Cisplatine Bağlı Akut Böbrek Yetersizliğinde İnterleukin-33 ün Rolü. Uzm. Dr. Kültigin Türkmen S.Ü.M.T.F Nefroloji B.D

Transkript

1 Cisplatine Bağlı Akut Böbrek Yetersizliğinde İnterleukin-33 ün Rolü Uzm. Dr. Kültigin Türkmen S.Ü.M.T.F Nefroloji B.D

2 Konuşmanın Akışı Genel bilgiler Cisplatine bağlı ABY IL-33 Cisplatine bağlı ABY de IL-33 Böbrekte IL-33 ün yerleşim yeri IL-33 verilmesinin siplatine bağlı ABY deki etkisi Wild-type farelerde CD4 knockout farelerde Soluble ST2 füzyon protein enjeksiyonu yoluyla IL-33 inhibisyonunun siplatine bağlı ABY deki etkisi

3 Cisplatine bağlı ABY modeli Renal endoteliyal and proksimal tubular epitheliyal hücreler Cisplatinin ana hedefleridir Apopitosiz, nekrosiz ve inflamasyon önemli patofizyolojik mekanizmalarıdır Apopitosizin temel enzimi olan caspase-3 düzeyleri artmıştır CD4 T lenfositler renal hasar oluşumunda en önemli düzenleyici hücrelerdir

4 Konuşmanın Akışı Genel bilgiler Cisplatine bağlı ABY IL-33 Cisplatine bağlı ABY de IL-33 Böbrekte IL-33 ün yerleşim yeri IL-33 verilmesinin siplatine bağlı ABY deki etkisi Wild-type farelerde CD4 knockout farelerde Soluble ST2 füzyon protein enjeksiyonu yoluyla IL-33 inhibisyonunun siplatine bağlı ABY deki etkisi

5 IL-33 IL-33, IL-1 ailesine ait bir proinflamatuar sitokindir (Schmitz et al, Immunity, 2005) Endoteliyal hücreler, deri, akciğer ve gastrointestinal epiteliyal hücrelerin çekirdeğinde yaygın olarak bulunur 31 kda uncleaved IL-33 biyolojik olarak aktif formudur Caspase-3 aracılı proteolizis ile kda ağırlığındaki cleaved inaktif formuna dönüştürülür

6 IL-33, bir alarmin molekülüdür Endojen tehlike sinyalidir İnfeksiyon ya da doku hasarına cevap olarak çeşitli hücrelerden hücre dışı ortama salınırlar İmmün sistemi aktive ederek (T helper 1 T helper 2 dönüşümü) hasarı kontrol etmeye yardımcı olur

7

8 Konuşmanın Akışı Genel bilgiler Cisplatine bağlı ABY IL-33 Cisplatine bağlı ABY de IL-33 Böbrekte IL-33 ün yerleşim yeri IL-33 verilmesinin siplatine bağlı ABY deki etkisi Wild-type farelerde CD4 knockout farelerde Soluble ST2 füzyon protein enjeksiyonu yoluyla IL-33 inhibisyonunun siplatine bağlı ABY deki etkisi

9 Çalışmanın Amacı Cisplatine bağlı ABY modelinde IL-33 ün yerini ve patofizyolojik mekanizmasını göstermek ve potansiyel hasar verici rolünü ortaya koymaktır

10 Çalışmanın Tasarımı Cisplatin 15 ya da 25 mg/kg dozlarda WT farelere intraperitoneal olarak enjekte edildi ve ABY gelişmesi sağlandı Fareler Cisplatin injeksiyonu sonrası 1., 2. ve 3. günlerde sakrafiye edildi IL-33 düzeyleri ELISA ve WB ile araştırıldı IL-33 ün lokalizasyonu IF ile gösterildi Mikrovasküler endoteliyal (MS-1) hücreler 10 ve 50 um Cisplatine ve 50 um pancaspase inhibitörüne maruz bırakıldı IL-33 ün böbrek hasarını artırıcı olası rolü rekombinant IL-33 ve soluble ST2 füzyon protein enjeksiyonu sonrası araştırıldı IL-33 ün ana hedef hücresi olan CD4 T lenfositlerin rolü IHC ve flowcytometry yöntemleri ile CD4 knockout fareler de kullanılarak incelendi

11 IL-33 pg/ml (n=4) Serum IL-33 (pg/ml) düzeyleri Mean and Standard Deviation Veh day 1 Cis day 1 Cis day 2 Cis day 3 A B C D Column

12 IL-33 pg/ug (n=3) Tam böbrek ekstraktında IL-33 (pg/ug) düzeyleri (ELISA) Mean and Standard Deviation Veh day A 1 Cis day B 1 Cis Cday 2 Cis Dday 3 Column

13 IL-33 pg/ug (n=3) Böbrek nükleer extraktında IL-33 (pg/ug) düzeyleri (ELISA) 1,6 1,2 0,8 0,4 0 Vehicle Day_1 Day_2 Day_3

14 IL-33/Actin Mean Intensity Artmış IL-33 düzeylerinin tam böbrek ekstraktlarında gösterilmesi (Western blot) Interleukin-33 (n=2) 22 KDa Vehicle Cisplatin 1 st day Cisplatin 2 nd day Cisplatin 3 rd day Actin 43 KDa 0,8 0,6 0,4 0,2 0 Vehicle Day_1 Day_2 Day_3

15 Artmış IL-33 düzeylerinin böbrek nükleer ve sitoplazmik ekstraktlarında gösterilmesi (Western blot)

16 MS-1 hücrelerinde Cisplatin sonrası artmış IL-33 düzeyleri (Western blot) Interleukin-33 (n=2) 22 KDa Vehicle Cisplatin 50 um Cisplatin 10 um Actin 43 KDa

17 MS-1 hücrelerinin kültür sıvılarında Cisplatin sonrası artmış IL-33 düzeyleri ve pancaspase inhibitörü sonrası görünümü (Western blot)

18 IFN-γ pg/ml IL-4 pg/ml Tam böbrek ekstraktlarında sitokin düzeyleri (ELISA) IFN-γ da azalma, Th1 hücrelerinin temel belirleyicisi IL-4 de artma, Th2 hücrelerinin temel belirleyicisi IFN-γ 0.6 pg/ml Mean and Standard Deviation 3 IL-4 Mean and Standard Deviation 3.1 pg/ml pg/ml pg/ml A B Veh day 1 Column Cis day 3 0 n=4 p=0.06 n=4 A B Veh day 1 Column Cis day 3

19 Konuşmanın Akışı Genel bilgiler Cisplatine bağlı ABY IL-33 Cisplatine bağlı ABY de IL-33 Böbrekte IL-33 ün yerleşim yeri IL-33 verilmesinin siplatine bağlı ABY deki etkisi Wild-type farelerde CD4 knockout farelerde Soluble ST2 füzyon protein enjeksiyonu yoluyla IL-33 inhibisyonunun siplatine bağlı ABY deki etkisi

20 ril-33 enjeksiyonunun (4 μgr/gün toplam 7 gün) böbrek fonksiyonlarına etkisi (serum kreatinin düzeyleri) 0,6 0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 0 ril33 SF

21 ril-33 enjeksiyonunun (2 μgr/gün toplam 3 gün) düşük doz Cisplatin uygulanan WT farelerde böbrek fonksiyonlarını bozması (serum kreatinin düzeyleri) 1 0,9 0,8 0,7 0,6 0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 0 CIS+VEH CIS+IL-33

22 ril-33 enjeksiyonunun (2 μgr/gün toplam 3 gün) düşük doz Cisplatin uygulanan WT farelerde böbrek fonksiyonlarını bozması (serum kreatinin düzeyleri) 2 1,8 1,6 1,4 1,2 1 0,8 0,6 0,4 0,2 0 Cis 15+Veh Cis 15+IL-33

23 ril-33 enjeksiyonunun (2 μgr/gün toplam 3 gün) düşük doz Cisplatin uygulanan CD4 KO farelerde böbrek fonksiyonlarına etkisi (serum kreatinin düzeyleri) 0,9 0,8 0,7 0,6 0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 0 CD4 KO+IL33 CD4 KO+Veh

24 ril-33 enjeksiyonunun (2 μgr/gün toplam 3 gün) düşük doz Cisplatin uygulanan WT ve CD4 KO farelerde böbrek fonksiyonlarına etkisi (serum kreatinin düzeyleri) 1,20 1,00 0,80 0,60 0,40 0,20 0,00 WT+VEH+15 CIS CD4 KO+VEH+15 CIS CD4 KO+IL CIS WT+IL33+15 CIS

25 IL-33 enjeksiyonunun düşük doz Cisplatin uygulanan WT farelerde CD4 T lenfosit düzeylerini artırması (immun histokimyasal boyama) IL-33 enjeksiyonu + düşük doz Cisplatin SF enjeksiyonu + düşük doz Cisplatin

26

27

28 IL-33 enjeksiyonunun düşük doz Cisplatin uygulanan WT farelerde CD4 T lenfosit düzeylerini artırması (flowcytometry) IL-33 enjeksiyonu + düşük doz Cisplatin SF enjeksiyonu + düşük doz Cisplatin

29 Konuşmanın Akışı Genel bilgiler Cisplatine bağlı ABY IL-33 Cisplatine bağlı ABY de IL-33 Böbrekte IL-33 ün yerleşim yeri IL-33 verilmesinin siplatine bağlı ABY deki etkisi Wild-type farelerde CD4 knockout farelerde Soluble ST2 füzyon protein enjeksiyonu yoluyla IL-33 inhibisyonunun siplatine bağlı ABY deki etkisi

30 Soluble ST2 füzyon protein enjeksiyonu (100 μg/gün toplam 3 gün) sonrası böbrek fonksiyonlarının korunması (serum kreatinin düzeyleri) 3 2,5 2 1,5 1 0,5 0 ST2 CIS 20 VEH CIS 20

31 ST2 füzyon protein enjeksiyonu sonrası CD4 T lenfositlerin gösterilmesi (immün histokimyasal boyama) sst2 enjeksiyonu + Cisplatin SF enjeksiyonu + Cisplatin

32

33

34 Soluble ST2 füzyon protein enjeksiyonu sonrası CD4 T lenfosit oranları (flowcytometry) sst2 enjeksiyonu + Cisplatin SF enjeksiyonu + Cisplatin

35 Özet IL-33 böbrekte endoteliyal hücrelerde yerleşik olarak bulunur Cisplatin, nekrotik endotel hücrelerden ortama salınan sistemik ve lokal bir uncleaved formda IL-33 cevabına yol açar WT farelere ril-33 verilmesi Cisplatine bağlı akut nefrotoksisiteyi artırırken, CD4 KO fareler bundan korunmuştur Soluble ST2 füzyon proteinle tedavi edilmiş fareler Cisplatine bağlı ABY den korunmuştur

36 Sonuç IL-33, Cisplatine bağlı ABY modelinde önemli bir patofizyolojik role sahiptir