PROSPEKTÜS. Kardiyak Troponin I (ctni) Test (Sadece in vitro Diagnostik kullanım için)

Transkript

1 Kardiyak Troponin I (ctni) Test (Sadece in vitro Diagnostik kullanım için) Versiyon No 2.0 Yayın tarihi 04 Mart 2010 Kullanım amacı The ReLIA TM ctni testi, akut miyokard infarktüs (AMI) tanısına yardımcı olan serum/ plazma/ insan tam kanında ctni konsantrasyonunu ölçmek için tasarlanmış bir in vitro diagnostik testtir. Özet ve Açıklama Kardiyak troponin I(cTnI)kardiyak doku hücrelerinde lokalize olan bir proteindir ve ctnc (Cardiac troponin C) ve ctnt (Cardiac troponin T) ile bir kompleks oluşturur. ctni, C ve T bağımsız yapı ve fonksiyonlara sahiptir. Kalsiyum iyonu tarafından yönlendirilen ctni, aktin ve miyozinin etkileşimine katılır ve kalp kasının kasılmasını ve gevşemesini düzenler. ctni sadece miyokardda bulunur ve bu nedenle kardiyak zararın erken tespiti için mükemmel bir göstergedir. Kalp kası hücrelerinin zarları sağlamsa, ctni kan dolaşımına girmez. Ancak, kalp kas hücreleri zarar gördüğünde ve zarlar artık sağlam olmadığında, ctni kan dolaşımına girecektir. AMI (akut miyokard infarktüsü) vakalarında kan dolaşımında ctni konsantrasyonu 4-6 saat içinde artacak ve yaklaşık 8-16 saat içinde pik yapacaktır. AMI dan sonra kanda ctni in konsantrasyonu kalp kası hasar derecesiyle doğrudan orantılıdır. ctni, normal seviyeye dönmeden önce yaklaşık 6-10 gün yüksek değerde kalır. Bu, uzun bir zaman dilimi içinde miyokard infarktüsünün tespit edilmesini sağlar. ctni, yüksek spesifitesi nedeniyle AMI tanısında altın standarttır. Test prensibi ReLIA ctni testi çift antikor sandviç formatında çift yönlü lateral flow immunoassaydir. Test sırasında stripi ıslatmak amacıyla Port 1 e buffer A eklenir. Port 2 ye numune eklendiğinde numune içindeki analit konjugat pat üzerindeki anti ctni immunogold konjugat ile reaksiyona girer ve immunokompleks oluşturur sonra nitroselüloz bant üzerinde ilerler. İmmunogold kompleks test bandına ulaştığında önceden nitroselüloz üzerine sabitlenmiş ctni antikorları ile reakasiyona girer. Kandaki ctni miktarı arttıkça test bandına daha fazla immunogold kompleks bağlanır. Test yapılırken kontrol konjugat, kolloid altın etiketli DNP-BSA, kromatografi tarafından numune ile nitroselüloz üzerine akıtılır. DNP-BSA altın, kontrol band 1 ve kontrol band 2 in yerlerinde nitroselüloz üzerine kaplı anti-dnp antikor ile reaksiyona girer, sonra kontrol bantları için sabitlenir. Kolloidal altın rengi kırmızı olduğu için, DNP BSA altının immün kompleksi kontrol band 1 de anti-dnp e bağlanır ve nitroselüloz üzerinde kontrol band 2 kırmızı renk olarak görünür. ctni yokluğunda, sadece kontrol band 1 ve kontrol band 2 oluşur. ctni varlığında, kırmızı bir test bandı oluşur. 1

2 Reaksiyon tamamlandığında, ReLIA Immunoassay Diagnostik Cihaz (SSJ-2) bantların DR sini (yansıma yoğunluğu) analiz eder ve RI ları (test ve kontrol bantlarının relative şiddeti) hesaplar. Sonra, cihaz içinde programlanan standart eğriye dayalı analitin konsantrasyonu cihaz tarafından belirlenecek ve sonucu (ng/ml) görüntülenecektir. Test band Control band 2 Control band 1 Test type C 2 ctnl C 1 ctni Port 1 Port 2 Port 1 Port 2 Assay window Barcode Sağlanan Kit Bileşenleri Test Kasetleri 20 Buffer-A 1 (3.5mL) Ürün eki 1 Buffer-A zararlı olmayan kimyasal bir reaktiftir. [Gerekli fakat sağlanmayan materyaller 1. Tek kullanımlık polipropilen pipet uçlu 40μL ile 120μL arasında hassas pipetörler. 2. ReLIA Immunoassay Diagnostik Cihazı (SSJ-2). Uyarılar ve Önlemler 1. Bu test in vitro diagnostik kullanım içindir. 2. Bu test sadece profesyonel kullanım içindir. 3. Yoğun hemolizli veya lipemi veya ciddi sarılıklı numunelerin kullanılmasına izin verilmez. 4. Zarar görmüş veya etiketi belli olmayan veya son kullanım tarihi geçmiş olan kasetleri kullanmayın. 5. Operatör, SSJ-2 cihazının ekran üzerindeki talimatlarını ve bu ürünün prospektüsü izlemelidir. Test bir kez başladığında durdurmayın. Aksi takdirde, teste devam edilemez. Eğer teste yeniden başlanırsa, yeni bir kaset kullanılmalıdır. 6. Geçersiz sonuç veren numuneler tekrar test edilmelidir. 7. Her bir ürün için test tablosu güncellenmelidir. Aksi takdirde yeni lotlu kasetler cihaz tarafından kabul edilmeyecektir. 2

3 8. Kaset sadece tek bir kullanım içindir. Kullanılan kasetler ve numuneler potansiyel olarak biyo-tehlikeli madde olarak ele alınmalıdır. 9. Folyo torbasındaki kurutucuyu yemeyin. 10. Her örnek için tek kullanımlık pipet uçları ve numune şişeleri kullanın. Pipet uçları ve numune şişeleri tek kullanımlık olmalıdır. 11. ReLIA ctni test sonucu koroner hastalığının yüksek olasılıklı mutlak kanıtı olarak kullanılmamalıdır. ctni düzeyi klinik bulgular ve diğer tanısal testler ile birlikte yorumlanmalıdır. Kit saklama ve ürün raf ömrü 1. Kuru bir yerde oda sıcaklığında (15-30 C or F) saklayın. Direk güneş ışığına maruz bırakmayın. 2. Raf ömrü 18 aydır (son kullanım tarihi için üretici tarihi). Örnek için gerekenler 1. Sadece serum veya heparinize ve EDTA.. K 2 plazma / tam kan test edilebilir. 2. Numuneler uygun bir kan toplama cihazında toplanmalıdır. Kontamine olmuş numuneler kullanılmamalıdır. 3. Numuneler toplandıktan sonra hemen test edilmelidir. 4. Serum veya plazma numuneleri hemolizi önlemek için en kısa sürede toplandıktan sonra ayrılmalıdır. Hemolizi yoğun olan numuneler kullanılmamalıdır. 5. Serum / plazma numunelerini 20 C altında saklayın ve bu analit bozulmasına neden olduğu için, numunelerin donma çözülme döngüsünün min. sayısına bağlı olmalıdır. 6. Kullanmadan önce oda sıcaklığında (20-26 C) ısınması için numuneleri bırakın. 7. Yoğun hemoliz veya lipemi veya bilirubin yüksek düzeyli numunelerin kullanılmasına izin verilmez. Test prosedürü Dikkat: Lütfen dikkatle ReLIA Immunoassay Diagnostik Cihaz (SSJ-2) kullanım kılavuzununu ve testin ürün eklerini okuyun. 1. Numuneler kullanıma başlamadan önce oda sıcaklığına getirilir. 2. ReLIA cihazına (SSJ-2) bağlı bilgisayarı açın, sonra cihazı açın ve kullanım kılavuzunda açıklanan ReLIA yazılımını başlatın. 3. ReLIA ctni test kasetlerini folyo paketlerinden çıkarın. Kaset tepsisini çıkarmak için testi çalıştırmak istiyorsanız bilgisayar ekranında modül simgesini tıklayın (veya modül düğmesine basın). Sonra, tepsi içine kaseti yerleştirin. (Dikkat: Kullanımdan hemen önce ReLIA ctni test kasetleri koruyucu folyo paketinde kapalı tutun. Kasetler açıldığında 1 saat içinde kullanılmalıdır. Eğer sıcaklık 30 C den 3

4 yüksekse ya da yüksek nem koşulları altında ise bir kez açılan folyo paketi hemen kullanılmalıdır) 4. Numune hakkındaki giriş bilgileri için yazılım istemlerini izleyin, sonra "onayla yı tıklayın. (Dikkat: Test tam kansa, bilgisayar ekranında tam kan" seçeneğini seçin.) 5. Kaset tepsisi otomatik olarak dışarı açıldığında, bilgisayar port 1 e 40μL buffer-a eklemesi için operatörü uyaracaktır saniye sonra, kaset tepsisi cihazdan dışarı doğru açılacak ve bilgisayar 100μL serum / plazma veya port 2 e 120μL tam kan numunesi eklemek için operatörü uyaracaktır. Sonra, kaset tepsisi 20 dakika inkübasyon süresi için cihazın içine geri çekilir. 7. Test tamamlandığında, cihaz otomatik olarak sonucu yorumlayacak ve ekranda sonuçlar görüntülenecektir. Atık Biyo-tehlikeli maddelerinin atıkları kurumun uygulamalarına göre atılmalıdır. Tüm malzemeler güvenli ve kabul edilebilir bir şekilde ve tüm federal, eyalet ve yerel gereksinimlere uyarak atılır. Beklenen değer Tespit Aralığı: 0-16 ng/ml. 496 sağlıklı bireylerin yüzde 99 unde ctni konsantrasyonu < 0.15 ng/ml den düşük bulunmuştur. Klinik önem ReLIA ctni diagnostik, AMI hastalar için cut-off değerini 0.15 ng/ml olarak belirlemiştir. ESC/ACC tarafından önerilen Miyokard infarktüsü Teşhis standardına göre, % 99 (ESC / ACC) u teşhis miyokard infarktüsü ve miyokardiyal yaralanma yardımı için referans olarak kullanılır. Sağlıklı bireylerin ctni düzeyleri ReLIA TM ctni testi ile belirlenir: Sağlıklı bireyler Yaş 99% ng/mL Diğer in vitro diagnostik testlerde olduğu gibi, her laboratuar hastanın ctni sonuçlarını diagnostik değerlendirmek için kendi referans aralığını belirlemelidir. Sonuçların yorumlanması 1. ReLIA Immunoassay Diagnostik Cihaz (SSJ-2), otomotik olarak ctni düzeylerini hesaplar ve ng/ml olarak ekranda ctni konsantrasyonunu gösterir. 4

5 2. Test son kullanım tarihini aştığında, cihaz direk olarak Test Süresi bildirecek ve kaseti reddedilecektir. 3. Kontrol bant 1 ve kontrol bant 2 sonuçları ürün özelliklerine uymadığında, cihaz Geçersiz raporu verecektir. Prosedürün limitleri 1. Trigliserit/kolesterol, bilirubin veya hemoglobin (hemolizden kaynaklanan) in yüksek konsantrasyonları nitroselüloz üzerinde kolloidal altın konjugat ve numunenin kromatografisini etkileyebilir ve hatalı sonuçlara neden olabilir. Bu nedenle, ciddi lipemili (trigliseritin konsantrasyonu > 15mmol / L veya kolesterolun konsantrasyonu > 4 mg / ml) ya da yoğun hemolizli (hemoglobinin konsantrasyonu > 6g / L ) ya da ciddi sarılıklı (bilirubinin konsantrasyonu > 4 mg / ml) numunelerin test edilmesine izin vermez. 2. Antikor-antijen reaksiyonları çalıştıran immunotestlerin belli sınırlamaları vardır. Bu testin sonucunu ctni in konsantrasyonunu tam kan / serum / plazma da sadece gösterir ve klinik diagnostik için tek kriter olarak kullanılmamalıdır. Performans özellikleri 1. Duyarlılığı: Ürünün 3 lot ve lot başına 20 kez tekrarlanması sonucuyla hesaplanan ReLIA TM ctni testinin fonksiyonel duyarlılığı 0.1 ng / ml dir. 2. Özgüllüğü: stni (280ng/mL), ctnc (1,000 ng/ml) ve ctnt (1,000 ng/ml) in çapraz-reaktivitesi test edildi ve maddelerin tespit edilen ctni düzeyi tüm <0.1ng/mL dir. 3. Hassasiyet: Lot hassasiyeti içinde, konsantrasyon başına 10 test. ctni (ng/ml) Ortalama SD CV % % 4. Lineerlik: Bir ctni standart seri olarak 8 den 0.1ng/mL e dilute edildi. Her konsantrasyon üç kez test edildi. Regresyon çizgisinin korelasyon katsayısı 0.99 dir. 5

6 Referanslar 1. Panteghini, M, Apple, FS, Christenson, RH, et al., Proposal from IFCC committee on standardization of markers of cardiac damage (C-SMCD): Recommendation on use of biochemical markers of cardiac damage I acute coronary syndromes. Scan J Clin Lab Invest;1999;59 (Suppl 230): Wu, AHB, Apple, FS, Gibler, WB, et al. National academy of clinical biochemistry standards of laboratory practice: recommendations for the use of cardiac markers in coronary artery diseases. Clin Chem; 1999; 45(7): Ravkilde, J, Risk stratification in acute coronary syndrome using cardiac troponin I. Clin Chem; 2000; 46 (4): Datta P., Foster K. and Dasgupta A. Comparison of immunoreactivity of human cardiac troponin I assay toward free and complexed forms of the antigen: implications for assay discordance. Clin Chem; 1999; 45 (12): Reiffert S., Jaquet K., Helimeyer L., Herberg F. Stepwise subunit interaction changes by mono and bisphosphorylation of cardiac troponin I. Biochemistry; 1998; 37: Wu, A.H.B, Biochemical markers of cardiac damage: from traditional enzymes to cardiac-specific proteins. Scan J Clin Lab Invest; 1999; 59(Suppl 230): Wu, A.H.B and Feng, YJ Biochemical differences between ctnt and ctni and their significance for diagnosis of acute coronary syndromes. Eur Heart J; 1998; 19 (Suppl N): N25-N Maynard, SJ, Menown, IB and Adgey, AA, Troponin T and I as cardiac markers in ischemic heart disease. Heart; 2000; 83(4): Mockel, M, Heller Jr., G, Berg, K, et al. The acute coronary syndrome diagnosis and prognostic evaluation by troponin I is influenced by the test system affinity to different troponin complexes. Clin Chem Acta; 2000; 293 (1-2): Giuliani, I, Bertinchant, JP, Granier, C, et al., Determination of cardiac troponin I forms in the blood of patients with acute myocardial infarction and patients receiving crystalloid or cold blood cardioplegia. Clin Chem; 1999; 45(2): Katrukha, A, Bereznikova, A, Filatov, V, Pettersson, K, Esakova, T, et al. Binary troponin I-troponin T complex in serum of patients with myocardial infarction. Clin Chem Lab Med; 1999; 37 (Suppl): S Katrukha, A, Berezbikova, A, Filatov, V and Esakova T, Biochemical factors influencing measurement of cardiac troponin I in serum. Clin Chem Lab Med; 1999; 37(11/12): Morjana, N Degradation of human cardiac troponin I after myocardial infarction. Biotechnol Appl Biochem; 1998 ;28: Solaro, RJ, Protein phosphorylation and the cardiac myofilaments in the heart muscle. 6

7 CRC Press; 1986; Al-Hillawi E, Chilton, D, Trayer, I, and Cummins, P, Phosphorylation-specific antibodies for human cardiac troponin I. Eur J Biochem; 1998; 256: Newma, DJ, Olabian, Y, Bedzyk, WD et al., Impact of antibody specificity and calibration material on the measurement of agreement between methods for cardiac troponin I. Clin Chem; 1999; 45(6): Gerhardt, W, Nordin, G, Herbert, AK et al. Troponin T and I assays show decreased concentration in heparin plasma compared with serum: lower recoveries in early than in late phase of myocardial injury. Clin Chem; 2000;46(6): Apple, FS Clinical and analytical standardization issues confronting cardiac troponin I. Clin Chem; 1999; 45 (1): Merkez: ReLIA Diagnostic Systems, Inc. Address: 1700 Owens Street San Francisco, CA 94158, USA Tel: Fax: Website: ReLIA Biotechnologies (Shenzhen), Inc. Address: 4 th Floor in Building 7, Nanshui Industry Village, 5 th Industrial Road, Shekou, Shenzhen, P. R. CHINA Tel: Fax: Website: Wellkang Ltd t/a Wellkang Tech Consulting Address: Suite B, 29 Harley Street, LONDON W1G 9QR, England, United Kingdom Tel: , Fax: Website: 7

8 Sembol Açıklama Üretici Yetkili temsilci In Vitro Diagnostik Medikal Cihaz Lot Kodu Yıl-Ay-Gün formatında son kullanım tarihler Sıcaklık Sınırı CE Mark Katalog numarası Kullanım sonrası potansiyel biyolojik zarar içerir Tekrar kullanmayın Üretim Tarihi <n> sayısında yeterli testler içerir 8