V8 İmmunodisplacement Kit

Transkript

1 V8 İmmunodisplacement Kit REF: KULLANIM AMACI V8 Immunodisplacement Kit Kapiler Elektroforez (CE) tarafından Monoklonal Gamopatilerin tespiti ve ayrıştırılması için tasarlanmıştır. Immunodisplacement için büyük talep monoklonal gamopatilerin tespiti için öncelikle kullanılan klinik laboratuarları içindir. Bir monoklonal gamopati bir tek sınıf ve türün bir immunglobulin yüksek seviyesini üreten plazma hücrelerinin tek bir klonunda bir primer hastalık durumudur. Bazı immünglobulinler monoklonal protein,m-protein veya paraproteinler olarak adlandırılır. Varlıkları iyi doğaya ya da belirsiz öneme sahip olabilir. Bazı durumlarda, multipl miyelom veya Waldenström macroglobulinaemia gibi bir malignite göstergesidirler. Farklılaşma poliklonal gamopatiler kronik karaciğer hastalığı, kolajen bozuklukları, romatoid artrit ve kronik enfeksiyon gibi klinik bozukluklardan dolayı ikincil bir hastalık durumu olduğu için poliklonal ve monoklonal gamopatiler arasında yapılmalıdır. İdrar proteinleri öncelikle böbrek yoluyla filtre edilen plazma proteinlerinden elde edilmiştir. İdrarda anormal plazma proteinlerinin görünümü renal fonksiyon değerlendirmesinde büyük değerdir. Proteinürinin uygun çalışması ekstre edilmiş proteinlerin miktarının ve tipinin kantitatif ve kalitatif değerlendirmesini içermelidir. İmmunoçökelme ile spesifik protein tür tespiti ile çiftleşen idrar proteinlerin elektroforetik ayrım kombinasyonu Dysglobulinaemias ile ilişkili proteinüri-fizyolojik, Glomerüler (seçici ve seçici olmayan), Tübüler ve proteinürin çeşitli türlerinin farklılaşmasına olanak sağlar 1-5. V8 Immunodisplacement Kit yüklerine göre serum proteini ayırır. Monospesifik antiserum ile inkübe edilen proteinler CE kalıntısından gelen immunoglobulin türlerinin yer değişimine neden olur. UYARILAR VE ÖNLEMLER Kitte bulunan reaktifler sadece in-vitro diagnostik kullanımı içindir. Yutmayın veya ağızla pipetleme yapmayın. Çalışma yaparken eldiven giyin. Atık bilgisi, risk ve güvenlik fazları için ürün güvenliği veri sayfasına bakın. BİLEŞENLER 1. Anti-human IgG antisera. REF HL SA (1 x 50 test) Her şişe 50 testin tamamlanması

2 2. Anti-human IgA antisera. REF HL SA (1 x 50 test). Her şişe 50 testin tamamlanması 3. Anti-human IgM antisera. REF HL SA (1 x 50 test). Her şişe 50 testin tamamlanması 4. Anti-human kappa antisera. REF HL SA (1 x 50 test). Her şişe 50 testin tamamlanması için yeterli antiserum içerir. Antiserum kullanıma hazırdır ve çalışma manuelinde belirtilen 5. Anti-human lambda antisera. REF HL SA (1 x 50 test). Her şişe 50 testin tamamlanması için yeterli antiserum içerir. Antiserum kullanıma hazırdır ve çalışma manuelinde belirtilen SAKLAMA VE RAF ÖMRÜ 1. Anti-human IgG antisera. Antiserum 2 6 C de saklanmalıdır ve şişe üzerinde belirtilen son 2. Anti-human IgA antisera. Antiserum 2 6 C de saklanmalıdır ve şişe üzerinde belirtilen son 3. Anti-human IgM antisera. Antiserum 2 6 C de saklanmalıdır ve şişe üzerinde belirtilen son 4. Anti-human kappa antisera. Antiserum 2 6 C de saklanmalıdır ve şişe üzerinde belirtilen son kullanım tarihine kadar stabildir. Helena V8 cihazının reaktif şişe alanına konulan açılmış şişeler 5. Anti-human lambda antisera. Antiserum 2 6 C de saklanmalıdır ve şişe üzerinde belirtilen son kullanım tarihine kadar stabildir. Helena V8 cihazının reaktif şişe alanına konulan açılmış şişeler GEREKLİ FAKAT SAĞLANMAYAN ÖĞELER REF V8 Storage Buffer REF V8 Maintenance Buffer REF V8 Serum Protein 5-band Kit (If conducting 5-band separation) REF V8 Serum Protein 6-band Kit (If conducting 6-band separation) REF V8 Serum Protein SPE Kit (if conducting SPE separation) REF V8 Serum Protein 6-band Zoom Kit (if conducting 6-band Zoom separation) REF V8 Clinical Waste Drawer Pack İSTEĞE BAĞLI ÖĞELER REF V8 Urine Analysis Centrifugation 5-band Kit (if conducting urine analysis preanalytical REF V8 Urine Analysis Centrifugation 6-band Kit (if conducting urine analysis preanalytical REF V8 Urine Analysis Centrifugation 6-band Zoom Kit (if conducting urine analysis preanalytical REF V8 Urine Analysis Centrifugation SPE Kit (if conducting urine analysis preanalytical

3 REF V8 Urine Analysis Column 5-band Kit (if conducting urine analysis preanalytical desalting REF V8 Urine Analysis Column 6-band Kit (if conducting urine analysis preanalytical desalting REF V8 Urine Analysis Column 6-band Zoom Kit (if conducting urine analysis preanalytical de-salting REF V8 Urine Analysis Column SPE Kit (if conducting urine analysis pre-analytical desalting REF V8 Free kappa / Free lambda Kit (if conducting serum or urine immunodisplacement) REF V8 Anti-IgD / Anti-IgE Kit (if conducting serum or urine immunodisplacement) NUMUNE TOPLANMASI VE HAZIRLANMASI Serum protein analizi için, tercih edilen örnek taze toplanmış serumdur. Örnekler 4 güne kadar 5-30 derecede, 2 haftaya kadar 2-6 derecede veya 6 aya kadar 20 derecede saklanabilir. Plazma kullanımı beta ve gama fraksiyonları arasında bir fibrinojen bandına sebep olur. İdrar analizi için, tercih edilen örnek taze toplanmış idrardır (24 saatlik toplama). Örnekler 7 güne kadar 2-6 derecede saklanabilir. Uzun süreli saklamalar için, örnek -70 C de 1 aya kadar saklanabilir. Örnekleri -20 C de saklamayın. Örnekler REF , REF , REF , REF , REF , REF , REF ya da REF in herhangi birini kullanarak tuzu giderilebilir. ADIM-ADIM PROSEDÜR 1. Atık konteynar çekmecesinin yerleşik şekilde olduğundan emin olun. 2. V8 açılmadan önce, Storage Buffer, Maintenance Buffer ve tek kullanımlık kapların yerleşik şekilde ve doğru pozisyonda olduğundan emin olun. Tüm sarf malzemenin doğru kurulumu için lütfen kullanım manueline bakın. 3. Platinum 4V başlatın ve yeni bir CE oturum açın. Platinum 4V de seçilen DEFAULT METHOD menüden CE SYSTEM seçin ve ilgili Immunodisplacement testin seçildiğinden emin olun. Refleks testler yada tek-tek testler istemi için lütfen çalışma manueline bakın. 4. Çalışma manüelinde anlatıldığı gibi Helena V8 açın. 5. Gerekirse Immunodisplacement testi yapmak için, ilgili Serum Protein tamponu ve Dilüenti yükleyin. Bütün Serum Protein Buffer şişeler ve Serum Protein Diluentlerin doğru ayarlanması için lütfen çalışma manueline bakın. 6. Immunodisplacement antiserum şişelerinin bütün kapaklarını çıkarın ve her şişenin reaktif şişe alanına doğru şekilde konulduğundan emin olun (çalışma manueline bakın). 7. Reaktif barkod bilgisi açılan menüden CE SYSTEM seçilerek Platinum 4V içine yüklenmelidir. DEFINE REAGENTS tıklayın ve reaktiflerin konumu V8 in her bir pozisyonuna uygun olmalıdır. 8. V8 çalışmak için kabul edilen örnekler hazırlandığında, cihaz kırmızı sinyal verir. 9. Örnekler için Refleks test istenir ve barkodun rak penceresinde açıkça göründüğünden emin olarak örnek rakı içine birincil örnek tüpünü koyun (lütfen çalışma manueline bakın). 10. V8 örnek taşıma alanının sol tarafına örnek raklarını yükleyin ve çalışma manüelinde anlatıldığı gibi kapağı kapatın. 11. V8 otomatik olarak tüm yüklü örneklerin analizi başlatır ve sonuçları Platinum 4V e aktaracaktır. 12. Analiz sonrası ve eğer gerekirse, çalışma manüelinde anlatıldığı gibi cihazı kapatarak V8 kapatma modunda başlatın.

4 13. Önemli olan V8 günün sonunda düzgün şekilde çalışmasıdır. Lütfen kullanım kılavuzuna başvurun. SONUÇLARIN YORUMLANMASI Monoklonal proteinlerin çoğunluğu protein patern alanında katot gama bölgesine göç eder fakat anormal doğalarından dolayı, kapiler elektroforezinde globulin bölgesinde herhangi bir yere göç edebilirler. Anormal protein antiserum türü ile tanımlanır ve CE kalıntısından gelen ilk başta tespit edilen pik ile reaksiyona girer. Anormal proteinin düşük konsantrasyonları bulunduğunda, anormal bant normal poliklonal immünoglobulin içinde bir bant gibi görülebilir. KALİTE KONTROL Helena Biosciences Abnormal CEtrol Serum Kontroller (Kat. no ) Immunodisplacement prosedürün tüm basamaklarını doğrulamak için kullanılabilir. SINIRLAMALAR 1. Kappa veya Lambda hafif zincir antiserumu ile reaksiyon gösterir fakat IgG,IgA veya IgM ağır zincir antiserumu ile reaksiyon göstermez. Bu paterni gösteren örnekler ya serbest hafif zinciri monoklonal gammopati yada bir IgD yada IgE monoklonal proteinine sahiptir. Bu durumda ID diğer ağır zincir antiserumların ikisi için IgD ve IgE antiserum yer değiştirerek tekrarlanmalıdır. IgD veya IgE antiserumları ile bir reaksiyon eldesin deki başarısızlık serbest hafif zincir hastalığını belirtebilir. 2. ID antiserum ile reaksiyon göstermeyen gamma bölgesi bant. C reaktif protein (CRP), akut inflamasyon yanıtı olan hastalarda tespit edilebilir 1-2. CRP için destekleyici kanıt, yükseltilmiş alfa-1,anttripsin ve haptoglobulindir. 3. Kappa ve Lambda antiserumları ile reaksiyon göstermez. Genellikle bir örnek, ağır zincir antiserumu ile reaksiyon verir fakat hafif zincir reaksiyonu vermez. Bu durumda, aşağıdakiler kabul edilmeza)ağır zincir hastalığı, b)hafif zincirlerinin çok yüksek konsantrasyonlarını izleyen antijen fazlalığı, c)hafif zincirinin düşük konsantrasyonları, d)antiserum ile reaksiyon vermeyen atipik hafif zincir molekülü, e) hidden hafif zincir determinantları ile hafif zincirler. Kesin sonuçlar elde etmek için, test: a) Antijen/antikor denkliğini optimize etmek için örneğin daha yüksek veya daha alçak dilüsyonu içerebilir. PERFORMANS ÖZELLİKLERİ Numune serileri test edildi ve diğer ticari test kiti ile karşılaştırıldı-her iki kit de eşit sonuçlar verdi.

5 BİBLİYOGRAFYA 1. Fauchier, P. and Catalan, F. Interpretive Guide to Clinical Electrophoresis Alfred Fournier Institute, Paris, France, Killingsworth, L.M., Cooney, S.K. and Tyllia, M.M. Finding Clues to Disease in Urine Diagnostic Medicine, 1980 ; May/June : Umbreit, A. and Wiedemann, G. Determination of Urinary Protein Fractions. A Comparison With Different Electrophoretic Methods and Quantitatively Determined Protein Concentrations Clin. Chim. Acta., 2000; 297 : Wiedemann, G. and Umbreit, A. Determination of Urinary Protein Fractions by Different Electrophoretic Methods, Clin. Lab.; 1999, 45 : Wong, W.K., Wieringa, G.E., Stec, Z., Russell, J., Cooke, S., Keevil, B.G. and Lockhart, S. A Comparison of Three Procedures for the Detection of Bence-Jones Proteinuria Ann. Clin. Biochem., 1997, 34 : Jeppsson, J.O., Laurell, C.B. and Franzen, B., Agarose Gel Electrophoresis, Clin. Chem., 1979; 25 (4) : Killingsworth, L.M., Cooney, S.K. and Tyllia, M.M., Protein Analysis, Diagnostic Medicine, 1980; Jan/Feb : 3-15.