Legionella pneumophila Real-TM

Transkript

1 in Vitro Diagnostik Kullanım İçin Legionella pneumophila Real-TM El Kitabı Kalitatif Tespiti için Real Time PCR kiti Legionella pneumophila REF TB50-50FRT REF B50-50FRT 50

2

3 ADI Legionella pneumophila Real-TM GİRİŞ Legionella pneumophila, Legionella cinsinden ince, pleomorfik flagellalı gram negatif bakteridir. L. pneumophila, bu grupta, primer insan patojen bir bakteri olup legionellosis veya Lejyoner hastalığına neden olan bir ajandır. (Ölen gazi anısına) Legionella pneumophila dünyada sucul ortamlara her yerde olduğu gibi amip ve protozoa bir hücre içi parazit olarak doğal çevre ve insan hastalığı arasında bir bağlantı sağlandığı bulunur. Böylece, çevresel izleme, özellikle içme suyu, soğutma kulelerinde, ve ilgili kaynakların, bu hastalığın yayılmasını kontrol çabalarında önemli bir odak noktasıdır yılında 235 olgunun ilk tanımlama yana, Lejyoner hastalığı hastanede yatan hastalarda atipik pnömoni en sık nedeni olarak kabul haline gelmiştir. Bu % 25 mortalite ile toplum kökenli bakteriyel pnömoni olarak ikinci en sık nedenidir. KULLANIM AMACI Legionella pneumophila Real-TM kiti klinik materyallerde (balgam, trakea, nazofarengeal swablar, boğaz bezlerinden, bronkoalveoler lavajdan gelen aspirasyon, doku),mikroorganizma kültürlerinde Legionella pneumophila DNA Real Time kalitatif tespiti için, bir testtir ve çevre örneklerinde Legionella pneumophila DNA (su, çevre nesnelerden gelen yıkantı, biyofilm sıyrıklar, toprak) miktarlandınlması.

4 TAHLİL PRENSİBİ Legionella pneumophila Real TM biyolojik materyallerde ve cevresel örneklerde Legionella pneumophila kalitatif ve kantitatif tespiti için bir Real Time Amplifikasyon testidir. Legionella pneumophila Real TM kiti olarak kullanılabilir: Klinik materyallerde Legionella pneumophila DNA tespiti için kalitatif bir test. Legionella pneumophila mip-gen, DNA ve protrombin gen DNA testi multipleks real time PCR sırasında gerçekleştirilir. Protrombin gen DNA endojen iç kontrol olarak kullanılır. Protrombin gen DNA amplifikasyonu FAM / Yeşil kanalda tespit edilirken Legionella pneumophila mip-gen DNA çoğaltma, JOE / Sarı kanalda algılanır. Protrombin gen DNA insan genomunun DNA parçasıdır ve DNA örneği (en az 103 den genomları) yeterli miktarda mevcut olmalıdır. Hem yanlış saklama koşulları ve kötü DNA izolasyonu süreci DNA nın bozulmasına ve kaybına yol açabilir. Yani, endojen iç kontrol analiz adımlarını kontrol etmenize izin vermez, ama aynı zamanda örnek işleme ve depolama değerlendirir. Cevresel numunelerde Legionella pneumophila DNA tespiti için kalitatif bir test. Bu durumda Internal Kontrol kullanılır. IC DNA amplifikasyonu FAM / Yeşil kanalda tespit edilirken Legionella pneumophila mip-gen DNA, JOE / Sarı kanalda algılanır. Suda Legionella pneumophila DNA hesaplamak için kantitatif test. Bu durumda Internal Kontrol (IC) kullanılır. IC DNA amplifikasyonu FAM/Yeşil kanalda tespit edilirken Legionella pneumophila mip-gen DNA, JOE/Sarı kanalda algılanır. Legionella pneumophila ve İç Kontrol DNA kopya kantitatif ölçmek için standartları kullanılmaktadır. Su örneklerinde Legionella pneumophila DNA kantitatif için, her numune için ekstraksiyon prosedürü esas alınarak, iki kere test edilmelidir. Sonuçlar her iki sonuç ortalaması olarak verilmiştir.

5 SAĞLANAN MALZEMELER Modül No.1: Real Time PCR kit (B50-50FRT) Kontroller Legionella C+, 0,5 ml; Negative Control C-, 1,2 ml; Legionella IC, 0,5 ml; DNA-buffer, 0,5 ml; Legionella pneumophila Real-TM PCR-mix-1, 70 tüp; PCR-mix-2-FL, 0,77 ml; Standartlar o QS1, 0,06 ml; o QS2, 0,06 ml; o QS3, 0,06 ml 55 test için reaktifler içerir Modül No.2: DNA purifikasyon kiti (TB50-50FRT) ile complete Real Time PCR testi. Lysis Solution, 15 ml; Washing Solution 1, 30 ml; Washing Solution 2, 50 ml; Sorbent, 1,25 ml; DNA-eluent, 5 ml. 50 test için reaktifler içerir Kontroller Legionella C+, 0,5 ml; Negative Control C-, 1,2 ml; Legionella IC, 0,5 ml; DNA-buffer, 0,5 ml; Legionella pneumophila Real-TM PCR-mix-1, 70 tüp; PCR-mix-2-FL, 0,77 ml; Standartlar o QS1, 0,06 ml; o QS2, 0,06 ml; o QS3, 0,06 ml 55 test için reaktifler içerir

6 SAĞLANMAYAN GEREKLİ MALZEMELER Alan 1 : Numune Hazırlama DNA ekstraksiyon kiti (Modül No. 1) Biyolojik kabin Vorteks 65 C ± 2 C kuru ısı bloğu eppendorf tip tüpler için (RCF max. 16,000 x g) masaüstü mikrosantrifüj, Tüp rakları Mikrosantrifüj tüpleri, 1,5-2,0 ml Steril, RNase içermeyen filtre uçlu pipetler Biyolojik atıklar için atık kabı, Tekk kullanımlık-atılabilir eldivenler (pudrasız), Buzdolabı, Dondurucu Alan 2: Real Time Amplifikasyon Tek kullanımlık eldiven, pudrasız Biyolojik tehlike atık bidonu, Buzdolabı, Dondurucu Real Time Thermal cycler Çalışma İstasyonu Pipetler (ayarlanabilir) Filtreli steril pipet uçları

7 MUHAFAZA KOŞULLARI Legionella pneumophila Real-TM kiti 2-8 C de saklayın.kit 2-25 C de nakliye edilebilir ancak alındıklarında hemen 2-8 C de saklanmalıdır. DNA-Sorb-B 2-8 C de saklayın. STABİLİTE Legionella pneumophila Real-TM etiketinde belirtilen son kullanım tarihine kadar stabildir. Ürün etiketinde basılı kontrol tarihine kadar performansını koruyacaktır. Işık, ısı veya neme maruz kalma kitin bazı bileşenlerinin raf ömrünü etkileyebilir, bunlardan kaçınılmalıdır. Hassasiyet azalabileceğinden, reaktiflerin tekrarlanan çözülme ve dondurma işlemlerinden kaçınılmalıdır. Bileşenlerin etiketlerde belirtilen koşulların dışında muhafazası, hatalı çalışmaya neden olabilir ve tahlil sonuçlarını ölumsuz yönde etkileyebilir. KALİTE KONTROL Her lot, tutarlı ürün kalitesini sağlamak için; Sacace ISO Sertifikalı Kalite Yönetim Sistemine uygun olarak, önceden belirlenmiş özelliklere karşı test edilmektedir.

8 UYARILAR VE ÖNLEMLER In Vitro Diagnostic Medikal Cihaz Sadece In Vitro Diagnostic Kullanım için Kullanıcı her zaman aşağıdakilere dikkat etmelidir: Lysis Solution,guanidine thiocyanate* içerir. Guanidin tiyosiyanat solunduğunda veya yutulduğunda veya deri ile temas halinde zararlıdır. Asit ile temasında toksik gaz oluşturur. (Xn; R: 20/21/22-36/37/38; S: 36/37/39). Aeresol bariyerli steril pipet ucuları kullanın ve her prosedür için yeni pipet ucu kulanın. Ekstrakte pozitif malzemeleri (numuneler, controller ve amplikonlar) diğer reaktiflerden uzak tutun/mufaza edin ve bunları reaksiyon karışımına ayrı bir alanda ekleyin. Bütün bileşenleri tahilile başlamadan önce oda sıcaklığında iyice çözün. Bileşenler çözündüğünde karıştırın ve kısa bir süre santrifüjleyin. Reaktif ve örnekler ile çalışırken, atılabilir eldiven, laboratuar önlüğü ve göz koruyucu kullanın. İşlem sonrası ellerinizi iyice yıkayın. Laboratuar çalışma alanlarında, sigara içmeyin, herhangi birşey yemeyin- içmeyin, kozmetik uygulamayın veya kontakt lenslere elle dokunmayın. Son kullanım tarihlerinden sonra kitleri kullanmayın. Tüm numuneleri ve kullanılmayan reaktifleri,yerel yönetim kurallarına uygun olarak imha edin.. Örnekler potansiyel enfeksiyöz olabilir, işlemleri uygun biyogüvenlik uygulamaları ile bir güvenlik kabini içerisinde gerçekleştirin. Dökülen/ saçılan tüm numune veya reaktifleri temizleyin ve %0.5 lik sodyum hipoklorit veya diğer uygun dezenfektanlarla dezenfekte edin. Numune veya reaktiflerin deri, göz veya mukoza zarları ile temasından kaçının. Deri, göz veya mukoza zarları ile temas olması halinde, hemen su ile yıkayın ve acilen tıbbi yardım alın. Malzeme Güvenlik Bilgi Formları (MSDS) istek üzerine verilebilir. Bu ürünün kullanımı, DNA amplifikasyonu teknikleri konusunda eğitimli personel ile sınırlı olmalıdır.. Laboratuvar süreci tek yönlü olmalı; Ekstraksiyon Alanında başlamalı ve sonra Amplifikasyon ve Tespit alanlarına gidilmeli/ yönlenmelidir. Örnekleri, ekipmanları ve reaktifleri önceki adımın yapıldığı bölgeye/alana geri döndürmeyin. Bu kitteki bazı bileşenler koruyucu olarak sodyum azid içerir. Reaktif transferi için metal tüp kullanmayın. * Sadece Modül No.2

9 ÜRÜN KULLANIM SINIRLARI Tüm reaktifler sadece in vitro diagnostic kullanılabilir. Bu ürünün kullanımı, DNA amplifikasyonu (UNI EN ISO :2012).teknikleri konusunda eğitimli personel ile sınırlı olmalıdır. Kullanım kılavuzu ile sıkı uyum optimum PCR sonuçları için gereklidir. Kutu ve tüm bileşenlerin etiketleri üzerinde yazılı olan son kullanım tarihlerine dikkat edilmelidir. Son kullanım tarihlerinden sonra kitleri kullanmayın. NUMUNE TOPLAMA, MUHAFAZA VE TAŞIMA Legionella pneumophila Real-TM DNA-Sorb-B (Modül No.2 ile birlikte) ile ekstrakte DNA analiz edilebilir: Balgam bronchial veya tracheal lavage aşağıdaki prosedüre göre işlenmelidir: O Balgam, 50 ml tek kullanımlık, vida kapaklı PP tüplerde toplanır. O Biyolojk kabinde, % 4 NaOH çözeltisi eşit hacimde karıştırıldıktan sonra numune homojen hale getirilir. 4% NaOH solution. (gerekirse örnek başına mg miktar, N-asetil-L-sistein ilave edilebilir) mg per sample) dakika (numune yoğunluğuna bağlı olarak) bir tüp rotator ile yoğun bir şekilde karıştırılır. O Numuneler 3000 rpm ( g) de 15 dk. santrifüjlenir ve süpernatantı tüpe µl O bırakılarak dikkatlice ayırın. Sedimenti resüspanse edin ve 1.5 ml lik tüpe aktarın. Numuneleri 12000rpm de 5-10 dk. santrifüjleyin, süpernatantı ayırın ve numune sedimentinden DNA izolasyonu için aynı 1,5 ml'lik numune tüpünü kullanın. Nazofarenks ve boğaz sürüntüsü: 500 ul steril serum fizyolojik veya fosfat tampon çözeltisi (PBS) ile tek kullanımlık steril pamuk çubuklu probu çalışma alanını yerleştirin. Probun üst bölümünü kırın veya tüpün kapanacağı şekilde kesin. Süspansiyonu DNA ekstraksiyon için kullanın. Legionella şüpheli Mikroorganizma kültürleri, 0.5 ml tuzlu su çözeltisi ya da fosfat tampon maddesi ile kültürleri tekrar süspanse edin. DNA ekstraksiyonu için 50 µl süspansiyon kullanın. doku (~1,0 gr) neşter, cam çubuklar, teflon havan tokmakları veya mekanik homojiner ile homojenize edin ve 1,0 ml tuzlu suda yada PBS sterilde ( 1hacim doku-1hacim tuzlu su) çözün. Kuvvetlice vorteksleyin ve oda sıcaklığında 30 dk. inkübe edin. Süpernatantı yeni bir 1,5 ml'lik tüpe aktarın. Su (atık su, su deposu, içme suyu): 0.5 L su cam huni ile kağıt filtre içinden ön filtre edilir. Ön filtre edildikten sonra su gözenek çapı en fazla 0,45 um membran filtre ile filtrelenir. Filtrasyondan sonra membran filtre (tek bir Petri kabı), steril makas ile kesilir ve 1 ml tuzlu su çözeltisi ile 1.5 ml tüpler içine steril kıskaçlar ile yerleştirilir. Tüp, dakika boyunca oda sıcaklığında inkube edilir, çözeltide microflora geçişi sağlamak için periodik olarak vorteksleyin. DNA ekstraksiyonu için 50 µl süspansiyon kullanın.

10 Çevresel nesnelerden yıkantı, steril tuzlu su çözeltisi içinde, doymuş pamuklu bir prob ile elde edilir. Çubuklu probun çalışma ucu,1.5 ml tuzlu su çözeltisi ile, tüp içine yerleştirilir, probun diğer bir parçası kırılmış ve uzağa taşınır. DNA ekstraksiyonu için 50 µl süspansiyon kullanın. Su iç yüzeyinden Biyofilm sıyrıklar, sanayi ve diğer ekipmanlar (örneğin, klimaların iç tepsisinden) Scrapes of moist biofilms under water or on the water-air interface are obtained by dry sterile probe and scrapes of dried biofilms are obtained by swab, saturated in sterile saline solution. Çubuklu probun çalışma ucu, 0.5 ml tuzlu su çözeltisi ile 1.5 ml lik tüp içine yerleştirilir, probun diğer bir parçası kırılmış ve uzağa taşınır. DNA ekstraksiyonu için 50 µl süspansiyon kullanın. Zemin (100 g): (0,4-1,0 gr) zemini sıkıca kapalı kapaklı 5 ml tüplere aktarın. Her tüpe 3 ml tuzlu su çözeltisi ekleyin, dikkatlice karıştırın ve 5 dak. Süzün, Süpernatant (50 µl) DNA ekstraktion için kullanılır. Numuneler 48 saatten fazla olmamak koşulu ile +2-8 C de muhafaza edilir ya da 20/-80 C dondurulur. Klinik örneklerin taşınması, etiyolojik ajanların taşınmasına yönelik ülke, federal, eyalet ya da yerel yönetmeliklere, uymak zorundadır. DNA İZOLASYON Herhangi bir ticari RNA / DNA izolasyon kiti, burada belirtilen IVD-CE "NUMUNE TOPLAMA, MUHAFAZA VE TAŞIMA" paragrafındaki örnek türleri için valide ise, kullanılabilir. Sacace Biotechnologies aşağıdaki kitleri kullanmanızı önerir: DNA-Sorb-B (Sacace, REF K-1-1/B) tam kan, BOS, doku, vs; SaMag Bacterial DNA Extraction kit (Sacace, REF SM006) kültürler su; DNA ekstraksiyon için üreticinin talimatlarına uygun olarak gerçekleştirin. 10 Internal (iç) Kontrol 'ü DNA izolasyon prosedürü esnasında doğrudan numune/lysis karışımına ekleyin.

11 NUMUNE VE REAKTİF HAZIRLAMA (modül No.2 ile sağlanan reaktifler) 1. Lysis Solution ve Washing Solution (+2-8 C de muhafaza edildikleri için) buz kristalleri yok olana kadar C' ye kadar ısıtılmalıdır. 1.5 ml polipropilen tüplere gereken miktarda hazırlayın,bir tüpte Ekstraksiyon Negatif Kontrol ve bir tüpte Pozitif Kontrol için. 2. Her tüpe 10 µl IC ( sadec çevresel numuneler ve kontroller için) ve 300 µl Lysis Solüsyon ekleyin. Lysis Solution. 3. Uygun tüpe 100 (50) µl numunelerden ekleyin. 4. Kontrolleri aşağıdaki gibi hazırlayın : Cneg etiketli tüpe 100 µl of C (amplifikasyon kiti ile sağlanan Neg Kontrol) ekleyin. CPOs etiketli tüpe 50 µl Legionella C+50 µl of C ekleyin 5. Bütün tüpleri vorteksleyin ve 5 dk. 65 C'de inkübe edin. 5-7 sn. santrifüjleyin. Eğer numune tamamen çözünmezse, tüpün maksimum ( g.) hızda 5 dk. yeniden santrifüjlenmesi önerilir. Süpernatantı DNA ektraksiyon için, yeni bir tüpe aktarın. 6. Sorbenti kuvvetlice vorteksleyin ve her tüpe 25 µl ekleyin sn. vorteksleyin ve bütün tüpleri, oda sıcaklığında 3 dk. inkübe edin. Bu adımı tekrarlayın. 8. Bütün tüpleri 30 sn g'de santrifüjleyin ve tıkaçlı aerosol bariyer uçlu mikropipet kullanarak, her tüpten pelleti dağıtmadan, süpernatantı dikkatlice ayırın ve kaldırın. Tüpler arasında pipet uçlarını değiştirin. 9. Her tüpe 300 µl Washing Solution ekleyin. Çok kuvvetli vorteksleyin ve 30 sn 5000g'de santrifüjleyin. Her bir tüpten süpernatantı ayırın ve kaldırın. 10. Her tüpe 500 µl Washing Solution ekleyin. Çok kuvvetli vorteksleyin ve 30 sn 10000g'de santrifüjleyin. Her bir tüpten süpernatantı ayırın ve kaldırın adımı tekrarlayın ve bütün tüpleri kapakları açık halde 65 C'de 5-10 dk. inkübe edin. 12. Pıhtıyı 50 µl DNA-eluent ile resüspanse edin. 65 C 'de 5 dk. inkübe edin ve periyodik olarak vorteksleyin. 13. Maksimum hızda ( g) 1 dakika boyunca tüpleri santrifüjleyin. Süpernatant, amplifikasyon için hazır DNA içerir. Eğer amplifikasyon ekstraksiyon ile aynı gün gerçekleştirilmezse, işlenmiş numuneler 5 günden fazla olmamak koşulu ile muhafaza edilebilir veya 20 /-80 C'de dondurulabilir. 2-8 C'de

12 PROTOKOL 1. Numuneler ve kontrol örnekleri için PCR-mix-1 reaksiyon tüpünü gerekli miktarı hazırlayın. 2. Balmumu yüzeyine 7 µl PCR-mix-2 ekleyin. 3. Uygun tüpe 10 µl ekstrakte DNA ekleyin. 4. Her kalitatif test için asağıdaki kontrolleri hazırlayın. Amplifikasyon Negatif Kontrol ile etiketli tüpe, 10 µl DNA-buffer ekleyin; Amplifikasyon Pozitif Kontrol etiketli tüpe, 10 µl QS3 ekleyin; 5. Her kalitatif test için asağıdaki kontrolleri hazırlayın. Amplifikasyon Negatif Kontrol ile etiketli tüpe, 10 µl DNA-buffer ekleyin; QS1 etiketli tüpe, 10 µl QS1 ekleyin; QS2 etiketli tüpe, 10 µl QS2 ekleyin; QS3 etiketli tüpe, 10 µl QS3 ekleyin; 6. Tüpleri thermalcycler'a yerleştirin. Amplifikasyon 1. Enstrümanınızda aşağıdaki gibi bir sıcaklık profili oluşturun: Rotor-tipi Cihazlar 1 Plate -tip enstrümanlar 2 Adım Sıcaklık Sıcaklık Süre Tekrarlar С С Süre Tekrarlar dk dk sn sn sn sn sn sn sn sn. floresan sn sinyal tespiti sn. floresan sinyal tespiti Örneğin; Rotor-Gene 3000/6000/Q sn. (Corbett Research, Qiagen) sn. 2 Örneğin, SaCycler-96 (Sacace), CFX96/iQ5TM (Biorad), Mx3000P / 3005 PTM (Agilent); LineGeneK (Bioer) Sonuçlar, eşik hattı ile floresan eğrinin geçiş varlığı sayesinde yorumlanır. Protrombin gen DNA amplifikasyonu FAM/Yeşil kanalda tespit edilirken Legionella pneumophila JOE/Sarı kanalda algılanır.

13 Kalitatif test: Analiz sonuçları,sadece aşağıdaki kontrol numune sonucları uygunluğu durumunda geçerli kabul edilir: Kontrol Sonuçları Kontrol Evresi Ct kanal Fam Kontrol /Yeşil Ct kanal JOE/Sarı Yorumlama C- DNA izolasyon Pos (< 30) Neg OK C+ DNA izolasyon Pos (< 30) Pos (< 30) OK DNA- Amplifikasyon Neg Neg OK Tampon QS3 Amplifikasyon Pos (< 33) Pos (< 33) OK Kantitatif test: Analiz sonuçları,sadece aşağıdaki kontrol numune sonucları uygunluğu durumunda geçerli kabul edilir: Kontrol Sonuçları Kontrol Evresi Ct kanal FAM Ct kanal JOE Kontrol (Yeşil) (Sarı) Yorumlama C- DNA izolasyon Pos Neg OK C+ DNA izolasyon Pos Pos OK DNA-buffer Amplifikasyon Neg Neg OK QS1 Amplifikasyon Pos Pos OK QS2 Amplifikasyon Pos Pos OK QS3 Amplifikasyon Pos Pos OK

14 Aşağıdakilere göre kontrol ve örneklerde Legionella pneumophila DNA konsantrasyonu hesaplanır: the following: C L.pn. DNA (cop/l) = K L.pn. DNA /K IC х C IC х 2 C L.pn. DNA (cop/l) 1 L su içinde Legionella pneumophila, DNA kopya miktarı; K L.pn. DNA (cop/ml) örnekte 1 ml Legionella pneumophila DNA kopyası hesaplanan miktarı; K IC (cop/ml) örnekte 1 ml Legionella pneumophila DNA kopyası hesaplanan miktarı; C IC (cop/ml) - Veri Kartına göre IC 1 ml IC DNA kopya miktarı, 2 Numune filtrasyon için ayarlama. 1. Kalibrasyon eğrisi korelasyon katsayısı R den fazla olması gerekir. 2. Verimlilik değeri aralığında olmalıdır: 0,85 1,15 ANALİTİK ÖZELLİKLER ANALİTİK ÖZGÜLLÜK Primerler ve probların analitik özgünlüğü 100 negatif numune ile valide edilmiştir. Spesifik primerler ve problar ile herhangi bir sinyal oluşturmamışlardır. ANALİTİK HASSASİYET Legionella pneumophila Real-TM kitinin hassasiyeti Legionella pneumophila. Standart DNA'sı kullanılarak tespit edilmiştir. Bu standart seri DNA-tampon maddesi içinde seyreltildi ve 3 kez çoğaltılarak 20 kere test edilmiştir. Legionella pneumophila Real-TM kitinin analitik hassasiyeti 1000 kopya/ numune 'den daha düşük değildi. Hedef bölge mip-gene

15 SORUN GİDERME 1. Ekstraksiyon Negatif Kontrol için, zayıf (Ct > 35) ya da olmayan IC (Fam/Yeşil kanal) sinyali. PCR inhibe edilmiştir. Önerilen DNA ekstraksiyon metodunu kullandığınızdan ve üreticinin talimatlarını izlediğinizden emin olun. Bütün tüpleri ekstrakte DNA pipetlemeden önce, 2 dk. maksimum ( g) hızda yeniden santrifüjleyin ve süpernatantı dikkatlice alın. Pelleti dağıtmayın, sorbent reaksiyonu inhibe eder. Reaktif muhafaza koşulları talimatlara uygun değil. Muhafaza koşullarını kontrol edin. PCR koşulları talimatlara uygun değil. Protokolde belirtilen IC tespit floresan kanalını seçin ve PCR koşullarını kontrol edin. IC örnek reaktiflerin pipetleme sırasında (sadece çevresel numune ve kontrol için) ilave edilmemiştir. DNA ekstraksiyon prosedürü esnasında dikkatli olun. 2. Zayıf (Ct > 35) ya da olmayan Pozitif Kontrol sinyali. PCR koşulları talimatlara uygun değil. Manuelde belirtilen floresan kanalını seçin ve aplifikasyon prosedürünü kontrol edin. 3. Ekstraksiyon Negatif Kontrol ile Joe (Sarı)sinyal. DNA ekstraksiyon prosedürü esnasında kontaminasyon. Tüm sonuçlar geçersizdir. Bütün yüzeyleri ve enstrümanları sodyum hipoklorid ve etanol ile dekontamine edin. Ekstraksiyon prosedürü esnasında sadece filtreli pipet uçları kullanın. Tüpler arasında pipet uçlarını değiştirin. Yeni reaktif setleriyle DNA ekstraksiyonunu tekrarlayın. 4. PCR Negatif Kontrol (DNA-buffer) ile herhangi bir sinyal yok. PCR hazırlama prosedürü esnasında kontaminasyon. Tüm sonuçlar geçersizdir. Bütün yüzeyleri ve enstrümanları sodyum hipoklorid ve etanol veya özel DNA dekontaminasyon reaktifleriyle dekontamine edin. Pozitif Kontrolü en son pipetleyin. Yeni reaktif setleriyle PCR hazırlamayı tekrarlayın.

16 KULLANILAN SEMBOLLERİN ANLAMLARI Liste Numarası Dikkat! Lot Numarası <n> test için yeterli içerik in Vitro Diagnostic Kullanım için Versiyon Saklama Son kullanım tarihi Üretici Kullanım için talimatlara bakınız C- Negatif kontrol Ekstraksiyon NCA Negatif kontrol Amplifikasyon C+ Pozitif Kontrol Amplifikasyon IC Internal Kontrol * SaCycler Sacace Biotechnologiestescilli markasıdır. * Rotor-Gene Qiagen tescilli markasıdır. * CFX and iq5 Bio-Rad Laboratories tescilli markasıdır. * MX3005P Agilent Technologies tescilli markasıdır. * LineGeneK Bioer tescilli markasıdır. Sacace Biotechnologies Srl via Scalabrini, Como Italy Tel Fax mail: info@sacace.com web: info@sacace.com web:

17