CIK ÜRETİMİNDE KALİTE STANDARTLARI. Bio. Utku SEYİS Acıbadem Labcell Hücre Laboratuvarı

Transkript

1 CIK ÜRETİMİNDE KALİTE STANDARTLARI Bio. Utku SEYİS Acıbadem Labcell Hücre Laboratuvarı

2 İnsan sağlığı için üretimi yapılan her ürünün, üretiminin tüm aşamalarında ve hasta uygulamalarında yüksek kalite standartlarına sahip olması gerekmektedir. Üretilen ürünler için belirlenen şartlar altında ve belirlenen bir zaman süresi içersinde istenilen fonksiyonları yerine getirebilme hizmetine ihtiyaç vardır. Verilen hizmetin önceden saptanmış özellikleri taşıyıp taşımadığının ve ne ölçüde güvenilir olduğunun incelenmesi için kullanılan kalite kontrol standartları geliştirilmiştir.

3 AMAÇ Bu sunum, üretim öncesinde, esnasında ve sonrasında bu üründe aranması gereken kalite standartlarını tanımlamaktadır.

4 TANIM Cytokine-induced Killer Cell (CIK), T hücre ve Natural Killer (NK) fenotiplerini gösteren immünefektör hücre grubudur. Enfekte ve malign hücreleri, antijen sunumuna ihtiyaç duymadan tanıyıp hızlı bir immün reaksiyon yaratabilirler. Bundan dolayı CIK uygulaması, viral enfeksiyon ve kanser için yeni geliştirilen bir tedavi yöntemidir. CIK aktif spesifik immünoterapi amaçlı kullanılmaktadır. Pievani A, Borleri G, Pende D, et al. Dual-functional capability of CD3+ CD56+ CIK cells, a T-cell subset that acquires NK function and retains TCR-mediated specific cytotoxicity. Blood. 2011;118: doi: /blood

5 ÜRETİM BASAMAKLARI MNH Aferezi Hücre Saflaştırılması Hücre Kültürü Hücrelerin Toplanması Sitokinler ile İnkübasyon Sitokin Eklenmesi Kalite Kontrol Son Ürün

6 SÜREÇ SORUMLULUKLARI HAM ÜRÜN OPERASYON SÜRECİ: KALİTE KONTROL SÜRECİ: ÜRETİM SÜRECİ: BİTMİŞ ÜRÜN OPERASYON SÜRECİ: Donör Seçimi Bilgilendirilmiş Onam Formu Ham Ürün Kabul Öncesi Kalite Kontrol İşlem Öncesi Süreci Ara Ürün Süreci Üçüncü Paketleme Transfer Ürünün Toplanması Ham Ürünün Paketlenmesi İşlem Öncesi Kalite Kontrol Bitmiş Ürün Süreci Etiketleme Uygulama Transfer Bitmiş Ürün Kalite Kontrol Birinci ve İkinci Paketleme Takip (Cell Vigilance)

7 SÜREÇ SORUMLULARI Ham Ürün Kabul Süreci İşlem Öncesi ürün Kalite Kontrol Süreci Ara Ürün Kalite Kontrol Süreci Son Ürün Kalite Kontrol Süreci Operasyon / Kalite Kontrol Kalite Kontrol Kalite Kontrol / Üretim Kalite Kontrol / Üretim Paketleme Transfer Uygulama Üretim / Operasyon Operasyon Operasyon / Klinik

8 HAM ÜRÜN KABUL STANDARTLARI Ham Ürün: Ürünün geldiği anda paket halindeki durumunu tanımlar.

9 Parametre Limit değer Yöntem Referans Ambalaj Kargo paketinin sağlam olması ve güvenlik bandının yırtılmamış olması gerekmektedir. Fiziksel kontrol Döküman Onam Formları, Başvuru Formları, Verici Bilgi Formu dış ambalajın içinde bulunmalıdır. Göz ile kontrol Türkiye Ve Tıbbi İlaç Ve Cihaz Kurumu 4 Nisan 2014 Tarihli, Sayılı Tebliğ Etiket Donör ve alıcının tanıtıcı bilgilerini içeren etiketler eksiksiz olmalıdır. Göz ile kontrol Sağlık Bakanlığı 27 Ekim 2010 Tarihli Sayılı Yönetmelik

10 Parametre Limit değer Yöntem Referans Görünüm Temiz ve berrak olmalıdır; dağılmayan ve farklı renkte partiküller bozulma işaretidir. Göz ile kontrol Isı takibi 4-12 C Miktar cc Tartı HBsAg, Anti-HCV, HIV antikoru 1&2 ve p24antijeni Sifiliz Negatif İndikatör/ dijital ısı takip sistemleri Eliza/NAT VDRL/RPR Türkiye Ve Tıbbi İlaç Ve Cihaz Kurumu 4 Nisan 2014 Tarihli, Sayılı Tebliğ Sağlık Bakanlığı 27 Ekim 2010 Tarihli Sayılı Yönetmelik

11 İŞLEM ÖNCESİ ÜRÜN KALİTE KONTROL STANDARTLARI İşlem Öncesi Ham Ürün Kabul öncesi kalite kontrolü geçip üretim alanına giren işlenmemiş ham ürüne verilen addır.

12 Parametre Limit değer Yöntem Referans Canlılık >%90 Tripan Blue, Akım sitometri 7AAD/Akridin Orange/Ethidium Bromür Rutella S, Iudicone P, Bonanno G, Fioravanti D, Procoli A, et al. (2012) Adoptive immunotherapy with cytokine-induced killer cells generated with a new good manufacturing practice-grade protocol. Cytotherapy14(7): Toplam beyaz hücre sayısı >800 x10 6 Otomatik Sayım Cihazı/Thoma Cui Y, Yang X, Zhu W, Li J, Wu X, Pang Y. Immune response, clinical outcome and safety of dendritic cell vaccine in combination with cytokine-induced killer cell therapy in cancer patients. Oncology Letters. 2013;6(2): doi: /ol Sterilite Aerob-Anaerob Kültür Mantar Kültürü Negatif Thioglicollate-Triptic soy Broth-Kanlı agar- Saboraud Dekstrose Agar/Otomatik Kültür Sistemi/PCR Points to Consider in the Characterization of Cell Lines Used to Produce Biologicals (1993), Department of Health & Human Servıces, Memorandum, Jul

13 Parametre Limit değer Yöntem Referans İmmünfenotipleme CD3/4: > % 25 CD3/8: > % 25 CD16/56: > % 10 CD3/16-56: > % 5 Akım sitometri Rutella S, Iudicone P, Bonanno G, Fioravanti D, Procoli A, et al. (2012) Adoptive immunotherapy with cytokineinduced killer cells generated with a new good manufacturing practice-grade protocol. Cytotherapy14(7): HBV DNA, HCV RNA, HIV RNA, Sifiliz Negatif NAT VDRL/RPR Türkiye Ve Tıbbi İlaç Ve Cihaz Kurumu 4 Nisan 2014 Tarihli, Sayılı Tebliğ

14 SON ÜRÜN KALİTE KONTROL SÜRECİ

15 Parametre Limit değer Yöntem Referans Canlılık >%95 Tripan Blue, Akım sitometri 7AAD/Akridin Orange/Ethidium Bromür Rutella S, Iudicone P, Bonanno G, Fioravanti D, Procoli A, et al. (2012) Adoptive immunotherapy with cytokine-induced killer cells generated with a new good manufacturing practice-grade protocol. Cytotherapy14(7): Toplam beyaz hücre sayısı Toplamda 1x10 8-1x10 9 hücre Otomatik Sayım Cihazı/Thoma Cui Y, Yang X, Zhu W, Li J, Wu X, Pang Y. Immune response, clinical outcome and safety of dendritic cell vaccine in combination with cytokine-induced killer cell therapy in cancer patients. Oncology Letters. 2013;6(2): doi: /ol İmmünfenotipleme CD3/4: > % 10 CD3/8: > % 70 CD16/56: > % 5 CD3/16-56: > % 10 CD3/4: > % 25 CD3/8: > % 25 CD16/56: > % 10 CD3/16-56: > % 5 Akım sitometri L. Shi, Q. Zhou, J. Wu, et al., Efficacy of adjuvant immunotherapy with cytokineinduced killer cells in patients with locally advanced gastric cancer, Cancer Immunology, Immunotherapy, vol. 61, no. 12, pp , 2012 Rutella S, Iudicone P, Bonanno G, Fioravanti D, Procoli A, et al. (2012) Adoptive immunotherapy with cytokine-induced killer cells generated with a new good manufacturing practice-grade protocol. Cytotherapy14(7):

16 Parametre Limit değer Yöntem Referans Sterilite Aerob-Anaerob Kültür Mantar Kültürü Ürünün son halini temsil eden örnekten alınan kültür 14 gün takip edilir; sonuç negatif olmalıdır. (Ürün çıkmadan 48 saat önce alınan örnek ve çıktığı anda alınan 2. örnek negatif olmalıdır.) Thioglicollate-Triptic soy Broth-Kanlı agar-saboraud Dekstrose Agar/Otomatik Kültür Sistemi/PCR Points to Consider in the Characterization of Cell Lines Used to Produce Biologicals (1993), Department of Health & Human Servıces, Memorandum, Jul Endotoksin Analizi: (Gram (-) bakteriler tarafından salgılanan bir toksindir, test endoktoksin varlığını ölçerek bakterinin var olup olmadığını belirler.) <5 Ü/kg veya toplamda <50 Ü olmalıdır. LAL Gel Clot/ Chromogenic Method Guideline on validation of the limulus amebocyte lysate test as an endproduct endotoxin test for human and animal parenteral drugs, biological products, and medical devices.department of health and human service, public health service, food and drug administration Etkinlik Analizi (Üretici tesis tarafından belirlenen testlerden oluşur.) Üretici tesis tarafından belirlenen limittir. Europium-TDA Cytotoxicity Assay Blomberg, K., Hautala, R., Lövgren, J., Mukkala, V. M., Lindqvist, C., Akerman, K. (1996) Time-resolved fluorometric assay for natural killer activity using targets cells labelled with a fluorescence enhancing ligand. J. Immunol. Methods 193: pp

17 Europium-TDA Cytotoxicity Assay: Genellikle üretici tesis tarafından belirlenen testlerden oluşur. Tesisimizde, hücre yoğunluğu, görünümü ve Europium-TDA Cytotoxicity Assay uygulanmaktadır. K562 Hücreleri TDA ile yüklenir. CIK Hücreleri eklenir, inkübe edilir. Santrifüjlenip supernatant alınır Europium solüsyonu eklenir Florometrik analizi yapılır Blomberg, K., Hautala, R., Lövgren, J., Mukkala, V. M., Lindqvist, C., Akerman, K. (1996) Time-resolved fluorometric assay for natural killer activity using targets cells labelled with a fluorescence enhancing ligand. J. Immunol. Methods 193: pp

18 SON ÜRÜN KALİTE KONTROL SÜRECİ

19 Parametre Limit değer Yöntem Referans Artık Ürün Varlığı (Penicilin ve streptomycin varlığı) < 0,5µgr/ml HPLC Eudralex Volme 4, Part 1, Chapter 6 (Quality Control), 28 March Stabilite (ürün paketlendikten sonra kullanıcıya teslim aşamasında son kullanıcı tarfından yapılmalıdır) 4 saatten kısa süre için >%90 24 saatten kısa süre için >%85 48 saatten sonrası için >%80 Tripan Blue, Akım sitometri L. Shi, Q. Zhou, J. Wu, et al., Efficacy of adjuvant immunotherapy with cytokine-induced killer cells in patients with locally advanced gastric cancer, Cancer Immunology, Immunotherapy, vol. 61, no. 12, pp , 2012

20 PAKETLEME PAKETLEME Birinci kap gönderici ve/veya paketlemeyi yapan tarafından kontrol edilmiş sızdırmaz, tercihen burgu kapaklı ve/veya contalı tipte olmak zorundadır. CIK ürünü EVA (Etilen Vinil Asetat) 250 ml lik dondurma torbasında saklanır ve transfer edilir. İkinci kap dayanıklı su geçirmez ve sızdırmaz özellikte olmalıdır. Üçüncü kap ya da dış kap, travma ve basınç etkilerine dayanıklı malzemeden yapılmış ve kabın alt yüzeyi dışındaki bir yüzeyinde, ilgili evrak ve dokümanların düşmesini, ıslanmasını, karışmasını ve kaybolmasını engelleyecek şekilde tasarlanmış ve paket ile birlikte taşınmasına yönelik hazırlanmış bir cep veya bölme olmak zorundadır. Dış kabın yüzeylerinden an az biri 100mm x 100mm boyutlarında olmak zorundadır. Türkiye Ve Tıbbi İlaç Ve Cihaz Kurumu 4 Nisan 2014 Tarihli, Sayılı Tebliğ; Sağlık Bakanlığı 27 Ekim 2010 Tarihli Sayılı Yönetmelik

21 UYGULAMA Ürünün uygulanmadan önce stabilite ve sterilite testlerinin yerinde tekrar yapılması önerilir. Bu süreçteki sorumluluk kullancıya aittir.

22 KLİNİK TAKİP Ürün uygulandıktan sonra belirli aralıklarla hasta takip edilmelidir. Bu süreçten Operasyon Birimi sorumludur. Ürünün uygulanmasını takiben varsa advers olay, advers etki kayıt altına alınmalıdır. Bununla birlikte ürün etkinliği ve stabilitesi de belirli aralıklarla takip edilmeli ve kayıt altına alınmalıdır.

23 TEŞEKKÜRLER Bio. Utku SEYİS Acıbadem Labcell Hücre Laboratuvarı ve Kordon Kanı Bankası 2015