Çiğ, işlenmiş ve karışık et, süt ve plazmada tür içeriğinin kalitatif tespiti için F.A.S.T. IMMUNOSTICK ET TÜRLERİ TARAMA KİTİ

Transkript

1 Çiğ, işlenmiş ve karışık et, süt ve plazmada tür içeriğinin kalitatif tespiti için F.A.S.T. IMMUNOSTICK ET TÜRLERİ TARAMA KİTİ

2 İÇERİK BÖLÜM SAYFA NUMARASI 1 2 F.A.S.T (FOOD ANALYTE SCREENING TESTS) 2 2 KİT İÇERİKLERİ 3 2 YÖNTEM NOTLARI 2 SAKLAMA 2 DAMLALIKLI ŞİŞELER 2 ÖRNEK/REAKTİF EKLEME 3 KARIŞTIRMA 3 ZAMANLAMA 3 YIKAMA 3 REAKTİF RENKLENDİRME 3 RENK STABİLİTESİ 4 3 F.A.S.T. TEST YÖNTEMİ 5 3 TEST PROSEDÜRÜ 6 4 KONTROLLERİN KULLANIMI 7 5 SORUN GİDERME 1

3 1. F.A.S.T. (GIDA ANALİT TARAMA TESTLERİ) aşağıdaki türler için kullanılabilir: Kırmızı: İnek (Kat No: B) Turuncu: At (Kat No: Y) Sarı: Domuz (Kat No: W) Yeşil: Koyun (Kat No: U) Mavi: Kümes hayvanı (Kat No: S) Lila: Tavşan* (Kat No: J) Gri: Kanguru (Kat No: G) (Yok): Buffalo* (Kat No: P) Beyaz: Keçi* (Kat No: M) Pembe: Tavuk* (Kat No: K) Kahverengi: Hindi* (Kat No: H) Yukarıda listelenen Katalog numaralarına göre ilgili türler için 5 test paketine sahiptir. F.A.S.T. Kitleri Ürün Prospektüsü, Çalışma Kağıdı, ABTS Konsantrate, Stop Solüsyonu ve 25 tek kullanımlık Pasteur Pipetler içeren bir Aksesuar Paketi ile 5 test (25 test gibi) paketinden oluşur. Bu nedenle, tek veya karışık tür kitler tür paketlerinin herhangi bir kombinasyonu şeklinde sipariş edilebilir (*Özel üretim - lütfen sorun). Ayrıca bulunan: FAST Immunostick rakları (Kat. No Q) test sırasında 40 tüp kadar alır. 2. KIT İÇERİKLERİ: 2-8 O C de SAKLAYIN. A. F.A.S.T. IMMUNOSTICKS: Stabilize ve koruyucu tampon solüsyonu içinde türe spesifik Kaptür Reaktif ile kaplı beyaz bir plastik "paddle" içeren renk-kodlu tüplerin her biridir. Tüp kapakları test tipine göre renkli kodlanmıştır (yukarıya bakınız). DİK TUTARAK SAKLAYIN. B. ENZİM REAKTİFİ: Türe spesifik Enzim Reaktifi içeren renk kodlu tüplerdir. C. RENK GELİŞTİRME BUFFERI tüpleri (renk kodu olmayan). D. ABTS KONSENTRATE: Konsantere Renk Reaktif (sulu ABTS) içeren bir 5 ml damlalıklı şişedir. E. STOP SOLÜSYONU: Sulu sodyum florür içeren bir 10ml damlalıklı şişedir. F. GEREKLİ fakat sağlanmayan: TEMİZ (tercihen tek kullanımlık) cam veya plastik kaplar ya da örnek ekstraksiyonu için stomacher çantalar. 3. YÖNTEM NOTLARI SAKLAMA: RENK GELİŞTİRME BUFFER tüpleri hariç tüm reaktifler ve ABTS KONSANTRE, TEST YÖNTEMİ inde özetlendiği gibi "kullanıma hazır" olarak verilir; kullanılmadığında buzdolabında saklanmalıdır fakat kullanım öncesi oda sıcaklığına getirilmelidir. DAMLALIKLI ŞİŞELER: Kapağı çıkarın ve dikkatlice ters düz ederek ve hafifçe sallayarak adım-adım eklemeleri ekleyin böylece nozılın ucunda yavaşça bir damla oluşur ve uygun tüpün içine düşer. Tek bir damla ABTS KONSANTRE için gereklidir; STOP SOLÜSYONU için ise dört damla gereklidir. ÖRNEK/REAKTİF EKLEMELERİ: Damla-damla eklemeler basit şekilde burada özetlenmiştir; eğer tercih edilirse, mikro pipetler örnek ekstresi 200μl; Pozitif Kontrol solüsyonları 750 μl; ABTS Konsentrate 40μl; Stop Solüsyonu 200μl gibi eklemeler için 2

4 kullanılabilir. Bu pipetlerin kullanımı test sonuçlarının hem doğruluğu hem de hassasiyetini artıracaktır. KARIŞTIRMA: Test performansı eğer tüp içerikleri karışıksa artar. Karıştırma tüp kapağı 3-4 kez vidalanarak ve vidası gevşetilerek yapılır. Herhangi bir aşamada tüp ters düz EDİLMEZ çünkü bu vidalı kapakta reaktiflerin kalmasına neden olur ve normal yıkama sırasında kapakların çıkarılması için zor olabilir. ZAMANLAMA: Doğru zamanlama daha tekrarlanabilir sonuçlar verir ve gün-gün ve çalışma değişimini azaltır. 10 dakika devamlı zamanlama çoğu durumda yeterli olacaktır, ancak eğer test normal oda sıcaklığı (19-21 C) altında yapılacaksa, daha uzun süre (20 dakika) inkübasyon süresi kullanmak gerekebilir. YIKAMA: Musluk suyu ile soğuk kullanarak yıkayın; tüm beyaz plastik yüzeyler, özellikle karıştırıcı kanadın yüzü iyice yıkanır. Yıkama süresi optimize edilmiş ve kısaltılmış olmamalıdır ama daha uzun yıkama süresi sonuçları etkilemez. RENK REAKTİFİ: Renk Geliştirme Reaktifi (CDR) bu çalışmada kullanılan her RENK GELİŞTİRME TAMPON tüpüne ABTS KONSANTRE bir damla ekleyerek (ilk eklemeler başlamadan hemen önce) hazırlanmalıdır. Tüpleri tekrar kapatın; eğer spektrofotometrik protokol kullanılacaksa (aşağıda bakın) CDR tüplerinden birini 414nm (ABS) de okuyun. RENK KARARLILIĞI: Stop Solüsyonu eklenmesinden sonra, enzim aktivitesi neredeyse durur ve renk 2-3 gün boyunca stabildir. Eğer renk ölçümü gerekiyorsa ama mümkün değilse "onsite", tüpler kapakları kapalı olarak saklanmalıdır. 4. F.A.S.T. TEST YÖNTEMİ Örnek Hazırlama: Örnek homojenliği test sonuçlarını arttıracaktır. Dondurulmuş talaş örnekleri, daha önce kıyılmış, karışık veya benzer diğer malzemeler için başka hazırlığa gerek yoktur; bozulmamış et ekstraksiyon işlemini daha iyi yapmak için kıyılmalı veya ince doğranmış olmalıdır. Süte ön-dilüsyon yapılmaz ve kaptür reaktif tüpe doğrudan eklenebilir. 1. Yaklaşık 10 kat suya uygun bir örnek ekleyin ve iyice karıştırın. Alternatif olarak örnek kıyılmış olabilir ve güçlü bir plastik torba içine su ile "stomached" yapılabilir dakika boyunca çökmesi için ekstre edin. Sıvı bir tabaka örneğin üstünde görünür veya çökebilen veya çökemeyen ince bulamaç elde edilecektir. Bu sıvı / bulamaç "örnek ekstrat" dir. 5. TEST PROSEDÜRÜ 1. Immunosticks, Enzim Reaktif ve Tampon tüplerinin kombinasyonu gerekli sayıda ve türde seçin. 2. Yeterli örnek tespitini sağlamak için Immunostick kapakları işaretleyin. 3. Gerekli sayıda CDR tüplere bir damla ABTS Konsantre ekleyerek Renk Geliştirme Reaktifi (CDR) hazırlayın; kapağı tekrar kapatın. 4. İlk Immunostick tüpün kapağını sökün ve temiz bir tek pipet kullanarak tüp içinde sıvıya 5-6 damla örnek ekstratı ekleyin. Karıştırıcı kanadı takın ve 3-4 kez kapağı çevirerek içeriğini karıştırın; kapağı sıkıca kapatın. 5.Eğer aynı ekstrat diğer türler için test edilecekse, belirli aralıklarla yukarıda 4. adımdaki gibi diğer (farklı renk-kod) Immunostick tüplere eklemeleri tekrar edin. Pipeti atın. 6. Immunostick tüplere başka örnek ekstratları ekleyin dakika boyunca kalması için ilk tüpü bırakın. 3

5 8. İlk karıştırıcı kanadı alın ve 10 saniye yıkayın; fazla su uzaklaştırmak için çalkalayın. Uygun bir (aynı renk kodu) Enzim Reaktif tüpüne yıkanmış karıştırıcı kanadı takın; karıştırmak için kapağı döndürün. 9. Tüm tüpleri dakikalık aralıklarla tekrarlayın dakika boyunca karıştırıcı kanatları Enzim Reaktif tüplerde bekletin. 11. İlk karıştırıcı kanadı alın ve 30 saniye yıkayın; fazla su uzaklaştırmak için çalkalayın. Yıkanmış karıştırıcı kanat içinde hazırlanmış bir CDR vidalı tüpten (renk kodu yok) kapağı çıkarın. 12. Tüm tüpleri dakikalık aralıklarla tekrarlayın dakika boyunca karıştırıcı kanatları CDR içinde bekletin. 14. OPSİYONEL: Dakikalık aralıklarla tüm tüplere Stop Solüsyonundan dört damla ekleyin. Renk gelişimini ve eşit olarak renk dağılımını durdurmak için iyice karıştırın. 15. Pozitif bir sonuç gösteren göze çarpan renk değişimi için tüpleri (açık / çok açık yeşil ile koyu yeşil solüsyonundan) inceleyin. Sonuçları ("+" veya "-" olarak) sağlanan çalışma sayfasına kaydedin. OPSİYONEL: Eğer gerekirse, spektrofotometre kullanarak solüsyonun absorbansı ölçülür ve sonuç kantitatif tespit edilir. 16. Suyu blank gibi kullanarak 414nm de sıfıra spektrofotometreyi ayarlayın. 17. Temiz bir küvet kullanarak, ölçün ve BİR CDR tüpün absorbansını ölçün ve kaydedin - yukarıda 3. adıma bakın. Bu Enzim Reaktif ile inkübasyonu sırasında en uygun şekilde yapılır,10. adımda yukarıda (Daha sonra kullanılabilir diye Renk Geliştirme Reaktifini tüplerinde DEĞİŞTİRİN). 18. Bilinmeyen örneklerin absorbansını ölçün ve sağlanan çalışma sayfasına kaydedin. 3-5 kez den daha fazla absorbansa sahip olan Renk Geliştirme Reaktifi en az % 1-2 oranında ilgili etten içermelidir. FAST Çiğ Et Test Kitleri ile kullanmak için pozitif Kontroller: Pozitif Kontrolü (İnek / At / Domuz / Koyun / Tavuk için) (Kat No E) Tavşan Kat No T Manda Kat No B Keçi Kat No S Kanguru Kat No Z Hindi Kat No D Bu reaktiflerin kullanımı yöntemin uygun Kalite Kontrolünü (2 test için yeterli Kontrol ) sağlamaya yardımcı olur. Homolog tür kontroller (örneğin İnek / At / Domuz / Koyun / Tavuk / Kümes hayvanı F.A.S.T. testlerinde Pozitif Kontrol, Tavşan test vb de Tavşan Kontrol) hem çalışma tekniği hem de reaktif performansını kabul edilebilir olarak gösteren pozitif bir yanıt (yeşil renk ) verecektir. Heterolog kontrollerin testi (örneğin Tavşan, Keçi gibi testlerde Pozitif Kontrol, diğer F.A.S.T. testlerinde Tavşan Kontrol) yıkama prosedürünü yeterince ayrıntılı olarak gösteren bir negatif sonuç (renkte değişiklik çok az yada yok; CDR in absorbansı 3 kez den daha az) her zaman elde edilmelidir. 6. KONTROLLERİN KULLANIMI 6.1 Test Yönteminin (yukarıda 4-6. da) örnek ekleme adımında aşağıdaki gibi bilinmeyen bir örnek ekstratı yerine Pozitif Kontrol kullanın:- 6.2 İlgili F.A.S.T. Immunostick ın vidalı kapağı/karıştırıcı kanadını çıkarın ve sıvı içeriğini dökün. 4

6 6.3 Tüpe damla (750μl) Kontrol ekleyin ve karıştırıcı kanadı tekrar takın kez kapağı döndürerek içeriği karıştırın; kapağı sıkıca kapatın. Yukarıda açıklandığı gibi testin kalanına devam edin. 7. SORUN GİDERME 7.1 Laboratuar ve / veya belirlenen çalışma alanı (lar) ve tüm ekipmanların bir yöntemden diğerine yada bir örnekten diğerine çapraz bulaşma olasılığını azaltmak için iyice temizlenmiş olduğundan emin olun. 7.2 Tüm ekipmanların belirli aralıklarla uygun olarak korunmuş olduğundan/kontrol edilmiş olduğundan ve kalibre edilmiş olduğundan emin olun. 7.3 Plaka çalkalayıcı (kullanılıyorsa) r.p.m de ayarlanmalıdır. Bu ayarlarda kuyu içeriği çalkalanır fakat kuyunun kenarına yaklaşmaz. Çalkalayıcı hızı çok yavaşsa, OD450 düzeyleri düşük olabilir. Eğer çok yüksekse, beklenmeyen durum oluşabilir. 7.4 Plaka okuyucu / spektrofotometre nin, eğer kullanılırsa, doğru dalga boyuna ayarlanmış olduğundan ve düzenli olarak kalibre edildiğinden emin olun. İstenmeyen bir durumda sorunlar devam ederse ve /veya sorun gidermek için daha fazla yardıma ihtiyacınız olursa, Tepnel Biosystems veya yerel distribütör ile temasa geçin ve mümkünse aşağıdaki bilgileri sağlayın: Kit tipi ve Lot numarası. Test edilecek örneklerin kısa özeti ve hazırlama/ekstraksiyon yöntemleri. Kullanılan Immunoassay ekipmanlar; laboratuvar sıcaklığı. Eğer uygunsa veri azaltma çıktısı dahil ham veri kopyaları. Bu Tepnel in derhal ve tamamen ihtiyaçlarınıza cevap verebilmesini sağlar. OTHER TEST KITS AVAILABLE FROM TEPNEL BioSystems Either directly or via your local Distributor: BioKits Speciation Testing Kits (Raw or Cooked; ELISA; PCR) BioKits Protein Allergen/Additive Kits (ELISA; Rapid; PCR) BioKits Mycotoxin Analysis Kits (ELISA) DISTRIBUTED BY: TEPNEL BioSystems Limited 5