VİRÜS SPESİFİK T HÜCRE ÜRETİMİNDE KALİTE STANDARTLARI. MSc. Bio. FERDA IŞIK Acıbadem Labcell Hücre Laboratuvarı

Transkript

1 VİRÜS SPESİFİK T HÜCRE ÜRETİMİNDE KALİTE STANDARTLARI MSc. Bio. FERDA IŞIK Acıbadem Labcell Hücre Laboratuvarı

2 TANIM Allogeneik kök hücre transplantasyonu lösemilerde, doğuştan gelen immün yetmezliklerde ve çeşitli tümörlerin tedavisinde etkili olarak kullanılmaktadır. Allogeneik kök hücre transplantasyonun post transplant kompilkasyonları arasında GVHD (graft versus host disease), relaps ve viral enfeksiyonlar bulunmaktadır. Transplant sonrası sıklıkla karşılaşılan viral enfeksiyonların başında EBV (Epstein-Barr virüs),cmv (cytomegalovirüs) ve ADV (adeno virüs)gelmektedir. Reddy at al.cmv central nervous system disease in stem-cell transplant recipients: an increasing complication of drug-resistant CMV infection and protracted immunodeficiency.bone Marrow Transplant; 2010 Jun;45(6): Omar at al. Targeted monitoring of patients at high risk of post-transplant lymphoproliferative disease by quantitative Epstein-Barr virus polymerase chain reaction.transpl Infect Dis Oct;11(5):393-9

3 KULLANIM ALANLARI CD8+ ve CD4+ T hücrelerin viral enfeksiyonların kontrolünde ve reaktivasyonuna karşı hücresel bağışıklığın yapılandırılmasında rol oynadığı bilinmektedir. Greenberg at al. Development of a treatment regimen for human cytomegalovirus (CMV) infection in bone marrow transplantation recipients by adoptive transfer of donor-derived CMV-specific T cell clones expanded in vitro. Ann N Y Acad Sci Dec 30;636: ; Rauser at al. Rapid generation of combined CMV-specific CD4+ and CD8+ T-cell lines for adoptive transfer into recipients of allogeneic stem cell transplants.blood 2004 May 1;103(9):

4 Adoptif transfer edilmiş virüs spesifik T hücreler Hematopoetik yada solid organ nakillerinden sonra oluşan viral enfeksiyonlarda standart tedaviye cevap vermeyen hastalarda, enfeksiyonların kontrolünde ve tedavisinde kullanılmaktadır. Walter et al. N Engl J Med Oct 19;333(16): , Heslop et al.nat Med May;2(5): Feuchtinger et al. Br JHaematol 2006 Jul;134(1):64-76, Feuchtinger et al.blood 2010 Nov 18;116(20):4360-7

5 Ayrıca Adoptif transfer edilmiş antijene spesifik T hücrelerin virüs kaynaklı malinitelerin ve metastatik melanom kontrolünde rol oynadığı gösterilmiştir. Comoli et al. Clin Oncol 2005 Dec 10;23(35): Straathof et al. Blood 2005 Mar 1;105(5): Yee et al. PNAS, U S A Dec 10;99(25): Dudley et al. J Clin Oncol, 2005 Apr 1;23(10): Hunder et al..(2008) NEJM, 2008 Jun 19;358(25):

6 AMAÇ Virüs spesifik T hücre üretiminde kalite standartların belirlenmesi

7 ÜRETİM BASAMAKLARI

8 Virüs Antijenleri AFEREZ Hücre Toplanması

9 T lenfosit IFN -gamma T lenfosit T lenfosit Virüs spesifik T lenfositlerin Uyarılması

10 T hücre ve IFN bağlayıcı antikor T lenfosit Chatch Reagent T lenfosit Virüs spesifik T lenfositlerin Uyarılması T lenfosit

11 IFN spesifik manyetik boncuklar T lenfosit T lenfosit T lenfosit Virüs spesifik T lenfositlerin manyetik boncuk ile işaretlenmesi

12 T lenfosit - T lenfosit - T lenfosit - Virüs spesifik T lenfositlerin seleksiyonu

13 SÜREÇLER HAM ÜRÜN OPERASYON SÜRECİ KALİTE KONTROL SÜRECİ ÜRETİM SÜRECİ BİTMİŞ ÜRÜN OPERASYON SÜRECİ *Donör Seçimi *Bilgilendirilmiş Onam Formu *Ürünün Toplanması *Ham Ürünün Paketlenmesi *Transfer *Ham Ürün Kabul Öncesi Kalite Kontrol *İşlem Öncesi Kalite Kontrol *Ara Üretim Kalite Kontrol *Bitmiş Ürün Kalite Kontrol *İşlem Öncesi Süreci *Ara Ürün Süreci *Bitmiş Ürün Süreci *Etiketleme *Birinci ve İkinci Paketleme *Üçüncü Paketleme *Transfer *Uygulama *Takip (Cell Vigilance)

14 SÜREÇ SORUMLULARI Ham Ürün Kabul Süreci İşlem Öncesi ürün Kalite Kontrol Süreci Operasyon / Kalite Kontrol Kalite Kontrol Ara Ürün Kalite Kontrol Süreci Bitmiş Ürün Kalite Kontrol Süreci Kalite Kontrol / Üretim Kalite Kontrol / Üretim Paketleme Transfer Uygulama Üretim / Operasyon Operasyon Operasyon / Klinik

15 HAM ÜRÜN KABUL STANDARTLARI

16 Parametre Limit değer Yöntem Referans Ambalaj Sağlam Fiziksel kontrol Görünüm Temiz -Berrak Göz ile kontrol Döküman Eksiksiz doldurulmalı Göz ile kontrol Etiket Tanımlayıcı bilgileri eksiksiz içermeli Miktar >200 ml Tartım Göz ile kontrol Isı takibi 4-12 C İndikatör/ dijital ısı takip sistemleri HbSAg AntiHbc IgM, HCV, HIV1,2, Sifiliz Negatif ELISA RPR,VDRL Türkiye Tıbbi İlaç ve Cihaz kurumu 4Nisan 2014 tarihli sayı 28962; İnsan Doku ve Hücre Ürünlerinin Ruhsatlandırılması ve Bu Ürünlerin Üretim, İthalat, İhracat, Depolama ve Dağıtım Faaliyetlerini Yürüten Merkezler Hakkında Tebliğ EudraLex Volume 4 Part1 Chapter 6: Quality Control 28 March 2014

17 Parametre Limit değer Yöntem Referans Donör seropozitifliği (EBV/CMV/ADV) Pozitif ELISA NAT (Nükleik asit testi ) Karl S.Peggs Adoptive T cell immunotherapy for cytomegalovirus Expert Opin.Ther. Rewiev(2009) 9(6): Donör Reaktivite Testi CD8+ IFN -gamma, CD4+ IFN-gamma Akım sitometri Greenberg at al. Development of a treatment regimen for human cytomegalovirus (CMV) infection in bone marrow transplantation recipients by adoptive transfer of donor-derived CMV-specific T cell clones expanded in vitro. Ann N Y Acad Sci Dec 30;636: Rauser at al. Rapid generation of combined CMV-specific CD4+ and CD8+ T-cell lines for adoptive transfer into recipients of allogeneic stem cell transplants.blood 2004 May 1;103(9):

18 Donör Reaktivite Testi Liyofilize virüs proteini ile kaplanmış plaklara donörden alınan örnek ilave edilerek virüsün proteini ile inkübe edilir. İnkübasyon sonrası eklenen özel solüsyon ile hücrelerin sitokin salgılaması sağlanır. T lenfosit IFN-gamma sekrete eden T hücrelerinin akım sitometrik analizi yapılılır.

19 İŞLEM ÖNCESİ ÜRÜN KALİTE KONTROL STANDARTLARI

20 Parametre Limit değer Yöntem Referans HIV HCV HBV Sifiliz Negatif NAT (Nükleik asit testi ) RPR, VDRL Canlılık >%70 Tripan Blue Etidium Bromür -Acridin Orange, 7AAD Toplam beyaz hücre sayısı >1x10 9 Thoma Lamı Otomatik Hücre Sayıcılar Türkiye Tıbbi İlaç ve Cihaz kurumu 4Nisan 2014 tarihli sayı 28962; İnsan Doku ve Hücre Ürünlerinin Ruhsatlandırılması ve Bu Ürünlerin Üretim, İthalat, İhracat, Depolama ve Dağıtım Faaliyetlerini Yürüten Merkezler Hakkında Tebliğ Uluhan at al. Production of good manufacturing practice-grade cytotoxic Tlymphocytes specific for Epstein Barr virus, cytomegalovirus and adenovirus to prevent or treat viral infections postallogeneic hematopoietic stem cell transplant. Cytotherapy 2012 January ; 14(1): 7 11 Brestrich, Adoptive T-cell therapy of a lung transplanted patient with severe CMV disease and resistance to antiviral therapy. Am J Transplant Jul;9(7): Sterilite Aerob/ Anaerob Kültür Mantar Kültürü Negatif Thioglicollate, Triptic Soy Agar, Broth Agar, Kanlı Agar Sabouraud Agar Otomatik kültür sistemleri EudraLex Volume 4 Part1 Chapter 6: Quality Control 28 March 2014 Türkiye İlaç ve Tıbbi Cihaz Kurumu, İnsan Doku Ve Hücre Ürünlerinin Ruhsatlandırılması Ve Bu Ürünlerin Üretim, İthalat, İhracat, Depolama Ve Dağıtım Faaliyetlerini Yürüten Merkezler Hakkında Tebliğ, Sayı;28962, 4 Nisan 2014 Uluhan at al. Production of good manufacturing practice-grade cytotoxic Tlymphocytes specific for Epstein Barr virus, cytomegalovirus and adenovirus to prevent or treat viral infections postallogeneic hematopoietic stem cell transplant. Cytotherapy 2012 January ; 14(1): 7 11

21 ARA ÜRÜN KALİTE KONTROL SÜRECİ

22 Parametre Limit değer Yöntem Canlılık >%70 Tripan Blue Etidium Bromür -Acridin Orange, 7AAD Toplam beyaz hücre sayısı >1x10 9 Thoma Lamı Otomatik Hücre Sayıcılar Referans Uluhan at al. Production of good manufacturing practice-grade cytotoxic Tlymphocytes specific for Epstein Barr virus, cytomegalovirus and adenovirus to prevent or treat viral infections postallogeneic hematopoietic stem cell transplant. Cytotherapy 2012 January ; 14(1): 7 11 Brestrich, Adoptive T- cell therapy of a lung transplanted patient with severe CMV disease and resistance to antiviral therapy. Am J Transplant Jul;9(7):

23 BİTMİŞ ÜRÜN KALİTE KONTROL SÜRECİ

24 Parametre Limit değer Yöntem Referans Canlılık >%70 Tripan Blue Etidium Bromür -Acridin Orange, 7AAD Toplam beyaz hücre sayısı >1x10 6 Thoma Lamı Otomatik Hücre Sayıcılar Uluhan at al. Production of good manufacturing practice-grade cytotoxic Tlymphocytes specific for Epstein Barr virus, cytomegalovirus and adenovirus to prevent or treat viral infections post-allogeneic hematopoietic stem cell transplant. Cytotherapy 2012 January ; 14(1): 7 11 Brestrich, Adoptive T-cell therapy of a lung transplanted patient with severe CMV disease and resistance to antiviral therapy. Am J Transplant Jul;9(7): Etkinlik Analizi CD8+ IFN- gamma>%80 CD4+IFN-gamma >%80 Akım sitometri Greenberg at al. Development of a treatment regimen for human cytomegalovirus (CMV) infection in bone marrow transplantation recipients by adoptive transfer of donor-derived CMV-specific T cell clones expanded in vitro. Ann N Y Acad Sci Dec 30;636: ; Uluhan at al. Production of good manufacturing practice-grade cytotoxic Tlymphocytes specific for Epstein Barr virus, cytomegalovirus and adenovirus to prevent or treat viral infections post-allogeneic hematopoietic stem cell transplant. Cytotherapy 2012 January ; 14(1): 7 11

25 Parametre Limit değer Yöntem Referans Saflık CD45+ >%90 CD3+ >%90 CD19+<%2 CD14+<%2 Akım Sitometri Rauser at al. Rapid generation of combined CMV-specific CD4+ and CD8+ T- cell lines for adoptive transfer into recipients of allogeneic stem cell transplants.blood 2004 May 1;103(9): Sterilite Aerob/ Anaerob Kültür Mantar Kültürü Mikoplazma Negatif Thioglicollate, Triptic Soy Agar, Broth Agar, Kanlı Agar Sabouraud Agar Otomatik kültür sistemleri PCR (polimeraz zincir reaksiyonu) Toksisite <5,0 EU/ml Endotoksin Analizi Gel Clot (LAL) Kromojenik Analiz EudraLex Volume 4 Part1 Chapter 6: Quality Control 28 March 2014 FDA - 21 CFR 610 General Biological Products Standard Türkiye İlaç ve Tıbbi Cihaz Kurumu, İnsan Doku Ve Hücre Ürünlerinin Ruhsatlandırılması Ve Bu Ürünlerin Üretim, İthalat, İhracat, Depolama Ve Dağıtım Faaliyetlerini Yürüten Merkezler H akkında Tebliğ, Sayı;28962, 4 Nisan 2014 Uluhan at al. Production of good manufacturing practice-grade cytotoxic Tlymphocytes specific for Epstein Barr virus, cytomegalovirus and adenovirus to prevent or treat viral infections postallogeneic hematopoietic stem cell transplant. Cytotherapy 2012 January ; 14(1): 7 11 Uluhan at al. Production of good manufacturing practice-grade cytotoxic Tlymphocytes specific for Epstein Barr virus, cytomegalovirus and adenovirus to prevent or treat viral infections postallogeneic hematopoietic stem cell transplant. Cytotherapy 2012 January ; 14(1): 7 11 Points to Consider in the Characterization of Cell Lines Used to Produce Biologicals (1993), Department of Health & Human Servıces, Memorandum, Jul

26 Parametre Limit değer Yöntem Referans FDA - 21 CFR 610 General Biological Products Standard, Tümörojenite Gerekli değil Sitogenetik Analiz Telomeraz Enzim Aktivitesi Comet Assay Türkiye İlaç ve Tıbbi Cihaz Kurumu, İnsan Doku Ve Hücre Ürünlerinin Ruhsatlandırılması Ve Bu Ürünlerin Üretim, İthalat, İhracat, Depolama Ve Dağıtım Faaliyetlerini Yürüten Merkezler Hakkında Tebliğ, Sayı;28962, 4 Nisan 2014 Points to Consider in the Characterization of Cell Lines Used to Produce Biologicals (1993), Department of Health & Human Servıces, Memorandum, Jul , Jul İn-vivo test Atık ürün analizi Gerekli değil Stabilite 4. saat > % saat >%70 HPLC Tripan Blue Acridine Orange Etidyum Bromür 7AAD Türkiye İlaç ve Tıbbi Cihaz Kurumu, İnsan Doku Ve Hücre Ürünlerinin Ruhsatlandırılması Ve Bu Ürünlerin Üretim, İthalat, İhracat, Depolama Ve Dağıtım Faaliyetlerini Yürüten Merkezler Hakkında Tebliğ, Sayı;28962, 4 Nisan 2014

27 PAKETLEME ETİKETLEME Ürün Adı: Ürün No: Kan Grubu: Ek Solusyon Volüm : Firma adı TRANSFER Kare Kod Volüm: Alıcı Bilgiler Ad/Soyad Prt No Verici Bilgileri Ad/Soyad Prt No Kalite K. No Ürt. T: SK T: Saklama Isısı : Logo

28 Kalite hiçbir zaman sona ermeyecek bir seyahattır. Tom Peters