MEME VE KOLON KANSERİ HÜCRELERİ İLE OLUŞAN ANJİYOGENEZİN PROPOLİS YOLUYLA İNHİBİSYONU PROF.DR. ÇİĞDEM YENİSEY ADÜ TIP FAK. TIBBİ BİYOKİMYA AD

Ebat: px

Şu sayfadan göstermeyi başlat:

Download "MEME VE KOLON KANSERİ HÜCRELERİ İLE OLUŞAN ANJİYOGENEZİN PROPOLİS YOLUYLA İNHİBİSYONU PROF.DR. ÇİĞDEM YENİSEY ADÜ TIP FAK. TIBBİ BİYOKİMYA AD"

Gonca Uzer
8 yıl önce
İzleme sayısı:

1 MEME VE KOLON KANSERİ HÜCRELERİ İLE OLUŞAN ANJİYOGENEZİN PROPOLİS YOLUYLA İNHİBİSYONU PROF.DR. ÇİĞDEM YENİSEY ADÜ TIP FAK. TIBBİ BİYOKİMYA AD

2 GİRİŞ Tümörlerin yayılımının ve uzak organlara metastaz yapmasının tek yolu yeni kan damarlarının oluşumu olup, bu işlem anjiyogenez olarak adlandırılmaktadır. Yeni kan damarlarının oluşumu olmadan tümörler 1-2 mm den daha fazla büyüyememektedirler.

işlem anjiyogenez olarak adlandırılmaktadır.

3 ANJİOGENEZİN KANSER TEDAVİSİNDEKİ ÖNEMİ Kanser tedavisinde kullanılan ilaçlar, proliferasyona uğrayan hücreleri hızlı bir şekilde öldürmek üzere oluşturulmuşlardır. İlaç tedavilerinin normal dokular üzerindeki toksisitesi gibi yan etkilerinden dolayı, bu ilaçların yapımında antitümör etkileri bazen sınırlı tutulmaktadır. Çünkü, normal hücrelerin sabit bir yenilenme hızı olup, çoğalmamaktadırlar. Kılcal damarların büyümesinin, başka bir deyişle anjiyogenezin kontrol edilmesi, yakın gelecekte kötü huylu tümörlerin tedavisini sağlayacaktır.

İlaç tedavilerinin normal dokular üzerindeki toksisitesi gibi yan etkilerinden dolayı, bu ilaçların yapımında antitümör etkileri bazen

4 Çalışmamızda, propolisin anti-tümöral ve apoptotik etkileri hücresel düzeyde incelenmiştir. İlk olarak, propolisin MCF-7 ve Caco-2 hücre hatlarının, HUVEC hücrelerinde oluşturduğu anjiyogenezi nasıl etkilediğini gösterdik. Ayrıca, kanserli hücrelerin yayılımında ve metastaz oluşturmasında çok önemli bir basamak olan endotel hücrelerinde MCF-7 ve Caco-2 hücrelerinin oluşturduğu proliferasyonun propolis ile inhibisyonu saptandı. Tümör hücrelerinin canlılığının propolis ile nasıl etkilendiği saptandı.

Soğukta sert ve kırılgan, sıcakta ise yumuşak ve yapışkan

5 Propolis aromatik hoş kokulu ve kaynağına bağlı olarak sarıyeşilden koyu kahverengiye kadar değişen renktedir. Soğukta sert ve kırılgan, sıcakta ise yumuşak ve yapışkan bir yapısı vardır. Propolis C arasında erime noktasına sahiptir

6 PROPOLİS NEDİR? Propolisin kimyasal bileşimi, arıların dolaştığı her bir bölgenin bitki örtüsündeki çeşitlilikten dolayı büyük ölçüde değişken ve komplekstir. Propolisin en önemli kaynakları; kavak, kızılağaç, huş ağacı, kestane, dişbudak, çam ve söğüt türleri gibi bitkilerdir.

bitki örtüsündeki çeşitlilikten dolayı büyük ölçüde değişken ve

7 PROPOLİS NEDİR? Propolisi arılar ağaçların tomurcuklarından toplar ağızlarında sindirim enzimleri ile çiğner ve balmumu eklerler. Propolisi iki amaç için kullanırlar; 1. Kovanlarının ışık gören deliklerinin kapatılması 2. Kovanlarını böceklerden ve mikroorganizmaların saldırılarından korumak

8 HUVEC (Human Umblical Vein Endothelial Cell) Hücreleri MCF-7 (meme kanseri) Hücreleri Caco-2 (kolon kanseri) Hücreleri Caco-2 hücreleri HUVEC hücreleri MCF-7 hücreleri

9 MCF-7 ve Caco-2 hücrelerinin ortam besiyerleri hazırlandı. Propolisin farklı konsantrasyonları (0.063, 0.125, 0.25, 0.5 ve 1.0 mg/ml) ile MCF-7 ve Caco-2 hücrelerinin ortam besiyerleri (Conditioned Medium, CM) hazırlandı.

10 Apoptotik hücreler boyayı sitoplazmalarına alırken, apoptoza uğramayan hücreler boyayı almamaktadır. Hücreler boyandıktan sonra, her bir kuyucuğun, farklı alanlardaki resimleri çekildi. Hücreleri saymadık, çünkü hücreler birbirlerine yapışmış ve küme oluşturmuş durumda idi. Bunun yerine, kit içinde bulunan boya salıcı madde kullanılarak, kuyucuklardaki apoptoza uğramış hücrelerin aldığı boyaların çözünmesiyle oluşan rengin absorbansı ELISA plak okuyucuda 550 nm de ölçüldü. Hücre hatlarında apoptozun saptanması APOPercentage Apoptosis Assay (biocolor life science assays, Biocolor Ltd, 8 Meadowbank Road, Carrickfergus, County Antrim, BT38 8YF, UK) ticari kit yöntemi ile saptanmıştır.

Bunun yerine, kit içinde bulunan boya salıcı madde kullanılarak, kuyucuklardaki apoptoza uğramış hücrelerin aldığı boyaların çözünmesiyle oluşan rengin absorbansı ELISA

Tümör hücreleri ile indüklenen anjiyogenezin Propolis yoluyla inhibisyonunun göstermek için, hem tümör hücrelerinden elde edilen ortam besiyerleri (Conditioned Medium) hem de tümör hücrelerinin

11 Tümör hücreleri ile indüklenen anjiyogenezin Propolis yoluyla inhibisyonunun göstermek için, hem tümör hücrelerinden elde edilen ortam besiyerleri (Conditioned Medium) hem de tümör hücrelerinin kendisinden yararlanılmıştır. Tümör hücreleri ve tümör ortam besi yeri kullanılarak endotel hücrelerinin kapiller damarları oluşturması Grant ve ark. (2002) metodu kullanılarak gerçekleştirilmiştir

12 İN VİTRO ANJİYOGENEZ MODELİ

hücrelerinde oluşturduğu proliferasyona etkisi gösterildi.

13 Tümör hücrelerinin ortam besiyerlerinin farklı miktarları ile HUVEC hücrelerini nasıl proliferasyona uğrattıklarını saptadık. Ayrıca, tümör hücrelerini farklı konsantrasyonlarda propolis ile muamele edip, propolisin tümör hücreleri yoluyla HUVEC hücrelerinde oluşturduğu proliferasyona etkisi gösterildi. Proliferasyonun saptanablmesi için Promega Firmasına ait ticari kit kullanılmıştır (CellQNon- Radioactive Cell Proliferation Assay, Promega Corporation, 2800 Woods Hollow Road- Madison, WI, USA).

14 MCF-7 ve Caco-2 hücreleri Propolisin artan konsantrasyonları ile muamele edildi ve kuyucuklardaki absorbanslar fluorometre ile ölçüldü. Hücre canlılığının saptanması için ticari kit kullanıldı. (Calcein AM Cell Viability Assay Kit, Biotium, Inc Investment Blvd. Suite 8, Hayward, CA 94545, USA. Katalog Numarası 30026).

Hücre canlılığının saptanması için ticari kit kullanıldı.

BULGULAR (in vitro anjiyogenez) HUVEC +MCF-7 (50.

15 BULGULAR (in vitro anjiyogenez) HUVEC +MCF-7 ( hücre/ml) MCF mg/ml MCF mg/ml Propolis Propolis

BULGULAR (in vitro anjiyogenez) HUVEC + Caco-2 (50.

16 BULGULAR (in vitro anjiyogenez) HUVEC + Caco-2 ( hücre/ml) Caco mg/ml Caco mg/ml Propolis Propolis

17 BULGULAR (MCF-7 ve Apoptoz) Boya çözeltisi konduğunda MCF-7 hücrelerinin bulunduğu kuyucuğun resmi. Boya çözeltisi konduğunda 1.0 mg/ml propolis + MCF-7 hücrelerinin bulunduğu kuyucuğun resmi

BULGULAR (MCF-7 ve Apoptoz) MCF-7 (Kontrol) 0.

18 BULGULAR (MCF-7 ve Apoptoz) MCF-7 (Kontrol) mg/ml Propolis uygulanmış MCF-7 hücreleri mg/ml Propolis uygulanmış MCF-7 hücreleri 0.25 mg/ml Propolis uygulanmış MCF-7 hücreleri

19 BULGULAR (MCF-7 ve Apoptoz) 0.5 mg/ml Propolis uygulanmış MCF-7 hücreleri 1.0 mg/ml Propolis uygulanmış MCF-7 hücreleri

Caco-2 (Kontrol) 0.063 mg/ml Propolis uygulanmış Caco-2 hücreleri 0.

20 Caco-2 (Kontrol) mg/ml Propolis uygulanmış Caco-2 hücreleri mg/ml Propolis uygulanmış Caco-2 hücreleri 0.25 mg/ml Propolis uygulanmış Caco-2 hücreleri

21 0.5 mg/ml Propolis uygulanmış Caco-2 hücreleri 1.0 mg/ml Propolis uygulanmış Caco-2 hücreleri

Abs 550 nm BULGULAR (MCF-7 Hücrelerinin Propolis ile Apoptozu) 1,2 1 1 0,8 0,6 0,5

22 Abs 550 nm BULGULAR (MCF-7 Hücrelerinin Propolis ile Apoptozu) 1, ,8 0,6 0,5 Propolis (mg/ml) MCF-7 ( hücre) 0,4 0,2 0,062 0,063 0,143 0,125 0,221 0,25 0,112 0,092 0,07 0

Abs 550 nm BULGULAR (Caco-2 Hücrelerinin Propolis ile Apoptozu) 1,2 1 1 0,8 0,6 0,4 0,3

23 Abs 550 nm BULGULAR (Caco-2 Hücrelerinin Propolis ile Apoptozu) 1, ,8 0,6 0,4 0,3 0,285 0,25 0,5 Propolis (mg/ml) Caco-2 ( hücre) 0,2 0,062 0,063 0,125 0,104 0,093 0,127 0

24 Abs 490 nm BULGULAR (Tümör Hücreleri Ortam Besiyerlerinin HUVEC Hücrelerinin Proliferasyonuna Etkisi) 3,5 3 3,014 2,5 2 1,5 1 0,935 1,165 1,503 1,817 1,717 0,853 0,87 0,992 1,792 1,903 0,5 0 HUVEC (Kontrol) 10 µl 20 µl 30 µl 40 µl 50 µl 10 µl 20 µl 30 µl 40 µl 50 µl MCF-7 ortam besiyeri Caco-2 ortam besiyeri

Absorbans 490 nm 2 1,8 1,836 1,763 1,6 1,4 1,2 1 0,8 0,6 0,683 1,224 1,021 1,146 1,083 0,72 1,174 1,135 1,06 0,4 0,2 0 HUVEC (kontrol) 0.

25 Absorbans 490 nm 2 1,8 1,836 1,763 1,6 1,4 1,2 1 0,8 0,6 0,683 1,224 1,021 1,146 1,083 0,72 1,174 1,135 1,06 0,4 0,2 0 HUVEC (kontrol) mg/ml mg/ml 0.25 mg/ml 0.5 mg/ml 1.0 mg/ml mg/ml mg/ml 0.25 mg/ml 0.5 mg/ml 1.0 mg/ml MCF-7 hücreleri Caco-2 hücreleri

Abs 485-530 BULGULAR (MCF-7 Hücrelerinin Canlılığına Propolisin

26 Abs BULGULAR (MCF-7 Hücrelerinin Canlılığına Propolisin Etkisi) , ,55 34, , ,92 1,12

27 Abs nm 5 4,5 4 4,7 3,89 3,78 3,5 3 2,87 2,5 2 1,5 1 0,5 0 1,39 1,23

28 SONUÇLAR Sonuç olarak; Semt pazarlarında satılmaya başlanan ve halk arasında da kullanımı gittikçe yaygınlaşan propolisin, sağlıklı hücrelere zarar vermeden kanserli hücreler üzerindeki rolünün gösterilmiş olmasının çok önemli olduğunu, tedavi edici rolünün daha fazla kanser hücrelerinde denenerek saptanması ve kanser hücreleri üzerindeki bu inhibe edici özelliğin mekanizmasının aydınlatılmasının gerekli olduğu düşüncesindeyiz.

29 2. Tümör hücrelerinden ve onların propolis ile muamele edilmesinden elde edilen ortam besiyerlerinde apoptozun gerçekleşmesinde etkili olan kaspazların aktiviteleri saptanarak apoptozun mekanizmasının moleküler düzeyde anlaşılabilmesi mümkün olacaktır. 1. Propolis yoluyla, apoptozun, proliferasyonun, tüpe benzer yapıların oluşmasının engellenmesi ve hücre canlılığının inhibisyonu ile ilgili olarak propolis bileşiğinin çeşitli kanser hücrelerinde tedavi edici en düşük dozunun kullanılması ile ilgili çalışmaların yapılmasının zorunlu olduğu düşünülmektedir.

30 3. Farklı kanser türlerinde aynı mekanizmalar kullanılarak yeni kan damarları oluşumunda en önemli basamaklardan biri olan HUVEC hücrelerinin invazyonunun propolis yolu ile incelenmesi, yeni kan damarları oluşumunun mekanizmasının aydınlatılmasında önemli olabileceğini düşünmekteyiz.

31 SABRINIZ İÇİN TEŞEKKÜR EDERİM ÇALIŞMA EKİBİMİZ Prof.Dr. Çiğdem YENİSEY (ADÜ Tıp Fak. Tıbbi Biyokimya AD) Prof.Dr. Orhan DEĞER (KTÜ Tıp Fak. Tıbbi Biyokimya AD) Araş. Gör.Dr. Naciye KILIÇARSLAN (ADÜ Tıp Fak. Tıbbi Biyokimya AD) Araş.Gör.Dr. Tuba Çakıroğlu (KTÜ Tıp Fak. Tıbbi Mikrobiyoloji AD)

32 ÖNERİLERİMİZ Araştırmalarımıza ışığında, in vivo çalışmaların da yapılması ve propolisin kanseri önleyici ve/veya tedavi edici bir bileşik olarak kullanılması mümkün olabilecektir. Propolisin bu tür antianjiyogenik ve apoptotik özelliklerinin daha ileri düzeyde incelenmesi gerekli olup, yakın gelecekte kanserlerin tıbbi olarak önlenmesi ve tedavi edilmesinde ilerleme kaydedileceğini ummaktayız.

Benzer belgeler

SERVİKAL KANSER: SİLYMARİN VEYA KEMOTERAPİ

SERVİKAL KANSER: SİLYMARİN VEYA KEMOTERAPİ Burçin İrem ABAS¹, Çiğdem YENİSEY¹ ¹: Adnan Menderes Üniversitesi, Tıp Fakültesi,Tıbbi Biyokimya AD, AYDIN GİRİŞ Silymarin (SM) deve dikeni bitkisinin (milk thistle