dili: Türkçe - Language: Turkish ) Hastanede yatan ishalli hastaların dışkı örneklerinde Clostridium difficile toksin araştırılması ve risk faktörlerinin incelenmesi Investigation of Clostridium difficile toxin in stool samples of patients hospitalized for diarrhea and analysis of the risk factors Hande KOSTUL, Nuran DELİALİOĞLU, Elif ŞAHİN-HORASAN, Gürol EMEKDAŞ, Candan ÖZTÜRK, Necdet KUYUCU Doi: /TurkHijyen (Dili: Türkçe - Language: Turkish ) Mardin Devlet Hastanesi nde yılları arasında metisiline dirençli stafilokoklarda direnç profilleri Resistance patterns of the methicillin resistant staphylococci between 2011 and 2013 in Mardin State Hospital Filiz ORAK Doi: /TurkHijyen (Dili: Türkçe - Language: Turkish ) Tüketime sunulan çeşitli hazır yemek ürünlerinin mikrobiyolojik kalitesinin belirlenmesi Determination of microbiological characteristics of several kinds of ready-to-eat meals presented for consumption Şule ŞENSES-ERGÜL, Havva SARI, Sevinç ERTAŞ, Umut BERBEROĞLU, Yıldırım CESARETLİ, Hasan IRMAK Doi: /TurkHijyen (Dili: Türkçe - Language: Turkish ) Manisa da aynı yemek şirketinden yemek alan farklı işletmelerde meydana gelen stafilokok kaynaklı besin zehirlenmesi Food poisoning caused by staphylococcus in various workplaces getting food from the same catering company in Manisa Ali Hasan ZUBAROĞLU, Ali BOZ, Selmur TOPAL, Fehminaz TEMEL, Mustafa Bahadır SUCAKLI, Belkıs LEVENT, Gonca ATASOYLU, Metin KIZILELMA Doi: /TurkHijyen (Dili: Türkçe - Language: Turkish ) Characterization of sericin protein recovered from silk wastewaters İpek atıksularından geri kazanılan serisin proteininin karakterizasyonu Gökşen ÇAPAR, Seylan Saniye AYGÜN Doi: /TurkHijyen (Dili: İngilizce - Language: English ) Olgu Sunumu / Case Report Anjioimmunoblastik T-hücreli lenfoması olan bir hastada çoklu ilaç dirençli Corynebacterium mucifaciens in neden olduğu ölümcül bir sepsis olgusu A fatal case of sepsis caused by multidrug-resistant Corynebacterium mucifaciens in a patient with an angioimmunoblastic T cell lymphoma Fatma KÖKSAL-ÇAKIRLAR, Nevriye GÖNÜLLÜ, Mert KUŞKUCU, Kübra CAN, Seval ÜRKMEZ, Kenan MİDİLLİ, Nuri KİRAZ Doi: /TurkHijyen (Dili: Türkçe - Language: Turkish ) Derleme / Review 8. Tarım çalışanlarının bitki koruma ürünleri konusunda bilgi ve davranışları Knowledge and behavior of agricultural workers about the plant protection products Ersin USKUN Doi: /TurkHijyen (Dili: Türkçe - Language: Turkish ) 9. Bitkilerde RNA interferans RNA interference in plants Sümer ARAS, Semra SOYDAM-AYDIN, Aslı FAZLIOĞLU, Demet CANSARAN-DUMAN, İlker BÜYÜK, Kürşat DERİCİ Doi: /TurkHijyen (Dili: Türkçe - Language: Turkish ) 10. Molecular techniques for clinical diagnostic mycology Mikolojik klinik tanıda moleküler teknikler Nuri KİRAZ Doi: /TurkHijyen (Dili: İngilizce - Language: English )

14

15 Araştırma Makalesi/Original Article Makale Dili Türkçe /Article Language Turkish Türk Hijyen ve Cilt Deneysel 72 Biyoloji Sayı 3 Dergisi 2015 Türkiye de mikrobiyoloji laboratuvarlarının kültür ve antibiyotik duyarlılık testi performans değerlendirmesi ve Ulusal Antimikrobiyal Direnç Sürveyans Sistemine veri sağlayacak laboratuvarların seçimi: Anket uygulaması Performance evaluation of the microbiology laboratories in Turkey for culture and antibiotic susceptibility tests and the selection of laboratories to provide data for National Antimicrobial Resistance Surveillance System: Questionnary application Ayşegül GÖZALAN 1, Nilay ÇÖPLÜ 2, Dilber AKTAŞ 3, Hüsniye ŞİMŞEK 3, Gül Bahar ERDEM 2, İpek MUMCUOĞLU 4 ÖZET Amaç: Antimikrobial direnç sorununun artmakta olması nedeniyle ülkemizde Ulusal Antimikrobiyal Direnç Sürveyans Sistemi (UAMDSS) kurulma çalışmaları başlatılmıştır. UAMDDS ye dahil olacak laboratuvarların sisteme güvenilir veri sağlayabilmesi önemlidir. Bu amaçla ülkedeki mikrobiyoloji laboratuvarlarının kültür ve antibiyotik duyarlılık testleri (ADT) yapabilme kapasitelerini değerlendiren bir anket uygulaması yapılmıştır. Yöntem: Bu çalışma yılları arasında yapılmış olup mikrobiyoloji laboratuvarlarının kültür ve ADT yapabilme kapasitelerine odaklanan 90 soru içermektedir. Anket formları T.C. Sağlık Bakanlığı tarafından mikrobiyoloji uzmanı bulunduğu bilgisine ulaşılan kamuya bağlı 354 hastanenin tıbbi mikrobiyoloji laboratuvarına gönderilmiştir. Sonuçlar SPSS 18,0 istatistik programı kullanılarak değerlendirilmiştir. Bulgular: Ankete %70,5 i devlet hastanesi, %16,5 i eğitim ve araştırma hastanesi ve %13 ü üniversite hastanesi olmak üzere 322 laboratuvar cevap vermiştir. Birinci basamak sisteme dahil olma kriterleri olan; mikrobiyoloji uzmanı bulunması (%99,1), bakteriyoloji bölümü olması (%97,5) ve kan kültürü çalışılması (%83,6) sorularının her üçüne de evet cevabı veren 259 ABSTRACT Objective: Due to the increase in of the antimicrobial resistance problem, in our country, the studies to establish National Antimicrobial Resistance Surveillance System (NAMRSS) was started. It is important to provide reliable data for the laboratories those will be included in NAMRSS. For this purpose, a questionnaire was applied to evaluate the culture and antimicrobial susceptibility tests performance capacities (AST) of the laboratories in the country. Method: This study was done between 2009 and 2010 years, and included 90 queries which were focused on the capacities of microbiology laboratories to perform culture and AST. The questionnaires were sent to medical microbiology laboratories of 354 public hospitals, where the presence of a specialist knowledge is achieved by TR Ministry of Health. Results were analysed by using SPSS 18.0 statistical program. Results: Three hundred twenty two laboratories replied the questionnaire among which were 70.5% state hospital, 16.5% training and research hospital and 13% university hospital laboratories. The number of laboratories which have positive reply to all three questions which are the first stage of the selecton criteria; presence of microbiolog specialist (99.1%), 1 Ankara Atatürk Eğitim ve Araştırma Hastanesi, Mikrobiyoloji Bölümü, ANKARA 2 Dışkapı Yıldırım Beyazıt Eğitim ve Araştırma Hastanesi, Mikrobiyoloji Bölümü, ANKARA 3 Türkiye Halk Sağlığı Kurumu, Mikrobiyoloji Referans Laboratuvarları Daire Başkanlığı, ANKARA 4 Ankara Numune Eğitim ve Araştırma Hastanesi, Mikrobiyoloji Bölümü, ANKARA İletişim / Corresponding Author : Nilay ÇÖPLÜ Dışkapı Yıldırım Beyazıt Eğitim ve Araştırma Hastanesi, Mikrobiyoloji Bölümü, ANKARA Tel : E-posta / nilaycoplu@gmail.com Geliş Tarihi / Received : Kabul Tarihi / Accepted : DOI ID : /TurkHijyen Gözalan A, Çöplü N, Aktaş D, Şimşek H, Erdem GB, Mumcuoğlu İ. Türkiye de mikrobiyoloji laboratuvarlarının kültür ve antibiyotik duyarlılık testi performans değerlendirmesi ve Ulusal Antimikrobiyal Direnç Sürveyans Sistemine veri sağlayacak laboratuvarların seçimi: Anket uygulaması. Turk Hij Den Biyol Derg, 2015; 72(3): Turk Hij Den Biyol Derg, 2015; 72(3):

16 Cilt 72 Sayı UAMDSS KATILIMCI LABORATUVAR SEÇİM ANKETİ (%80,4) laboratuvar ileri değerlendirmeye alınmıştır. İkinci aşama olan skor çalışmasında kullanılan sorular ve bu sorulara verilen cevap yüzdeleri şöyledir: i) Escherichia coli (ortalama: 74,7), Klebsiella spp. (ortalama: 22,9), Staphylococcus aureus (ortalama: 19,6), Pseudomonas aeruginosa (ortalama: 19,5), Enterococcus spp. (ortalama: 16,1) ve Streptococcus pneumoniae (ortalama: 3,7), için uygulanan aylık ADT sayısının ortalama değerlerinin üzerinde olması, ii) klinik olarak anlamlı kabul edilen mikroorganizmalara veya izole edilen hastada klinik olarak önemli kabul edilen mikroorganizmalara kan izolatları için sırasıyla %49,2 ve %30,2; BOS izolatları için sırasıyla %88,7 ve %75,5 ADT uygulaması, iii) ADT için standart uygulama prosedürünün olması (%81,6), iv) iç kalite kontrol s o n u ç l a r ı n ı n g ö z d e n g e ç i r i l i y o r o l m a s ı ( % 8 2, 2 ), v) ADT için standart yöntemlerden herhangi birinin kullanılıyor olması (%95,8), vi) ADT sonuçlarının yorumu için standart rehber kullanılması (%94,2) vii) sonuçların tutarlılığının değerlendirilmesi (%96,9) şeklindedir. 259 laboratuvardan 173 ü skor belirleme sorularının tümüne cevap vermiş olup, bu laboratuvarların skor değerleri 4-7; 8-11 ve olacak şekilde gruplandırılmıştır. Laboratuvarlardan 43/173 (%24,8) ünün skor grubuna dahil olduğu görülmüştür. Üniversite hastaneleri ve eğitim ve araştırma hastanelerinin büyük bir kısmı arası skor puanı alırken (sırasıyla %64,9 ve %53,3 ü), devlet hastanelerinin büyük bir bölümünün 4-7 (%50) ve 8-11 (%47,2) arası skor puanı aldığı belirlenmiştir. Sonuç: UAMDSS için katılımcı laboratuvar belirlerken; skor değerinin yüksek olması, Türkiye İstatistikî Bölge Birimleri Sınıflandırması na göre belirlenen 12 bölgeye olabildiğince eşit dağılması ve üniversite, eğitim araştırma ve devlet hastanelerini içerecek şekilde olması dikkate alınmıştır. Buna göre UAMDSS ye güvenilir veri sağlayabilecek katılımcı 78 laboratuvar seçilmiştir. Anahtar Kelimeler: Antimikrobiyal direnç, sürveyans presence of bacteriology laboratory (97.5%) and performance of blood culture (83.6%), were 259 (80.4%) and they were included in further evaluation. The queries and percentage of the replies used for the second stage were: i) The number of AST performed to be more than the average monthly number for Escherichia coli (mean: 74.7), Klebsiella spp. (mean: 22.9), Staphylococcus aureus (mean: 19.6), Pseudomonas aeruginosa (mean: 19.5), Enterococcus spp. (mean: 16.1) and Streptococcus pneumoniae (mean: 3.7), ii) performance of AST when a microorganism that is generally accepted as clinically significant or significant for the patient from whom the microorganism was isolated; 49.2% and 30.2% for blood culture, and 88.7% and 75.5% for CSF, respectively, iii) the presence of standard operating procedures for AST (81.6%), iv) revising the internal quality control results (82.2%), v) usage of any of the standard methods for AST (95.8%), vi) using standard guidelines for the interpretation of results (94.2%), and vii) the evaluation of the consistency of the results ( % ). A m o n g l a b o r a t o r i e s o f t h e m r e p l i e d a l l the queries for score determination, and these laboratories were grouped as 4-7; 8-11 and according to their scores. Among 173 laboratories, 43 of them were found to be involved in the group score. While most of the teaching and research hospitals and university hospitals received score points (64.9% and 53.3% respectively), most of the state hospitals received 4-7 (50%) and 8-11 (47.2%) score points. Conclusion: For the determination of participant laboratories; having a high score, equally distribution in 12 regions determined by Turkey Statistical Classification of Territorial Units include university, training and reserach and state hospitals were taken i n t o c o n s i d e r a t i o n. A c c o r d i n g l y 7 8 l a b o r a t o r i e s which can provide reliable data for NAMRSS were chosen as participant. Key Words: Drug resistance microbial, surveillance GİRİŞ Son yıllarda tüm dünyada antimikrobiyal direnç problemi giderek artmaktadır (1). Birçok sürveyans programının özellikle antimikrobiyal direnç ve nozokomiyal enfeksiyonlara odaklandığı gözlenmektedir (2, 3). Antimikrobiyal direnç sürveyans sisteminin etkin bir şekilde yürütülebilmesi için yüksek morbitide ve/veya mortaliteye sahip, antimikrobiyal tedavi seçeneği kısıtlı, kolay 176 Turk Hij Den Biyol Derg

17 A. GÖZALAN ve ark. Cilt 72 Sayı yayılabilen; bölgesel ve ulusal düzeyde bilgi toplanabilecek mikroorganizmalara odaklanılmalıdır. Ülkemizde ilk olarak; Bulaşıcı Hastalıklar Sürveyans ve Kontrol Esasları Yönetmeliği ( tarih ve sayılı RG-Madde 13/1)(4) gereği, Türkiye Halk Sağlığı Kurumu (eski adıyla Refik Saydam Hıfzıssıhha Merkezi Başkanlığı) koordinasyonunda, 2009 yılından itibaren Ulusal Antimikrobiyal Direnç Sürveyans Sistemi (UAMDSS) kurulma çalışmaları başlatılmış, ilk veriler 2011 yılında toplanarak rapor edilmiştir (5). Sürveyans sistemlerinde enfeksiyon etkenleri ve antibiyotik dirençlerine ait veriler klinik mikrobiyoloji laboratuvarlarından toplanmaktadır (3). Bu nedenle mikrobiyoloji laboratuvarı sonuçlarının da güvenilir olması gereklidir. Oysa ülkemizde mikrobiyoloji laboratuvarlarının gerek kurumsal, gerek bölgesel dağılım bakımından farklı imkanlara ve donanımlara sahip oldukları bilinen bir gerçektir (6). Bu nedenle kurulmakta olan UAMDSS ye veri sağlayacak laboratuvarın seçilmesi aşamasında ülkemizdeki mikrobiyoloji laboratuvarlarının kültür ve antibiyotik duyarlılık testi (ADT) yapabilme kapasitelerini d e ğ e r l e n d i r m e y e y ö n e l i k b i r a n k e t u y g u l a m a s ı yapılmıştır. GEREÇ ve YÖNTEM Bu çalışma yıllarında yapılmıştır. Dünya Sağlık Örgütünün dökümanları kullanılarak kültür ve ADT konusunda laboratuvarların kapasitesini değerlendirmeye yönelik bir anket formu hazırlanmıştır (7). Anket formu laboratuvarda çalışan personelin ünvan ve sayısı, kan kültürü ve ADT yapma kapasiteleri ve kullandıkları yöntemler, ADT uygulayan personel sayısı, belirtilen mikroorganizmalar için aylık uygulanan ADT ortalama sayısı, klinik örneklerden hangi mikroorganizmalara ADT uygulandığı, ADT sonuçlarının değerlendirilmesi ve rapor edilmesi bilgilerini içeren 90 sorudan oluşmaktadır. Anket formları, kamuya bağlı olup T.C. Sağlık Bakanlığı tarafından mikrobiyoloji uzmanı bulunduğu bilgisine ulaşılan 354 Tıbbi Mikrobiyoloji laboratuvarına posta yolu ile gönderilmiştir. UAMDSS ye veri sağlayacak laboratuvarın seçilmesi aşamasında ilk olarak birincil kriterler olan mikrobiyoloji uzmanı bulunması, bakteriyoloji bölümü olması ve kan kültürü çalışılıyor olması özelliklerinin her üçüne sahip laboratuvarlar incelemeye alınmıştır. Bu laboratuvarlar arasından seçim yapabilmek için skorlama yöntemi kullanılmıştır. Skor çalışmasında kullanılan sorular ; i) Escherichia coli, Klebsiella spp., Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Enterococcus spp. ve Streptococcus pneumonia için uygulanan aylık ADT sayısının grup ortalama değerlerinin üzerinde olması, ii) Kan ve BOS izolatlarında genellikle klinik olarak anlamlı kabul edilen mikroorganizmalara veya izole edilen hastada klinik olarak önemli kabul edilen mikroorganizmalara ADT uygulaması, iii) ADT için standart uygulama prosedürünün olması, iv) İç kalite kontrol sonuçlarının gözden geçiriliyor olması, v) ADT için standart yöntemlerden herhangi birinin kullanılıyor olması, vi) ADT sonuçlarının yorumu için standart rehber kullanılması, vii) Sonuçların tutarlılığının değerlendirilmesi şeklindedir. Skor değeri yedi ve üzerinde olan laboratuvarlar değerlendirmeye alınmıştır. Anket sorularına verilen cevapların sıklık ve yüzde dağılımları SPSS (Windows, versiyon 18) istatistik programı kullanılarak hesaplanmıştır. BULGULAR Anket gönderilen merkezlerin 322 (%91,0) sinden cevap alınmıştır. Cevap veren merkezlerin %70,5 i devlet hastanesi, %16,5 i eğitim ve araştırma hastanesi ve %13 ü üniversite hastanesi laboratuvarlarıdır. Birincil kriterler olan mikrobiyoloji uzmanı bulunması (%99,1); bakteriyoloji bölümü içermesi (%97,5) ve kan kültürü çalışılıyor olması (%83,6) sorularının her üçüne de evet cevabı veren 259 (%80,4) laboratuvar ileri değerlendirmeye alınmıştır. Turk Hij Den Biyol Derg 177

18 Cilt 72 Sayı UAMDSS KATILIMCI LABORATUVAR SEÇİM ANKETİ Kriterlere uyan laboratuvarların aylık ADT sayılarının mikroorganizmalara göre dağılımı Tablo 1 de sunulmaktadır. ADT uygulama d u r u m l a r ı n ı n k l i n i k ö r n e k l e r e g ö r e d a ğ ı l ı m ı n a (Tablo 2) bakıldığında, bazı laboratuvarların özellikle kan ve BOS gibi klinik önemi olan örneklerden izole edilen mikroorganizmaların tümüne ADT uyguladığı saptanmıştır (sırasıyla; %40,7, %64,6). ADT kalite standartlarına yönelik soruların cevapları (Tablo 3) değerlendirildiğinde; kalite kontrol s u ş l a r ı n ı n d ü z e n l i t e s t e d i l m e s i ( % 5 7, 7 ) v e d ı ş kalite kontrol programlarına dahil olma (%18) yüzdelerinin düşük olduğu görülmüştür. İkinci aşama olan skor çalışmasında kullanılan sorular ve bu sorulara verilen cevap yüzdeleri şöyledir: i) E. coli (ortalama: 74,7), Klebsiella spp. (ortalama: 22,9), S. aureus ( o r t a l a m a : 1 9, 6 ), P. aeruginosa (ortalama: 19,5), Enterococcus spp. (ortalama: 16,1) ve S. pneumoniae (ortalama: 3,7), için uygulanan aylık ADT sayısının ortalama değerlerinin üzerinde olması, ii) Klinik olarak anlamlı kabul edilen mikroorganizmalara veya izole edilen hastada klinik olarak önemli kabul edilen mikroorganizmalara kan izolatları için sırasıyla %49,2 ve %30,2; BOS izolatları için sırasıyla %88,7 ve %75,5 ADT uygulaması, Tablo 1. Kriterlere uyan laboratuvarların aylık ADT sayılarının mikroorganizmalara göre dağılımı Mikroorganizma Antibiyotik Duyarlılık Testi Uygulama Değerleri Ortalama Standart Sapma Alt-Üst limit E. coli 74,7 86, Klebsiella spp. 22,9 38, S. aureus 19, P. aeruginosa 19,5 28, Enterococcus spp. 16,1 26, Acinetobacter spp. 15,2 30, Enterobacter spp. 8, S. pneumoniae 3,7 11, Citrobacter spp. 1,8 3, H. influenzae 1,3 4, Salmonella spp. 0,7 1, Shigella spp. 0, Salmonella typhi 0,3 0,8 0-3 N. meningitidis 0,1 0,5 0-5 Tablo 2. Kriterlere uyan laboratuvarların ADT uygulama durumlarının klinik örneklere göre dağılımı.* Klinik Örnek Tüm mikroorganizmalara Genellikle klinik olarak anlamlı kabul edilen mikroorganizmalara İzole edilen hastada klinik olarak anlamlı kabul edilen mikroorganizmalara Sayı (%) Sayı (%) Sayı (%) Kan (n=258) 105 (40,7) 127 (49,2) 78 (30,2) Gaita (n=258) 8 (3,1) 205 (79,5) 88 (34,1) İdrar (n=258) 36 (14) 197 (76,4) 88 (34,1) BOS (n=257) 166 (64,6) 228 (88,7) 194 (75,5) Yara (n=258) 69 (26,7) 229 (88,8) 151 (58,5) Genital Sistem (n=258) 8 (3,1) 208 (80,6) 95 (36,8) * Her bir klinik örnek için birden fazla seçenek işaretleme söz konusudur. 178 Turk Hij Den Biyol Derg

19 A. GÖZALAN ve ark. Cilt 72 Sayı Tablo 3. Kriterlere uyan laboratuvarların ADT kalite uygulamalarına yönelik bazı özellikleri Özellik Uyguladığınız ADT ile ilgili aylık laboratuvar kayıtlarınız var mı? Laboratuvarınızda iç kaliteyi sağlamak amacıyla ADT için standart uygulama prosedürleri (SUP) var mı? Cevabınız evet ise SUP leriniz yazılı mı? Akış diyagramı içeriyor mu? Eğer var ise: SUP leriniz kalite kontrol suşlarınının düzenli test edilmesini içeriyor mu? İç kalite kontrol sonuçlarınızı gözden geçiriyor musunuz? Laboratuvarınız ADT ile ilgili herhangi bir dış kalite kontrol programına dahil mi? ADT yöntemlerinden herhangi birini kullanıyor musunuz? ADT yorumunda rehber kullanıyor musunuz? ADT sonuçlarını rapor ederken kısıtlı bildirim uyguluyor musunuz? ADT sonuçlarının tutarlılığı laboratuvar tarafından değerlendiriliyor mu? Sayı (evet/ toplam) Yüzde (evet) 238/250 95,2 200/245 81,6 169/204 82,8 112/194 57,7 171/208 82,2 45/ /259 95,8 244/259 94,2 219/258 84,9 247/255 96,9 iii) ADT için standart uygulama prosedürünün olması (%81,6), iv) iç kalite kontrol sonuçlarının gözden geçiriliyor olması (%82,2), v) ADT için standart yöntemlerden herhangi birinin kullanılıyor olması (%95,8), vi) ADT sonuçlarının yorumu için standart rehber kullanılması (%94,2), vii) Sonuçların tutarlılığının değerlendirilmesi (%96,9) şeklindedir. 259 laboratuvardan 173 ü skor belirleme sorularının tümüne cevap vermiş olup, bu l a b o r a t u v a r l a r ı n s k o r d e ğ e r l e r i 4-7 ; v e olacak şekilde gruplandırılmıştır. Üniversite hastaneleri ve eğitim ve araştırma hastanelerinin büyük bir kısmı arası skor puanı alırken (sırasıyla %64,9 ve %53,3 ü), devlet hastanelerinin büyük bir bölümünün 4-7 (%50) ve 8-11 (%47,2) arası skor puanı aldığı belirlenmiştir. Türkiye İstatistikî Bölge Birimleri Sınıflandırması (TİBBS) na göre belirlenmiş olan 12 bölgenin skor d a ğ ı l ı m ı n a b a k ı l d ı ğ ı n d a e n y ü k s e k s k o r a ( ) s a h i p bölgelerin Batı Anadolu (38,1); İstanbul (%35) ve E g e B ö l g e s i ( % 3 3, 3 ) i k e n e n d ü ş ü k s k o r l a r a ( 4-7 ) sahip bölgelerin Batı Marmara (%50); Orta Anadolu (%50) ve Ortadoğu Anadolu (%45,5) olduğu g ö r ü l m ü ş t ü r. S k o r d e ğ e r l e r i n i n k u r u m l a r a v e bölgelere göre dağılımları Tablo 4 ve 5 de sunulmaktadır. Ankete yanıt veren laboratuvarlar arasında skoruna sahip laboratuvarların yüzdesi %24,8 dir. Tablo 4. Kurumların skor değerlerine göre dağılımları Kurum SKOR TOPLAM Sayı (%) Sayı (%) Sayı (%) Sayı (%) Üniversite Hastaneleri 1 (2,7) 12 (32,4) 24 (64,9) 37 (100) Eğitim ve Araştırma Hastaneleri 1 (3,3) 13 (43,3) 16 (53,4) 30 (100) Kamu Hastaneleri 53 (50) 50 (47,2) 3 (2,8) 106 (100) TOPLAM 55 (31,8) 75 (43,3) 43 (24,9) 173 (100) Turk Hij Den Biyol Derg 179

20 Cilt 72 Sayı UAMDSS KATILIMCI LABORATUVAR SEÇİM ANKETİ UAMDSS için katılımcı laboratuvar belirlerken skor değerinin yüksek olması, TİBBS ye göre saptanmış olan 12 bölgeye olabildiğince eşit dağılım s a ğ l a m a s ı ; ü n i v e r s i t e, e ğ i t i m a r a ş t ı r m a v e d e v l e t hastanelerini içerecek şekilde olması dikkate alınmıştır. Toplam 78 laboratuvar UAMDSS ye katılımcı olarak belirlenmiştir (Şekil 1). Tablo 5. Bölgelerin skor değerlerine göre dağılımları Laboratuvarların Bulunduğu Bölgeler SKOR TOPLAM Sayı (%) Sayı (%) Sayı (%) Sayı (%) Batı Marmara 5 (50) 4 (40) 1 (10) 10 (100) Orta Anadolu 5 (50) 3 (30) 2 (20) 10 (100) Ortadoğu Anadolu 5 (45,1) 4 (36,4) 2 (18,2) 11 (100) Akdeniz 8 (44,4) 7 (38,9) 3 (16,7) 18 (100) Doğu Karadeniz 3 (33,3) 5 (55,6) 1 (11,1) 9 (100) Güneydoğu Anadolu 4 (30,8) 7 (53,8) 2 (15,4) 13 (100) Batı Anadolu 6 (28,6) 7 (33,3) 8 (38,1) 21 (100) Batı Karadeniz 4 (25) 9 (56,2) 3 (18,8) 16 (100) Ege 7 (25,9) 11 (40,7) 9 (33,4) 27 (100) İstanbul 5 (25) 8 (40) 7 (35) 20 (100) Doğu Marmara 3 (20) 8 (53,3) 4 (26,7) 15(100) Kuzeydoğu Anadolu 0 2 (66,7) 1 (33,3) 3 (100) TOPLAM 55 (31,8) 75 (43,5) 43 (24,8) 173 (100) Şekil 1. UAMDSS ye dahil edilen merkezlerin dağılımı 180 Turk Hij Den Biyol Derg

21 A. GÖZALAN ve ark. Cilt 72 Sayı TARTIŞMA Antimikrobiyal tedavi; 60 yıldan bu yana enfeksiyon hastalıklarına karşı kullanılan tıbbi müdahalelerin en önemli dayanak noktasıdır. Bununla birlikte, özellikle antibakteriyel ilaçların gerek toplumda gerekse gıda, tarım ve hayvancılıkta yanlış ve aşırı kullanılmaları dirençli bakterilerin seleksiyonu ve yayılımına yol açmıştır. Günümüzde antibakteriyel ilaçların tedavi etkinliklerinde sürekli bir azalmanın hatta kaybın gözlenmesi küresel bir tehdit olarak kabul edilmektedir yılından bu yana kurulan birçok sürveyans modeli antimikrobiyal direnç konusuna dikkat çekmektedir (2, 8, 9). Bu çalışmada ankete katılan laboratuvarlardan %80,4 ünde uzman bulunması; bakteriyoloji bölümü olması ve kan kültürü çalışılabilmesi yüz güldürücü bir sonuçtur. ADT uygulanan mikroorganizmaların dağılımı da beklendiği gibidir (10). ADT uygulama durumlarının klinik örneklere göre dağılımına (Tablo 2) bakıldığında, özellikle kan ve BOS gibi klinik önemi olan suşlarda bazı laboratuvarlarda tüm mikroorganizmalara ADT uygulandığı ifade edilmektedir (sırasıyla; %40,7, %64,6). Diğer klinik örneklerde bu oran daha düşük olmakla birlikte, tüm mikroorganizmalara ADT uygulanıyor olması bu konuya hassasiyet gösterilmesi gerektiğine işaret etmektedir. ADT kalite standartlarına yönelik soruların cevapları, kalite kontrol suşlarının düzenli test edilmesi ve dış kalite kontrol programlarına dahil olma hususlarının iyileştirilmesi gerektiğini düşündürürken, diğer parametrelerin %81,6 ile 96,9 arasında değişmesi memnuniyet vericidir. Ülkemizdeki laboratuvarların skor puanlarının kurumsal dağılımına bakıldığında; diliminde beklendiği gibi üniversite hastanelerinin (%64,9) en yüksek yüzdeyi gösterdiği, onu yakın arayla eğitim araştırma hastanelerinin (%53,3) izlediği ve devlet hastanelerinin sadece %2,8 inin bu dilime girdiği saptanmıştır. Devlet hastanelerinin %50 sinin 4-7 skor dilimine girdiği görülmektedir. Toplamda 173 laboratuvarın 43 (%24,8) ü skor puanı almıştır. En yüksek skor açısından bölgeler arası farklara bakıldığında batı Marmara Bölgesi (%10) ile batı Anadolu Bölgesi (%38,1) sırasıyla alt ve üst sınırları oluşturmaktadır. Bu durumun başlıca nedeni skorlama kriterleri içerisinde izole edilen mikroorganizmalar için uygulanan aylık ADT sayısının ortalama değerlerinin üzerinde olması seçeneğinin bulunmasıdır. Ayrıca tüm yüzdelerin yalnızca anketin skor sorularını tam cevaplayan laboratuvarlara ait o l d u ğ u a k ı l d a t u t u l m a l ı d ı r. B u n u n l a b i r l i k t e t ü m anket sorularının cevapları genel olarak değerlendirildiğinde; mikrobiyoloji laboratuvarlarında medikal donanımın iyileştirilmesinin yanı sıra çalışan elemanların gerek hizmet içi eğitim gerekse performans ve benzeri uygulamalarla motive edilmesi önemlidir. Ülkemizde klinik mikrobiyoloji laboratuvarlarının standardizasyonu konusuna ilgi gösterilmelidir. Anket uygulaması ile ülkemizdeki mikrobiyoloji laboratuvarlarının genel durumu, ihtiyaçları ve kalite kriterleri konusundaki yaklaşımlarını saptamak ve bu yolla kurulmakta olan UAMDSS ye güvenilir veri sağlayacak laboratuvarların belirlenmesi amaçlanmıştır. Bu çalışma ile bölgesel ve kurumsal dağılımın dengelendiği ve güvenilir veri sağlayacağı d ü ş ü n ü l e n l a b o r a t u v a r l a r d a n u y g u n b i r ö r n e k l e m oluşturulmuştur. Bu sayede UAMDSS verilerinin antimikrobiyal direnci düşürmeğe yönelik olarak alınacak olan önlemlere ışık tutması, alınan önlemlerin uzun vadede veriminin ölçülmesi ve benzeri etkinlikler için bilim adamlarına ve politika üreticilere yol göstermesi görevlerini yerine getirmesi mümkün olacaktır. Turk Hij Den Biyol Derg 181

22 Cilt 72 Sayı UAMDSS KATILIMCI LABORATUVAR SEÇİM ANKETİ TEŞEKKÜR Katılımcı laboratuvarların çalışanlarına anketi doldurup gönderdikleri ve bu yolla ülkedeki mikrobiyoloji laboratuvarlarının durum değerlendirmesi yapılabilmesini sağladıkları için teşekkür ederiz. IPA-2008 programı Bulaşıcı Hastalıkların Sürveyansı ve Kontrolü Projesi, Faz III. TR projesi çalışanlarına katkılarından dolayı teşekkür ederiz. UAMDSS Bilimsel Komisyonu; Şöhret AYDEMİR, Gülçin BAYRAMOĞLU, İsmail CEYHAN, Rıza DURMAZ, Mustafa ERTEK, Berrin ESEN, Mete EYİGÖR, Zeynep GÜLAY, Deniz GÜR, Nezahat GÜRLER, Ufuk HASDEMİR, Ahmet MÜEZZİNOĞLU, Cüneyt ÖZAKIN, Duygu PERÇİN. KAYNAKLAR 1. EARSS Annual Report 2008 On-going surveillance of S. pneumoniae, S. aureus, E. coli, E. faecium, E. faecalis, K. pneumoniae, P. aeruginosa ( surveillance/ears-net/documents/2008_earss_ Annual_Report.pdf) (Erişim Tarihi: ). 2. Van de Sande-Bruinsma N, Grundmann H, Verloo D, Tiemersma E, Monen J, Goossens H, et al. European Antimicrobial Resistance Surveillance System Group; European Surveillance of Antimicrobial Consumption Project Group. Antimicrobial drug use and resistance in Europe. Emerg Infect Dis, 2008; 14(11): Cantón R. Role of the microbiology laboratory in infectious disease surveillance, alert and response. Clin Microbiol Infect, 2005; 11(1): Bulaşıcı Hastalıklar Sürveyans Ve Kontrol Esasları Yönetmeliği, Resmi Gazete: bulasici-hastaliklar-surveyans-ve-kontrol-esaslariyone-.html 5. Ulusal Antimikrobiyal Direnç Surveyans Sistemi 2011 Yıllık Raporu, Türkiye Halk Sağlığı Kurumu, Ankara, ( index.php?option=com_phocadownload&view =category&id=6:raporlar&itemid=13)(erişim Tarihi: ). 6. Akbaş E, Buyurgan V. Bildirimi zorunlu bulaşıcı hastalıklar için klinik mikrobiyoloji laboratuvarlarının tanı kapasitelerinin değerlendirilmesi: Bir anket çalışması. XXXI. Türk Mikrobiyoloji Kongresi; S8, s375, Eylül 2006, Antalya. 7. WHO/CDS/CSR/RMD/ Antimicrobial Resistance Surveillance Questionnaire for Assessment of National Networks Department Of Communicable Disease Surveillance And Response World Health Organization Sader HS, Farrell DJ, Flamm RK, Jones RN. Antimicrobial susceptibility of Gram-negative organisms isolated from patients hospitalised with pneumonia in US and European hospitals: results from the SENTRY Antimicrobial SurveillanceProgram, Int J Antimicrob Agents, 2014; 43(4): de Kraker ME, Jarlier V, Monen JC, Heuer OE, van de Sande N, Grundmann H. The changing epidemiology of bacteraemias in Europe: trends from the European Antimicrobial Resistance Surveillance System. Clin Microbiol Infect, 2013; 19(9): Mister P, Lehman DC. Bacteremia and Sepsis. Chapter 36 p In: Mahan CR, Manuselis G (eds) Textbook of Diagnostic Microbiology 5th ed. Elsevier 2015 Saunders, Missouri. Printed in China. 182 Turk Hij Den Biyol Derg

23 Araştırma Makalesi/Original Article Makale Dili Türkçe /Article Language Turkish Türk Hijyen ve Deneysel Biyoloji Dergisi Hastanede yatan ishalli hastaların dışkı örneklerinde Clostridium difficile toksin araştırılması ve risk faktörlerinin incelenmesi Investigation of Clostridium difficile toxin in stool samples of patients hospitalized for diarrhea and analysis of the risk factors Hande KOSTUL 1, Nuran DELİALİOĞLU 1, Elif ŞAHİN-HORASAN 2, Gürol EMEKDAŞ 1, Candan ÖZTÜRK 1, Necdet KUYUCU 3 ÖZET Amaç: Hastanede yatan özellikle geniş spektrumlu antibiyotik kullanan hastalarda Clostridium difficile ilişkili ishal görülmektedir. C. difficile nin patojenik suşları toksin A ve toksin B olmak üzere iki ekzotoksin oluşturmaktadır. Bu toksinler kolon mukozasında hasarlanma ve inflamasyona sebep olmaktadır. Kendini sınırlayan hafif bir ishalden ağır seyirli psödomembranöz enterokolite kadar değişen bir klinik tablonun gelişmesi söz konusudur. Antibiyotik kullanımı dışında ileri yaş, gastrointestinal endoskopi, nazogastrik tüpün varlığı, antiülser ilaç kullanımı, altta yatan ciddi hastalıklar, immün sistemin baskılanması, yoğun bakım ünitesi ve uzun süreli hastanede yatış diğer risk faktörleri arasında sayılmaktadır. Kesin tanı; dışkıdan C. difficile nin üretilmesi ve hücre kültüründe sitopatik etkiyi saptayarak toksin yapımının gösterilmesi ile konur. Ancak rutinde bu her zaman mümkün olmadığı için enzim immunoassay yöntemi ile toksinin gösterilmesi daha sık kullanılan bir yöntemdir. Bu çalışmada hastanede yatan ve ishalli hastalardan gönderilen dışkı örneklerinde bağırsak florası, C. difficile Toksin A ve B varlığı ve risk faktörlerinin araştırılması amaçlanmıştır. Yöntem: Bu çalışmaya Eylül 2010-Ekim 2011 tarihleri arasında Mersin Üniversitesi Tıp Fakültesi Hastanesi nde çeşitli kliniklerinde yatan ve ishalli hastalardan gönderilen 158 dışkı örneği dahil edilmiştir. Bu hastaların dışkı örneklerinde Enzyme-Linked Fluorescent Assay (ELFA) yöntemiyle C. difficile toksin A/B araştırılmıştır. ABSTRACT Objective: The diarrhea related with the Clostridium difficile is seen especially in the patients hospitalized and using broad spectrum antibiotics. Pathogenic strains of C. difficile produce two exotoxins, toxin A and toxin B, which cause colonic mucosal injury and inflammation. It is possible to observe a clinical picture ranging from a mild self-limiting diarrhea to severe course of pseudomembranous enterocolitis. Besides antibiotic intake; advanced age, gastrointestinal endoscopy, presence of a nasogastric tube, receiving anti-ulcer medication, severe underlying illness, immunosuppression, intensive care unit and prolonged hospital stay are considered as other risk factors. The accurate diagnosis is established by producing C. difficile from the feces and demonstration of the toxin by determining the cytopathic effect in cell culture production. Since, this is not always possible in routine practice, demonstration of the toxin with enzyme immunoassay is a method used more often. The aim of this study was to investigate the intestinal flora from stool specimens of hospitalized patients and patients having diarrhea, existence of C. difficile toxin A and B and to determine the related risk factors. Method: Stool specimens of 158 diarrhea patients hospitalized in various clinics which were sent to Department of Medical Microbiology Laboratory from Mersin University Medical Faculty Hospital between September 2010 and October 2011 were included in this study. Toxin A/B of C. difficile were investigated in the stool specimens of these patients with Enzyme-Linked 1 Mersin Üniversitesi, Tıp Fakültesi, Tıbbi Mikrobiyoloji Anabilim Dalı, MERSİN 2 Mersin Üniversitesi, Tıp Fakültesi, Enfeksiyon Hastalıkları ve Klinik Mikrobiyoloji Anabilim Dalı, MERSİN 3 Mersin Üniversitesi, Tıp Fakültesi, Çocuk Enfeksiyon Hastalıkları Bilim Dalı, MERSİN İletişim / Corresponding Author : Nuran DELİALİOĞLU Mersin Üniversitesi, Tıp Fakültesi, Tıbbi Mikrobiyoloji Anabilim Dalı, MERSİN Tel : E-posta / nurandel@hotmail.com Geliş Tarihi / Received : Kabul Tarihi / Accepted : DOI ID : /TurkHijyen Kostul H, Delialioğlu N, Şahin-Horasan E, Emekdaş G, Öztürk C, Kuyucu N. Hastanede yatan ishalli hastaların dışkı örneklerinde Clostridium difficile toksin araştırılması ve risk faktörlerinin incelenmesi. Turk Hij Den Biyol Derg, 2015; 72(3): Turk Hij Den Biyol Derg, 2015; 72(3):

24 Cilt 72 Sayı CLOSTRIDIUM DIFFICILE TOKSİN ARAŞTIRILMASI Ayrıca bu örnekler mikroskobik olarak incelenmiş ve rutin bakteriyolojik kültürü yapılmıştır. Bulgular: Çalışmanın sonucunda; 18 (%11,4) hastada C. difficile toksin A/B pozitif olarak bulunmuş ve bu hastaların 15 (%83,3) inin beta-laktam - betalaktamaz inhibitörü grubu (penisilin, sefalosporin ve karbapenem) antibiyotik kullandığı görülmüştür. Toksin pozitif hastaların dışkı kültürlerinin bir tanesinde Candida albicans ürerken 17 sinde normal bağırsak flora bakterilerinin ürediği tespit edilmiştir. Toksin pozitif ve negatif hastalarda incelediğimiz çeşitli risk faktörlerinden penisilin kullanımında istatistiksel olarak anlamlı bir fark bulunmuştur. Sonuç: C. difficile hastanede yatan ve antibiyotik kullanan hastalarda ortaya çıkan ishallerde öncelikle akla gelmelidir. Bu amaçla dışkı örneklerinden toksin A ve B hızlı tanısı için özgüllük ve duyarlılığı yüksek olan testler kullanılabilir. Sonuç olarak toksin pozitif olguların erken tanısı spesifik tedaviye başlanması ve etkili enfeksiyon kontrol önlemlerinin uygulanmasını sağlayacaktır. Anahtar Kelimeler: Clostridium difficile, toksin, ishal Fluorescent Assay (ELFA) method. In addition, these samples were examined microscopically and routine bacteriological cultures were done. Results: As a result of this study, C. difficile toxin A/B is found as positive in 18 (11,4%) patients and 15 of these patients (83,3%) had used, beta-lactam - betalactamase inhibitor group (penicillins, cephalosporins, and carbapenems) antibiotics. One of the toxin positive patients had Candida albicans while normal intestinal flora bacteria were grown in 17 of them. Using of penicillin was found to be statistically significant among the various risk factors studied in toxin positive and toxin negative patients. Conclusion: C. difficile should be considered as the main cause of diarrhea particularly occured in patients hospitalized and used antibiotics. For this purpose, tests which has high sensitivity and specificity may be used for rapid diagnosis of A and B toxins in stool samples. As a result, early detection of toxin positive cases will provide initiation of specific therapy and the implementation of effective infection control measures. Key Words: Clostridium difficile, toxin, diarrhea GİRİŞ Clostridium difficile Gram pozitif sporlu anaerob basildir. Sağlıklı yetişkinlerin %0-3 ünün, sağlıklı yenidoğanların %25-80 inin dışkısında b u l u n m a k t a d ı r. H a s t a n e d e y a t a n h a s t a l a r ı n %20 sinde; psödomembranöz koliti olan hastaların ise % ünde dışkıda C. difficile pozitif olarak bildirilmektedir. C. difficile ilişkili kolit en yaygın g ö r ü l e n n o z o k o m i y a l e n f e k s i y o n l a r d a n b i r i d i r ( 1 ). C. difficile sporları, kolonizasyon gelişmiş hastalardan ya da çevrelerindeki kişilerden temas sonucu alınabilmekte, çoğu zaman hastane personelinin elleri aracılığıyla taşınmaktadır. Elle taşınma önemli bir bulaş şekli olarak düşünülmektedir. Yapılan bir araştırmada, hastane personelinin eldiven kullanması sonucunda C. difficile ye bağlı ishallerde beş kat azalma görüldüğü belirtilmiştir. C. difficile ısıya dirençli sporları nedeniyle hastane ortamında uzun süre canlı kalabilmektedirler (2). C. difficile ilişkili kolit patogenezinde başlangıç antibiyotiklerle kolonun normal bakteriyel florasının bozulmasıdır. Bu durum C. difficile kolonizasyonuna sebep olmaktadır. Hastanede antibiyotik alan hastaların bulunduğu çevrede C. difficile yüksek orandadır. Yetişkin ve iki yaş üstündeki çocuklarda normal kolon mikroflorası C. difficile kolonizasyonunu engellemektedir (1). C. difficile ilişkili enfeksiyon patogenezinde primer risk faktörleri; 65 yaş üstü, son üç ay içinde antibiyotik kullanımı ve hastanede yatmadır. Sekonder risk faktörleri arasında nazogastrik tüp uygulanması, sigara kullanımı, asit azaltan ajanlar (proton pompa inhibitörleri, H2 reseptör antagonistleri), malign hastalıklar, kemoterapi alınması bulunmaktadır (3). Antibiyotik aracılıklı diyarelerin %20 den fazlası ve antibiyotik ilişkili kolitlerin %60-75 inden ve psödomembranöz 184 Turk Hij Den Biyol Derg

25 H. KOSTUL ve ark. Cilt 72 Sayı kolitlerin %95 inden fazlasında C. difficile etken olarak bildirilmektedir (4). C. difficile ilişkili diyare ve kolitle sıklıkla ilişkili antibiyotikler ampisilin, amoksisilin, sefalosporinler ve klindamisindir. C. difficile enfeksiyonu tedavisinde ilk seçilen antibiyotik metranidazoldur. Normal kolon florasının yeniden oluşumu C. difficile kolonizasyonunu engeller ve klinik iyileşme oluşur. C. difficile patojenik suşları, toksin A enterotoksin ve toksin B sitotoksin olmak üzere iki potent toksin oluşturur. Her iki toksin de insan kolon epitel hücrelerine bağlanır ve hasar verir. Kolon mukozasında inflamasyon ve psödomembranlar oluşur. C. difficile enfeksiyonu klinik olarak asemptomatik taşıyıcılıktan, megakolon ve perforasyonların olduğu fulminan kolite kadar uzanabilir. Bunun sebebi tam olarak bilinmemekle birlikte bakteri virulans faktörlerden çok konak faktörlerin önemli olduğu görünmektedir. Diyare genellikle antibiyotik tedavisi başladıktan 4-9 gün sonra oluşmaktadır. Hastaların üçte birinde antibiyotik kesildikten sonra diyare başlar. Kanser kemoterapisi kolonun mikroflorasını bozabilir ve kolonizasyon, diyare ve enfeksiyona yol açabilir (1). Clostridium difficile ilişkili hastalık hayatı tehdit eden bir enfeksiyondur ve mortalite oranı %6-15 olarak bildirilmektedir. Bu enfeksiyonun hastanede yayılımının kontrol altına alınması gereklidir. Özellikle komplike enfeksiyonlarda antibiyotik tedavisi alan hastalar daha sıklıkla enfeksiyona maruz kalmaktadır. Hastalığın doğru tanısı hastaların yönetilmesinde; yayılımının kontrol altına alınmasında ve sürveyans bilgilerinin elde edilmesinde önemlidir. C. difficile tanısında referans metod dışkının hücre kültürünün yapılması ve sitotoksisitenin antiserumlarla inhibisyonu ile gösterilmesidir. Bu test 2-3 günde tamamlanmaktadır. Günümüzde C. difficile toksin tanısında hızlı metodlar geliştirilmiştir. Her iki toksini tespit edebilen ticari testler bulunmaktadır. Diğer tanı metodları polimeraz zincir reaksiyonu ve glutamat dehidrogenaz varlığının araştırılmasıdır (5). Bu çalışmada çeşitli kliniklerde yatan ve ishalli hastalardan gönderilen dışkı örneklerinde C. difficile toksin A ve B varlığının ve çeşitli risk faktörlerinin araştırılması amaçlanmıştır. GEREÇ VE YÖNTEM Eylül Ekim 2011 tarihleri arasında Mersin Üniversitesi Tıp Fakültesi Tıbbi Mikrobiyoloji Anabilim Dalı Mikrobiyoloji Laboratuvarı na çeşitli kliniklerde yatan ishalli hastalardan gönderilen dışkı örnekleri çalışmaya alınmıştır. Bu dönemde yatan hastalardan toplam 878 adet dışkı örneği gönderilmiş olup bunlardan sulu, mukuslu ve yumuşak kıvamlı olan 158 adeti çalışmaya dahil edilmiştir. Bu örneklerin 47 sinin hasta yatışından bir gün sonra; 111 inin ise iki gün ve sonrasında geldiği tespit edilmiştir. Dışkı örnekleri makroskopik ve mikroskopik olarak incelenmiştir. Makroskopik incelemede dışkıların kıvamına, kan ve mukus olup olmadığına bakılmıştır. Mikroskopik incelemede ise eritrosit-lökosit varlığı ve protozoon kisttrofozoitleri araştırılmıştır. Bakteriyolojik kültür için örnekler kanlı agar, Eosin Methylene Blue (EMB) agar, Salmonella-Shigella (SS) agar ve Sabouraud Dextrose Agar besiyerlerine ekilmiştir. Bir miktar dışkı örneği steril 2 ml lik iki adet ependorf tüpe alınarak C. difficile Toksin A/B araştırılması yapılıncaya kadar -80 O C d e s a k l a n m ı ş t ı r. B e s i y e r l e r i e t ü v d e 37 O C de saat inkübasyona bırakılmıştır. Daha sonra kültürde üreyen mikroorganizmaların koloni morfolojisi değerlendirilerek kolonilerden Gram boyama yapılmış ve mikroskopta incelenmiştir. Gram pozitif bakterilerin identifikasyonunda katalaz, koagülaz ve eskülin hidrolizi testleri, Gram negatif enterik bakterilerin identifikasyonunda ise klasik biyokimyasal yöntemler ve gerektiğinde otomatize bakteri identifikasyon sistemi (VITEK, biomérieux) kullanılmıştır. Maya üremesi tespit edilen dışkı örneklerine germ tüp testi ile Candida albicans ve non-albicans ayrımı yapılmıştır. Clostridium difficile Toksin A/B aranması Dışkı örneklerinde C. difficile toksin A/B varlığının araştırılması için C. difficile Toksin A/B Turk Hij Den Biyol Derg 185

26 Cilt 72 Sayı CLOSTRIDIUM DIFFICILE TOKSİN ARAŞTIRILMASI kiti (lot numarası: ) kullanılarak (VIDAS, biomérieux, Fransa) Enzyme-Linked Fluorescent Assay (ELFA) yöntemi ile VIDAS cihazında (biomérieux, Fransa) firmanın önerdiği prosedüre göre çalışılmıştır. Testin prensibi; iki adım enzim immunoassay sandviç yöntemi ve bir floresan okumadır. Çalışma öncesi dışkı örnekleri santrifüj edilerek homojenize edildikten sonra test stripindeki uygun kuyucuğa eklenerek cihaza yerleştirilmiştir. Testin tüm adımları cihazda otomatik olarak çalışılmış ve yaklaşık test 75 dakika içinde tamamlanmıştır. İstatistiksel Analiz Verilerin normal dağılıma uyup uymadığı Shapiro wilk testi ile incelenmiştir. Normal dağılıma uymayan sürekli değişkenler medyan [çeyreklikler] şeklinde özetlenmiş ve grup karşılaştırmalarında Mann Whitney U testinden yararlanılmıştır. p<0,05 istatistiksel anlamlılık düzeyi olarak kabul edilmiştir. Analizler MedCalc v ve SPSS 11.5 paket programlarında yapılmıştır. BULGULAR Çalışmaya alınan toplam 158 hastanın 86 (%54,4) sı erkek 72 (%45,6) si kadındı. Bunların 84 (%53) ü 0-18 yaş grubu, 54 (%34) ü yaş grubu ve 20 (%12,6) si 65 ve üzeri yaş grubunda idi. C. difficile toksin A/B pozitifliği 18 (%11,4) hasta örneğinde saptanmıştır. Bunların yaş gruplarına göre dağılımında 16 (%88,8) sının çocuk yaş grubunda, iki hastanın (%11,2) yetişkin yaş grubunda olduğu tespit edilmiştir. C. difficile toksin pozitif hastaların yaşlarına göre dağılımı; 2 si 0-6 aylık, 7 si 6-12 ay, 1 i 5 yaş ve 6 sı yaş arasında, yetişkin iki hasta ise 33 ve 56 yaşlarında idi. Dışkı örneklerinin mikroskobik incelemesinde; toksin pozitif bir örnekte Entamoeba histolytica/ E. dispar k i s t l e r i v e t o k s i n n e g a t i f a l t ı ö r n e k t e E. histolytica / E. dispar k i s t v e t r o f o z o i t l e r i, bir örnekte ise Giardia intestinalis kistleri görülmüştür. Dışkı örneklerinden izole edilen mikroorganizmaların dağılımı Tablo 1 de görülmektedir. Dışkı mikroskobisinde lökosit toksin pozitif hastaların altı (%33,3) sında ve toksin negatif hastaların 52 (%37) sinde lökosit görülmüştür. Tablo 1. Hastaların dışkı kültürlerinde izole edilen mikroorganizmaların dağılımı Kültür Sonucu C. difficile toksin A/B pozitif hastalar Çalışmadaki hastaların hastanede yatış süresi içinde aldıkları antibiyotiklere bakıldığında ilk sırayı sefalosporinler almakta onu karbapenemler takip etmekte daha sonra da sırayla florokinolonlar, penisilin, beta laktam+beta laktamaz inhibitörleri ve diğer antibiyotikler de bunları izlemektedir. C. difficile toksin A/B pozitif bulunan hastaların daha önce kullandığı antibiyotiklere bakıldığında beşinin (%28,5) penisilin grubu, üçünün (%16,5) sefalosporin grubu, üçünün (%16,5) karbapenem, ikisinin (%11,0) b e t a - l a k t a m + b e t a - l a k t a m a z C. difficile toksin A/B negatif hastalar n (%) n (%) Normal flora bakterileri* 17 (94,5) 128 (91,4) Candida spp. 1 (5,5) 9 (6,4) Salmonella spp. - 2 (1,5) Shigella spp. - 1 (0,7) Toplam 18 (100) 140 (100) * Escherichia coli, Klebsiella spp., Enterobacter spp., Enterococcus spp., Proteus spp. vb. i n h i b i t ö r ü, b i r i n i n (%5,5) penisilin + sefalosporin ve birinin (%5,5) sefalosporin + karbapenem kombinasyonu aldığı tespit edilmiştir. Toksin pozitif tespit edilen üç hastanın ise antibiyotik kullanım öyküsü bulunmadığı saptanmıştır (Tablo 2). Penisilin a l a n l a r ı n a l m a y a n l a r a g ö r e 6, 3 4 k a t d a h a f a z l a C. difficile toksin A/B pozitifliği saptanmıştır. (OR= 6,34 (1,81-22,24) p= 0,004). Antibiyotik kullanım süreleri (p= 0,659) bakımından toksin negatif ve pozitif gruplar arasında istatistiksel o l a r a k a n l a m l ı b i r f a r k s a p t a n m a m ı ş t ı r. 186 Turk Hij Den Biyol Derg

27 H. KOSTUL ve ark. Cilt 72 Sayı Yatış süresince antibiyotik kullanma süresi ortanca değeri (medyanı) 15 gün olarak belirlenmiştir. Hastaların dışkı örneklerinde antibiyotiğe başladıktan ortanca 6,6 gün (min 0 - max 40 gün) sonra toksin A/B pozitifliği saptanmıştır. Yatıştan sonra pozitiflik için geçen süre ise ortanca değeri 10,4 gün (min 0 - max 58 gün) olarak tespit edilmiştir. Tablo 2. Hastaların hastanede yattıkları süre içerisinde kullandıkları antibiyotikler Antibiyotik Grupları C. difficile toksin A/B pozitif hastalar C. difficile toksin A/B negatif hastalar Sayı (%) Sayı (%) p değeri Penisilin 5 (28,5) 8 (5,7) 0,006 Sefalosporin 3 (16,5) 57 (40,7) 0,080 Karbapenem 3 (16,5) 24 (17,2) 0,777 Beta-laktam+betalaktamaz inhibitörü Penisilin- Sefalosporin Sefalosporin- Karbapenem 2 (11,0) 11 (7,8) 0,986 1 (5,5) 5 (3,5) 0,810 1 (5,5) 10 (7,1) 0,808 Florokinolon - 16 (11,5) Aminoglikozit - 2 (1,5) Glikopeptit - 1 (0,7) Nitroimidazol - 5 (3,6) Tablo 3. C. difficile toksin pozitif ve negatif hastaların risk faktörlerinin değerlendirilmesi Risk Faktörleri Hematolojik malignite C. difficile toksin A/B pozitif hastalar C. difficile toksin A/B negatif hastalar Sayı (%) Sayı (%) p değeri 4 (22) 46 (33) 0,519 Nazogastrik tüp 4 (22) 15 (11) 0,304 Anti-ülser tedavi 8 (44) 76 (54) 0,591 Biyokimyasal test sonuçlarına bakıldığında toksin pozitif hastaların dördünde (%22,2) yüksek değerlerde lökosit varlığı ve 10 (%55,5) unda yüksek C-reaktif protein (CRP) varlığı saptanmıştır. Çalışmaya alınan hastalarda C. difficile için risk faktörlerinden olan hematolojik malignitesinin ve nazogastrik tüp uygulamasının ve altta yatan herhangi bir hastalığının olup olmadığı ve antiülser tedavi (proton pompa inhibitörü, H2 antagonist veya her ikisi) alıp almadıklarının dağılımı Tablo 3 de verilmiştir. TARTIŞMA C. difficile hastanede yatan hastalarda gelişen diyarelerin en yaygın sebeplerindendir. C. difficile ye bağlı ishal sıklığını araştırmak için ülkemizde yapılan çalışmalarda toksin A-B pozitifliğinin %3,2 ile %24 arasında olduğu görülmektedir (6-15). Bizim çalışmamızda C. difficile toksin A/B %11,4 oranında pozitif olarak tespit edilmiştir. C. difficile ye bağlı ishal oluşumunda en önemli risk faktörü antibiyotik kullanımıdır. C. difficile ilişkili diyare ve kolit sıklıkla ampisilin, amoksisilin, sefalosporinler ve klindamisin gibi antibiyotiklerle ilişkilidir (1). Ercis ve arkadaşları C. difficile ye bağlı ishalin, hastaların büyük bir kısmında (32/68) beta laktam - beta laktamaz inhibitörü kombinasyonlarının kullanımı sonucunda geliştiğini, bunu aminoglikozidlerin (12/68) ve sefalosporinlerin (8/68) izlediğini saptamışlardır (9). Altındiş ve arkadaşları C. difficile toksin pozitif hastaların %84,6 sının ampisilin - sulbaktam, %7,7 sinin ise kotrimoksazol - SXT ve makrolid antibiyotik kullandığını belirlemişlerdir (11). Altuğlu ve arkadaşları toksin A pozitif bulunan hastaların beşinin üçüncü kuşak sefalosporin, birinin trimetoprim-sulfametoksazol ve birinin de siprofloksasin kullanmakta olduğunu saptamışlardır (16). Avustralya da yapılan C. difficile ile ilişkili ishal olgularının incelendiği epidemiyolojik bir çalışmada; 3. kuşak sefalosporinlerin kullanımının Turk Hij Den Biyol Derg 187

28 Cilt 72 Sayı CLOSTRIDIUM DIFFICILE TOKSİN ARAŞTIRILMASI kontrol altına alınması ile C. difficile ilişkili ishal olgularının azaltılabileceği bildirilmiştir (17). C. difficile ye bağlı ishalin oluşmasına neden olan diğer bir risk faktörü, altta yatan ciddi bir hastalığın varlığıdır. Kronik hastalığı olanların daha sık ve daha uzun süre hastanede yatmaları sebebiyle C. difficile ile kolonize olma ihtimali artmaktadır (18). Ercis ve arkadaşları C. difficile toksin A/B pozitif tespit ettikleri olguların %52,9 unda altta yatan bir hastalığın olduğunu, bunları da kronik obstrüktif solunum yolu hastalığı, böbrek yetmezliği ve kanser olarak belirlendiğini bildirmişlerdir (9). Altuğlu ve arkadaşları toksin A pozitif bulunan hastaların operasyon geçirmek, politravma, vaskülit, solid tümör, organik fosfat zehirlenmesi, beyin içi kanaması, kronik obstrüktif akciğer hastalığı gibi nedenlerden dolayı yoğun bakımda yatmakta olduğunu tespit etmişlerdir (16). Çalışmamızda, C. difficile toksin A/B pozitif 18 hastanın dördünde (%22,2) hematolojik malignite ve dördünde (%22,2) nazogastrik tüp olduğu tespit edilmiştir. Hematolojik malignitenin olması ve nazogastrik tüp uygulaması ile C. difficile toksin A/B nin pozitif ya da negatif olması arasında istatistiksel olarak anlamlı bir ilişkinin olmadığı görülmüştür. C. difficile toksin A/B nin pozitifliği ile anti ülser ilaç tedavisi alımı arasında istatistiksel olarak anlamlı bir ilişki bulunmamıştır (p= 0,591). Hastanede yatış süreleri (p= 0,317) bakımından toksin negatif ve pozitif gruplar arasında istatistiksel olarak anlamlı bir fark belirlenememiştir. Antibiyotik ilişkili ishal vakalarında sıklıkla karın ağrısı, ateş, lökositoz, dışkıda lökositler ve hipoalbüminemi görülmektedir (4). Antibiyotiğe bağlı ishal olguları sıklıkla kendini sınırlama eğilimindedir. İshal sıklıkla sulu, mukusludur ve kan bulunmaz. Kolit olgularında ise sistemik bulgular, dışkıda lökosit ve eritrosit tespit edilmektedir (19). Bizim çalışmamızda; mikroskobik incelemede toksin pozitif 18 örneğin ikisinde (%11) eritrosit, beşinde (%27) lökosit, birinde hem eritrosit ve hem lökosit varlığı saptanırken beş örneğin (%27) makroskopik görüntüsünün mukuslu olduğu görülmüştür. Kan lökosit değerleri bakımından gruplar arasında istatistiksel olarak anlamlı bir fark bulunamamıştır (p= 0,164). CRP değerlerinin toksin negatif hastalarda daha yüksek olduğu tespit edilmiştir. CRP değerleri bakımından gruplar arasında istatistiksel olarak anlamlı bir fark bulunmuştur (p= 0,038) (Tablo 4). Bunun nedeninin hastaların altta yatan diğer hastalıklarına bağlı olabileceği düşünülmüştür. Salmonella türleri, C. perfringens tip A, Staphylococcus aureus, Klebsiella oxytoca ve C. albicans gibi diğer enterik patojenlerde antibiyotik ilişkili diyare ile karışabilir. Klinik semptomları olan hastalarda C. difficile negatif bulunduğunda bu patojenler araştırılmalıdır (4). Altuğlu ve arkadaşlarının çalışmasında hastaların 21 ine bakteriyolojik kültür yapılmış, sadece bir tanesinde Shigella flexneri izole edilmiş. Toksin A pozitif hastaların hiçbirinde patojen bir bakteri saptanmamıştır (16). Aygün ve arkadaşları Tablo 4. C. difficile toksin pozitif ve negatif hastaların risk faktörlerinin değerlendirilmesi Biyokimyasal Testler C. difficile toksin A/B pozitif hastalar medyan [çeyrekliler] C. difficile toksin A/B negatif hastalar medyan [çeyrekliler] p değeri Lökosit [ ] [ ] 0,164 CRP yüksek 12,50 [2,00-51,50] 45,00 [9,75-145,75] 0, Turk Hij Den Biyol Derg

29 H. KOSTUL ve ark. Cilt 72 Sayı Salmonella, Shigella, Aeromonas, Plesiomonas varlığını araştırmak için aynı zamanda bakteriyolojik kültür yapmışlardır. Fakat hiçbirinde bu bakterilere rastlanmamış hepsinde normal flora elemanlarının ürediği görülmüştür (10). Çalışmamızda toksin pozitif hastaların birinde (%5,5) C. albicans ve 17 (%94,5) sinde normal flora bakterileri üremiştir. Dışkıda C. difficile toksin araştırması için altın standart doku kültüründe sitopatik etkinin gösterilmesidir. Doku kültürü ile toksin araştırılması zaman alıcı ve pahalı bir yöntemdir. Birçok merkezde enzim immunoassay (EIA); toksin A ve B yi saptamada hızlı sonuç alınması nedeniyle rutin uygulamada tercih edilen bir yöntemdir (20). C. difficile tanısında önceleri toksin A ve sonra toksin A ve toksin B araştıran EIA testleri yaygın olarak kullanılmaktaydı. Son zamanlarda tanıda C. difficile hücre duvar antijeni glutamat dehidrogenaz (GDH) testinin toksin A ve B EIA den daha duyarlı olduğu bildirilmektedir. C. difficile tanısında test algoritmasının değerlendirildiği bir çalışmada; sitotoksin nötralizasyon testi referans yöntem olarak kullanıldığında hızlı immunokromotografik testlerle GDH ve toksin A ve B taranması ile bir saat içinde örneklerin %90 nında doğru sonuç alındığı, kalan %10 örnekte ise algortimada üçüncü bir testin gerekli olduğu tespit edilmiştir. Bu testin sitotoksin nötralizasyonu, toksijenik kültür veya polimeraz zincir reaksiyonu ile toksin ve toksin genlerinin araştırılmasından birinin olabileceği bildirilmektedir. ABD de 2004 yılında C. difficile tanısında laboratuvarların kullandığı t e s t l e r d e ğ e r l e n d i r i l d i ğ i n d e ; % 4 2 s i k a t ı f a z E I A i l e C. difficile toksin A ve B, %26 sı hızlı immunokromotografik testler ile toksin A/B veya/ve GDH araştırdıkları bildirilmiştir. Hızlı immunokromotografik testlerdeki gelişmelerle 2008 yılında %46 laboratuvar bu metodu kullanırken, %43 ünün EIA metotlarını kullanmakta olduğu tespit edilmiştir (21). Sonuç olarak; çocuk yaş grubunda toksin pozitifliği daha yüksek oranda belirlenmiş ve toksin pozitif grupta penisilin kullanımı istatistiksel olarak anlamlı bulunmuştur. Araştırılan diğer risk faktörleri (hematolojik malignitenin olması, n a z o g a s t r i k t ü p u y g u l a m a s ı, a n t i ü l s e r i l a ç tedavisi) ve hastanede yatış süreleri bakımından toksin negatif ve pozitif gruplar arasında istatistiksel bir fark bulunamamıştır. Bunun sebebinin toksin pozitif gruptaki hasta sayısının az olmasından kaynaklanabileceği düşünülmüştür. C. difficile hastanede yatan ve başta antibiyotik kullanan hastalarda gelişen ishallerde öncelikle akla gelmelidir. Tanı için toksin oluşumunun gösterilmesi gereklidir. Rutin laboratuvarlarda C. difficile t o k s i n t e s p i t i i ç i n d u y a r l ı l ı k v e ö z g ü l l ü ğ ü y ü k s e k olan EIA testleri veya immunokromotografik yöntemler tercih edilebilir. Böylece toksin pozitif hastalar belirlenerek bulaşmayı önlemek için izole edilmesi ve uygun tedavi alması sağlanır. Aynı zamanda çevresel hijyen ve el yıkama gibi enfeksiyon kontrol önlemleri alınarak C. difficile nin hastane ortamında hastalar arasında yayılımı önlenmiş olacaktır. TEŞEKKÜR Bu çalışmanın istatistik analizlerinin yapılmasında katkılarından dolayı Prof. Dr. Arzu KANIK ve Arş. Gör. Didem DERİCİ ye teşekkür ederiz. Turk Hij Den Biyol Derg 189

30 Cilt 72 Sayı CLOSTRIDIUM DIFFICILE TOKSİN ARAŞTIRILMASI KAYNAKLAR 1. Kelly CP, LaMont T. Clostridium difficile infection. Annu Rev Med, 1998; 49: Di Persio JR, Varga FS, Conwell DL, Kraft JA, Kozak KJ, Willis DH. Development of a rapid enzyme Immunoassay for Clostridium difficile Toxin A and Its use in the diagnosis of C. difficile-associated disease. J Clin Microbiol, 1991; 29(12): Stanley JD, Bartlett JG, Dart BW IV, Ashcraft JH. Clostridium difficile infection. Curr Probl Surg, 2013; 50(7): Coté GA, Buchman AL. Antibiotic-associated diarrhoea. Expert Opin Drug Saf, 2006; 5(3): Planche T, Aghaizu A, Holliman R, Riley P, Poloniecki J, Breathnach A, et al. Diagnosis of Clostridium difficile infection by toxin detection kits: A systematic review. Lancet Infect Dis, 2008; 8(12): Boral ÖB. Clostridium difficile infeksiyonu ön tanılı hastaların dışkı örneklerinde Toksin A ve B nin belirlenme sıklığı. Türk Mikrobiyol Cem Derg, 2002; 32(3-4): Aygün G, Aslan M, Yaşar H, Altaş K. Hastanede yatarken gelişen ishal olgularında Clostridium difficile toksin A+B araştırılması. ANKEM Derg, 2002; 16(1): Deniz U, Ülger N, Aksu B, Karavuş M, Söyletir G. Marmara Üniversitesi Hastanesinde yatan ishalli hastalardan izole edilen Clostridium difficile kökenlerinde toksin genlerinin araştırılması. Mikrobiyol Bul, 2011; 45(1): Ercis S, Ergin A, Hasçelik G. Clostridium difficile ye bağlı ishal olgularının 6 yıllık değerlendirilmesi. Mikrobiyol Bul, 2004; 38(1-2): Aygün G, Aslan M, Yaşar H, Altaş K. Antibiyotikle ilişkili ishal olgularında Clostridium difficile Toksin A+B araştırılması. Türk Mikrobiyol Cem Derg, 2003; 33(1): Altındiş M, Usluer S, Çiftçi İH, Tunç N, Çetinkaya Z, Aktepe OC. Antibiyotiğe bağlı ishal olgularında Clostridium difficile varlığının kültür ve toksin saptama yöntemleriyle araştırılması. Mikrobiyol Bul, 2007; 41(1): Tunçcan ÖG, Ulutan F, Karakuş R. Antibiyotiğe bağlı ishal gelişen nötropenik ve nötropenik olmayan hastalarda Clostridium difficile toksin sıklığı ve risk faktörlerinin analizi. Mikrobiyol Bul, 2008; 42(4): Gündem SV, Özdemir M, Baysal B, Baykan M. Antibiyotik ilişkili ishal olgularında toksijenik Clostridium difficile varlığının ve risk faktörlerinin araştırılması. Türk Mikrobiyol Cem Derg, 2012; 42(2): Ayarcı AO, Özakın C, Oral B, İlbaşı AR, S ı n ı r t a ş M, S ı ğ ı r l ı D, e t a l. İ s h a l l i o l g u l a r d a Clostridium difficile toksin pozitifliğinin retrospektif analizi. Türk Mikrobiyol Cem Derg, 2012; 42(1): Lale Z, Doğruman Al F, Fidan I, Adıyaman G, Yeşilyurt E, Özkan S, et al. İshalli hastaların dışkı örneklerinde Clostridium difficile toksin A/B sıklığının araştırılması. ANKEM Derg, 2013; 27(2): Altuğlu İ, Aydemir Ş, Zeytinoğlu A, Erensoy S, Bilgiç A. Antibiyotikle ilişkili nozokomiyal diyarelerde Clostridium difficile Toksin A araştırılması. Turkish Journal of Infection, 2001; 15(4): Thomas C, Stevenson M, Williamson DJ, Riley TV. Clostridium difficile-associated diarrhea: Epidemiological data from Western Australia associated with a modified antibiotic policy. Clin Infect Dis, 2002; 35(12): Barbut F, Petit JC. Epidemiology of Clostridium difficile associated infections. Clin Microbiol Infect, 2001; 7(8): Aygün G. Antibiyotiğe Bağlı İshaller. In: Topçu AW, Söyletir G, Doğanay M. Enfeksiyon Hastalıkları ve Mikrobiyoloji. Cilt 2, İstanbul: Nobel Tıp Kitabevleri, 2008: Özinel MA. Hastane infeksiyonu etkeni olarak Clostridium difficile. Hastane İnfeksiyonları Dergisi, 2001; 5(3): Schmidt ML, Gilligan PH. Clostridium difficile testing algorithms: What is practical and feasible? Anaerobe, 2009; 15(6): Turk Hij Den Biyol Derg

31 Araştırma Makalesi/Original Article Makale Dili Türkçe /Article Language Turkish Türk Hijyen ve Deneysel Biyoloji Dergisi Mardin Devlet Hastanesi nde yılları arasında metisiline dirençli stafilokoklarda direnç profilleri Resistance patterns of the methicillin resistant staphylococci between 2011 and 2013 in Mardin State Hospital Filiz ORAK 1 ÖZET Amaç: Metisiline dirençli Staphylococcus aureus (MRSA), ilk kez 1961 yılında tanımlandıktan sonra, özellikle antibiyotik direnci yönünden tüm dünyada önemli bir problem haline gelmiştir. MRSA suşları sıklıkla penisilinaza dirençli penisilinler, sefalosporinler dahil tüm beta-laktam grubu antibiyotiklere ve betalaktam grubu dışı bazı antibiyotiklere de dirençli olup sadece vankomisin ile teikoplanine duyarlıdır. Bu çalışmanın amacı, Mardin Devlet Hastanesi Mikrobiyoloji Laboratuvarı nda izole edilen stafilokok suşlarında metisilin direnci ile birlikte çeşitli antibiyotiklere direnç durumunun araştırılmasıdır. Metisilin direncinin doğru olarak belirlenmesi uygun antimikrobik ilacın kullanımını sağlamak için gereklidir. Yöntem: Bu çalışmada çeşitli klinik örneklerden izole edilen 73 stafilokok suşu kullanılmıştır. Antimikrobiyal duyarlılık testi olarak Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) önerileri doğrultusunda Kirby-Bauer disk difüzyon testi kullanılmıştır. Suşların metisilin dirençlerinin araştırılması amacıyla, %4 NaCl içeren Mueller-Hinton Agar (RTA, TR) ve 1 μg lık oksasilin diski (Bioanalyse, TR) kullanılmıştır. Bulgular: Suşların 22 (%30,1) si MRSA, dokuzu (%12,3) MRCNS (Metisiline Dirençli Koagülaz Negatif S. aureus) ve 42 (%57,5) si MSSA (Metisiline Duyarlı S. aureus) olarak belirlenmiştir. MRSA suşlarının beşi (%22,7) ve MRCNS suşlarının da üçü (%33,3) hastane kaynaklı olarak tespit edilmiştir. MRSA suşları eritromisine %81,8, sefoksitine ABSTRACT Objective: After the report of first case of methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) had been described in 1961, MRSA became a major problem worldwide especially because of antibiotic resistance. MRSA strains are often resistant to beta-lactam antibiotics such as penicilinase resitant penicillins, cephalosporins and to some non-beta-lactam antibiotics, but they are only susceptible to vancomycin and teicoplanin. The aim of our study was to evaluate the resistance of Staphylococcus strains isolated at Mardin State Hospital against methicillin and various other antimicrobials. Accurate assessment of methicillin resistance is necessary to ensure proper use of antimicrobial drugs. Method: In this study, 73 Staphylococcus strains isolated from various clinical specimens were evaluated. As antimicrobial susceptibility testing was performed using the Kirby-Bauer disc diffusion method according to the Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) criteria. Mueller-Hinton Agar (RTA,TR) containing 4% NaCl and 1 μg oxacillin disc (Bioanalyse, TR) were used for determining methicillin resistance. Results: Of the strains tested, 22 (30.1%) were found to be (MRSA), nine (12.3%) were methicillin-resistant coagulase-negative staphylococci (MRCNS) and 42 (57.5%) were methicillin-susceptible S. aureus (MSSA). Five (22.7%) of the MRSA strains, and three (33%) of the MRCNS strains were identified as nosocomial. 81.8% of the MRSA strains were found to be resistant to erythromycin; 66.6% 1 Özel Elitpark Hastanesi,Tıbbi Mikrobiyoloji Laboratuvarı, ÇORUM İletişim / Corresponding Author : Filiz ORAK Özel Elitpark Hastanesi,Tıbbi Mikrobiyoloji Laboratuvarı, ÇORUM Tel : E-posta / drfilizorak@hotmail.com Geliş Tarihi / Received : Kabul Tarihi / Accepted : DOI ID : /TurkHijyen Orak F. Mardin Devlet Hastanesi nde yılları arasında metisiline dirençli stafilokoklarda direnç profilleri. Turk Hij Den Biyol Derg, 2015; 72(3): Turk Hij Den Biyol Derg, 2015; 72(3):

32 Cilt 72 Sayı STAFİLOKOK SUŞLARINDA METİSİLİN DİRENCİ %66,6, gentamisine %60; amoksisilin/klavulanik asit, penisilin ve norfloksasine %100 dirençli bulunmuştur. MRSA ve MRCNS suşlarında penisiline %100 oranında direnç saptanmıştır. Sonuç: Çalışmaya alınan hiçbir suşta vankomisin ve teikoplanine direnç bulunmaması sevindirici bir gelişmedir. Anahtar Kelimeler: Antibiyotik duyarlılığı, direnç, metisilin, stafilokok to cefoxitin; 60% to gentamicin; and 100% to amoxicillin/ clavulanic acid, norfloxacin and penicillin. The resistance rates to penicillin among the MRSA and MRCNS strains were determined to be 100%. Conclusion: It is a welcome development to find that there was no resistance to vancomycin and teicoplanin strains tested in this study. Key Words: Antibiotic susceptibility, resistance, methicillin, staphylococci GİRİŞ Stafilokoklar önemli enfeksiyon etkenleri olarak 100 yıldan uzun bir süredir tıp dünyasını meşgul etmektedir yılında metisilin, daha sonra da diğer penisilinaza dirençli penisilinlerin kullanıma girmesiyle birlikte stafilokokal enfeksiyonların tedavisinde önemli aşama kaydedilmiştir. Ancak çok kısa bir süre içerisinde (1961) stafilokoklarda metisilin direnci tanımlanmış ve 1970 li yıllardan itibaren de metisiline dirençli Staphylococcus aureus (MRSA) suşlarında çoklu antibiyotik direnci problemi ortaya çıkmıştır (1). Metisiline duyarlı ve dirençli stafilokoklar arasındaki temel fark, penisilin bağlayan protein (PBP) lerdedir. Metisilin direnci, duyarlı suşlarda bulunmayan PBP 2a (PBP2 ) denen proteinin varlığına bağlıdır. Direncin n e d e n i o l a n 2 a y ı k o d l a y a n g e n k r o m o z o m a l D N A üzerinde mec (metisilin direnç geni) olarak adlandırılan bölgedir (2). Metisilin direncinin düzenlenmesinde mec bölgesi dışında factors essential for the expression of methicillin resistance (fem) genleri olarak tanımlanmış genler de g ö r e v a l m a k t a d ı r ( 3 ). M R S A d a m e t i s i l i n e d u y a r l ı S. aureus da bulunmayan ve SCCmec olarak i s i m l e n d i r i l e n b i r d i r e n ç a d a s ı b u l u n m a k t a d ı r ( 4 ). MRSA suşlarının çoğu beta-laktam yapısındaki antibiyotiklerin yanı sıra aminoglikozidler, kinolonlar, klindamisin ve karbapenem gibi birçok antibiyotiğe de dirençlidirler (5, 6). S. aureus nozokomiyal yara enfeksiyonlarında en sık saptanan etkendir. Bunu enterokoklar ve koagülaz-negatif stafilokoklar izlemektedir (1). Toplumsal yaşamda, toplum kökenli MRSA, önemli bir enfeksiyon olarak ortaya çıkmıştır. B a ş l ı c a c i l t v e y u m u ş a k d o k u e n f e k s i y o n l a r ı n d a n s o r u m l u o l m a k l a b i r l i k t e p n ö m o n i v e a m p i y e m gibi şiddetli pulmoner enfeksiyonlara da neden olabilmektedir. Toplum kökenli MRSA, sağlık hizmeti ile ilişkili olanların aksine, geniş bir antibiyotik grubuna duyarlıdır. Toplum kökenli MRSA, sıklıkla, n ö t r o fi l l e r i n h ü c r e m e m b r a n l a r ı n d a l i t i k p o r l a r oluşturan, inflamasyon ve doku yıkımını başlatan nötrofil kemotaktik faktörlerin salınımını indükleyen Pa n t o n - Va l e n t i n e l ö k o s i d i n i ( P V L ) k o d l a y a n g e n i taşımaktadır (7). Hastane kökenli ve toplum kökenli MRSA ların epidemi yapma potansiyeli olduğundan halk sağlığı yönünden büyük önem taşımaktadır (8). Bu çalışmada, Mardin Devlet Hastanesi Mikrobiyoloji Laboratuvarı ndan izole edilen stafilokok suşlarında metisilin direnci ile birlikte çeşitli antibiyotiklere direnç durumunun araştırılmasını amaçlanmıştır. 192 Turk Hij Den Biyol Derg

33 F. ORAK Cilt 72 Sayı GEREÇ VE YÖNTEM Ocak Ağustos 2013 tarihleri arasında başhekimlik onayı alınarak, Mardin Devlet Hastanesi Mikrobiyoloji Laboratuvarı na gönderilen çeşitli klinik örneklerden izole edilen toplam 73 stafilokok suşu retrospektif olarak değerlendirmeye alınmıştır. Gelen örnekler, %5 koyun kanlı agar, McConkey Agar (RTA, TR) ve DNaz besiyerlerine ekilerek, saat O C de inkübe edilmiştir. DNaz besiyerinde üreyen ve kanlı agarda üreyen izolatlar, Gram boyama, katalaz (ORBAK, TR) ve tüp koagülaz testleriyle tanımlanmıştır. S. aureus ve koagulaz negatif stafilokok (KNS) olarak tanımlanan izolatların oksasilin ve diğer antibiyotiklere [vankomisin, teikoplanin, penisilin, klindamisin, eritromisin, amoksisilin/klavulanik asit, sefoksitin, levofloksasin ve gentamisin (Bioanalyse, TR)] duyarlılıkları Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) önerileri doğrultusunda Kirby-Bauer disk difuzyon yöntemiyle araştırılmıştır (9). Buna göre 24 saatlik bakteri kültüründen 0,5 McFarland bulanıklığına eşit olacak şekilde doğrudan koloni süspansiyonu hazırlanmış ve %4 NaCl içeren Mueller-Hinton Agar (MHA) besiyeri yüzeyine eküvyon yardımıyla yayılmıştır. Besiyeri yüzeyi kuruduktan sonra diskler yerleştirilmiş ve 35 O C de 24 saatlik inkübasyondan sonra zon çapları değerlendirilmiştir. Metisilin direnci CLSI kriterleri doğrultusunda 1µg oksasisilin diski (<10 mm ise dirençli, >13 mm ise hassas ) ve 30 µg sefoksitin diski (<21 mm ise metisiline dirençli, >22 mm ise metisiline hassas) ile %2 NaCl eklenmiş MHA da disk difüzyon yöntemiyle araştırılmıştır. Gerek S. aureus g e r e k s e KNS suşlarının antimikrobiyal duyarlılıklarının belirlenmesi için vankomisin, teikoplanin, penisilin, klindamisin, eritromisin, amoksisilin/klavulanik asit, sefoksitin, levofloksasin, norfloksasin, linezolid ve gentamisin (Bioanalyse, TR) kullanılmıştır. BULGULAR Araştırmaya alınan stafilokok suşları, çeşitli kliniklerden getirilen örneklerden izole edilmişlerdir (Tablo 1). MRSA suşlarının beşi (%22,7) ve MRCNS suşlarının da üçü (%33,3) hastane kaynaklı olarak tespit edilmiştir. MRSA suşlarının sekizi (%36,6) ile Metisiline Hassas Staphylococcus (MSS) suşlarının 21 (%50) i burun sürüntü örneklerinden elde edilmiştir. MRCNS suşlarının çoğunluğu ise idrar örneklerinden izole edilmişlerdir (Tablo 2). Tablo 1. İzole edilen stafilokok suşlarının kliniklere göre dağılımı Klinik MRSA MRCNS MSS Sayı (n) Sayı (n) Sayı (n) Üroloji Pol Göğüs Hastalıkları Pol Nöroloji Servisi Genel Yoğun Bakım Enfeksiyon Hastalıkları Genel Cerrahi Pol Acil Pol KBB Pol Yoğun Bakım Dahiliye To p l a m MRSA: (Methicillin Resistant Staphylococcus aureus, MSSA (Methicillin Susceptible Staphylococcus aureus) MSSA: Methicillin susceptible Staphylococcus aureus, MRCNS: (Methicillin Resistant Coagulase Negative Staphylococci) Tablo 2. İzole edilen MRSA ve MRCNS suşlarının klinik örneklere göre dağılımı Klinik Örnek Sayı MRSA MRCNS MSS İdrar Balgam Burun sürüntüsü Kulak sürüntüsü Yara B o ğ a z Kateter ucu Üretral akıntı To p l a m Turk Hij Den Biyol Derg 193

34 Cilt 72 Sayı STAFİLOKOK SUŞLARINDA METİSİLİN DİRENCİ Çalışmaya alınan 73 Staphylococcus suşunun 22 (%30,1) si MRSA, dokuzu (%12,3) MRCNS ve 42 (%57,5) si MSS olarak belirlenmiştir. Antibiyotik duyarlılık testleri değerlendirildiğinde, hiçbir suşta vankomisin, teikoplanin ve linezolide direnç saptanmamıştır. Her bir antibiyotik direnç oranı, kullanıldığı suşa göre değerlendirilerek hesaplanmıştır. MRSA ve MRCNS suşları penisiline %100 dirençli iken MSS suşlarında bu direnç %83,3 olarak bulunmuştur. MRSA suşlarından eritromisin duyarlılığına bakılan 11 suştan dokuzu (%81,8), sefoksitin duyarlılığına bakılan dokuz suştan altısı (%66,6), gentamisin duyarlılığına b a k ı l a n b e ş s u ş t a n ü ç ü ( % 6 0 ) v e a m o s i s i l i n / klavulunat duyarlılığına bakılan beş suştan beşi (%100) dirençli bulunmuştır. MRCNS suşları ise sefoksitine %80, amoksisilin/klavulanik asite % 8 0 v e e r i t r o m i s i n e % 8 7, 5 d i r e n ç l i b u l u n m u ş t u r. MSS suşlarının amoksisilin/klavulanik asit ve eritromisine direnç oranları sırasıyla %66,6 ve 17,6 dır (Tablo 3). TARTIŞMA Hem toplum hem de hastane kökenli stafilokoklar sistemik ve lokal birçok enfeksiyona neden olmaları yanında son yıllarda antimikrobiyal ajanların çoğuna dirençli hale gelmeleri nedeni ile de önemi artan bakterilerdir (10). Stafilokoklar Türkiye de ve tüm dünyada en yaygın hastane enfeksiyonu etkenlerindendir. MRSA suşlarının ve KNS ların, hastane enfeksiyonlarında büyük rol sahibi oldukları görülmektedir (2). S. aureus fronkül, karbonkül, apse gibi çeşitli deri lezyonlarından, yara enfeksiyonlarından ayrıca pnömoni, osteomyelit gibi daha birçok enfeksiyonlardan izole edilmişlerdir (5). S. aureus un çeşitli çalışmalarda; toplum kökenli (TK) pnömonilerin %8-68 inden, hastane kökenli (HK) pnömonilerin ise %18 inden sorumlu olduğu bildirilmektedir (11). KNS ler cildin normal florası içinde yer alan bakteriler olup, genellikle konakla selim ilişkiler içinde saprofit olarak bulunmaktadır (12). Ancak cilt travması, intravenöz kateter kullanılması gibi invaziv girişimlerde ve şant sistemleri, yapay kalp kapakçığı, eklem protezi bulunması durumunda bu yabancı cisimlerin yüzeyine yapışabilme, immün Tablo 3. MRSA ve MRCNS suşlarının antimikrobiyal direnç sonuçları Antibiyotik M R S A D i r e n ç l i M R C N S D i r e n ç l i M S S D i r e n ç l i Sayı (n) Sayı (n) Sayı (n) Vankomisin 0 (%0) 0 (%0) 0 (%0) Teikoplanin 0 (%0) 0 (%0) 0 (%0) Linezolid 0 (%0) 0 (%0) 0 (%0) Amoksisilin/klavulanik asit 5/5 (%100) 4/5 (%80) 2/3 (%66,6) Sefoksitin 6/9 (%66,6) 4/7 (%57,1) 0 (%0) Gentamisin 3/5 (%60) 0 (%0) 0 (%0) Norfloksasin 3/3 (%100) (%0) Penisilin 13/13 (%100) 7/9 (%77,7) 10/12 (%83,3) Levofloksasin 2/7 (%28,5) 2/5 (%40) 0 (%0) Klindamisin 3/5 (%60) 0 (%0) 0 (%0) Eritromisin 9/11 (%81,8) 7/8 (%87,5) 3/17 (%17,6) 194 Turk Hij Den Biyol Derg

35 F. ORAK Cilt 72 Sayı sistemden kaçabilme veya bu sistemi kırabilme yeteneklerine bağlı olarak çoğalmakta ve enfeksiyon oluşturabilmektedirler (13). KNS ler üzerinde yapılan duyarlılık çalışmalarında, S. aureus türlerinden daha yüksek metisilin direnci gösterdikleri belirlenmiştir. Nozokomiyal KNS izolatlarının %60 ı metisiline dirençli olarak tespit edilmiştir (14). KNS lerin de yaklaşık %80-90 ı indüklenebilir beta laktamaz üretmektedir. Direnç mekanizmasında düşük afiniteli bir PBP-a rol oynamaktadır. Bir çalışmada, neonatal sepsisli hastaların kanından izole edilen KNS lerde, multipl polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) çalışılmış ve izole edilen 85 KNS nin 73 (%86) ünde meca geni pozitif v e 1 2 ( % 1 4 ) s i n d e m e c A g e n i n e g a t i f b u l u n m u ş t u r. meca-negative izolatların hiç birinde PBP-2a ya rastlanmamış ve β-lactam antibiyotiklere direnç saptanmamıştır (14, 15). Yapılan çalışmalarda, hastaneye başvurudan sonraki ilk saat içerisinde gelişen MRSA enfeksiyonları toplum kökenli olarak tanımlanmaktadır. Toplum kaynaklı MRSA enfeksiyonları, Kuzey Amerika ve Avrupa dahil olmak üzere hemen her coğrafi bölgede saptanmaya başlanmış ve bazı yerlerde %20 lere varan oranlar görülmüştür (16). Bizim çalışmamızda da MRSA suşlarının 17 (%77,3) si ve MRCNS suşlarının da 6 (%66,7) sı toplum kaynaklı olarak tespit edilmiştir. Özgüven ve ark. (17) ilköğretim ve lise öğrencileri üzerinde yaptıkları araştırmalarda, burun MRSA taşıyıcılığı saptanamamış ve MSS taşıyıcılık oranı ise %14,7 olarak bulunmuştur. Çıtak ve ark. (18) hastane kaynaklı stafilokok suşlarının %40 ını, toplum kaynaklı stafilokok suşlarının ise %31 ni MRSA olarak tespit etmişlerdir. Duman ve ark. (19) toplum kökenli suşların %12,5 ini, hastane kökenli suşların da %43 ünü metisiline dirençli olarak bulmuşlardır. Özel ve ark. (20) PBP2a lateks aglütünasyon yöntemi ile KNS lerin %54,1 ini, S. aureus ların %42,4 ünü metisiline dirençli bulmuşlardır. Opuş ve ark. (21) Konya da yaptıkları bir araştırmada 85 dirençli suşun 35 (%41) ini MRSA, 50 (%59) sini KNS olarak tespit etmişlerdir. Stafilokoklarda görülen metisilin direnci, tüm dünyada olduğu gibi Türkiye de de giderek artış göstermektedir. Vural ve ark. (22). bir çalışmada oksasilin disk difüzyon, sefoksitin disk difüzyon, oksasilin agar tarama ve PBP2a lateks aglütinasyon testlerinin duyarlılıklarını %100 ve özgüllüklerini sırasıyla %100, %100, %100 ve %97 olarak bulmuşlardır. ABD de MRSA oranı yıllarında %79 olarak bulunmuştur (23). European Antimicrobial Resistance Surveillance System (EARSS) 2008 verilerine göre, MRSA oranları Kuzey Avrupa ülkelerinde %5 in altında, İngiltere, İspanya, İtalya, Türkiye ve Yunanistan da %25 in üzerinde, Malta ve Portekiz de ise %50 lerde seyretmektedir (24).Türkiye deki çeşitli merkezlerde MRSA görülme oranı %57, %58,5, %62 ve %33 gibi değerlerde bulunmuştur (25-27). Bizim çalışmamızda MRSA oranı %30,1 ve MRCNS oranı %12,3 olarak belirlenmiştir. Ekşi ve ark. (28) yaptığı çalışmada olduğu gibi bizim çalışmamızda da vankomisin ve teikoplanine direnç saptanmamıştır. Güler ve ark. (29) gentamisine %84, klindamisne %63, eritromisine %77 oranında, vankomisin ve teikoplanine %0 direnç bulmuşlardır. Çıtak ve ark. (18) MRSA suşlarının gentamisine %77, siprofloksasin ve tetrasikline %74 ve eritromisine de %78 oranında direnç bildirmişlerdir. Ekşi ve ark. (28) ise gentamisine %76, rifampine %73 ve siprofloksasine %85,9 oranında direnç oranı saptamışlardır. Aynı araştırmacılar MSS suşlarının penisiline direnç oranını %91,1 bulurken en duyarlı oldukları antibiyotikleri meropenem, sefotaksim ve siprofloksasin olarak bulmuşlardır. Çalışmamızda MSS lerin penisilin direnci %83,3 iken, eritromisin direnci %17,6 bulunurken, MRCNS lerde penisilin direnci %77,7, eritromisin direnci de %87,5 olarak bulunmuştur. Gerek MRSA gerekse MRCNS lerde vankomisin ve teikoplaninin yanı sıra kinolonların, linezolid, levofloksasin ve klindamisinin de antibiyogram sonuçlarına göre hala kullanılabilir olması umut vericidir (30). Tigesiklin, ciddi MRSA enfeksiyonlarının tedavisinde kullanıma giren yeni bir ajandır. Daptomisin, pulmoner sürfaktanlar tarafından inaktive edildiği için toplum kökenli pnömonilerde kullanılmamalıdır (31). Turk Hij Den Biyol Derg 195

36 Cilt 72 Sayı STAFİLOKOK SUŞLARINDA METİSİLİN DİRENCİ Deri ve yumuşak doku enfeksiyonlarında klindamisin ve vankomisin kombinasyonu bir alternatif olarak ele alınmaktadır (32). Metisilin direncinin saptanması amacıyla; disk difüzyon, E-test, sıvı mikrodilüsyon yöntemi, oksasilin içeren katı besiyerlerinin kullanıldığı tarama testleri ve meca geni veya onun ürünü olan PBP2a nın tesbit edilmesine dayalı çeşitli yöntemler kullanılmaktadır. PCR ile meca geni varlığının tespit edilmesi altın standart olarak kabul edilmektedir (20). CLSI önerileri doğrultusunda sefoksitin diski ile meca aracılı oksasilin direncinin gösterilebileceği bildirilmiştir (33). Özel ve ark. (20) göre S. aureus için sefoksitin ve oksasilin disklerinin duyarlılığı birbirine eşit iken (%94,3), KNS ler için oksasilin daha duyarlı bulunmuştur. Çalışmamızda sefoksitine direnç %66,6 saptanmıştır. Ayrıca CLSI önerilerine göre antibiyotik disklerinin dizilimi yapılırken eritromisin ve klindamisin diskleri yan yana konularak eritromisine bakan yüzünde d ü z l e ş m e o l m a s ı ( D - z o n u ) i n d ü k l e n e b i l i r M L S t i p i direnç açısından araştırılabilir (33). Vural ve ark. (33) sefoksitin disk difüzyon yönteminin meca dışı dirençleri atlama olasılığı göz önüne alınarak, laboratuvarlarda sefoksitin ve oksasilin disk difüzyon yöntemlerinden ikisinin de çalışılması MRSA direncini yakalamada daha faydalı olabileceğini düşünmektedirler. Sonuç olarak çalışmamızda, yoğun bakım ünitelerinin yeni uygulamaya girmesi ve kliniklerden de hastane kökenli MRSA ların yeterli düzeyde saptanamaması, daha fazla çalışmaya ihtiyaç duyulduğunu ve metisilin direncini belirlemede, geliştirilmiş farklı yöntemlerin kullanılmasına gerek olduğunu göstermektedir. Buna rağmen izole edilen MRSA ve MRCNS lerin toplumda yüksek düzeyde bulunması ve çeşitli antibiyotiklere dirençli bulunmaları akılcı antibiyotik kullanımını tekrar gündeme getirmektedir. Antibiyotik duyarlılık sonuçlarına göre kararlaştırılacak ilaç tedavisinin direnç gelişimini önlemede önemli olduğunu düşünüyoruz. Ayrıca toplum kökenli MRSA izolatlarının varlığının kanıtlanabilmesi içn SCCmec tipi ve PVL saptanması gibi ayrıntılı çalışmalara gereksinim vardır. KAYNAKLAR 1. Çetinkaya ŞY. Metisilin dirençli S. aureus enfeksiyonlarının epidemiyolojisi ve kontrolü. Hastane İnfek Derg, 2000; 4: Cengiz AT. Staphylococcus. Ustaçelebi Ş, Ed. Temel ve Klinik Mikrobiyoloji, Ankara: Güneş Kitabevi, 1999: Eliopoulus G:Antimicrobial agents for treatments of serious infections cauused by S. aureus and enterococci. Eur J Clin Microbial Infect Dis, 2005; 24(12): Ünal S. MRSA problemi, ANKEM Derg, 2009; 23(EK 2): Baron EJ, Peterson LR, Finegold SM. Bailey& Scott s Diagnostic Microbiology. 9th ed. St. Louis: Mosby, 1994: Ertek M, Yazgı H, Erol S, Aktaş AE. Klinik örneklerden soyutlanan stafilokok kökenlerinin moksifloksasin ve diğer kinolonlara in vitro duyarlılığının araştırılması. İnfek Derg, 2004; 18: Kollef MH ve Micek ST. Methicillin-resistant Staphylococcus aureus: a new community-acquired pathogen? Curr Op Infect Dis, 2006, 19(2): Van Leeuwen WB, van Pelt C, Luijendik A, Verbrugh HA, Goessens WH. Rapid detection of methicillin resistance in Staphylococcus aureus isolates by the MRSA screen latex agglutination test, J Clin Microbiol, 1999; 37(9): Clinical and Laboratory Standards Institute. Performance standards for antimikrobial susceptibility testing.18th Informational Supplement. Document M 100-S18, CLSI, Wayne, Pennsylvania. 196 Turk Hij Den Biyol Derg

37 F. ORAK Cilt 72 Sayı Haley RW, Hightower AW, Khabbaz RF, Thornsberry C, Martone WJ, Alle JR: The emergence of methicillin resistant S. aureus infections in U.S.A. hospitals. Ann Intern Med, 1982; 97: Ryke CA, Lodise TP Jr, Rybak MJ, McKinnon PS. Epidemiology, treatment and outcomes of nosocomial bacteremic S. aureus pneumonia. Chest, 2005; 128(3): Akpaka PE, Christian N, Bodonaik NC, Smikle MF. Epidemiology of coagulase-negative Staphylococci isolated from clinical blood specimens at the universty hospital of the West Indes. West Indian Med J, 2006; 55 (3): Cunha RS, Sinzato YK, Silveira VA. Comparision of methods for the identification of coagulasenegative staphylococci. Mem Inst Oswaldo Cruz, 2004; 99(8): Pal N, Ayyagari A. Species identification and methicillin resistance of coagulase negative staphylococci from clinical specimens. Indian J Med Res, 1989; 89: Fleer A, Hemels MAC,Paauw A,Krediet TG. Reduced expression of PBP-2A by neonatal meca-positive coagulase-negative staphylococci (CoNS) blood isolates: β-lactams are useful first-line agents for the treatment of neonatal CoNS sepsis, restricting the use of vancomycin. J Antimicrob Chemother, 2012; 67(7): Moellering RC Jr. Current treatment options for community-acquired methicillin-resistant S. aureus infection. Clin Infect Dis, 2008; 46: Özgüven A, Tünger Ö, Çetin ÇB, Dinç G. İlköğretim ve lise öğrencilerinde toplum kökenli metisiline dirençlş S. aureus burun taşıyıcılığının araştırılması. Mikrobiyol Bul, 2008; 42: Çıtak S, Karaçocuk E. Hastane ve toplum kaynaklı metisiline dirençli S. aureus suşlarının çeşitli antibiyotiklere duyarlılığı. C.Ü.Tıp Fakültesi Dergisi, 2004; 26(1): Duman Y, Tekerekoğlu MS, Otlu B. Toplum ve hastane kökenli S. aureus klinik izolatlarında Panton-Valentine Lökosidin varlığının ve klonal ilişkinin araştırılması. Mikrobiyol Bul, 2013; 47(3): Özel G, Aslan V, Erdem GB, Çağatay M, Şencan İ, Mert A. Stafilokoklarda metisilin duyralılığının belirlenmesinde oksasilin, sefoksitin, seftizoksim ve moksalaktam disk difüzyon yöntemlerinin karşılaştırılması. Mikrobiyol Bul, 2011; 45(2): Opuş A, Keşli R, Kurtoğlu MG, Güzelant A, Uysal EB. Metisiline dirençli stafilokok suşlarında tigesiklin etkinliğinin araştırılması. Türk Hijy Den Biyol Derg, 2012; 69(39): Vural A, Afşar İ, Kurultay N, Demirci M. Staphylococcus aureus da metisilin direncinin saptanmasında disk difüzyon, oksasilin agar tarama, mikrodilüsyon ve PBP2a lateks aglütinasyon testlerinin karşılaştırılması ANKEM Derg, 2011; 25(3): Kallen AJ, Brunkard J, Moore Z, Budge P, Arnold KE, Fosheim G et al. S. aureus community-aquired pneumonia during the 2006 to 2007 influenza season. Ann Emerg Med, 2009; 53(3): Köck R, Becker K, Cookson B, van Gemert-Pijnen JE, Harbarth S, Kluytmans J et al. Methicillinresistant S. aureus (MRSA): Burden of disease and control challenges in Europe. Euro Surveill, 2010; 15(41); Değerli K, Özbakkaloğlu B, Sürücüoğlu S, Sezgin C, Kurutepe S. Klinik örneklerden soyutlanan Staphylococcus aureus suşlarının çeşitli antimikrobiklere duyarlılıkları. İnfek Derg, 2000; 14: Sancak B, Günalp A. Çeşitli klinik örneklerden izole edilen metisilin dirençli S.aureus izolatlarının mupirosin ve diğer antibiyotiklere olan duyarlılıkları. Mikrobiyol Bul, 2000; 34: Azap A, Ergin Timurkaynak F, Kuru İnci E, Arslan H. S. aureus suşlarında vankomisin direncinin araştırılması. İnfek Derg, 2003; 17: Ekşi F, Balcı İ, Gayyurhan ED, Çekem G, Klinik örneklerden soyutlanan S. aureus suşlarının metisilin direncinin belirlenmesi ve antimikrobiyal ilaçlara duyarlılıklarının değerlendirilmesi. İnfek Derg, 2007; 21(1): Güler İ, Kılıç H, Atalay MA, Perçin D, Erçal BD. Metisilin dirençli Staphylococcus aureus suşlarının antibiyotiklere in-vitro duyarlılıkları. Dicle Tıp Dergisi, 2011; 38 (4): Weigelt J, Kaafarani HM, Itani KM, Swanson RN. Linezolid eradicates MRSA better than vancomycin from surgical-site infections. Am J Surg, 2004; 188(6): Silverman JA, Mortin LI, Vanpraagh AD, Li T, Alder J. Inhibition of daptomycin by pulmonary surfactant: in vitro modeling and clinical impact. J Infect Dis, 2005; 191: Turk Hij Den Biyol Derg 197

38 Cilt 72 Sayı STAFİLOKOK SUŞLARINDA METİSİLİN DİRENCİ 32. Wunderink RG, Rello J, Cammarata SK, Croos- Dabrera RV, Kollef MH. Linezolid ve vancomycin: analysis of two double-blind studies of patients with methicillin-resistant S. aureus nosocomial pneumonia. Chest, 2003; 124: Vural A, Afşar İ, Kurultay N, Demirci M. S. aureus da metisilin direncinin saptanmasında disk difüzyon, oksasilin agar tarama, mikrodilüsyon ve PBP2a lateks aglütinasyon testlerinin karşılaştırılması. ANKEM Derg, 2011; 25(3): Turk Hij Den Biyol Derg

39 Araştırma Makalesi/Original Article Makale Dili Türkçe /Article Language Turkish Türk Hijyen ve Deneysel Biyoloji Dergisi Tüketime sunulan çeşitli hazır yemek ürünlerinin mikrobiyolojik kalitesinin belirlenmesi * Determination of microbiological characteristics of several kinds of ready-to-eat meals presented for consumption Şule ŞENSES-ERGÜL 1, Havva SARI 1, Sevinç ERTAŞ 1, Umut BERBEROĞLU 1, Yıldırım CESARETLİ 1, Hasan IRMAK 2 ÖZET Amaç: Bu çalışmada, tüketime sunulan çeşitli hazır yemek ürünlerinin mikrobiyolojik kalitelerinin incelenmesi ve gıda zehirlenmeleri açısından taşıdıkları riskin belirlenmesi amaçlanmıştır. Yöntem: Tüketime sunulan toplam 666 hazır yemek ürünü incelenmiştir. Bu gıdalar Türk Gıda Kodeksi Mikrobiyolojik Kriterler Yönetmeliği nde yer alan; Salmonella spp. (TS EN ISO 6579), Listeria monocytogenes (TS EN ISO ), Escherichia coli O157 (TS EN ISO 16654), termotoleran Campylobacter spp. (TS EN ISO 10272), Bacillus cereus (TS EN ISO 7932), koagülaz pozitif stafilokoklar (TS EN ISO ), sülfit indirgeyen anaerop bakteri (ISO 15253), E. coli (Bacteriological Analytical Manual), küf ve maya (TS EN ISO ve ), stafilokokal enterotoksin (3M Tecra) parametreleri açısından incelemeye alınmışlardır. Bulgular: İncelemeye alınan hazır yemek örneklerinden 612 adedi (%92) Yönetmelik te yer alan gıda güvenilirliği ve patojen mikroorganizma limitleri açısından tüketime uygun bulunurken, 54 adedinin (%8) bir veya daha fazla parametre yönünden tüketime uygun olmadıkları belirlenmiştir. Çalışmada, örneklerin hiçbirinde Salmonella spp., L. monocytogenes, E. coli O157 ve termotoleran Campylobacter spp. tespit ABSTRACT Objective: In this study, determination of microbiological quality of several kinds of ready-to-eat meals and their risk in means of foodborne infections, were aimed. Method: Total of 666 ready-to-eat meals available for consumption, were examined. These products were examined in means of the parameters; Salmonella spp. (TS EN ISO 6579), Listeria monocytogenes (TS EN ISO ), Escherichia coli O157 (TS EN ISO 16654), thermotolerant Campylobacter spp. (TS EN ISO 10272), Bacillus cereus (TS EN ISO 7932), coagulase positive staphylococci (TS EN ISO ), sulfite reducing anaerobic bacteria (ISO 15253), E. coli (Bacteriological Analytical Manual), molds-yeasts (TS EN ISO ve ) and staphylococcal enterotoxin (3M Tecra) parametres as it was stated in Regulation on Microbiological Criteria for Foods. Results: 612 (92%) of the investigated ready-toeat meals were found in accordance with the food safety criteria and limits of pathogenic microorganisms mentioned in the Regulation, while 54 of them (8%) were found unsuitable for consumption. In none of the samples Salmonella spp., L. monocytogenes, E. coli O157 and thermotolerant Campylobacter spp. were * Bu çalışma; 4. Gıda Güvenliği Kongresi nde (14 15 Mayıs 2013, İstanbul-TÜRKİYE) poster bildiri olarak sunulmuştur. 1 Türkiye Halk Sağlığı Kurumu, Tüketici ve Çalışan Güvenliği Laboratuvarları Daire Başkanlığı, ANKARA 2 Türkiye Halk Sağlığı Kurumu, Tüketici ve Çalışan Güvenliği Laboratuvarları Başkan Yardımcılığı, ANKARA İletişim / Corresponding Author : Şule ŞENSES-ERGÜL Türkiye Halk Sağlığı Kurumu, Tüketici ve Çalışan Güvenliği Laboratuvarları Daire Başkanlığı, ANKARA Tel : DOI ID : /TurkHijyen E-posta / sule.senses@saglik.gov.tr Geliş Tarihi / Received : Kabul Tarihi / Accepted : Şenses-Ergül Ş, Sarı H, Ertaş S, Berberoğlu U, Cesaretli Y, Irmak H. Tüketime sunulan çeşitli hazır yemek ürünlerinin mikrobiyolojik kalitesinin belirlenmesi. Turk Hij Den Biyol Derg, 2015; 72(3): Turk Hij Den Biyol Derg, 2015; 72(3):

40 Cilt 72 Sayı HAZIR YEMEKLERİN MİKROBİYOLOJİK KALİTESİ edilmemiştir. Hazır yemek ürünlerinden 30 adedinin B. cereus (1x10 3-5,7x10 4 kob/g), 14 adedinin E. coli (1,5x >1,1x10 3 EMS/g), beş adedinin sülfit indirgeyen anaerop bakteri (1,6x >3x10 4 kob/g), bir adedinin koagülaz pozitif stafilokok (4x10 3 kob/g) ve bir adedinin de toplam küf-maya (2,6x10 4 kob/g) parametreleri yönünden Mikrobiyolojik Kriterler Yönetmeliği nde belirtilen limitlere uygun olmadığı belirlenmiştir. Ayrıca altı adet hazır yemek ürününde stafilokokal enterotoksin bulunmuştur. Sonuç: Elde edilen bulgulara göre incelemeye alınan tüketime hazır yemek ürünlerinin mikrobiyolojik kalitelerinin genellikle (%92) yeterli olduğu saptanmıştır. Tüketime uygun olmadıkları belirlenen hazır yemeklerin ise uygunsuz bulundukları parametrelerin yemek türüne bağlı olarak değiştiği görülmüştür. Çalışmamızda, tüketime sunulan ve ısıtılarak servis edilen hazır yemek ürünlerinin özellikle B. cereus, stafilokokal enterotoksin ve sülfit indirgeyen anaerop bakteri parametreleri, soğuk olarak servis edilen salata, meze gibi ürünler ile üretim sırasında elle temasta bulunulan pişirilmiş unlu mamullerin ise E. coli ve koagülaz pozitif stafilokok parametreleri açısından risk taşıdıkları sonucuna ulaşılmıştır. Anahtar Kelimeler: Gıda, gıda kaynaklı enfeksiyon, patojen bakteri, mikrobiyoloji, hijyen not detected. In the study, number of the ready-to-eat meals which were not complying the limits specified in the regulations in terms of B. cereus (1x x10 4 cfu/g) was 30. The number of ready to eat meals which were above limits for E. coli (1.5x >1.1x10 3 MPN/g), staphylococcal enterotoxin and sulphite reducing anaerobic bacteria (1.6x >3x10 4 cfu/g), were found as; 14, 6 and 5, respectively. While one sample was found unsuitable for consumption in means of coagulase positive staphylococci (4x10 3 cfu/g), another sample was found unsuitable for consumption in means of total mold and yeast counts (2.6x10 4 cfu/g). Conclusion: According to the data obtained in this study, microbiological quality of the ready-to-eat meals were found mostly good. The meals which were found unsuitable for consumption in means of the parameters not complying the limits showed differences depending on the kind of the food sample. In this study, it was found that ready-to-eat meals served after reheating carry risk in means of B. cereus, staphylococcal enterotoxin and sulphite reducing anaerobic bacteria parameters. Additionally, cold meals like salads, apetizers and cooked bakery products were found to carry risk in terms of the parameters; E. coli and coagulase positive staphylococci. Key Words: Food, foodborne infection, pathogenic bacteria, microbiology, hygiene GİRİŞ Gıda kaynaklı zehirlenmelere neden olan patojen mikroorganizmaların hastalığa neden olma mekanizmaları, bu mikroorganizmaların gıdalardaki kontrolü üzerinde birçok çalışma ve düzenleme yapılmış ancak tüm önlemlere rağmen teknolojik olarak gelişmiş batı ülkelerinde bile gıda kaynaklı salgınlara rastlanabilmektedir (1). İnsanların sağlıklarını koruyabilmeleri için yeterli ve dengeli beslenmelerinin yanı sıra tükettikleri gıdaların insan sağlığını tehdit etmemesi ve güvenli olması da gerekmektedir (2, 3). Endüstrileşme ile beraber hazır yemek ile beslenmeye karşı eğilimin son yıllarda artış gösterdiği görülmektedir. ABD, İngiltere ve Hollanda da elde edilen istatistiksel verilere göre gıda kaynaklı hastalıkların %70 inden fazlası yemek veya servis hizmeti veren sektörlerle ilişkilendirilmektedir (4). Gıda zehirlenmesi; kontamine gıda ve/veya suyun tüketilmesi sonucu ortaya çıkan hastalıklara verilen genel bir isimdir. (5) Günümüzde gıda kaynaklı zehirlenmeler birçok ülkenin önemli bir sağlık sorunu olarak karşımıza çıkmaktadır. Gıda maddelerinin hijyenik koşullarda üretilerek, hijyen zinciri bozulmadan tüketiminin sağlanması sağlıklı beslenmenin sağlanabilmesi için önemli bir kriterdir. 200 Turk Hij Den Biyol Derg

41 Ş. ŞENSES-ERGÜL ve ark. Cilt 72 Sayı Gıdalar üretim aşamasından tüketiciye ulaşıncaya kadar yapılan işlemler zincirinde çeşitli kaynaklardan bulaşan mikroorganizmalar, uygun koşullar söz konusu ise hızla çoğalarak duyusal kalitenin bozulmasına, ekonomik kayıplara ve gıda kaynaklı hastalıkların ortaya çıkmasına neden olabilmektedirler (6, 7). Bu süreçte hijyen zincirinin en önemli basamaklarından birini personel hijyeni oluşturmaktadır. Ayrıca gıdaların üretim ve işlenmesi aşamalarında kullanılan kesme tahtaları, dilimleyici, karıştırıcı ve öğütücüler, işletme suyu, ortam havası ile üretim koşullarında bulunmaması gereken çöpler, haşereler, kemiriciler ve ev hayvanları bulaşma kaynakları olarak karşımıza çıkmaktadır (6). Gıda satış noktalarında satışa sunulan ve hemen tüketilebilecek halde bulunan ürünler, tüketime hazır yiyecekler/gıdalar olarak adlandırılmaktadırlar (8, 9). Bu gıdalar; çiğ ya da pişmiş, sıcak veya soğuk, ya da yeniden ısıtma gibi bir ısıl işlem olmadan tüketilebilir halde bulunmaktadırlar (8). T ü k e t i m e h a z ı r g ı d a l a r, d o ğ r u d a n t ü k e t i l d i ğ i i ç i n pişirilerek içerisindeki mikroorganizmaların çoğu öldürülebilen gıdalara göre tüketici sağlığı açısından daha risklidirler. Bu gıdalar çoğunlukla tüketilinceye kadar soğukta muhafaza edilerek çoğu bakterinin inhibisyonu sağlanmaktadır (10). Yapılan birçok çalışmada tüketime hazır gıdalardan izole edilen patojen mikroorganizmalar arasında verositotoksin üreten Escherichia coli (VTEC), Salmonella spp., Listeria monocytogenes ve Campylobacter spp. türlerinin yer aldıkları bildirilmektedir (8, 11). Birçok ülkede birinci sıradaki gıda kaynaklı hastalık etmenlerinin Salmonella ve Campylobacter türleri olduğu belirtilmektedir. Ancak ülkeler arasında insanların beslenme alışkanlıklarından ileri gelen farklılaşmalar olduğu da vurgulanmaktadır. (12). Tüketime hazır gıdalar aracılığı ile meydana gelen gıda kaynaklı salgınlardaki patojen etkenlerin incelendiği birçok çalışma mevcuttur (8, 10, 11). Gıdaların mikrobiyolojik yönden güvenli olmaması küresel bir sorun olmaya devam etmektedir. Bütün d ü n y a d a ü l k e l e r i g ı d a k a y n a k l ı h a s t a l ı k l a r d a k i a r t ı ş a yanıt olarak gıda güvenilirliğinin geliştirilmesi amacıyla yeni önlemler alabilmek için çalışmalar yapmaktadırlar. Tarım ve gıda alanında çalışan gıda üreticilerinin Gıda Güvenliği Yönetim Sistemi oluşturabilmeleri için ülkelerin yönetmeliklerinde çeşitli düzenlemeler yapılmakta ve bu şekilde gıda kaynaklı salgınların önlenebilmesi hedeflenmektedir (13). Ülkemizde de bu amaçla gerçekleştirilen en son düzenleme, T. C. Gıda, Tarım ve Hayvancılık Bakanlığı tarafından hazırlanan ve tarihli Resmi Gazete de yayımlanan Türk Gıda Kodeksi Mikrobiyolojik Kriterler Yönetmeliği (14) nin yürürlüğe girmesidir. Bu çalışmanın amacı, tüketime sunulan çeşitli hazır yemek ürünlerinin mikrobiyolojik kalitelerinin incelenmesi ve gıda zehirlenmeleri açısından taşıdıkları riskin belirlenmesidir. GEREÇ ve YÖNTEM Türkiye Halk Sağlığı Kurumu, Tüketici Güvenliği Laboratuvarları Daire Başkanlığı, Merkez Tüketici Ürünleri Mikrobiyolojik Araştırma Laboratuvarlarına Ocak-Aralık 2012 tarihleri arasında mikrobiyolojik analiz amacıyla farklı illerden gelen toplam 666 adet hazır yemek ürünü, Türk Gıda Kodeksi Mikrobiyolojik Kriterler Yönetmeliği nde (14) yer alan parametreler açısından incelenmiştir. Steril kaplara alınan gıda örnekleri, örnek alımını takiben 24 saat içerisinde soğuk zincirde laboratuvara ulaştırılmıştır. Gıda örneklerinin 587 tanesi kontrol, 79 tanesi ise zehirlenme/şikayet nedeniyle incelemeye alınmıştır. Analize alınan hazır yemek ürünlerinin 519 adedi tüketime hazır et ve sebze yemeği, 58 adedi tüketime hazır şarküteri ürünü, 42 adedi tüketime hazır unlu mamul, 36 adedi tüketime hazır sütlü ve şerbetli tatlı, 11 adedi diğer gıdalar grubu olmak üzere beş ana başlık altında gruplandırılarak analiz edilmiştir. Çalışmamızda incelenen gıda örnekleri, Türk Gıda Kodeksi Mikrobiyolojik Kriterler Yönetmeliği Ek 1 ve Ek 3 teki gruplandırmalar dikkate alınarak Salmonella spp., L. monocytogenes, Bacillus Turk Hij Den Biyol Derg 201

42 Cilt 72 Sayı HAZIR YEMEKLERİN MİKROBİYOLOJİK KALİTESİ cereus, koagülaz pozitif stafilokoklar, E. coli O157, termotoleran Campylobacter spp., sülfit indirgeyen anaerop bakteri, E. coli, küf ve maya, stafilokokal enterotoksin parametreleri açısından analiz edilmiştir (14). Laboratuvarımıza kontrol amacıyla gelen gıdalarda Türk Gıda Kodeksi Mikrobiyolojik Kriterler Yönetmeliği Ek 1 de yer alan gıda güvenilirliği kriterlerine bakılırken, zehirlenme ve/veya şikayet amacıyla gelen gıdalar Ek 1 deki parametrelerin yanı sıra Ek 3 te yer alan patojen mikroorganizmalar açısından da incelemeye alınmışlardır. Salmonella spp. tespiti amacıyla TS EN ISO 6579 (15) yöntemi uygulanmıştır. Bu amaçla 25 g gıda numunesi 225 ml tamponlanmış peptonlu su (TPS, LabM) içerisinde homojenize edildikten sonra 37 O C de sa ön zenginleştirme işlemi uygulanmıştır. İnkübasyon süresi sonunda TPS deki kültürden 0,1 ml alınarak seçici zenginleştirme işlemi için Rappaport Vasiliadis Broth (RVS, Difco) b e s i y e r i n e a k t a r ı l m ı ş t ı r. RV S B r o t h b e s i y e r i n d e 41,5 O C de 24 sa inkübe edilerek oluşturulan kültürden bir öze dolusu alınarak Xylose Lysine Deoxycholate (XLD, LabM) Agar besiyerine tek koloni düşürme tekniği ile ekimler gerçekleştirilmiştir. Katı besiyerinde oluşan siyah merkezli renksiz koloniler şüpheli Salmonella spp. olarak değerlendirilmiş ve bu kolonilerden beş adet seçilerek biyokimyasal (oksidaz, laktoz/ glukoz fermantasyonu, üre hidrolizi, H 2 S oluşumu, sitrat kullanımı, L-lizin dekarboksilaz aktivitesi), serolojik (OMA ve OMB, THSK, Biyolojik Ürünler Araştırma ve Geliştirme Daire Başkanlığı) doğrulama testleri ile Enteropluri tanımlama kiti (Liofilchem) uygulanmıştır. L. monocytogenes tespitinde ise ISO (16) yöntemine göre 25 g gıda numunesi 225 ml Half Fraser Broth (LabM) besiyerinde homojenize edildikten sonra 30 O C de 24 sa ön zenginleştirme işlemi uygulanmıştır. Bu işlemden sonra Half Fraser Broth besiyerinde oluşan kültürden 0,1 ml alınarak Fraser Broth besiyerine aktarılmış ve 36 O C de 24 sa seçici zenginleştirme yapılmıştır. Tipik L. monocytogenes kolonilerinin gözlenebilmesi için Oxford Agar (LabM) besiyerine tek koloni düşürme tekniği ile ekimler gerçekleştirilmiştir. Oxford Agar besiyerinde 36 O C de 48 sa inkübasyon sonunda gelişen 2 mm çaplı, grimsi yeşil renkli merkezleri çökük, çevresi siyah hale ile çevrili koloniler doğrulama için seçilmiştir. Doğrulama amacıyla biyokimyasal (katalaz, Gram boyama, hareket deneyi, hemoliz, CAMP, karbonhidrat testleri) ve serolojik testler ile L. monocytogenes tanımlama kiti (Microbact) yapılmıştır. B. cereus tespiti ve sayımı için ISO 7932 (17) y ö n t e m i k u l l a n ı l m ı ş v e e n a z 1 0 g g ı d a ö r n e ğ i n i n TPS içerisinde 1/10 luk seyreltisi hazırlanarak homojenize edilmiştir. Homojenizasyondan hemen sonra Mannitol Yolk Polymyxin Agar (MYP, Oxoid) besiyerine yayma kültür yöntemi ile ekimler gerçekleştirilmiştir. Ekim yapılan Petri kutuları 30 O C de 48 sa inkübe edildikten sonra, lesitinaz aktivitesine bağlı olarak opak zonla çevrelenmiş ya da düşük lesitinaz aktivitesi nedeni ile opak zonla çevrelenmemiş tüm pembe koloniler sayılmış, bu kolonilerden beş tanesine doğrulama amacı ile kanlı agar besiyerinde hemoliz testi ve Gram boyama ile mikroskobik inceleme yapılmıştır. Koagülaz pozitif stafilokokların tespiti ve sayımı amacıyla ISO (18) yöntemi uygulanmıştır. Bu amaçla en az 10 g tartılan gıda numunesi TPS içerisinde homojenize edilmiş ve Baird Parker Agar (BPA, Difco) besiyerine ekimler gerçekleştirilmiştir. Ekim yapılan Petri kutuları 37 O C de 48 sa inkübe edilmiştir. Tipik ve atipik kolonileri doğrulama amacı ile Gram boyama ve koagülaz testi yapılmıştır. Termotoleran Campylobacter spp. tespiti ISO (19) yöntemine göre gerçekleştirilmiştir. 25 g gıda örneği 225 ml Bolton broth (Merck) besiyerinde homojenize edildikten sonra öncelikle 37 O C de 4-6 sa, daha sonra 41,5 O C de 48 sa mikroaerofilik koşullarda inkübe edilmiştir. Zenginleştirme o r t a m ı n d a n a l ı n a n b i r ö z e d o l u s u k ü l t ü r K a r m a l i Agar (Oxoid) besiyerine ekilmiştir. Petri kutuları 41,5 O C de 48 sa mikroaerofilik koşullarda inkübe edilmiştir. Şüpheli Campylobacter kolonilerine mikroskobik morfoloji ve hareket incelemesi, oksidaz 202 Turk Hij Den Biyol Derg

43 Ş. ŞENSES-ERGÜL ve ark. Cilt 72 Sayı testi, 25 O C de mikroaerofilik ve 41,5 O C de aerobik koşullarda üreme testleri uygulanmıştır. E. coli O157 tespitinde ISO (20) yöntemine göre 25 g gıda örneğine 225 ml novobiyosin içeren modifiye Tryptic Soy Broth besiyerinde (mtsb+n, Merck) zenginleştirme işlemi yapılmıştır. 41,5 O C de sa inkübasyon sonunda immünomanyetik seperasyon (IMS, LabM) uygulanmış ve sefiksim tellürit içeren sorbitol MacConkey (CT-SMAC, Oxoid) Agar besiyerine ekimler gerçekleştirilmiştir. CT- SMAC besiyerinde 37 O C de 24 sa inkübasyon sonucu gelişen 1 mm çaplı, şeffaf, açık sarımsı-kahverengi görünümlü koloniler, şüpheli E. coli O157 kolonileri olarak değerlendirilmiştir. Şüpheli kolonilere indol ve serolojik doğrulama testleri uygulanmıştır. Sülfit indirgeyen anaerop bakteri tespiti ve s a y ı m ı, I S O ( 2 1 ) y ö n t e m i i l e g e r ç e k l e ş t i r i l m i ş t i r. Bu amaçla en az 10 g gıda numunesinin TPS ortamında homojenize edilerek Demir Sülfit Agar ( S c h a r l a u ) b e s i y e r i n e ç i f t k a t l ı d ö k m e p l a k y ö n t e m i ile 37 O C de 48 sa anaerobik koşullarda inkübe edilmiştir. İnkübasyon süresi sonunda besiyerinde gelişen siyah renkli, etraflarında siyah zon olan koloniler sülfit indirgeyen anerobik bakteri olarak sayılmıştır. E. coli tespiti ve sayımı ise Bacteriological Analytical Manual (22) tarafından önerilen en muhtemel sayı (EMS) yöntemi uygulanmıştır. Çalışmada, küf ve maya sayımı amacıyla ISO (23) ve (24) yöntemleri kullanılmıştır. Su aktivitesi değeri 0,95 ve daha yüksek olanlar için Rose Bengal Chloramphenicol Agar (RBC, LabM), 0,95 ten düşük olanlar için Dichloran Glycerol % 1 8 A g a r ( D G 1 8, O x o i d ) b e s i y e r l e r i k u l l a n ı l m ı ş t ı r. 25 O C de 3-5 günlük inkübasyon sonunda gelişen koloniler mikroskobik olarak incelenerek toplam küf ve maya sayımları yapılmıştır. Stafilokokal enterotoksin tespitinde, 3M Tecra marka test kiti kullanılmış ve tüm aşamalar kit ile birlikte sağlanan kullanım kılavuzunda belirtildiği şekilde gerçekleştirilmiştir. Araştırma bulgularının istatistiksel olarak değerlendirilmesi amacıyla ki-kare testi uygulanmıştır. BULGULAR Türkiye Halk Sağlığı Kurumu, Tüketici Güvenliği Laboratuvarları Daire Başkanlığı, Merkez Tüketici Ürünleri Mikrobiyolojik Araştırma Laboratuvarlarında 1 Ocak - 31 Aralık 2012 tarihleri arasında mikrobiyolojik olarak incelemeye alınan toplam 666 adet tüketime hazır yemek ürününün analize geliş amacına g ö r e d a ğ ı l ı m l a r ı v e t ü k e t i m e u y g u n l u k d u r u m l a r ı Tablo 1 de gösterilmiştir. İncelenen gıdalardan 587 adedi kontrol, 79 adedi ise zehirlenme/şikayet nedeniyle analize alınmıştır. Mikrobiyolojik olarak incelenen gıda örneklerinden 612 adedi (%92) Mikrobiyolojik Kriterler Yönetmeliği ne göre tüketime uygun bulunurken, 54 adedinin (%8) tüketime uygun olmadıkları tespit edilmiştir. Zehirlenme/ şikayet amacıyla gelen numuneler ile kontrol amacıyla gelen numuneler arasında ki-kare testi uygulandığında (ki-kare: 25,9, p<0,05); istatistiksel anlamda uygunsuzluk en çok zehirlenme/şikayet nedeniyle gelen numunelerde görülmüştür. Tüketime uygun olmadıkları tespit edilen gıdaların 18 tanesi zehirlenme/ şikayet, 36 tanesi ise kontrol amacıyla incelemeye alınmıştır. Tablo 1. Hazır yemek ürünlerinin analize geliş amaçlarına göre dağılımı, THSK, 2012 Analize Geliş Amacı Analiz Sonucu U y g u n Uygun Değil Toplam Zehirlenme/ Şikayet Kontrol Toplam Tüketime hazır gıda ürünlerinin Türk Gıda Kodeksi Mikrobiyolojik Kriterler Yönetmeliği ne (14) göre gruplandırılması ve bu gruplardaki gıdaların tüketime uygunluk durumları Tablo 2 de verilmiştir. Tüketime Turk Hij Den Biyol Derg 203

44 Cilt 72 Sayı HAZIR YEMEKLERİN MİKROBİYOLOJİK KALİTESİ Tablo 2. Hazır yemek ürünlerinin gruplandırılması, THSK, 2012 Gıda Grubu Hazır Yemek Ürünleri Tüketime hazır (pişirilmiş) her türlü et ve sebze yemeği Tüketime hazır her türlü salata, şarküteri ürünleri ve soğuk mezeler vb. Tüketime hazır (pişirilmiş) her türlü unlu mamul (makarna, her türlü börek, lahmacun, pide, pizza, mantı vb.) Şerbetli ve sütlü tatlılar Analiz Sonucu U y g u n Uygun Değil Toplam Diğer Toplam uygun olmadıkları belirlenen 54 hazır yemek ürününün 31 adedinin (%58) pişirilmiş et ve sebze yemekleri, 10 adedinin (%18) şarküteri ürünleri, dokuz adedinin (%16) pişirilmiş unlu mamuller, iki adedinin (%4) tatlı ve iki adedinin (%4) diğer gıdalar (peynir ve turşu) grubunda yer aldıkları belirlenmiştir. Çalışmada, analize alınan 666 adet gıda örneğinin hiçbirinde Salmonella spp., L. monocytogenes, E. coli O157 ve termotoleran Campylobacter spp. tespit edilmemiştir. Laboratuvarımıza zehirlenme/ şikayet nedeniyle gelen ve yapılan analizler sonucunda tüketime uygun olmadıkları belirlenen 18 adet gıda örneğindeki uygun bulunmayan mikrobiyolojik p a r a m e t r e l e r i n g ı d a g r u p l a r ı n a g ö r e d a ğ ı l ı m ı Tablo 3 te gösterilmiştir. Bu gıdalardan 12 adedinde B. cereus, beş adedinde sülfit indirgeyen anaerop bakteri, iki adedinde stafilokokal enterotoksin, bir adedinde E. coli ve bir adedinde de koagülaz pozitif stafilokok parametresi yönünden uygunsuzluk tespit edilmiştir. B. cereus yönünden tüketime uygun bulunmayan numunelerin çoğunu et ve sebze yemeklerinin Tablo 3. Zehirlenme amacıyla analize alınan ve tüketime uygun olmayan hazır yemek ürünlerindeki uygun olmayan mikrobiyolojik parametrelerin gıda gruplarına göre dağılımı, THSK, 2012 Parametreler Gıda Grubu Gıda Türü B. cereus Stafilokokal enterotoksin E. coli Sülfit indirgeyen anaerop bakteri Koagülaz pozitif stafilokok Tüketime hazır (pişirilmiş) her türlü et ve sebze yemeği Tüketime hazır her türlü salata, şarküteri ürünleri ve soğuk mezeler vb. Tüketime hazır (pişirilmiş) her türlü unlu mamul (makarna, her türlü börek, lahmacun, pide, pizza, mantı vb.) Diğer Sebze yemeği Et yemeği Pilav Meze Lahmacun Börek Pide Mantı Peynir Turşu Toplam Turk Hij Den Biyol Derg

45 Ş. ŞENSES-ERGÜL ve ark. Cilt 72 Sayı oluşturduğu, bunları pilav, meze, börek mantı ve turşu numunelerinin takip ettiği belirlenmiştir. Bu gıdalardaki B. cereus yükünün 1,3x10 3 >3x10 4 kob/g arasında değiştiği görülmüştür. Zehirlenme/ şikayet nedeniyle analize alınan bir adet sebze yemeği ile bir adet peynir numunesinde, stafilokokal enterotoksin varlığı tespit edilmiştir. E. coli yönünden tüketime uygun bulunmayan bir adet lahmacun numunesindeki E. coli sayısının 1,1x10 3 olduğu saptanmıştır. Sülfit indirgeyen anaerop bakteri yönünden tüketime uygun bulunmayan beş adet gıdanın; sebze yemeği, pilav, meze ve lahmacun numuneleri olduğu görülmüş, bu gıdalardaki sülfit indirgeyen anaerop bakteri sayısının 1,6x >3x10 4 kob/g arasında değiştiği belirlenmiştir. Zehirlenme/ şikayet nedeniyle analize alınan bir adet pide numunesinde 4x10 3 kob/g düzeyinde koagülaz pozitif stafilokok olduğu saptanmıştır. Kontrol amacıyla yapılan mikrobiyolojik incelemeler sonucunda tüketime uygun bulunmayan 36 adet gıda numunesindeki uygun bulunmayan parametrelerin gıda gruplarına göre dağılımı Tablo 4 te özetlenmiştir. Kontrol nedeniyle incelemeye alınan gıda numunelerinde de Salmonella spp., L. monocytogenes, E. coli O157 ve termotoleran Campylobacter spp. türlerine rastlanmamıştır. Bu numunelerden 18 inin B. cereus, 13 ünün E. coli, dört t a n e s i n i n s t a fi l o k o k a l e n t e r o t o k s i n v e b i r t a n e s i n i n i s e küf-maya parametreleri açısından ilgili Yönetmeliğe (14) uygun olmadıkları belirlenmiştir. Bu grupta yer alan ve B. cereus parametresi açısından uygun olmadıkları belirlenen numunelerin çoğunu (14 adet) et ve sebze yemekleri oluşturduğu, bunları makarna (2), pilav (1) ve meze (1) numunelerinin takip ettiği bulunmuştur. Tüketime uygun bulunmayan numunelerdeki B. cereus sayısının 1x10 3-5,7x10 4 kob/g arasında değiştiği saptanmıştır. E. coli açısından ilgili Yönetmeliğe uygun olmadıkları belirlenen numunelerin çoğunun salata (6 adet) numunesi olduğu, bunları makarna (3 adet) meze (2 adet), pide (1 adet) ve tatlı (1 adet) numunelerinin izlediği belirlenmiştir. Bu numunelerdeki E. coli yükünün 1,1x >1,1x10 3 kob/g arasında olduğu tespit edilmiştir. Stafilokokal enterotoksin parametresi yönünden uygun olmadıkları belirlenen numunelerin tümünün et ve sebze yemekleri gruplarında yer aldıkları saptanmıştır. Küf-maya parametresi yönünden tüketime uygun bulunmayan bir adet numunenin ise tatlı grubunda yer aldığı ve toplam küf-maya sayısının 2,6x10 3 kob/g olduğu belirlenmiştir. Tablo 4. Kontrol amacıyla analize alınan ve tüketime uygun olmayan hazır yemek ürünlerindeki uygun olmayan mikrobiyolojik parametrelerin gıda gruplarına göre dağılımı Parametreler Gıda Grubu Gıda Türü B. cereus Stafilokokal enterotoksin E. coli Küf-maya Tüketime hazır (pişirilmiş) her türlü et ve sebze yemeği Tüketime hazır her türlü salata, şarküteri ürünleri ve soğuk mezeler vb. Tüketime hazır (pişirilmiş) her türlü unlu mamul (makarna, her türlü börek, lahmacun, pide, pizza, mantı vb.) Sebze yemeği Et yemeği Pilav Meze Salata Pide Makarna Diğer Tatlı Toplam Turk Hij Den Biyol Derg 205

46 Cilt 72 Sayı HAZIR YEMEKLERİN MİKROBİYOLOJİK KALİTESİ TARTIŞMA Elde edilen bulgulara göre farklı yerlerde tüketime sunulan hazır yemek ürünlerinin mikrobiyolojik kalitelerinin (%92) iyi olduğu belirlenmiştir. Tüketime uygun bulunmayan ürünlerde (%8) görülen bakteriyal üremelerin gıdanın türüne bağlı olarak farklılık gösterdiği tespit edilmiştir. Çalışmada, hazır yemek ürünlerinin özellikle et ve sebze yemekleri ile pilav türü gıdaların B. cereus, stafilokokal enterotoksin ve sülfit indirgeyen anaerop bakteri parametreleri açısından risk taşıdıkları sonucuna ulaşılmıştır. Ayrıca incelenen gıdalarda Salmonella spp., L. monocytogenes, E. coli O157 ve termotoleran Campylobacter spp. bulunmamıştır. Yapılan çeşitli çalışmalarda da elde ettiğimiz bulgulara benzer sonuçlara rastlanmış, tüketime hazır gıdalarda özellikle Salmonella spp, E. coli O 1 5 7, L. monocytogenes ve Campylobacter spp. rastlanma sıklığının oldukça düşük olduğu görülmüştür (10, 11). Yalçın ve Can (25) tarafından yapılan bir çalışmada, 100 adet tüketime hazır et yemeği Salmonella spp., Staphylococcus aureus, E. coli, B. cereus parametreleri yönünden incelenmiş, çalışmamızla benzer şekilde bu gıdalardan hiç birinde Salmonella spp. varlığına rastlanmadığı rapor edilmiştir. Söz konusu çalışmada incelenen gıda örneklerinden sekiz tanesinde S. aureus (1x10 2-4x10 2 kob/g), yedi tanesinde B. cereus (1x10 2-3x10 2 kob/g) ve altı tanesinde ise E. coli nin (1x10 2-2x10 2 k o b / g ) b u l u n d u ğ u b e l i r t i l m i ş t i r. Bu gıdalardan sadece E. coli gelişimi tespit edilenlerin ilgili Yönetmelik teki kriterlere uygun olmadıkları bildirilmiş, S. aureus tespit edilen gıdalarda enterotoksin testi yapılmamıştır. Bir başka çalışmada ise piyasada satılan 30 adet tüketime hazır dönerin mikrobiyolojik özellikleri incelenmiştir (26). Yapılan incelemeler sonucunda döner örneklerinde S. aureus ve sülfit indirgeyen anaerop bakteri gelişmine rastlanmazken, aynı örneklerdeki toplam aerobik mezofilik bakteri sayısının çoğunlukla kob/g arasında değiştiği, bazı örneklerde 10 6 kob/g düzeyine ulaştığı bildirilmiştir. Aynı çalışmada döner örneklerinin %36,6 sı Enterobacteriaceae, %56,6 sı ise; E. coli açısından negatif bulunmuştur. Enterobacteriaceae ve E. coli gelişen örneklerde sayıların sırasıyla, 10 4 ve 10 3 kob/g olduğu belirtilmiştir. Her iki çalışma da, pişirilerek tüketime sunulan gıdalar olmasına rağmen et yemeklerinin düşük hijyen uygulamaları nedeniyle sağlık riski oluşturabileceklerini göstermektedir (25, 26). Hatakka (27); yılları arasında uçak yolculukları sırasında servis edilen sıcak ve soğuk yemeklerin mikrobiyolojik kalitelerinin incelendiği bir çalışma gerçekleştirmiştir. Bu çalışmanın sonuncunda; incelenen yemeklerde Clostridium perfringens e rastlanmazken, sıcak servis edilen yemeklerde Salmonella spp. bulunma oranı %0,3, soğuk servis edilen yemeklerde ise %0,1 bulunmuştur. Sıcak yemeklerde E. coli bulunma oranı %8,2, soğuk yemeklerde ise; %14 rapor edilmiştir. S. aureus a sıcak yemeklerde %0,6, soğuk yemeklerde ise; %7 oranında rastlanıldığı belirtilmiştir. Bunun yanısıra, B. cereus bulunma oranı sıcak yemeklerde %0,7, soğuk yemeklerde ise %3 olarak tespit edilmiştir. Çalışmanın sonuçları genel olarak değerlendirildiğinde ise uçakta yeniden ısıtılarak sıcak servis edilen yemek numunelerindeki mikrobiyal riskin, soğuk servis edilenlere göre daha düşük olduğu belirtilmiştir. Çalışmamızda incelenen tüketime hazır gıdalardan et ve sebze yemekleri ile pilav ve makarna örnekleri sıcak, meze, salata vb. ürünler ise soğuk servis edilen gıdalar olarak kabul edilebilir. Bu şekilde yapılan bir gruplandırma ile sıcak servis yapılan gıda örneklerinde Y ö n e t m e l i k t e k i ( 1 4 ) l i m i t d e ğ e r l e r i n ü z e r i n d e B. cereus a, soğuk servis yapılan gıdalarda ise limit değerlerin üzerinde E. coli varlığına rastlanabildiğini söyleyebiliriz. Tüketime hazır salataların mikrobiyolojik kalitelerinin incelendiği bir başka çalışmada ise örneklerin %55,1 inde toplam aerobik mezofilik bakteri, %54 ünde Enterobacteriaceae, %13 ünde S. aureus, %61,3 ünde maya ve %9,5 inde küf gelişimi tespit edilmiştir (28). Arıcı ve ark. (29) tarafından yapılan bir çalışmada, incelenen hazır salatalardaki toplam canlı bakteri sayısının 5x10 5-2x10 9 kob/g arasında olduğu, maya 206 Turk Hij Den Biyol Derg

47 Ş. ŞENSES-ERGÜL ve ark. Cilt 72 Sayı ve küf sayısının x10 6 kob/g arasında değiştiği ve laktik asit bakterilerinin sayısının 3x10 2-1,1x10 7 kob/g arasında olduğu bildirilmiştir. Aynı çalışmada ö r n e k l e r i n ç o ğ u n d a k o l i f o r m g r u b u b a k t e r i v e E. coli ye rastlanıldığı ve sayılarının sırasıyla, ,2x10 6 kob/g ile kob/g olarak bulunduğu rapor e d i l m i ş t i r. B u ç a l ı ş m a d a h a z ı r s a l a t a ö r n e k l e r i n d e k i S. aureus sayısının 12 2,8x10 3 kob/g arasında değiştiği bulunmuştur (29). Tüketime hazır farklı çeşitteki gıdaların incelendiği bir başka çalışmada, örneklerde koagülaz pozitif stafilokoka rastlanmadığı, sadece bir adet salata numunesinde Salmonella spp. izole edildiği ve örneklerin %18,5 inde E. coli saptandığı belirtilmiştir. Aynı çalışmada E. coli tespit edilme oranının en yüksek olduğu gıdaların salatalar, yan ürünler (kızartma, zeytinyağlı yemek vb.) ve tatlılar olduğu, b u n l a r ı e t y e m e k l e r i n i n i z l e d i ğ i i f a d e e d i l m i ş t i r (30). Can ve Yalçın (31) tarafından yapılan bir çalışmada; 50 adet yaş pasta örneği mikrobiyolojik olarak incelemeye alınmıştır. Yapılan analizler sonucunda numunelerde Salmonella spp. ve L. monocytogenes varlığına rastlanmadığı rapor edilmiştir. İncelenen yaş pasta örneklerinden beş tanesinin koagülaz pozitif stafilokoklar açısından pozitif sonuç verdiği ve bu örneklerdeki koagülaz pozitif stafilokok sayısının 1,1x10 3-4x10 4 kob/g arasında değiştiği bildirilmiştir. Yaş pasta örneklerinden dört tanesininde ise E. coli tespit edildiği, mikroorganizma sayısının 9-21 kob/g arasında değiştiği bildirilmiştir. Çalışmamızda kontrol amacıyla incelenen iki adet tatlı numunesinden bir tanesinin E. coli, diğerinin ise küf-maya parametresi açısından tüketime uygun olmadıkları belirlenmiştir. Bunun yanı sıra tüketime hazır salata, meze ve pişirilmiş unlu mamullerde, özellikle makarna, pide, lahmacun gibi ürünlerde gözlenen mevzuat limitleri üzerindeki E. coli varlığı da üretim koşullarındaki hijyen uygulamalarının yetersiz olduğunu göstermektedir. Tüketime hazır gıdalarda zehirlenmeye/ hastalığa neden olabilecek gıda kaynaklı etkenlerin bulunması tüketici sağlığı açısından önemli bir risk oluşturmaktadır. Gıda kaynaklı patojen mikroorganizmaların tespiti, mikroorganizma düzeyi ne olursa olsun önem taşımaktadır. Bu nedenle tüketiciler için taşıdığı risk ve kontaminasyon düzeyi ile ilgili önlemler alınmalıdır. Koagülaz pozitif stafilokoklar, C. perfringens, B. cereus gibi patojenlerin tüketime hazır gıdalarda düşük düzeyde bulunması sağlıklı bireyler için düşük risk oluştururken, bağışıklık sistemi zayıf olanlarda daha önemli sağlık problemlerine neden olabildiği bilinmektedir (11). Gıdalarda bulunabilecek düşük miktardaki mikroorganizma sayısı bu gıdaların üretiminde kullanılan hammaddelerin doğal yollarla kontaminasyonundan kaynaklanabileceği gibi çoğunlukla üretim veya işleme sırasındaki hatalardan kaynaklanabilmekte ve sağlık açısından taşıdıkları risk kabul edilemeyecek kadar artmaktadır. Bu çalışmada, incelenen tüketime hazır yemek ürünlerinin mikrobiyolojik kalitelerinin genelde iyi olduğu saptanmıştır. Bunun yanısıra uygunsuz saklama ve üretim koşullarına bağlı olarak bazı gıda numunelerinde de benzer ulusal ve uluslararası çalışmalarda da karşımıza çıkan bakteri türlerinin geliştikleri görülmüştür. KAYNAKLAR 1. Gürgün V, Ayhan K. Gıdalar ve mikrobiyolojik riskler II. Gıda, 1996; 21(3): Çolak H, Ulusoy B, Bingöl B, Hampikyan H, Muratoğlu K. Tüketime sunulan bazı hazır yemeklerin mikrobiyolojik kalitelerinin incelenmesi. Turk Mikrobiyol Cem Derg, 2007; 37(4): Özkaya FD, Cömert M. Gıda zehirlenmelerinde etken faktörler. Turk Hij Den Biyol Derg, 2008; 65(3): Bilgin B, Erkan ÜC. Bir Hazır yemek işletmesinde HACCP sisteminin kurulması. Tekirdağ Zir Fak Derg, 2008; 5(3): Turk Hij Den Biyol Derg 207

48 Cilt 72 Sayı HAZIR YEMEKLERİN MİKROBİYOLOJİK KALİTESİ 5. Küçükçetin A, Milci S. Staphylococcus aureus ile kontamine olan peynirlerden kaynaklanan gıda zehirlenmeleri. Gıda, 2008; 33(3): Fidan F, Ağaoğlu S. Ağrı bölgesinde bulunan lokantaların hijyenik durumu üzerine araştırmalar. YYÜ Vet Fak Derg, 2004; 15(1-2): Afshin J, Reza Z, Saeid S. Microbiological study of cocktail sausage during shelf life. Middle-East J Sci Res, 2011; 7(6): Alyaaqoubi SJM, Sani NA, Abdullah A, Rahman RDA. Microbiological quality of selected ready-to-eat food at Hulu Langat district, Malaysia. Prosiding Seminar Kimia Bersama UKM-ITB VIII 9-11 June 2009, Pp Oranusi US, Braide W. A study of microbial safety of ready-to-eat foods vended on highways: Onitsha- Owerri, South East Nigeria. Int Res J Microbiol, 2012; 3(2): Hosein A, Muñoz K, Sawh K, Adesiyun A. Microbial load and the prevalence of Escherichia coli, Salmonella spp. and Listeria spp. in ready-to-eat products in Trinidad. The Open Food Sci J, 2008; 2: Anonymous. Guidelines for assessing the microbiological safety of ready-to-eat foods placed on the market. webc/hpawebfile/hpaweb_c/ Gürgün V, Ayhan K. Gıdalar ve mikrobiyolojik riskler I. Gıda; 1996; 21(1): Jacxsens L, Kussaga J, Luning PA, Van der Spiegel M, Devlieghere F, Uyttendaele M. A microbial assessment scheme to measure microbial performance of food safety management systems. Int J Food Microbiol, 2009; 134: Anonymous. Türk Gıda Kodeksi Mikrobiyolojik Kriterler Yönetmeliği. Ankara: T.C. Gıda Tarım ve Hayvancılık Bakanlığı, Anonymous. Gıda ve hayvan yemlerininmikrobiyolojisi-salmonella spp tespiti için yatay metot. TS EN ISO 6579, Anonymous. Microbiology of food and animal feeding stuffs Horizontal method for the detection and enumeration of Listeria monocytogenes Part 1: Detection method. TS ISO , Anonymous. Gıda ve hayvan yemleri mikrobiyolojisi- Bacillus cereus sayımı için yatay metot. 30 O C de koloni sayım tekniği. TS EN ISO 7932, Anonymous. Gıda ve hayvan yemleri mikrobiyolojisi- Koagülaz pozitif stafilokokların (Staphyloccus aureus ve diğer türler) sayımı için yatay metotbölüm 1: Baird-Parker agar besiyeri kullanarak. TS EN ISO , Anonymous. Gıda ve hayvan yemleri mikrobiyolojisi- Campylobacter spp. nin sayımı ve belirlenmesi için yatay metot-bölüm I: belirleme yöntemi. TS EN ISO , Anonymous. Microbiology of food and animal feding stuffs-horizontal method for the detection of Escherichia coli O157. TS EN ISO 16654, Anonymous. Microbiology of food and animal feeding stuffs-horizontal method for the enumeration of sulfite-reducing bacteria growing under anaerobic conditions. ISO 15213, Anonymous. Enumeration of Escherichia coli and coliform bacteria. Bacteriological Analytical Manual Anonymous. Microbiology of food and animal feeding stuffs horizontal method for the enumeration of yeasts and moulds part 1: colony count technique in products with water activity greater than ISO , Anonymous. Microbiology of food and animal feeding stuffs horizontal method for the enumeration of yeasts and moulds part 2: colony count technique in products with water activity less than or equal to ISO , Yalçın H, Can ÖP. Tüketime hazır bazı et yemeklerinin mikrobiyolojik kaliteleri. Erciyes Üniv Vet Fak Derg, 2013; 10(1): Bostan K, Yılmaz F, Muratoğlu K, Aydın A. Pişmiş döner kebaplarda mikrobiyolojik kalite ve mikrobiyel gelişim üzerine bir araştırma. Kafkas Univ Vet Fak Derg, 2011; 17(5): Hatakka M. Hygienic quality of foods served on aircraft. Academic Dissertation, Department of Food and Environmental Hygiene, Faculty of Veterinary Medicine, University of Helsinki, Pamuk Ş, Gürler Z, Yıldırım Y, Ertaş N. The microbiological quality of ready to eat salads sold in Afyonkarahisar, Turkey. Kafkas Univ Vet Fak Derg, 2013; 19(6): Arıcı M, Gümüş T, Şimşek O. Hazır salataların hijyenik durumu. Gıda, 2003, 28(6): Ildız F, Çiftçioğlı G. Toplu tüketim amacıyla üretilen gıdaların bazı patojen mikroorganizmalar yönünden incelenmesi. İstanbul Üniv Vet Fak Derg, 1997; 23(2): Can ÖP, Yalçın H. Mersin de tüketime sunulan kremalı pastaların mikrobiyolojik kalitelerinin değerlendirilmesi. Gıda Teknol Elektr Derg, 2011; 6(3): Turk Hij Den Biyol Derg

49 Araştırma Makalesi/Original Article Makale Dili Türkçe /Article Language Turkish Türk Hijyen ve Deneysel Biyoloji Dergisi Manisa da aynı yemek şirketinden yemek alan farklı işletmelerde meydana gelen stafilokok kaynaklı besin zehirlenmesi Food poisoning caused by staphylococcus in various workplaces getting food from the same catering company in Manisa Ali Hasan ZUBAROĞLU 1, Ali BOZ 1, Selmur TOPAL 2, Fehminaz TEMEL 1, Mustafa Bahadır SUCAKLI 1, Belkıs LEVENT 3, Gonca ATASOYLU 4, Metin KIZILELMA 5 ÖZET Amaç: Manisa da aynı yemek şirketinden yemek alan 23 farklı kurumda besin zehirlenmesi meydana gelmiş ve çok sayıda kişi etkilenmiştir. Bu araştırma, sorunun kaynağını tespit etmek, koruma ve kontrol önlemlerini almak amacıyla yapılmıştır. Yöntem: öğle yemeği sonrası farklı işletmelerden çok sayıda kişinin sağlık kurumlarına başvurdukları bildirilmiştir. İşletmelerdeki personel sayısının fazla olması ve bütün çalışanlara ulaşılmasının zorluğu nedeniyle vaka kontrol çalışması planlanmıştır. Araştırma; atak hızının en yüksek ve vaka sayısının en fazla olduğu yedi işyerinde yapılmıştır. Anketler yüz yüze görüşülerek doldurulmuştur. Enfektif etken tespiti için su, gıda ve klinik örnekler alınmıştır. Bulgular: Araştırmada 94 vakaya ulaşılmış ve aynı sayıda kontrol seçilmiştir. Vakaların tamamında ishal ve kusma, %94,7 sinde bulantı %85,1 inde halsizlik, %83 ünde karın ağrısı ve %38,3 ünde ateş olduğu belirlenmiştir. Vakaların ortalama inkübasyon süresi 3 saat 42 dakika (En düşük= 35 dk. En yüksek= 7 saat 30 dk.) olarak bulunmuştur. Salgın eğrisi incelendiğinde olayın tek kaynaklı salgın olduğu belirlenmiştir. ABSTRACT Objective: A food poisoning occurred in 23 different workplaces, obtaining food from the same catering company in Manisa and many people were affected. This research was conducted to identify the source of the problem and control and preventive measures. Method: On April 25th 2014, many workers from various workplaces were admitted to the health institutions after lunch. Due to the high number of staff in the workplaces and difficulty of reaching all of them, a case-control study was planned. Research was conducted in seven workplaces which had both the highest number of cases and attack rate. Data was collected through a questionnaire. Water, food and clinical samples were taken to identify the infective agent. Results: In this research 94 patients were reached and same number of controls were selected. Diarrhea and vomiting were present among all cases; in 94.7% nausea, in 85.1% fatigue, in 83% abdominal pain and in 38.3% fever. Average incubation period of cases was 3 h and 42 min (Min= 35 min Max= 7 h and 30 min). Epidemic curve showed a point source outbreak. The odds of Eating Apricot Ball Dessert was found 8.7 times * Bu araştırma; Ekim 2014 tarihlerinde Edirne de düzenlenen 17. Ulusal Halk Sağlığı Kongresi nde poster olarak sunulmuştur. 1 Türkiye Halk Sağlığı Kurumu, Erken Uyarı-Cevap ve Saha Epidemiyolojisi Daire Başkanlığı, ANKARA 2 Türkiye Halk Sağlığı Kurumu, Bulaşıcı Hastalıklar Daire Başkanlığı, ANKARA 3 Türkiye Halk Sağlığı Kurumu, Mikrobiyoloji Referans Laboratuvarları Daire Başkanlığı, ANKARA 4 Manisa Halk Sağlığı Müdürlüğü, MANİSA 5 İzmir Halk Sağlığı Müdürlüğü, İZMİR İletişim / Corresponding Author : Ali Hasan ZUBAROĞLU Türkiye Halk Sağlığı Kurumu, Erken Uyarı-Cevap ve Saha Epidemiyolojisi Daire Başkanlığı, ANKARA Tel : DOI ID : /TurkHijyen E-posta / ahzubaroglu@yahoo.com Geliş Tarihi / Received : Kabul Tarihi / Accepted : Zubaroğlu AH, Boz A, Topal S, Temel F, Sucaklı MB, Levent B, Atasoylu G, Kızılelma M. Manisa da aynı yemek şirketinden yemek alan farklı işletmelerde meydana gelen stafilokok kaynaklı besin zehirlenmesi. Turk Hij Den Biyol Derg, 2015; 72(3): Turk Hij Den Biyol Derg, 2015; 72(3):

50 Cilt 72 Sayı MANİSA DA STAFİLOKOKAL BESİN ZEHİRLENMESİ Vakalarda kontrollere göre Kayısı Topu Tatlısı yeme tahmini rölatif riski 8,7 kat olarak bulunmuştur (%95 GA = 1,1-71,4). Diğer gıdaların tüketimleriyle hastalık arasında anlamlı bir ilişki saptanmamıştır. Alınan gıda numunelerinde kayısı topu tatlısında Staphylococcus aureus tespit edilmiştir. Kayısı topu tatlısının üretildiği işletme çalışanlarından birinin nazal sürüntüsünde S. aureus izole edilmiştir. Ancak yapılan ileri analizlerde bu suş ile gıda izolatından elde edilen suşun moleküler düzeyde birbirlerinden farklı oldukları belirlenmiştir. Sonuç: Laboratuvar sonuçları ve epidemiyolojik analizler sonucunda yaşanan besin zehirlenmesinin kaynağının kayısı topu tatlısı olduğu belirlenmiştir. Geriye dönük gıda takibi yapılmış ancak bulaşın ne şekilde olduğu belirlenememiştir. Benzer olayların tekrar yaşanmaması için ilgili yemek şirketindeki hijyen eğitimleri eksik olan personelin eğitim alması sağlanmış, taşıyıcılık tespit edilen çalışan tedavi edilmiş, ayrıca tedarikçi firmaya para cezası verilmiştir. Besin zehirlenmelerinde kaynağın belirlenmesi ve bulaş zincirinin tespiti amacıyla Gıda Tarım ve Hayvancılık Bakanlığı ile Sağlık Bakanlığı nın zamanında ve ortak hareket etmesi gerekmektedir, bu nedenle uygun yasal düzenlemeler geliştirilmelidir. Anahtar Kelimeler: Vaka-Kontrol Çalışması, Stafilokokal Besin Zehirlenmesi, Salgın, Manisa in cases when compared to controls (95% CI = ). There was no significant association between the other food items and the disease. Analysis of food samples were revealed Staphylococcus aureus in apricot ball dessert. S. aureus was also isolated from a nasal swab of an employee working in the kitchen of the catering company that produced the apricot ball dessert. However, further analysis of these two strains revealed that the isolates were different from each other at molecular level. Conclusion: Epidemiological and laboratory findings showed that apricot ball dessert was the origin of food poisoning. Although traceback investigation of food was conducted the route of contamination has been fined. In order to prevent reoccurence of similar incidents; training was provided for foodcompany workers who does not have hygiene training; the porter worker was treated, and besides supplier company could not be determined. Ministry of Health and Ministry of Food, Agriculture and Livestock should act timely and together to identify the source and chain of transmission in food poisoning incidents. For this purpose convenient legal regulations should be improved. Key Words: Case-Control Study, Staphylococcal Food Poisoning, Outbreak, Manisa GİRİŞ Patojen bir mikroorganizma ya da onun ürettiği toksini içeren bir gıdanın tüketimi sonucu ortaya çıkan hastalıklara Gıda Kaynaklı Mikrobiyal Hastalıklar denilmektedir. Gıda kaynaklı mikrobiyal hastalıklar; gıda kaynaklı enfeksiyonlar ve gıda kaynaklı zehirlenmeler olmak üzere iki gruba ayrılmaktadır. Gıda maddesinin patojen bir mikroorganizma ile kontamine olması ve bu mikroorganizmanın çoğalarak toksin salgılaması sonrası, bu gıda maddesinin tüketilmesiyle meydana gelen zehirlenmeye ise Gıda Kaynaklı Zehirlenme adı verilmektedir (1). Gıdaların mikrobiyal etkenlerle enfekte edilmesi; gıdaların hazırlama, saklama, taşıma ve sunum aşamalarında hijyen kurallarına uyulmaması nedeniyle olabilmektedir. Gelişen bulguların şiddeti; karın ağrısı, bulantı, kusma, ishalden gıda kaynaklı zehirlenmeye bağlı ölümlere kadar değişen geniş bir spektrum şeklinde görülmektedir. Amerikan Hastalık Önleme ve Kontrol Merkezi (CDC) tarafından yapılan tanıma göre Gıda Kaynaklı Salgın ; ortak bir gıdanın tüketilmesi sonrası iki veya daha fazla kişide aynı zaman ve yerde benzer belirtiler gösteren hastalık tablosunun ortaya çıkması durumudur (2). ABD, gıda güvenliği konusunda dünyadaki en ileri ülkelerden biri olmasına rağmen ABD Tarım 210 Turk Hij Den Biyol Derg

51 A. H. ZUBAROĞLU ve ark. Cilt 72 Sayı Bakanlığı nın raporlarına göre; her yıl yaklaşık 8,9 milyon Amerikalının gıda kaynaklı bir hastalık geçirdiği düşünülmektedir. Yıllık yaklaşık kişinin hastanelerde yatarak tedavi edildiği, kişinin ise hayatını kaybetmesine neden olduğu tahmin edilmektedir. Tüm bunların ABD ye ekonomik yükünün yıllık 15,6 milyar dolar olduğu belirtilmektedir (3). Günümüzde 250 den fazla gıda kaynaklı hastalık tanımlanmaktadır. Bunlar bakteri, virüs, mantar ve parazitlerin kendilerinin veya toksik ürünlerinin gıdalara bulaşması sonucu ortaya çıkmaktadır. Etken açısından bazı farklılıklar göstermekle beraber gelişmiş ve gelişmekte olan ülkelerde gıda kaynaklı hastalıklar sıklıkla görülebilmektedir (4). Ülkemizde yapılan bir çalışmada, Marmara bölgesinde perakende olarak satılan 1070 gıda örneğinde inceleme yapılmıştır. Patojen etken saptanan 147 örneğin 92 (%62,6) sinin stafilokokal toksinler ile enfekte olduğu tespit edilmiştir (5). Bu da tüm dünyada olduğu gibi ülkemizde de stafilokokal besin zehirlenme riskinin yüksek olduğunu göstermektedir. İnsanların yaklaşık %20 sinin Staphylococcus aureus açısından sürekli taşıyıcı durumunda olduğu, %20 sinin hiçbir şekilde S. aureus ile kolonize olmadığı, %60 ının ise dönem dönem burunlarında S. aureus taşıyabildikleri belirlenmiştir. Genelde toplumun %33 ünün burnunda S. aureus saptanmaktadır (6). S. aureus insanda; nazofarinks, deri, vajina, rektum, perine ve özellikle burunda yaygın kolonizasyon gösterir. Bu da S. aureus un gıda elleyicilerinden rahatlıkla yemeklere bulaşmasına neden olmaktadır. Nemli ellerle yüzeylere ve yiyeceklere kolayca bulaşı mümkün olduğundan yemek hazırlama, taşıma ve sunum aşamalarında hijyen kurallarına azami ölçüde dikkat edilmesi çok önemlidir. S. aureus besin zehirlenmesi salgınlarının araştırılmasında doğrulama için şüpheli besinden, hastaların kusmuklarından, besin hazırlayıcıların ellerinden, burunlarından veya deri lezyonlarından izole edilen S. aureus suşlarının aynı faj tipi olduğu gösterilebilmektedir (7). Bu çalışmada; aynı yemek şirketinden yemek alan 23 farklı işyerindeki çalışanlarda meydana gelen besin zehirlenmesi; ortaya çıkan halk sağlığı sorununun kaynağının tespiti, koruma, kontrol önlemlerinin alınması ve bu tür olayların tekrar yaşanmasının önlenmesi amacıyla incelenmiştir. GEREÇ ve YÖNTEM Manisa da günü saat 16:00 sularında Manisa Halk Sağlığı Müdürlüğü ne şüpheli bir besin zehirlenmesi olayı ihbarı yapılmıştır. Halk Sağlığı Müdürlüğü tarafından Türkiye Halk Sağlığı Kurumu (THSK) Erken Uyarı-Cevap ve Saha Epidemiyolojisi (EUCSE) Daire Başkanlığı na aynı yemek şirketinden yemek alan farklı iş yerlerinde çok sayıda kişinin bulantı, kusma, karın ağrısı, terleme, halsizlik şikâyetleriyle sağlık kurumlarına başvurdukları bilgisi aynı gün iletilmiştir. Etkilenen kişi sayısının fazlalığı ve olayın toplum sağlığını etkileme riski taşıması nedeniyle THSK EUCSE Daire Başkanlığı tarafından araştırma kararı alınmıştır. Salgın inceleme çalışmaları 29 Nisan-2 Mayıs 2014 tarihleri arasında EUCSE Daire Başkanlığı ndan görevlendirilen personel ile Manisa Halk Sağlığı Müdürlüğü personeli tarafından, tedarikçi firmada yapılan inceleme ise 4 Haziran 2014 tarihinde İzmir Kemalpaşa Toplum Sağlığı Merkezi (TSM) personeli tarafından gerçekleştirilmiştir. Salgının 23 işletmeyi etkilemesi, bu işletmelerdeki personel sayısının fazla olması ve tüm çalışanlara ulaşılmasının zorluğu nedeniyle vaka kontrol çalışması yapılmıştır. Çalışmada salgın boyutunu belirleyebilmek için öncelikle şüpheli vaka tanımı ve kontrol seçim kriterleri geliştirilmiştir. Sağlık kurumlarına başvuran kişilerin muayene kayıtlarında iş yeri bilgisi kaydedilmediği için vaka bulmada hastane bilgi sistemlerinden yararlanılamamıştır yılında düzenlenen 6331 sayılı İş Sağlığı ve Güvenliği Kanunu nun 14. maddesine göre işveren iş Turk Hij Den Biyol Derg 211

52 Cilt 72 Sayı MANİSA DA STAFİLOKOKAL BESİN ZEHİRLENMESİ kazalarını üç iş günü içinde Sosyal Güvenlik Kurumu (SGK) na bildirmekle yükümlü olduğu belirtilmektedir. Buna uygun olarak yaşanan besin zehirlenmesinden sonra etkilenen ve sağlık kurumuna başvurarak rapor alanların, işyerlerinin insan kaynakları birimlerince SGK ya bildirildiği belirlenmiştir. İnsan kaynakları birimlerindeki kayıtlar kullanılarak vakalara ulaşılmıştır. Şüpheli vaka, tarihinde ilgili işyerlerinde çalışan; tarihlerinde bulantı, kusma, karın ağrısı, ishal, ateş şikâyetlerinden en az birisi olan kişiler olarak belirlenmiştir. Kontroller ise, tarihinde ilgili işyerlerinde ç a l ı ş a n ; b u l a n t ı, k u s m a, k a r ı n a ğ r ı s ı, i s h a l v e y a ateş şikâyetleri bulunmayan kişiler olarak tanımlanmıştır. İlk belirlemelere göre 23 farklı işyerinde yaklaşık 2700 kişinin yemek yediği, bunların 257 sinin şüpheli vaka tanımına uyduğu tespit edilmiştir. Çalışma alanının geniş olması nedeniyle; araştırma için, atak hızının en yüksek ve vaka sayısının en fazla olduğu dokuz işyeri belirlenmiştir. İşletmelerle yapılan görüşmelerde; çalışmanın yapıldığı tarihlerde iki işletmenin personel ve zaman açısından uygun olmadıklarını belirtmeleri üzerine, çalışma yedi işyerinde yapılmıştır. İshal ve kusmanın birlikte bulunduğu şüpheli vakalar olası vaka olarak tanımlanmış ve analizlerde bu tanıma uyan vakalar kullanılmıştır. Yüz-yüze görüşme ile uygulanan ankette çalışanlara sosyo-demografik özellikler, yemek yeme durumu ve semptomlar sorulmuştur. Anket çalışması için Manisa Halk Sağlığı Müdürlüğü tarafından, Yunusemre ve Şehzadeler TSM lerinden 18 kişi görevlendirilmiştir. Anket uygulaması, 30 Nisan ve 2 Mayıs 2014 tarihlerinde gerçekleştirilmiştir. Firmalardaki tüm çalışanların olduğu listeler alınarak; vakalar ve tarihinde izinli olan kişiler listeden çıkarılmış, geriye kalanlardan sistematik örnekleme yöntemiyle kontroller seçilmiştir. Open Epi programıyla %95 güven aralığı, %80 güç, kontrollerin tahmini etken maruziyeti %90 ve beklenen tahmini rölatif risk 8 alınarak yapılan hesaplamalarda 114 vaka ve 114 kontrol sayısı belirlenmiştir. Anket uygulanacak örneklem büyüklüğü hesaplamasında ulaşılamama, reddetme ve kontrol seçim kriterlerine uymama durumları göz önüne alınarak %50 cevapsızlık hızı düşünülerek ilgili işletmelerdeki tüm vakalara ve 171 kontrole ulaşılması hedeflenmiş ancak, 145 vaka ve 155 kontrole ulaşılabilmiştir. Anket uygulanan 145 vakanın 103 ünün olası vaka tanımına uyduğu belirlenmiştir tarihinde işyerinde öğlen yemek yemeyen kontroller veri setinden çıkarılmış, geriye 94 kontrol kalmıştır. Vaka ve kontrol sayılarını eşitlemek için dokuz vaka da basit rastgele yöntemle belirlenerek veri setinden çıkarılmıştır (Şekil 1). Analizler SPSS 22, Epi Info ve Open Epi programları kullanılarak 94 vaka ve 94 kontrol üzerinden yapılmıştır. Şekil 1. Vaka ve kontrol seçimi Analizlerde, yüzde dağılımı, atak hızı, %95 güven aralığı (GA) ve tahmini rölatif risk (TRR) hesaplanmıştır. Manisa İl Gıda, Tarım ve Hayvancılık Müdürlüğü personeli tarafından tarihinde ilgili yemek şirketine gidilerek inceleme yapılmıştır. Öğle yemeğinde işletmelere tavuk sote, erişte, toyga çorbası ve kayısı topu tatlısının verildiği belirlenmiştir. İncelemede tavuk sote, erişte ve toyga çorbasının porselen tabaklarla dağıtıldığı ancak; kayısı topu 212 Turk Hij Den Biyol Derg

53 A. H. ZUBAROĞLU ve ark. Cilt 72 Sayı tatlısının plastik kaselerde verildiği; bazı kâselerin kapaklı çoğunun ise kapaksız olduğu tespit edilmiştir. Tüm yemeklerden numune alınmış ve yemeklerin dağıtımı durdurulmuştur. Yemeklerden alınan numuneler yayma plak yöntemiyle analiz edilmiştir. Manisa Halk Sağlığı Müdürlüğü tarafından vaka çıkan dört işletmenin şebeke sularından örnekler alınarak İzmir Halk Sağlığı Laboratuvarı na gönderilmiştir. Su numuneleri Escherichia coli, Koliform Bakteri, Clostridium perfringens ve Enterokok patojenleri açısından değerlendirilmiştir. Vakalardan alınan dört taze gaita örneği soğuk zincir koşullarında THSK Mikrobiyoloji Referans Laboratuvarı na iletilmiştir. BULGULAR Araştırmada vakaların %79,8 i ile kontrollerin %78,7 si erkektir. Vakalar (Ort. ± SS = 34 ± 8,9 yıl) ve kontroller (Ort. ± SS = 34 ± 9,2 yıl) benzer yaş ortalamalarına sahiptir. Vakalarda ishal ve kusmaya ek olarak, %94,7 sinde bulantı %85,1 inde halsizlik, %83 ünde karın ağrısı, %38,3 ünde ateş olduğu belirlenmiştir. Yemek firmasından elde edilen bilgilere göre öğle yemeği 11:00-13:30 saatleri arasında dağıtılmıştır. Vakalar, ilk şikâyet başlama saatine göre değerlendirildiğinde; şikayetlerin 24 Nisan 2014 tarihinde saat 12:55 te başladığı, vaka sayısının 15:00-16:00 saatleri arasında pik yaptığı, saat 20:00 den sonra vaka görülmediği tespit edilmiştir (Grafik 1). Ortalama inkübasyon süresi 3 saat 42 dakika (SS= 1 saat 9 dk.), ortanca inkübasyon süresi 3 saat 30 dakika (En düşük= 35 dk. En yüksek= 7 saat 30 dk.) olarak bulunmuştur. Salgın eğrisi incelendiğinde olayın tek kaynaklı salgın olduğu düşünülmüştür. 25 Nisan 2014 tarihinde ilgili işletmelerde dağıtılan öğle yemeği menüsündeki yiyeceklerin vaka ve kontrol gruplarında tüketim durumları ve yiyeceklerin tahmini rölatif riskleri Tablo 1 de verilmiştir. Öğle yemeği menüsünde dağıtılan yemeklerin tüketimi değerlendirildiğinde vakalarda kontrollere göre kayısı topu tatlısı yeme tahmini rölatif riski 8,7 Grafik 1. Vakalarda ilk şikâyetlerin başlama saatlerine göre dağılımı (Nisan 2014, Manisa) Turk Hij Den Biyol Derg 213