25 Hidroxy Vitamin D EIA

Transkript

1 25 Hidroxy Vitamin D EIA Serum veya plazmada 25 OH vitamin D veya diğer hidroksi metabolitlerin kantitatif tespiti için kullanılan Enzim İmmünoassay testidir. Kullanım Amacı Sadece Tanı amaçlı kullanılır IDS 25-hidroksi D vitamini ÇED seti 25-hidroksi D (25-OH D) ve insan serum veya plazmasında diğer hidroksillenmiş metabolitlerinin kantitatif tayin edilmesi içindir bir enzim immunoassaydir. Sonuçlar yetişkin popülasyonunda D vitamini yeterlilik değerlendirmesinde klinisyene yardımcı diğer klinik ve laboratuvar verileri ile birlikte kullanılmak üzere vardır. Özet ve Açıklama D vitamini seko-steroid bir aile için yaygın olarak kullanılan bir terimdir. Güneş ışığına maruz kalma sonucunda, 7-dehidro-kolesterol, epidermisin aktif büyüyen katmanlarında derin yer, vitamin D3 (kolekalsiferol) için isomerised olan ön-d3 vitamini elde etmek için "B" halka fotolitik bölünmesine uğrar. Vitamin D3 ve D2 vitamini (ergokalsiferol) da diyet takviyesi veya gıdalar sınırlı sayıda temin edilebilir. Vitamin D2 D3 vitamini benzer bir şekilde metabolize edilir. D vitamini yağ dokusunda depolanır ve D vitamini bağlayıcı protein (VDBP) ve albümine bağlı olarak dolaşım girer.karaciğer, D vitamininin de VDBP ile bir kompleks olarak dolaşır 25-hidroksi D vermek hidroksillenir.25-oh D küçük bir bölümü biyolojik aktif kalsitropikhormon 1,25-di-hidroksivitamin D. Daha hidroksilasyon ve vitamin metabolizmasıoluşturmak için, paratiroid hormon ve iyonize kalsiyum düzeyleri ile doğrudan yönetmelik kapsamında, böbrekte daha hidroksillenir D suda çözünür ve kolaylıkla atılan bileşik üretir. Karaciğer D vitamini 25-hidroksilaz aktivitesi sıkı regüle edilmez ve D3 vitamini, D vitamini (D3 veya D2) alım, kutanöz üretim değişiklikleri 25-OH D (1) seviyelerini dolaşan değişikliklere neden olacaktır. 25-OH D serum konsantrasyonu toplam vitamin D durumunun en güvenilir ölçüsü olarak kabul edilir ve böylece bir hastanın vitamin D yeterli (2) olup olmadığını belirlemek için kullanılabilir. Vitamin D durumunun değerlendirilmesi hastalarda anormal serum kalsiyum konsantrasyonlarının nedenini belirlemek için gerekebilir. Yöntem Açıklaması IDS 25-hidroksi D vitamini ÇED seti 25-OH D ve serum veya plazma diğerhidroksillenmiş metabolitlerinin kantitatif bir enzymeimmunoassaydir. Kalibratörleri, kontrol ve numune biyotin seyreltilmiş örnekleri aspirasyon ve kurutmadan önce, oda sıcaklığında 2 saat süreyle yüksek bir özgül koyun 25-OH D antikoru ile kaplı olan mikrotitre kuyulara inkübe edilir 25-OH D. etiketli ile seyreltilir. Enzim (horseradish

2 peroksidaz) avidin etiketli, daha ileri bir adım yıkama sonrasında, ilave ve kompleks biotin seçici olarak bağlanır ve olan, renkli bir kromojenik substrat (TMB) kullanılarak geliştirilmiştir.reaksiyon durdurulmuş karışımlarının absorbans bir mikrotitre plaka okuyucu okunur, renk yoğunluğu 25-OH D konsantrasyonu ile ters orantılı olan geliştirilmiştir Uyarı ve Önlemler IDS 25-hidroksi D vitamini ÇED kiti vitro diagnostik sadece kullanmak içindir ve insan veya hayvanlarda iç kullanım için değildir. Bu ürün Talimatı belirtilen talimatlara uygun olarak kesinlikle kullanılmalıdır. IDS Limited halükârda verilen talimatlara uyulmamasından kaynaklanan, neden (hariç olarak tüzük gereği) herhangi bir kayıp veya hasar için sorumlu tutulamaz. DİKKAT: Bu kit, insan ve / veya hayvan kaynaklı materyal içerir. Enfeksiyöz ajan iletebilen gibi kit reaktifleri taşıyınız. Uygun önlemler ve iyi laboratuar uygulamaları kiti reaktiflerin saklanması, taşınması ve bertarafı ile kullanılması gerekir. Kit reaktiflerini atılması yerel yönetmeliklere uygun olmalıdır. İnsan Serumu: Kalibratörleri CAL ve Kontrolleri CTRL Bu ürünün hazırlanmasında kullanılan malzeme İnsan İnsan İmmün Yetmezlik Virüsü karşı antikor varlığı (HIV I ve II), Hepatit B yüzey antijeni, Hepatit C antikoru için FDA önerilenanalizleri ile test edilmiş ve negatif bulunmuştur. Hiçbir test bulaşıcı ajanların bulunmadığına dair tam bir güvence veremediği gibi, reaktifler Biyogüvenlik Seviyesi 2 ye göre ele alınmalıdır. Sodyum Azid Xn. Zararlı: sodyum azit içerir CTRL (NaN3)>% 0.1 (w / w) (<% 1). R22 Yutulması halinde zararlıdır. R52/53 Sudaki organizmalar için zararlı, su ortamında uzun süreli olumsuz etkilere neden olabilir. S46 Yutulması halinde hemen doktora başvurun, kabı veya etiketi gösterin. S36/37 Koruyucu elbise ve eldiven giyin S60 Bu materyal ve / veya kabı tehlikeli atık olarak bertaraf edilmelidir. Bu kit Bazı reaktifler Yüksek patlayıcı metal azitleri oluşturmak üzere kurşun, bakır veya pirinç tesisat ile reaksiyona girebilir koruyucu olarak sodyum azit içerir. Attıktan birikmesini önlemek için su büyük miktarda suyla yıkayın. 0,5 M Hidroklorik Asit Stop solüsyonu 0,5 M Hidroklorik asit içerir. R36/38 Gözünüzü ve cildinizi koruyun. S26 Gözlere temas etmesi halinde, bol su ile yıkayınız ve doktora başvurunuz. S36/37 Koruyucu elbise ve eldiven giyin

3 Tetrametilbenzidin Substrat TMB SUBS 3,3 ', 5,5'-tetrametilbenzidin içerir. R21/22 Deri ile teması ve yutulması halinde zararlıdır. S36/37 Koruyucu elbise ve eldiven giyin Reaktiflerin Hazırlanması Kontroller: Kontroller CTRL liyofilize sağlanır. Distile veya deiyonize su 1 ml ile sulandırın, stoperdeğiştirin ve oda sıcaklığında dakika dik durabilir. Tam sulandırıldıktan sağlamak için birkaç kez ters çevirin. 25 D Biotin Solüsyonu: 25-B Biotin Konsantre 25-D biyotin 50x liyofilize temin edilir. Liyofilize 25-D BiotinKonsantre 25-D biotin 50x (mavi renk) şişe Tampon BUF 3 ml ekleyin.durdurucu yerini ve oda sıcaklığında dakika bekletilir. Tam sulandırılma sağlamak için birkaç kez ters çevirin. Geri kalan tampondan içeren şişe içine rekonstitüe 25-D Biotin Konsantre25- D biyotin 50x (3 ml) ilave edilir. Tersine çevirerek iyice karıştırın.25-d Biotin Çözüm(50 ml), rengi yeşildir.şişe "25-D Biotin Çözüldü" olarak işaretleyin. Wash Solüsyonu: Yıkama, her şişe içeriği distile veya deiyonize su ve karışım WASHBUF 20x 950 mlkonsantre ekleyin. Oda sıcaklığında saklayın. Tüm reaktifler, diğer kullanım için hazırdır. Tüm reaktifler kullanılmadan önce odasıcaklığına gelmesini bekleyin. Reaktifler deneyde kullanmadan önce tekrar çevirerek karıştırılmalıdır. Raf Öümrü ve Reaktiflerin Saklanması Belirtildiği gibi saklanan bu kit belirtilen son kullanma tarihine kadar stabildir. Aldıktan sonra, C'de 2-8 C'de tüm reaktifler saklanır. Sulandırılmış Kontrolleri CTRL ve 25-D Biotin Çözüm 25-D biotin soln kadar 8 hafta için2-8 C'de saklanabilir. 25-D Biotin çözüm kullanımdan hemen sonra yukarıda karanlıkta saklanmalıdır. Kullanılmayan Antikor Kaplı Levha MICROPLAT şeritler kurutucu poşet ile folyo kese iade edilmelidir. Sağlanan plastik torbalar l birinde folyo kese ve conta sonu boyunca katlanmalıdır. 8 hafta için 2-8 C'de saklayınız. Yıkama Çözüm WASHBUF solüsyonunu kadar 8 hafta boyunca oda sıcaklığında saklanabilir. Kit reaktiflerinin olası bozulma belirtileri Reaktiflerin herhangi bir anormal partikül madde varlığında. Sıfır kalibratörün absorbansında azalma olduğunda. Eğrinin normal konumundan kayma olduğunda. Örneklerin toplanması ve saklanması

4 Testi serum veya plazma (EDTA veya heparin) örnekler kullanılarak yapılmalıdır. Örnekler toplandıktan sonra en kısa sürede ayrılmalıdır. Uzun süreli depolama, saklarken20 oc için.örneklerin tekrar donma / çözülme kaçının. Otomatik platformlar Kullanıcılar bu ürünün tasarlanmış ve aşağıda açıklanan protokolü kullanılarak elle yapılması amacıyla geliştirildiğini bilmelidir. Protokolü otomatik platformlar için mutlaka geçerli değildir. Otomatik bir platform üzerinde deney gerçekleştirmek isteyen kullanıcılar, bu nedenle kendi protokolü optimize etmek ve bu aşağıda açıklanan hayli farklı olabilirolabileceğini bilmelisiniz. Bu konuda Rehberlik IDS Teknik Hizmetler elde edilebilir. Prosedür 1. Kalibratörler 0-6 Tamponlanmış insan serum içeren 25-hidroksi D vitamini ve <% 0.09 sodyum azid. Her Kalibratör değeri tam QC Raporu, şişe başına 1 ml, kit başına 7 şişe yazdırılır. 2. Antikor kaplı plaka 25-hidroksi D koyun poliklonal antikorla Mikroplaka polistiren kuyuların iç yüzeyine, 12bağlantılı kurutucu ile bir folyo kese içinde x 8 de şeritler. 3. Konsantre 25 D Biotin 25-hidroksi- biyotin etiketli vitamin D, ve özel bir stabilizatör, şişe başına 1 ml içeren liyofilize tamponu. Kit başına 1 (F1) veya 2 (F2) şişeler. 4. Tampon 25-hidroksi D Için özel reaktif bağlayıcı proteinlerin, şişe başına 50 ml ile vitamini ayrışır.kit başına 1 (F1) veya 2 (F2) şişeler. 5. Enzim Konjugat Fosfat horseradish peroksidaz, protein, enzim stabilizatörleri ve koruyucu bağlantılı tuzlu su içeren avidin tamponlu. Şişe başına 22 ml. Kit başına 1 (F1) veya 2 (F2) şişeler. 6. Kontrol 1-2 Içeren liyofilize insan serum 25-hidroksi D vitamini ve <% 1 sodyum azid (% 0,09sulandırılmış), şişe başına 1 ml, kit başına 2 şişe. 7. TMB Substrat Kendine has bir sulu tetrametilbenzidin formülasyonu (TMB) ve hidrojen peroksit, şişe başına 28 ml. Kit başına 1 (F1) veya 2 (F2) şişeler. 8. Stop Solüsyonu 0.5M Hidroklorik Asit, şişe başına 13 ml. Kit başına 1 (F1) veya 2 (F2) şişeler. 9. Konsantre Yıkama Tamponu (20X) Fosfat tuzlu su içeren Tween, şişe başına 50 ml tamponlanmış. 10. Adhezive plaka kapayıcı Her kitte 8 adet 11. Dökümanlar Kullanma talimatı ve QC raporu Gerekli olup sağlanmayan materyal

5 1.Tek 12 x 75 mm borosilikat cam ya da polipropilen tüpler ul ve 200 ul teslim Hassas pipetler ml, örn sağlamak için tekrarlayarak pipet Eppendorf multipipet 4780, veya benzer. 4. Hassas çok kanallı pipetler 100 ul ve 200 ul teslim etmek. 5.. Vorteks karıştırıcı. 6. Otomatik mikroplak yıkayıcı (opsiyonel). 7. Fotometrik mikroplaka okuyucu ve veri analizi ekipmanı Test Prosedürü Rekatiflerin hazırlanması bölümünde belirtilen şekilde reaktifleri hazırlayınız 1. Etiketli borosilikat cam ya da polipropilen borular, her Kalibratörü CAL, Kontrol CTRLve örnek SPE için bir hazırlayın. Şekilde etiketlenmiş tüpleri her Kalibratörü CAL, Kontrol CTRL veya numune ekleyin. 3. Tüm tüplere 25-D Biotin Çözüm 25-D biotin soln ekleyin. 10 saniye boyunca iyice vorteksleyin. 4. Nüsha halinde Antikor Kaplı Levha MICROPLAT uygun kuyuların her seyreltilmiş Kalibratör, Kontrol veya numune ekleyin. Yapışkan bir plaka patı ile plaka örtün az C'de 2 saat inkübe edin. 5.. Yıkama Çözeltisi WASHBUF soln tüm kuyuları üç kez yıkayın. a) Otomatik plaka yıkama: Set plaka yıkayıcı yanı başına Yıkama Çözeltisi WASHBUF soln en az 300 ul dağıtmak için. 3 kür doldurun ve aspire b) Elle yıkama: Durusu kuyuların içeriğini keskin üst edilerek. Tüm kuyucuklara Yıkama Çözeltisi WASHBUF soln 250 ul dağıtın. Iki kez boşaltacaktır ve tekrarlayın. Bir sonraki adıma geçmeden önce aşırı Yıkama Çözeltisi WASHBUF soln kaldırmak içinemici dokusu üzerine iyice ters plaka dokunun. Çok kanallı pipet kullanarak tüm kuyulara Enzim Konjuge ENZYMCONJ ve 6.Add.Yapışkan bir plaka patı ile plaka örtün. 30 dakika boyunca C'de inkübe edilir. 7.Repeat adım 5 yıkayın. 8. Çok kanallı pipet kullanarak tüm kuyulara TMB Yüzey SUBS arasında ekleyin.yapışkan bir plaka patı ile plaka örtün. 30 dakika boyunca C'de inkübe edilir. 9. Çok kanallı pipet kullanarak tüm kuyulara HCL ekle 10. Stop ekleyerek 30 dakika içinde bir mikroplaka okuyucu kullanılarak 450 nm(referans 650 nm) absorbansı ölçülür. Kalibrasyon 25-OH D Kalibratörleri U.V. kullanılarak standardize edilmiştir miktar. Kalite Kontrol İki kiti kontrolleri bilinmeyenler olarak test edilmesi gereken sağlanmaktadır. Bunlar birgüngün bazında, yöntemle elde edilen sonuçların geçerliliği, değerlendirilmesi kullanıcıyardımcı olmayı amaçlar.ortalama konsantrasyonu% 20 - Her bir kit ile birlikte QC rapor,manuel testler bir dizi üzerinden IDS tarafından belirlenen her bir kontrol ve + / eşdeğerolan bir ifade. IDS çalışan ortalama, SD ve % cv bir hesaplama ile birlikte, müşterilerine üreten kontrol değerlerinin grafik kayıtları muhafaza önerir. Bu güncel ve tarihsel kontrolüçok verilen QC verilerinin göreli performansını izlemesini sağlayacak ve onların normal önemli ölçüde farklı kontrol değerleri vermek testleri tanımlamak içindir. Kontrol verileri kullanıcıların yorumlarken şu noktalara dikkat etmelisiniz: a) Bu ürün bir manuel ürün olarak tasarlanmış ve geliştirilmiştir.qc Sertifikada verilenaralık elle ve yukarıda açıklanan Test Prosedürü için sıkı adherans ile yapılan deneyleri için uygun olmalıdır. 3.IDS QC raporda verilen aralığı bu

6 nedenle herhangi bir kontrol için kendi ortalama değer IDS QC raporda verilen önemli ölçüde farklı olduğunu bulmak kullanıcılar için uygun olmayabilir.clsi Belge C24-A3 açıklandığı gibi durumlardakullanıcılar kendi aralığını ayarlamanız gerekir. Bu uyarı, özellikle otomatik bir platformda bu ürünü çalıştıran müşteriler için ilgili ve tanımı gereği, yukarıda açıklanan Test İşlemi takip etmeyenler olabilir. Kullanıcılar, IDS QC aralığı uygunsuz nerelerde kullanılır, bunlar kabul edilebilir testler reddetme riski olduğundan uygunsuz raporlama yapmamamaya dikkat etmelisiniz. b) Kendi kontrol aralıkları ayarlamak mümkün değilse veya IDS QC raporda verilen aralıkları kullanmayı tercih eden müşterilerde otomatik test başarısız olmamalıdır IDS QC Raporda belirtilen kabul edilebilir aralığın dışında bir kontrol değeri düşmek gerekir. Böyle bir durumda, bunlar kontrol değeri mevcut laboratuar çalışan ortalama veya IDS QC ortalama değeri göreli daha önceki yöntemlerde elde geçmiş seviyeleri önemli ölçüde farklı olup bağlamında sonuç geçerlik değerlendirilmesi gerekir. Sonuçların Hesaplanması Aşağıdaki gibi her kalibratör, kontrol ve bilinmeyen numunenin yüzde bağlanma (B /Bo%) hesaplanır: B/Bo% = ((mean absorbance) / (mean absorbance for '0' calibrator))* 100 Apsiste 25-hidroksi D konsantrasyonu karşı ordinat üzerindeki B / Bo% çizerek yarı-log grafik kağıdı üzerine bir kalibrasyon eğrisi hazırlayın. Her bilinmeyen örnek için B / Bo% hesaplayın ve nmol / L (nm) olarak eşik değerlerini okuyun. Alternatif veri azaltma teknikleri istihdam edilebilir ancak kullanıcılar seçilen eğriye uygun ve kabul edilebilir sonuçlar verdiğini teyit etmelidir. Düzleştirilmiş spline veya 4PL eğrisi geçmeler tavsiye edilir. Örnek test Bilgileri Lütfen Orijinal prospektüse bakınız. Tipik Kalibrasyon Eğrisi Lütfen orijinal prospektüse bakınız Kullanım Limitleri Raporlanabilir aralık yukarıda 25OHD konsantrasyonlu örnekler seyreltme sonra yeniden tahlil edilmelidir. Bu, bir kısım numuneye bir oran +bir parçası seyreltici olarak, düşük bir konsantrasyonda insan serum numunesi ile yapılması gerekir. Seyreltilmiş numuneler için sonuçlar seyreltme faktörü 2 ile çarpılması ve düşük konsantrasyonda Örnek çıkarılması ile seyreltici olarak analitin varlığı için düzeltilmesi gerekir. 2.Hastanın klinik ve doktorun elindeki diğer bilgilerle birlikte yorumlanması gerekirherhangi bir tanı sonuçları olduğu gibi. 3. Bu testin performans özellikleri pediatrik popülasyonda kurulmuş değil. 4. Nadir durumlarda, avidin antikorlarının çok yüksek titreleri nedeniyle parazit oluşabilir. 5..Aşağıdaki maddelerin test ve IDS 25-hidroksi D vitamini tayininde bozulmamasına bulundu:

7 Hemoglobin 1470 mg / dl kadar test Bilirubin 513 mmol / L kadar test Lipid 5.6 mmol / L trigliserid kadar test Beklenen Değerler Her laboratuvar kendi yerel nüfus için aralıklarını belirlemelidir. 25-OH D Aralıkları en iyi konsantrasyonunu üzerinde evrensel bir mutabakat Bu amaçlahem her yaştan cinsiyetler yerine 25-OH D için toplum tabanlı referans aralıkları için geçerli klinik karar değerleri, büyük bir çalışma dayanmalıdır var serum D vitamini düzeyleri ile intakt PTH arasındaki ilişkiyi inceledi. IPTH için bir plato ~ 30 ng/ml4görüldü. ~ 30 ng / ml 25- OH D gelinceye kadar Benzer şekilde, kalsiyum (Ca) soğurmaartan 25- OH D seviyesi ile artmaktadır. Optimal Ca emilimini 25-OH D 30 ng/ml 5 aşandüzeyleri gerektirir. Diyet, günün saati, güneş ışığı, year6 mevsimi, coğrafi location7, age8, güneş kremi ve / veya koruyucu clothing 9, 10 ve deri kullanımı: 25- OH D durumda, değerler etkileyebilecek pek çok başka faktörler de var pigmentation 11. Böylece, görünüşte sağlıklı bireylerden oluşan bir örneklem grubundan referans aralığı kurmak için ideal bir yol değildir. ABD Ulusal Osteoporoz Vakfı düzeyi önerir> 30 ng / kemik health12 korumak için ml.benzer şekilde, ABD Ulusal Böbrek Vakfı yetersiz veya deficient13 olmak düzeyleri <30ng / ml düşünmektedir. Mevcut literatür itibaren, 25-OH D düzeyi için öneriler şunlardır: ARALIK Eksik <25 <10 Yetersiz Yeterli Potansiyel intoksitasyon >250 >100 Aşağıdaki aralığı IDS 25-Hidroksi Vitamin D EIA kiti kullanılarak tespit edilmiş ve yalnızcayönlendirme için sağlanmıştır. Her laboratuvar kendi yerel nüfus için aralıklarını belirlemelidir. Normal yetişkin 47,7-144 nmol / L (n = 36) Doc: AC-57PL-A Issue: January 2012