M235B1/5. June 2005 Edition:001

Transkript

1 M235B1/5 June 2005 Edition:001

2 Türkçe Cozart EIA Morfin Adli Seti Sadece tüpte teşhis kullanımı içindir. Amaçlanan Kullanım Serum veya bütün kan için Cozart Morfin EIA seti klinik ve adli laboratuarlarda kullanım içindir. İnsan serumundaki morfin için 10ng/mL lik kesme konsantrasyonunda niteliksel sonuçlar sağlar. Bu tahlil sadece bir ön analitik test sonucu sağlar. Test sonuçlarını, özellikle de pozitif bir ön sonuç alacak şekilde, istismar eden bütün ilaçlar hakkında klinik değerlendirme ve profesyonel yargıya başvurulmalıdır. Daha kesin bir analitik sonuç elde etmek için daha özel bir kimyasal metot alternatifi kullanılmalıdır. Gaz kromatografisi/kütle spektrometrisi (GC-MS) tercih edilen kesinleştirme yöntemidir. Adli kan örneklerinin rutin analizi için örneklerin saf suyla 5'te 1 oranında sayreltilmesi tavsiye edilir. Örneğin, 200µL su eklenmiş 50µL kan. Daha fazla yardım için lütfen teknik destek ile temasa geçin. Testin Prensibi Cozart EIA Morfin Adli Seti, insan serumu ve bütün kanında morfinin tespiti için rekabetçi bir enzim immunotahlilidir. Mikrotitre şeritlerinin çukurları anti-morfin antikorlarıyla kaplıdır.ilk kuluçka sırasında yaban turpu peroksidazıyla (HRP) etiketlenmiş Morfin, mikrotitre şeritlerindeki anti-morfin antikorlarının bağlanma yerleri için hasta örneğindeki serbest Morfin ile yarışır. TMB substrat çözeltisinin eklenmesinden önce çukurlar fazla enzim materyalinin kaldırılması için yıkanır. Durdurma çözeltisinin eklenmesi tepkimeyi durdurur ve soğurganlıklar spektrofotometresel olarak 450 nm'de okunur. 1

3 Reaktif Maddeler M235B1-1 tabaklı set (M235B5-5 tabaklı set) Anti-Morfin Kaplı Levha- 1 levha (5 levha) Kırılmaya hazır 12 x 8 çukur şerit.kuru formdaki polistiren levha üzerinde sabitlenmiş anti-morfin çok klon antikorlar % BSA içerir. Enzim eşleniği 1 şişe (1 şişe) Yaban turpu peroxidazıyla etiketlenmiş Morfin türevi. Yüksek vakum altında dondurarak kurutulmuş (lyofilize) pudra olarak sunulur. 1 ml Enzim Sulandırma Tampon Çözeltisi ile sulandırınız. Çalışan seyreltmelerle ilgili veri sayfası ektedir. Enzim, yeniden oluşturma gününde ayrılmalı ve dondurulmalıdır. Enzim ayırma şişeleri (boş) 5 şişe (5 şişe) Enzim saklamak için şişeler.enzim eşleniğini ayırınız ve -20 C de saklayınız. Enzim Seyreltici 20 ml (2x30mL) Dengeleyici ve protein matris içeren tampon çözelti. 2-8 C sıcaklıkta saklayınız. Enzim sulandırıcı tampon çözelti 3mL (3mL) Yıkama tampon çözeltisi 50ml (50ml) 30 x konsantre, 0.1% (v/v) yüzey etkin madde.saklama halinde kristaller oluşabilir.kullanımdan önce her şişeyi 1500 ml ye kadar saf suyla seyreltin. Substrat Çözeltisi 20 ml (55mL) <0.05% 3,3, 5,5 - tetramethylbenzidine içeren bir şişe. Durdurucu çözelti 20 ml (55mL) 1M Sülfürik asit içeren bir şişe.bu çözeltiyi aşındırıcı olarak kullanın. Negatif Kalibratör - 1mL (4mL) Morfin için negatif kan matrisi. Pozitif Kalibratörler bütün seviyelerde 1 ml (bütün seviyelerde 4 ml) 1ng/mL morfin içeren kan matrisi 5ng/mL morfin içeren kan matrisi 10ng/mL morfin içeren kan matrisi 25ng/mL morfin içeren kan matrisi 50ng/mL morfin içeren kan matrisi 100ng/mL morfin içeren kan matrisi Bunlar, bilinmeyen örneklerde de olduğu gibi 5 te 1 veya 10 da 1 oranında seyreltilmelidir.

4 Uyarılar ve Önlemler 1. Set reaktifleri civarında yiyecek ve içeceklerin bulundurulması tavsiye edilmez. 2. Bütün deri şikayetleri, kesikler ve yıpranmalar uygun şekilde korunmalıdır. 3. Bütün reaktiflerin düzgün kullanılması önemle tavsiye edilir. Substrat Çözeltinin kirlenmesini önlemek için tek kullanımlık materyallerin kullanılması önerilir.belirgin mavi rengin ortaya çıkması durumunda substrat çözeltisini atın. 4. Bazı tahlil reaktifleri bakır veya kurşun boru tesisatlarıyla reaksiyona girerek potansiyel olarak patlayıcı metal azidleri oluşturabilecek olan sodyum azid içerir.bu reaktifleri elden çıkarırken azid birikmesini önlemek için her zaman büyük miktarda suyla yıkayınız. 5. Pipet reaktifleri ağzınıza almayınız. 6. Sodyum azidi örneklere koruyucu olarak eklemeyiniz. 7. Mikrobik kirlenmeleri önlemek için bütün kapları kullanılmadıkları zaman kapalı tutunuz. 8. Reaktifleri son kullanım tarihlerinden sonra kullanmayınız. 9. Farklı setlerden, üreticilerden veya parti numaralarından reaktifleri karıştırmayınız. 10. Reaktifleri dondurmayınız. 11. Reaktiflerin mümkün olduğu kadar doğrudan günışığından uzak tutulması tavsiye edilir. 12. Durdurma Çözeltisi aşındırıcıdır; özenle kullanınız. Gerekli Olan ama Sağlanmayan Materyaller 1. Pozitif ve negatif kontroller nm filtreli otomatik mikrotitre levhası okuyucusu. 3. Tek kullanımlık uçlu hassasiyet pipetleri. Kirlenmeyi önlemek için her reaktif için temiz uçlar kullanınız. 4. Otomatik mikrotitre levhası yıkama makinası, manuel mikrotitre levhası yıkayıcı veya seyreltilmiş yıkama tamponu çözeltisini dağıtmak için 350μL sekiz kanallı pipet.

5 dakikalık süreleri tutmak için süre ölçer. Yıkama tamponu konsantresinin seyreltilmesi için temiz ölçme silindiri. 7. Saf veya iyonsuzlaştırılmış su. Örnek Toplanması ve Saklanması Örnek hemen analiz edilemezse, 28 güne kadar 2-8 C sıcaklıkta veya daha uzun süre için -20 C sıcaklıkta saklayın. Bütün örnekleri potansiyel olarak enfekte olabileceklerini düşünerek kullanınız. Reaktiflerin Saklanması ve Kararlılığı Açılmış/ açılmamış bütün reaktifleri 2-8 C sıcaklıkta saklayınız. Reaktifler, reaktif etiketleri üzerinde belirtilen son kullanma tarihlerine kadar kararlıdır. Mikrotitre şeritlerinin fazlası hemen kurutuculu mühürlenebilir folyo keseyle yeniden paketlenmelidir. Saklama koşullarını yerine getirme konusunda başarısızlık tahlil performansını olumsuz etkileyebilir. Saklama halinde yıkama tamponunda kristaller oluşabilir. Yıkama tamponunu seyreltirken bütün bunların transfer edildiğinden emin olun. Substratın rengi berrak olmalıdır. Herhangi bir mavi renklenme reaktifin kirlendiğini ve atılması gerektiğini gösterir.substratı ışığa maruz bırakmayınız. Herhangi bir set bileşeninde bulanıklık veya çökelme, bozulmaya işaret eder ve bileşen atılmalıdır. Prosedür Reaktifin Hazırlanması 1. Derecelendirilmiş pipet kullanarak enzim eşleniğine 1mL sulandırıcı tampon çözelti ekleyin. Şişeyi 10 dakika boyunca yavaşça karıştırın.

6 2. Talimatlarda belirtildiği gibi enzim seyrelticisi ekleyerek çalışan enzim eşleniğini hazırlayın. 3. Yeniden oluşturduğunuz enzim eşleniğini sağlanan şişelere ayırın. -20 o C de saklayınız. 4. Kullanılmayan çalışan enzim eşleniğini atın. Tahlil Prosedürü Tahlil Prosedürü Not: Kullanımdan önce bütün reaktifleri oda sıcaklığına (20-27 C ) getiriniz. Operatörün takdir yetkisine bağlı olarak bütün örnekler, kalibratörler ve kontroller kopyalarıyla test edilebilir. 1. Her çukura örneğin, kalibratörün veya kontrolün 10 µl sini 25 dakika içinde ekleyiniz. 2. Her test çukuruna 100 µl Enzim Eşleniği ekleyiniz dakikalığına kuluçkaya yatırınız. 4. Levhayı 350µL yıkama tampon çözeltisiyle ve levha yıkayıcısıyla dört kere yıkayınız. 5. Her çukura 100 µl Substrat Çözeltisi ekleyiniz ve 30 dakikalığına kuluçkaya yatırınız. 6. Her çukura 100 µl Durdurucu Çözelti ekleyiniz nm de 15 dakikadaki soğurganlığı ölçün.

7 Kalite Kontrol Her tahlilde kalibratörler dahil edilmelidir. Durdurulmuş tahlil 15 dakika içinde okunmalıdır. Kontroller setle birlikte sağlanmamıştır ama kullanıcılar dış kalite kontrollerin uygulanmasıyla ilgili uygun kurallara uymalıdırlar.negatif kontrol, 10ng/mL kalibratörden daha yüksek bir soğurganlığa sahip olmalıdır. Pozitif kontrol, 10ng/mL kalibratörden daha düşük bir soğurganlığa sahip olmalıdır. Pozitif veya negatif kontroller sırasıyla 10ng/mL kalibratörden daha düşük veya yüksek soğurganlığa sahip değillerse, tahlil sonuçları geçersizdir. Tahlil tekrar edilmelidir, kontrol sonuçları hala yukarıda belirtilen limitlerin dışındaysa Cozart Bioscience Ltd. in Teknik Servis i ile temasa geçiniz. Sonuçların Değerlendirilmesi Pozitif Sonuç 10ng/mL Kesme Kalibratörü nden küçük veya ona eşit soğurganlığa sahip bütün örnekler pozitif olarak değerlendirilir. Pozitif bir sonuç, zehirlenme (entoksikasyon) derecesi veya uyuşturucu miktarı hakkında bir bilgi sağlamaz; sadece niteliksel olarak örneğin kesme seviyesinin üzerinde uyuşturucu bulundurabileceğine işaret eder. Negatif Sonuç 10ng/mL Kesme Kalibratörü nden büyük soğurganlığa sahip bütün örnekler negatif olarak değerlendirilir. Negatif bir sonuç kesin olarak örnekte uyuşturucu madde bulunmadığına işaret etmez; sadece örneğin niteliksel olarak kesme seviyesi üzerinde uyuşturucu bulundurmadığına işaret eder. Not: Reaktiflerin saflığının bozulması, gerekli yeterliklere sahip olmayan enstrümanların kullanılması veya etiketteki talimatları takip etme konusundaki diğer başarısızlıklar, performans karakteristiklerini ve etikette belirtilen veya ima edilen iddialarını etkileyebilir. Yetersizlikler Bu tahlilden elde edilen pozitif sonuç GC/MS gibi başka bir genel olarak kabul gören bağışıklık harici metotla kesinleştirilmelidir. Test yalnızca insan serumu ve bütün kanıyla kullanılmak üzere tasarlanmıştır.

8 Burada listelenmemiş başka maddelerin ve/ya faktörlerin testle etkileşme ve teknik veya prosedürel hatalar gibi yanlış sonuçlar ortaya çıkarma ihtimali vardır. Cihazın analitik performansında bozulma veya setin taşıma sırasında zarar görmesi durumunda lütfen Cozart Bioscience Ltd. ın Teknik Servis i ile temasa geçiniz.

9 Özgüllük 100,000 ng/ml de çapraz tepkimeyenler, kesme konsantrasyonuna göre 7-Aminoflunitrazepam EDDP Nitrazepam Alprazolam EMDP Norbuprenorphine Amitriptyline (-) Ephedrine Nordiazepam Amobarbital (+) Ephedrine Norfluoxetine Amphetamine Fenfluramine Nor-LSD Anhydroecgonine Fentanyl Oxazepam Anhydroecgonine methyl ester Flunitrazepam Oxycodone Ascorbic Acid Fluoxetine Paracetamol Aspirin Flurazepam Pentobarbital Benzoylecgonine Hexobarbital Phencyclidine Buprenorphine 3-Hydroxyflunitrazepam Pheniramine Butalbarbital 11-HydroxyΔ9-THC Phenobarbital Caffeine Ibuprofen βphenylethylamine Cannabidiol Ketamine Phentermine Chlordiazepoxide LAAM Phenylpropanolamine Chloroquine Lidocaine Prazepam Chlorpheniramine Lorazepam Propoxyphene Clonazepam LSD Propranolol Cocaethylene MBDB (-) Pseudoephedrine Cocaine MDA (+) Pseudoephedrine Cotinine MDEA Ranitidine Δ9-THC MDMA Salicylate Desalkylflurazepam Meperidine Secobarbital Desmethylflunitrazepam Methadone Temazepam Dextromethorphan Methamphetamine Triazolam Diazepam Midazolam Tyramine Dothiepin Nicotine Warfarin Ecgonine methyl ester 11-nor-9-Carboxy-Δ9-THC

10 Çapraz-Tepkiyenler Bileşikler ng/ml Görülen Morfin % Tepkirlik Çapraz-Tepkiyenler ng/ml 6-Acetyl Morphine 10,000 > , % % 10 < Codeine 100, , % 1,000 < Dihydrocodeine 100, , % 1,000 < Heroin 10,000 > , % % % % % Hydrocodone 100, ,000 < Hydromorphone 100, % 10, % 1, % 100 < Morphine-3-Glucuronide 100,000 > , % 1, % 100 < Nalorphine 50 > % % Naloxone 100, % 10, % 1, % 100 < Norcodeine 100, % 10, % 1,000 < Bileşikler ng/ml Görülen Morfin % Tepkirlik Çapraz-Tepkiyenler ng/ml Normorphine 1,000 > %

11 % Oxymorphone 100, % 10, % Tramadol 100, % 10, % Daha fazla yardım/teknik destek için: COZART plc 92 Milton Park Abingdon Oxfordshire OX14 4RY, UK Telephone: +44 (0) Fax: +44 (0)