Revizyon çubuğu, önceki versiyonda yapılan güncellemeleri göstermektedir.

Transkript

1 SYPH Revizyon çubuğu, önceki versiyonda yapılan güncellemeleri göstermektedir. Kullanım Amacı İnsan serumu veya plazmasındaki Treponema pallidum'a spesifik antikorların kalitatif deteksiyonu için enzim immün testi. Enzim immün testi, BEP III Sistemi, BEP 2000 Sistemi veya BEP 2000 Advance System ELİSA işlemcileriyle işlenir. Testin otomatik olmayan şekilde çalışılması da mümkündür. Özet ve Açıklama Sifilis (eş anlamı: frengi), T. pallidum patojeninin neden olduğu enfeksiyon olup çoğunlukla cinsel temas yoluyla bulaşır 1. Hamilelik sırasında gerçekleşen maternal enfeksiyon fetusa bulaşma riski vardır (konjenital sifilis 2 ) Dahası, kan nakli üzerinden bulaşma riski mevcuttur 3. Florid sifilis hastalarında patojen ancak hastalığın erken aşamalarında ve normal olarak primer lezyonun akıntılı sızıntısında tespit edilebilir. Diğer yanda sifilis antikorları enfeksiyondan sadece birkaç hafta sonra tespit edilebilir 1. Sifilisin serolojik tanısı, sık tekrarlayan romatoid faktörler 4, diğer otoantikorlar 5 ve diğer ilgili bakterilerle çapraz reaksiyonlar, özellikle de T. phagedenis ve Borrelia burgdorferi 6 gibi spiroketaller tarafından komplikeleştirilir. Enzygnost Syphilis'in spefikliği bu faktörler tarafından etkisizleştirilmez. Enzygnost Syphilis tüm ilgili antikor sınıflarını tespit eder ve hastalığın her aşamasında yüksek derecede hassasiyet sergiler. Enzygnost Syphilis testinde alınan bir negatif sonuç, bir Treponema enfeksiyonunun varlığını yüksek kesinlik derecesiyle doğrular. Test prosedürü otomatikleştirilebilir ve yüksek hassasiyet ve spesifiklik derecesine sahip olduğundan, Enzygnost Syphilis büyük örnek serilerinin testi için, örneğin kan bankalarında, prenatal bakım programlarında ve yüksek risk gruplarını test ederken uygundur. Enzygnost Syphilis Treponema-pallidum-Hemaglütinasyon Testi (TPHA) ile iyi korelasyon gösterir, örneğin Cellognost Syphilis H Siemens Healthcare Diagnostics. Enzygnost Syphilis, daha önce farklı bir tarama testinde reaktif olan örnekleri (ör. TPHA) doğrulayıcı bir test olarak da kullanmak üzere uygundur, çünkü test Fluorescent Treponemal Antikor Abzorpsion testi (FTA-ABS) ile aynı şekilde iyi bir korelasyon sergiler. Tedavi ve terapötik izleme ihtiyacının değerlendirilmesi için reaktif örnekler, Siemens veya FTA-ABS/IgM testi gibi IgM spesifik VDRL (Venereal Disease Research Laboratory testi ) testinde tekrar test edilmelidir 7. Yöntem Prensibi Enzygnost Syphilis tek adımda uygulanan bir kompetitif enzim immün testidir. T. pallidumspesifik antikorlar (IgG ve/veya IgM) ve POD-atiketli antikorlar (Anti- T. pallidum/pod Konjugat) mikrotitrasyon plağının haznelerini kaplayan T. pallidum antijenlerine bağlanmak için rekabet eder. OWVOG11C48 Rev. 06 TR /11

2 Reaktifler Konjugatın enzim kısmı, teşekkül eden Kromojen Çalışma Solüsyonunun mavi bir renk almasını sağlar. Bu reaksiyon Durdurma Solüsyonu POD ilave edilmesi yoluyla sonlandırılır ve rengin sarıya dönüşmesine sebep olur. Ortaya çıkan sarı rengin yoğunluğu, örnek içerisindeki T. pallidum- spesifik antikorlarının aktivitesi ile ters orantılıdır. Semboller Sağlanan Materyaller SYPH Enzygnost Syphilis 2 x x x 96 (Q) MTP Enzygnost Syphilis test plağı 2 adet 10 adet 10 adet CONJUGATE Anti-T. pallidum/pod Konjugat 2 x 13 ml 10 x 13 ml 2 x 55 ml REFER P Anti-T. pallidum Referans P 1 x 0,7 ml 2 x 0,7 ml 2 x 0,7 ml REFER N Anti-T. pallidum Referans N 1 x 1,2 ml 2 x 1,2 ml 2 x 1,2 ml WASH POD Yıkama Solüsyonu POD * 1 x 100 ml 3 x 100 ml --- SUBSTRATE TMB Tampon/Substrat TMB * 1 x 30 ml 4 x 30 ml --- CHROMOGEN TMB Kromojen TMB * 1 x 3 ml 4 x 3 ml --- STOP POD Durdurma Solüsyonu POD * 1 x 100 ml 2 x 100 ml --- EMPTY VIAL Kromojen Çalışma Solüsyonu için 1 adet 1 adet --- boş şişe * CHROM SOL Polietilen torba 1 adet 1 adet 1 adet Yapışkan folyolar 6 adet 24 adet --- Barkod değer tablosu 1 adet 1 adet 1 adet Kullanım talimatları 1 adet 1 adet 1 adet * Bu komponentler aynı zamanda Enzygnost için Yardımcı Reaktifler/TMB ( REF OUVP) içerisinde de mevcuttur. Test plağı, konjugat ve bunların yanı sıra Anti-T. pallidum Referans P ve Anti-T. pallidum Referans N ambalaj üzerinde yazılı olarak temin edilmiş ve de barkod değerler tablosunda belirtilmiş 6 haneli lot numarası kombinasyonunda kullanılmalıdır. Aynı kural Kromojen TMB ve Tampon/Substrat TMB reaktifleri için de geçerlidir. Gerekli olan ancak sağlanmayan materyaller, 10 x 96 kit için Bileşimi Enzygnost /TMB ( REF OUVP) için Yardımcı Reaktifler Kromojen TMB ve Tampon/Substrat TMB reaktifleri ancak Yardımcı Reaktifler Kitinde belirtilen lot kombinasyonunda kullanılabilir. Geçerli lot numaraları ambalaj üzerinde verilen 6 haneli numaralardır. Enzygnost Syphilis test plakası: İnaktive edilmiş T. pallidum antijeniyle (Nichols suşundan deterjan ekstresi) kaplı mikrotitrasyon plakası Anti-T. pallidum/pod Konjugat: TRIS/HCI tamponunda peroksidaz ile konjuge insan serumundan IgG fraksiyonu, kullanıma hazır Koruyucu: fenol ( 1 g/l) Anti-T. pallidum Referans P: T. pallidum'a özel antikorlar içeren insan serumu, nominal absorbans: 0,2 Koruyucular: amphotericin (~ 5 mg/l) amphotericin (~ 100 mg/l) Anti-T. pallidum Referans N: T. pallidum'a özel antikorlar içermeyen insan serumu, nominal absorbans: 0,7 Koruyucular: amphotericin (~ 5 mg/l) amphotericin (~ 100 mg/l) 2/ OWVOG11C48 Rev. 06 TR

3 Yıkama Solüsyonu POD: Tween içeren fosfat tamponu Koruyucu: fenol ( 1 g/l) Tampon/Substrat TMB: Asetat tampon içinde hidrojen peroksit Koruyucu: n-butanol ( %< 1) Kromojen TMB: Tetrametilbenzidin dihidroklorür Durdurma Solüsyonu POD: Sülfürik asit (0,25 mol/l) Uyarılar ve Önlemler İn-vitro tanı amaçlı kullanım içindir. Test, toplu örnekler için değil ayrı ayrı örneklerin test edilmesi için geliştirilmiştir. Uyarı! STOP POD H290, H314: Metaller için korozif olabilir. Ciddi cilt yanıkları ve göz hasarına neden olur. P280, P310, P301, P330, P331, P303, P361, P353, P305, P351, P338, P390, P501: Koruyucu eldiven/koruyucu giysi/gözlük/maske kullanın. Hemen bir ZEHİR DANIŞMA MERKEZİ'ni veya doktoru arayın. YUTULMASI HALİNDE: Ağızınızı çalkalayınız. Kusmaya ZORLAMAYIN. CİLT ÜZERİNDEYSE (ya da saç): Kontamine olmuş tüm giysiler acil olarak çıkarılmalıdır. Cildinizi suyla durulayınız. GÖZLE TEMAS ETMESİ HALİNDE: Suyla bir kaç kere dikkatlice çalkalayınız. Kontakt lens kullanıyorsanız, mümkünse çıkarınız ve gözlerinizi yıkamaya devam ediniz. Malzeme hasarını önlemek için dökülen sıvıyı emdirin. İçeriği ve kabı tüm yerel, bölgesel ve ulusal düzenlemelere uygun şekilde bertaraf edin. DİKKAT! POTANSİYEL BİYOLOJİK TEHLİKE In Vitro Tanı Amaçlı Tıbbi Cihazlara İlişkin AB Direktifi ile uyumlu veya ABD Gıda ve İlaç Dairesi (FDA) tarafından onaylanmış testler kullanılarak, insan immün yetmezlik virüsü (HIV) 1 ve 2, hepatit B virüsü (HBV) ve hepatit C virüsü (HCV) bakımından, her bir donör ya da donör birimi test edilmiş ve negatif olduğu bulunmuştur. Bilinen hiçbir test bulaşıcı etkenlerin var olmadığı konusunda tam güvence sunamayacağı için, insanlardan elde edilen tüm örneklerin gerekli dikkat ve özen gösterilerek kullanılması gerekmektedir. Güvenlik bilgi formları (MSDS/SDS) adresinden edinilebilir. Test prosedürünün tamamı boyunca koruyucu gözlük takılması tavsiye edilir. Kullanılan eldivenlerin maruz kalınan materyallere karşı koruma sağlama yeterliliği bilgisi için lütfen üretici talimatlarına uyun. Atıklar açısından, katı infeksiyöz materyalin en az 1 saat süreyle 121 C de otoklavlanması önerilir. Tüm emilen sıvılar, birbirlerine seri olarak bağlantılı iki kapta toplanmalıdır. Her iki kap içinde insan patojenlerini etkisizleştirebilecek dezenfektan bulunmalıdır. Üretici tarafından belirtilmiş olan konsantrasyonlara ve reaksiyon sürelerine uyulmalıdır. Tampon/Substrat TMB, Kullanıma Hazır Kromojen Solüsyonu ve Durdurma Solüsyonu POD un ağır metal iyonları ya da okside edici maddeler ile temasından kaçınılmalıdır (sıvı ile doğrudan temasa geçen metal parçaları bulunan pipetler kullanmayın). Substrat reaksiyon aşamaları, hipoklorit içeren dezenfektanların yakınında gerçekleştirilmemelidir. Eğer Çalışma Kromojen Solüsyonu test plağına aktarılmadan önce bir anda mavi renge dönerse solüsyon kontamine olmuş demektir; bu durumda temiz bir kap içerisinde yeni solüsyon hazırlanmalıdır. Yukarıda bahsedilen solüsyonların ciltle temas etmesinden kaçınılmalıdır. Reaktiflerin Hazırlanması Teste başlamadan önce tüm reaktiflerin ve test örneklerinin 18 ile 25 C ye gelmesini sağlayın. Bu adımda test plaklarından folyo torbayı çıkartmayın. Testi işlemeye başlamadan önce OWVOG11C48 Rev. 06 TR /11

4 gerekmeyen stripleri yuvadan çıkartın ve bunları daha sonra kullanmak üzere ambalajdaki polietilen torbaya koyun (Bkz. Tablo 1). Reaktifler ile reaktif çalışma solüsyonlarının karıştırılması gerekiyorsa, köpük oluşmasını engelleyin. BEP III Sistem üzerinde çok sayıda örnek dizisiyle çalışırken sıklıkla şırınga değiştirmemek için 10 x 96 (Q) kiti tavsiye edilir. Anti-T. pallidum/pod-konjugat kullanıma hazırdır. Stabilizör olarak eklenen sığır serumunun neden olabileceği hafif flokülasyon sorun teşkil etmez. Her test plağı için 20 ml Yıkama Solüsyonu POD u distile ya da deiyonize suyla 400 ml ye seyreltin. Her test plağı için, 1 ml Kromojen TMB'yi, 10 ml Tampon/Substrat TMB (Kromojen Çalışma Solüsyonu) ile, temin edilen boş plastik şişe içinde seyreltin. Işıktan koruyarak saklayın. Kullanılmasının ardından şişeyi distile ya da deiyonize su ile iyice durulayın. Ayrıca, Kromojen TMB şişesinin ve Tampon/Substrat TMB şişesinin tüm içeriğinin boş şişeye birlikte doldurulmasına izin verilir. Enzygnost /TMB, REF OUVP 27 için Ek reaktifleri kullanılırken, Kromojen TMB flakonu içerisindeki miktarın tamamı Buffer/Substrate TMB barkod etiketli flakonun içerisine aktarılmalıdır. Saklama ve Stabilite Enzygnost Syphilis kitinin tüm bileşenleri, açılmamış halde saklandığı takdirde, etiketlerde verilmiş olan son kullanma tarihlerine kadar kullanılabilir. Açılmış ve ardından seyreltilmiş reaktiflerle ilgili stabilite ve saklama verilerinin tamamı için, bkz. Tablo 1. Gerekli Olan Donanım Örnekler BEP III: Örneklerin dağıtılmasından sonra testin otomatik olarak gerçekleştirilmesi ve yanı sıra değerlendirilmesi için BEP 2000/BEP 2000 Advance : Testin tam otomatik olarak gerçekleştirilmesi ve değerlendirilmesi için Pipetler: Sabit veya değişken hacimli piston tipi pipetler veya hacmi ayarlanabilir hacimli tek veya çok kanallı pipetler Testin otomatik olarak işlenmemesi durumunda ek olarak aşağıdakiler de gereklidir: İnkübatör: Homojen ısı dağıtımına veya buna eşdeğer bir inkübasyon yöntemine sahip inkübatör (37 ±1 C) Yıkama cihazı: Mikrotitrasyon plak yıkayıcı Fotometre: Mikrotitrasyon plakları için uygun fotometre, ölçüm dalga boyu 450 nm, referans dalga boyu 650 nm (uygun olduğunda 615 nm ile 690 nm arası) Test için kullanılan tüm ekipmanların doğrulanmış olması gerekir. Uygun olan örnekler standart laboratuvar teknikleriyle elde edilmiş olan ayrı ayrı örneklerdir (insan serumu ya da EDTA lı/heparinize edilmiş/sitratlı plazma). Heparinize ve sitratlı plazma örnekleri en fazla 3 gün süreyle ve 2 ile 8 C arasında saklanmalıdır; serum ve EDTA plazmaları ise bu saklama koşullarında 8 güne kadar kullanılabilir. Örnekler daha uzun süre saklanacaklarsa dondurulmalıdır. 4/ OWVOG11C48 Rev. 06 TR

5 Prosedür Otomatik Çalışılmayan Test Prosedürü 1. Test planı: Gereken test plağı hazne sayısı örnek sayısı alınarak ve buna Anti-T. pallidum Referans P ve N için determinasyon sayısı (n=6) eklenerek belirlenir. 2. Örneklerin dağıtılması: 25 µl of Referans N'yi 4 haznenin (A1-D1) her birine dağıtın, 25 µl Referans P'yi bir hazneye dağıtın (E1) ve sonraki haznelerin her birine seyreltilmemiş 25 µl örnek dağıtın. Serinin sonunda test plağı sırasıyla bir adet hazneyi daha 25 µl Referans P ile doldurun. Yukarıdaki pipetleme düzenine alternatif olarak Referans N'yi pipetledikten sonra Referans P'yi iki kez pipetlemekle mümkündür. Alternatif pipetleme şeması: 25 µl of Referans N'yi 4 haznenin (A1-D1) her birine dağıtın, 25 µl Referans P'yi iki hazneye dağıtın (E1, F1) ve sonraki haznelerin her birine seyreltilmemiş 25 µl örnek dağıtın. Her test plağı için pipetleme işlemi 30 dakika içerisinde tamamlanmalıdır. 3. Konjugatı dağıtın: Her bir kuyucuğa 100 µl Anti-T. pallidum/pod Konjugat pipetleyin. Ardından plakayı folyo ile kapatın ve derhal inkübatöre yerleştirin. 4. İnkübasyon: İnkübasyonu 90 ±2 dakika süreyle 37 ±1 C'de yapın, ardından derhal yıkama adımına geçin. 5. Yıkama: Folyoyu çıkartın ve tüm hazneleri emdirin. Her hazneye yaklaşık 0,3 ml seyreltilmiş Yıkama Solüsyonu POD doldurun, plakayı emdirin ve yıkamayı üç kez tekrarlayın. Yıkama işlemi tamamlandıktan sonra, bir sonraki reaktifin dağıtılması adımına geçin (aksi takdirde kuyucuklar kuruyabilir). 6. Sübstratın dağıtılması: Her hazneye 100 µl Kromojen Çalışma Solüsyonu pipetleyin ve mikrotitrasyon plağını yeni folyo ile kapatın. 7. Sübstratın inkübasyonu: Substrat ekleme adımından hemen sonra oda sıcaklığında 18 ile 25 C ışıktan koruyarak 30 ±2 dakika inkübe edin. 8. Reaksiyonun durdurulması: Folyoyu çıkartın. Substratın dağıtılması adımındaki ile aynı zamanlamayla haznelerin her birine 100 µl Durdurma Solüsyonu POD ilave edin. 9. Okuma: est plağını bir saat içerisinde 450 nm de okuyun. Önerilen referans dalga boyu 650 nm, veya gerekli durumlarda 615 ve 690 nm arasıdır. BEP III Sistemi için prosedür BEP III Sistemi kullanılırken test plakları örnek dağıtma adımına kadar hazırlanmalıdır ( Otomatik Olmayan Test Prosedürü bölümünde adım 1 ile 2 arası). Kısmen dolu test plaklarının su şeritleri ile takviye edilmesiyle en az yarı seviyelerine kadar dolu (6 test şeridi) hale getirilmelidir. Hemen ardından açık test plaklarını, yani folyo ile kapatılmamış olanları BEP III içine yerleştirin. Takip eden tüm işlem adımları daha sonra analiz cihazı tarafından otomatik olarak gerçekleştirilir (bakınız BEP III Kullanım Kılavuzu). BEP III yazılımındaki inkübasyon süresi ayarları, Otomatik Olmayan Test Prosedürleri nde tarif edilen sürelerden teknik nedenlerden farklı olabilir (sistem hızı), ancak bunlar BEP III üzerinde Enzygnost için doğrulanmıştır. BEP 2000 Sistemi için prosedür Örnek dağıtma adımları ve bunu takip eden işlemler analiz cihazı tarafından tamamen otomatik olarak yapılır (bakınız, BEP 2000 Kullanım Kılavuzu). Bunu yaparken, kısmen dolu test plaklarının su şeritleri ile takviye edilmesiyle en az yarı seviyelerine kadar dolu (6 test şeridi) hale getirilmesi gerektiğini unutmayınız. Örneklerin BEP 2000 Sistemi ile çalışılması Otomatik Olmayan Test Prosedürleri altında verilen bilgiden farklı olsa da BEP 2000 Sistemi üzerinde Enzygnost için doğrulanmıştır. İç Kalite Kontrolü Doğrulama kriterleri Testin değerlendirilmesi için aşağıdaki kriterler karşılanmış olmalıdır: OWVOG11C48 Rev. 06 TR /11

6 Sonuçlar 1. Anti-T. pallidum Referans N: 0,700 A 2, Anti-T. pallidum Referans P: -0,010 A 0,200 Anti-T. pallidum Referans N absorbans değerlerinden bir ispesifikasyonun dışında olduğu takdirde, bu değer önemsenmeyebilir. Referans P'ye ait her iki absorbans değeri de spesifikasyonla uyumlu olmalıdır. Bu şartlar karşılanmadığı taktirde test değerlendirme için geçerli değildir. Bu durumda BEP III ve BEP 2000 yazılımı geçersiz test sonucu uyarısı verir. Geçersiz işleme yol açan nedenler araştırıldıktan sonra test tekrar edilmelidir. Değerlendirmeler BEP III ve BEP 2000 Sistemleri için otomatik olarak yapılır. Lütfen ilgili Kullanım Kılavuzuna başvurun. Yazılım desteği olmadan değerlendirme işlemi yapılmaktaysa, aşağıda belirtilen noktalar dikkate alınmalıdır. Kesme değerini hesaplamak için Referans N için geçerli abzorbans değerlerinin ortalamasını kullanın ve 0,7 ile çarpın: A Ref. N x 0.7 = kesme Belirsizlik aralığı şu şekilde tanımlanır: A Ref. N x 0,6 şüpheli aralık A Ref. N x 0,7 Test kriterlerine dayanarak örnekler aşağıda belirtildiği gibi sınıflandırılmıştır: 1. Anti-T. pallidum negatif A örnek > kesme 2. Anti-T. pallidum pozitif A örnek < A Ref. N x 0,6 3. Anti-T. pallidum şüpheli A Ref. N x 0,6 A örnek kesme Pozitif veya belirsiz bir sonuç elde edildiği takdirde örnek çift çalışma yeniden test edilmelidir Yeniden yapılan testte her iki absorbans değeri de belirsizlik aralığının üzerinde ya da aşağısındaysa, ilk belirsiz sonuç yok sayılabilir ve örnek sırasıyla negatif ya da pozitif olarak sınıflandırılabilir. Ancak, eğer ortalama abzorbans değer örneği tekrar şüpheliyse, örnek şüpheli olarak rapor edilmelidir. Sürekli olarak şüpheli veya pozitif sonuçlar alınan örnekler spesifik IgM tespit eden bir test ile araştırılmalı ve yakın zamanda gerçekleşmiş ve tedavi gerektiren bir enfeksiyonun varlığı doğrulanmalıdır. Onaylama testi ilk başta negatif sonuç veriyorsa fakat yakın bir geçmişte enfeksiyon gerçekleştiğinden şüphelenilecek güçlü nedenler varsa, birinci örnekten yaklaşık 2 ila 4 hafta sonra ikinci bir örnek alınmalı ve alınan bu örnek daha önce alınan örnek ile paralel olarak test. edilmelidir. Sonuçların Değerlendirilmesi Enzygnost Syphilis testinde alınan bir negatif sonuç, akut veya geçmişte bir sifilis enfeksiyonunun varlığını yüksek kesinlik derecesiyle doğrular. Diğer test yöntemlerinde spesifik antikor titerleri çok yüksek olduğunda yalancı negatif sonuçlar verebilen Prozone fenomeni Enzygnost Syphilis ile gözlemlenmemiştir. Bir SDS positif test tekrarı sonucu T. pallidum-spesifik antikorların tespit edildiğini belirtir (ancak yine de Prosedürün Sınırlamaları bölümüne bakınız). Eğer aynı zamanda yapılan IgM spesifik testte hiçbir T. pallidum-spesifik antikor tespit edilmediyse, hastanın sifilis enfeksiyonunu çok uzun zaman önce aldığı veya başarılı bir tedaviden geçtiği varsayılabilir. Prosedürün Sınırlamaları 1. Sodyum azit içeren örnekler kullanılmamalıdır! 2. Enzygnost Syphilis'in, sırasıyla pinta, ekvator frengisi ve endemik sifilise neden olan ajanlar olan T. carateum, T pertenue ve T. endemicum gibi T. pallidum alt türlerini de tespit etmesi olasılık dahilidir. Afrika'nın bazı bölgelerinde ve Güney Amerika'da endemik olan bu treponematozlar serolojik olarak sifilis 8,9 'dan ayırt edilemez, ancak klinik resime dayalı olarak ayırt edilebilir. 6/ OWVOG11C48 Rev. 06 TR

7 3. Bağışıklık sistemi baskılanmış hastalar ve özellikle HIV-ile enfekte hastalar sıklıkla tipik olmayan serolojik konstelasyon sergiler. 4. Antikoagülanlar (heparin, EDTA, sitrat) ve römatoid faktörleri test sonuçlarını etkilemez. 5. Lipemik, hemolitik veya ikterik örnekler test sonucunu etkilemez. 6. ANA içerien örnekler ve Borrelia pozitif olan örnekler test sonuçlarını etkilemez. 7. Isıl işlem yapılmış örneklerde (30 dakika, 56 C) hiçbir enterferans gözlenmemiştir. 8. Yetersiz şekilde koagüle olmuş serumlar ve mikrobiyolojik olarak kontamine olmuş örnekler kullanılmamalıdır. Partikül niteliğindeki tüm bileşenler (örneğin fibrin pıhtıları, eritrositler) test öncesinde örnekten çıkarılmalıdır. 9. Eritilmiş örnekler kullanılırken materyalin iyice homojen hale geldiğinden emin olun. 10. Durdurma reaksiyonu sonrasında kuvvetli bir renk değişimi varsa, boya presipite olabilir. Bu durum fotometrik değerlendirmeyi etkilemez. 11. Referanslar doğal insan serumlarından hazırlanmıştır. Bu nedenle bulanıklık meydana gelebilir, ancak bunun test sonucu üzerinde hiçbir etkisi yoktur. 12. İnkübasyon evresinde test plağı titreşimden korunmalıdır. İnkübatör olarak su banyosu kullanılıyorsa, sağlam bir yüzdürme yardımcısı veya sirkülasyonsuz bir su banyosu kullanılmalıdır. Plağın kuyucukları, ısısı termostatla kontrol altında tutulan suyla temas halinde olmalıdır. Suyun mikrobiyal kontaminasyonunu önlemek için stabilizörler kullanıldığı takdirde, bu gibi bir kontaminasyon spesifik olmayan reaksiyonlara neden olabileceğinden, test plağının yüzeyinin ya da yuvaların sıvının temas etmemesi için dikkat edilmelidir. 13. Ürün performansını optimize etmek ve ürün özelliklerini karşılamak amacıyla Siemens çeşitli analizörlerde bu reaktiflerin kullanımını onaylamıştır. Kullanıcı tarafından belirlenen değişiklikler system performansını ve test sonuçlarını etkileyebileceği için Siemens tarafından desteklenmemektedir. Reaktiflerin Siemens Uygulama Kitapçıklarında veya prospektüslerde belirtilenler dışındaki analizörlerde kullanımı veya kullanım talimatlarında yapılan değişikliklerin geçerliliği kullanıcı tarafından onaylanmalıdır. 14. Bu testin sonucu her zaman hastanın tıbbi geçmişi, klinik durumu ve diğer bulgularla birlikte yorumlanmalıdır. Spesifik Performans Özellikleri Duyarlılık Özgüllük İlk klinik araştırmada olduğu gibi 294 pozitif-durum test örnekleri Enzygnost Syphilis kullanılarak test edilmiştir. Bu örnekler topluluğunda test %97,3 hassasiyet sergilemiştir (başta şüpheli çıkan sonuçlar tekrar test edilmiştir). Başka bir araştırmada 369 pozitif-durum test örnekleri Enzygnost Syphilis kullanılarak test edilmiştir. Burada hassasiyet (test tekrarı sonrasında) %98,4 - %100 çıkmıştır. Birkaç farklı araştırmada Enzygnost Syphilis aşağıdaki spesifiklik değerlerini sergilemiştir (başta şüpheli/pozitif değerlerin test tekrarı sonrasında): Örnekler n Kesinlik (%) Hasta serumu (sifilis durumu negatif) ,0 Hamilelik serumu ,5 Sağlıklı donörlerden serum örnekleri ,0 Sağlıklı donörlerden plazma örnekleri ,0 OWVOG11C48 Rev. 06 TR /11

8 Hassasiyet Farklı T. pallidum'a özel antikor aktivitesi içeren beş test örneği iki laboratuvarda varyasyonun (CV) test içi ve testler arası katsayıları açısından değerlendirilmiş ve aşağıdaki sonuçları vermiştir: Örnek Ortalama abzorbans (A450) Test içi CV (%) Örnek Ortalama abzorbans (A450) Testler arası CV (%) Not F I 1,151 7,0 F I 1,410 5,3 F II 0,725 6,5 F II 0,830 4,5 F III 0,661 7,3 F III 0,747 5,1 F IV 0,427 6,7 F IV 0,510 6,7 F V 0,060 7,8 F V 0,067 22,1 Testin performans özellikleri için belirtilen değerler tipik sonuçları gösterir ve Enzygnost Syphilis özellikleri olarak düşünülmemelidir. Bibliyografya 1. Larsen SA, Hunter EF, McGrew BE. Syphilis. In: Wentworth BB, Judson FN, eds. Laboratory methods for the diagnosis of sexually transmitted diseases. Washington, DC: American Public Health Association, 1984: Ikeda MK, Jenson HB. Evaluation and treatment of congenital syphilis. J Pediatr 1990;117: van der Sluis JJ, ten Kate FJ, Vuzevski VD, et al. Transfusion syphilis, survival of Treponema pallidum in stored donor blood. Vox Sang : Cerny EH, Farshy CE, Hunter EF, Larsen SA. Rheumatoid factor in syphilis. J Clin Microbiol 1985;22: Harris EN, Gharavi AE, Wasley GD, Hughes GR. Use of an enzyme-linked immunosorbent assay and of inhibition studies to distinguish between antibodies to cardiolipin from patients with syphilis or autoimmune disorders. J Infect Dis 1988;157: Magnarelli LA, Anderson JF, Johnson RC. Cross-reactivity in serological tests for Lyme disease and other spirochetal infections. J Infect Dis 1987;156: Romanowski B, Sutherland R, Fick GH, et al. Serologic response to treatment of infectious syphilis. Ann Intern Med 1991;114: Noordhoek GT, Cockayne A, Schouls LM, et al. A new attempt to distinguish serologically the subspecies of Treponema pallidum causing syphilis and yaws. J Clin Microbiol 1990;28, Fohn MJ, Wignall FS, Baker-Zander SA, Lukehart SA. Specificity of antibodies from patients with pinta for antigens of Treponema pallidum subspecies pallidum. J Infect Dis 1988;157: / OWVOG11C48 Rev. 06 TR

9 Simgelerin Tanımı Tekrar kullanmayınız YYYY-MM-DD Son kullanma tarihi LOT Lot Numarası REF Katalog Numarası Dikkat, ekteki dokümanlara başvurunuz Üretici EC REP Avrupa Birliği Yetkili Temsilcisi <n> sayıda test için yeterlidir Biyolojik Tehlikeler IVD In Vitro Diyagnostik Tıbbi Cihaz Saklama derecesi Kullanım talimatlarına başvurunuz Steril değil CE İşareti CONTENTS İçindekiler Sulandırma hacmi LEVEL Seviye Isı ve güneş ışığından uzak tutun BEP, BEP 2000 Advance, Cellognost ve Enzygnost, Siemens Healthcare Diagnostics firmasının ticari markalarıdır Siemens Healthcare Diagnostics Products GmbH. Tüm hakları saklıdır Siemens Healthcare Diagnostics Products GmbH Emil-von-Behring-Str Marburg/Germany OWVOG11C48 Rev. 06 TR /11

10 Tablo 1 Saklama ve Stabilite Materyal/reaktif Durum Saklama Stabilite Enzygnost Syphilis test plağı açıldıktan sonra 2 8 C kurutucu madde içeren torbada 8 hafta Anti-T. pallidum/pod Konjugat açıldıktan sonra 2 8 C 8 hafta Anti-T. pallidum Referans P Anti-T. pallidum-referans N açıldıktan sonra 2 8 C son kullanma tarihi Kromojen TMB açıldıktan sonra 2 8 C son kullanma tarihi Tampon/Sübstrat TMB açıldıktan sonra 2 8 C son kullanma tarihi Kromojen Çalışma Solüsyonu 1+10 seyreltilmiş 2 8 C C Işıktan korunan kapalı kapta 5 gün 8 saat Yıkama Solüsyonu POD açıldıktan sonra 1+19 seyreltilmiş 2 8 C 2 8 C C son kullanma tarihi 1 hafta 1 gün Durdurma Solüsyonu POD açıldıktan sonra 2 8 C son kullanma tarihi her bileşeni en geç son kullanma tarihine kadar kullanın 10/ OWVOG11C48 Rev. 06 TR

11 Tablo 2 Test Prosedürü Reaktiflerin hazırlanması 4 x 25 μl Referans N 2 x 25 μl Referans P 25 μl her seyreltilmemiş örnekten 100 μl konjügat İnkübasyon: 90 ±2 dakika (37 ± 1 C) Plakaların kısmen dolu olması halinde su dolu stripler ekleyin ve plakları yarım doldurun 4x yıkama 100 μl Kromojen Çalışma Solüsyonu BEP 2000 Tam otomatik test işleme İnkübasyon (ışıktan korunarak) 30 ±2 dakika (18-25 C) BEP III Tam otomatik test işleme 100 μl Durdurma Solüsyonu (maksimum 60 dakika sonra) Ölçüm: 450 nm ye karşı 650 nm Test sonucu OWVOG11C48 Rev. 06 TR /11