ELEGANCE PROGESTERON ELİZA KİTİ

Transkript

1 KULLANIM AMACI ELEGANCE FSH ELİZA, serum ya da plazmadaki progesteron (P 4 ) değerini bulmak için in vitro diyagnostik kantitatif ölçümlerde kullanılmak üzere üretilmiştir. ELEGANCE ELİZA KİTİNİN PRENSİBİ ELEGANCE P4 ELİZA kiti, kuyuculara anti-fare IgG polikonal antikoru ve anti progesteron monoklonal antikoru (Antikor reaktifi) birleşen, enzim bağlı immuno testtir.sinyal üretmek için, progesteron-horseradish peroksidaz konjugat (P4-HRP). kullanan, tek basamaklı yarışmalı metottur. İnkübasyon süresi boyunca, monoklonal antikor ve numune antijeni ya da P4- HRP arasında kompleksler oluşur.antikor olarak meydana gelir, Kendi kendine ikinci antikor olarak kuyucuk tarafından tutulur. Tutunmayan materyalleri yok etmek için yıkama işlemi yapılır. Yıkamadan sonra, substrat solüsyonu,bağlanan peroksidaz ile renk oluşturmak için reaksiyona girer, oluşan renk numunedeki antijen miktarı ile doğru orantılıdır.konsantrasyon, kalibrasyon eğrisinden hesaplanır. ELEGANCE SAĞLANAN REAKTİFLER, STABİLİTE VE SAKLAMA Kit ambalaj - 96 test. Kit ve tüm bileşenleri, açılmış ya da açılmamış olarak, miadı bitene kadar 2-8 C de saklanmalıdır.. Progesteron: Kuyucuklar 96 kuyucuk REF # P4A96 Anti-murine IgG antikoru ile kaplı kuyucuklarla dolu çerçeve.kullanıma hazırdır. Progesteron: Antikor Reaktifi 1 şişe REF # P4B96 Mavi boyayla beraber, hayvan serum proteinin içeren, murin anti-progesteron antikoru(5 ml). Bronidox L, 0.2% v/v ve tiomersal, 0.01% w/v içerir. Kullanıma hazırdır. Progesteron: Konjugat Reaktifi 1 şişe REF # P4C96 Bufer solüsyonu içinde leylak rengi boya da içeren progesteron HRP konjugat (5mL). Bronidox L, 0.2% v/v ve tiomersal, 0.02% w/v içerir.kullanıma hazırdır. Yıkama Konsantresi 1 şişe REF # EWC96 50 ml of a 15 x konsantre yıkma solüsyonu Tiomersal, 0.09% w/v içerir. Kullanmadan önce dilüe edilmelidir. Substrat Solüsyonu TMB N 1 şişe REF # TMBB96 Stabilize solüsyonun içinde,10 ml, 3,3,5,5 - tetramethylbenzine (TMB N) ve hidrojen peroksit.kullanıma hazırdır. Progesteron: Kalibratörler 6 şişe REF # EP4S1-6 her biri, insan serumu içinde olup, 2.0 ml Kalibrator A ve 0.5 ml Kalibrator B-F, Tiomersal, 0.01% w/v içerir. Liofilizedir. KULLANICILAR İÇİN ÖNLEMLER VE UYARILAR Numunelerin ve kitlerin, kullanımlarının, saklanmasının ve berteraf edilmesinin yolu bölgesel ya da ulusal güvenlik prosedürlerine göre olmalıdır. Numuneler ve Kalibratörler Kontrol ve kalibratörler hepatit C, hepatit B, HIV -1/2 (AIDS) e karşı test edildi ve güvenilir metotla sonucun negatif olduğu ispatlandı. Yine de tüm numunelerde bulaşıcı hastalık potansiyeli gibi davranılması önerilir. Koruyucular Kit koruyucu olarak, tiomersal ve Bronidox L içerir.reaktifler toksik koruyucular içerdiğinden, solumaktan, yutmaktan ve deri ile temasından kaçının. Substrat Deri ile temasından sakınınız.

2 NUMUNE TOPLAMA VE SAKLAMA ELEGANCE Numune hazırlamak için özel bir itina gerekmez. Test için uygun bir şekilde serum ya da plazma alınır. Serum tercih edilir, EDTA ya heparin kesin sonucu bozmaz.hemolitik, lipemik ve bulanık numunelerle çalışmayınız. Numuneler 2-8 C de 48 saat stabil kalır. -20 C de ya da altında daha uzun süre saklanır. Numuneler tekrar tekrar çözülüp saklanmamalıdır.çözülen numunelerde dibinde çökme olmuş mu diye kontrol edilip testten önce alt üst edilerek karıştırmalıdır. GEREKLİ OLAN AMA SAĞLANMAYAN MATERYALLER VE EKİPMANLAR * Distile su veya deiyonize su * 1M H 2 SO 4 * Presizyon pipetleri * Çoklu pipet * 1L mezür * emici bez (pamuksuz) * Saat * Vorteks mikser * Mikrotitre pleyt karıştırıcı * Mikrotitre pleyt yıkayıcı * Mikropleyt okuyucu sistem. PROSEDÜR NOTLARI Tüm reaktifleri oda ısısına( C)getiriniz ve kullanmadan önce karıştırınız.çift çalışma önerilir.kontaminasyon testin performansının düşmesine sebep olur. Kalibrasyon eğrisi her çalışmadan önce çizilmelidir En yüksek kalibratörün konsantrasyonundan yüksek olduğu sanılan numuneler sıfırlık kalibratör ile dilüe edilip o şekilde test edilir. Testin tüm basamakları sırasıyla yapılmalıdır. Eğer kuyucuklar amplifikasyon reaktifiyle doldurulmazsa, amplifikasyon reaktifi için 15 dk, emici biz havlunun üzerine, kuyucuklar ters çevrilerek bırakılabilir. Kit kutusunun içindeki reaktifler bu kutuya özel lota sahiptir, diğer kutularla karışık kullanılmamalıdır. Fotometre ve tüm pipetler kullanılmadan önce kalibre edilmelidir. Yıkama Etkili yıkama Presizyon için çok gereklidir.kuyucuklar otomatik yıkayıcı kullanarak yıkanır. Bir kuyucuktan diğerine taşmasından sakınınız. Kalite kontrol Kontrol numuneleri çalışmayı doğrulamak için her seferinde çalışılmalıdır.test sonuçları onaylanmadan önce sınırların içinde bulunduğu görülmelidir TEST PROSEDÜRÜ Reaktifleri Hazırlama Yıkama solüsyonu Yıkama konsantresini 1/ 15 oranında dilüe ediniz. Yıkama solüsyonu oda sıcaklığında (20-25 C) 12 hafta stabil kalır. Kalibratörler Liyofilize kalibratörleri, şişelerin üzerinde belirtilen miktar kadar deiyonize su ile çözünüz. Sulandırılan kalibratörleri bir yere çözülmeye bırakın(en az 30 dk) ve sonra yavaşça çalkalayınız. Tüm konsantrasyonlar lottan lota değişir kitin içindeki etikette belirtilmiştir.kit çözüldükten sonra kalibratörler -20 C de 4 hafta saklanabilir.

3 Protokol: 1. Test sayısı kadar gerekli kuyucuğu çerçeveye yerleştiriniz.kullanılmayan kuyucukları çantasına koyun ve 2-8 C de saklayınız µl numune (kalibratör, kontrol, numune) çift olarak uygun kuyucuğa yerleştiriniz. Numuneleme zamanı 40 dk yı geçmemelidir 3. Her kuyucuğa 50µL Progesteron konjugat Reaktifi (leylaki) pipetleyiniz. 4. Her kuyucuğa 50 µl of Progesteron Antikor Reaktifi(mavi) pipetleyiniz 5. Üzerini kapatıp karıştırıcı üzerinde oda sıcaklığında (20-25 C) 60 dk boyunca inkübasyona bırakınız µl yıkama solüsyonu ile her kuyucuğu 4 defa yıkayınız.son yıkamadan sonra, emici bir bezin üzerine pleyti ters çeviriniz, kuyucularda hiç yıkama solüsyonu kalmamasına dikkat ediniz.kuyucuklarda hiçbir hava kabarcığı olmamasına dikkat ediniz 7. Her kuyucuğa,100 µl Substrat Solüsyonu (TMB N) pipetleyiniz. İnkübasyon adımını subsrat eklediğiniz ilk kuyucuğa göre yapınız. 8. Üzerini kapatınız ve sabit bir şekilde 5 dakika oda sıcaklığında (20-25 C) inkübe ediniz µl Stop Solüsyonunun (1M H 2 SO 4 )tüm kuyucuklara, substrat eklediğiniz ilk kuyucuktan başlayarak ilave ediniz. 10. Son nokta okumayı 450 nm de eliza okuyucunun kullanım kılavuzunda tarif edildiği gibi yapınız.bu okuma adımı stop reaktifi eklendikten sonraki 15dakika içinde yapılmalıdır SONUÇLARIN HESAPLANMASI Hesaplamalar, otomatik data hesaplayıcı yoksa manuel olarak hesaplanır. Her kuyucuğun OD si tespit edilir.log-log grafik kağıdı kullanılarak kalibratör konsantrasyonlarıyla birlikte x ekseni OD lerden y ekseni oluşturularak grafik çizilir.eğri noktadan noktaya ya da, eğri oluşturma modellerinde birisi (örneğin: spline interpolasyonu )kullanılabilir. Numunelerin konsantrasyonları, OD değerleri eğriye girilerek bulunur. Her numunenin değeri nmol/l P 4 olarak raporlanır.elegance PROGESTERON ELIZA nmol/l aralığında okunur.ama maksimum konsantrasyon kullanılan okuyucunun performans karakterine bağlı olarak rapor edilir. Eğer en yüksek kalibratörün OD değeri fotometre OD değerini aşıyorsa bu kalibratör değeri kalibrasyon eğrisinden çıkarılır. MODEL HESAPLAMALARI Son Nokta Data ID Ort. OD P 4 (nmol/l) Numune Numune Numune KALİBRASYON Bu kit ile sağlanan kalibratörler, nmol/l olarak ifade edilir.kalibratör biriminin çevrilmesi için aşağıdaki formül kullanılabilir. ng/ml P 4 = nmol/l P SINIRLAMALAR Serum numunelerinde eğer yüksek hemoliz,lipemi ya da bulanıklık görüntüsü varsa yanlış sonuçlara sebep olabilir.

4 BEKLENEN DEĞERLER Her laboratuar ilgili numune popülasyonuna göre kendi referans değerini oluşturmalıdır.aşağıdaki referans değerleri %95 i güven aralığında sağlıklı kişilerden numune alınarak oluşturulmuştur: n Aralık(nmol/L) Yetişkin erkek 68 < 4.5 (2.2) Yetişkin bayan Foliküler faz (2.2) Luteal faz 40 >> 5.0* Post-menopausal 11 < 1.6 (0.7) * genel olarak <60 nmol/l Hamilelik boyunca 1st trimastır < 100 nmol/l 2nd trimastır nmol/l 3rd trimastır > 300 nmol/l PERFORMANS KARAKTERLERİ Intra-test presizyon Numune n Ortalama ± 2SD %CV (nmol/l) ± ± ± Inter-test Presizyon Numune n * Ortalama ± 2SD %CV (nmol/l) ± ± ± * çift çalışma Kesinlik Düzeltme harici analitin test öncesi ve sonrası eklenmesi ile hesaplandı. Numune P 4 P 4 % Sapma (nmol/l) (nmol/l) Gözlemlenen Beklenen Dilüsyon Bir numune sıfırlık kalibratöre kadar dilüe edildi, test edilip sapma hesaplandı. Numune P 4 P 4 % Sapma (nmol/l) (nmol/l) Gözlemlenen Beklenen Neat / / /

5 Özgüllüğü Analit %Çapraz reaksiyonlar Progesteron* α-oh-progesteron 1.80 Pregnenolone 1.10 Deoxycorticosterone 0.47 Androstenediol <0.20 Kolesterol <0.20 Corticosterone >0.20 Cortisol < Deoxycortisol < α-Oestradiol < β-Oestradiol <0.20 Oestriol <0.20 Oestrone <0.20 Pregnanolone < α-OH-Progesteron < β-OH-Progesteron <0.20 Testosteron <0.20 Hassasiyet Testin hassasiyeti 0.25 nmol/l den azdır. Hassasiyet, üç farklı testte 20 replikasyon ile sıfır kalibratörün ortalama doz cevabı belirlenmesinden bulunan OD ile 2 SD doz cevabının belirlenmesi ile ilgili analitin konsantrasyonu olarak tanımlanmıştır. Etkileşimler Test sonucu, 250 mg/dl hemoglobine, 10 mg/dl bilirubine ve 970 mg/dl trigliserite kadar etkilenmez. SİPARİŞ BİLGİSİ ELEGANCE Progesteron ELİZA Bioclone Australia Pty Limited tarafından üretilir Railway Parade, Marrickville NSW 2204, AUSTRALIA. Telefon +61 (0) Ücretsiz arama Fax +61 (0) sales@bioclone.com.au Web TEKNİK SERVİS Tam teknik servise Bioclone on +61 (0) ya da ücretsiz arama hattından ulaşabilirsiniz. GARANTİ Üretici, diyagnostik kitin, kullanım prosedürü dışındaki kullanımlar için hiçbir garanti vermez. Diyagnostik kitin amacı dışındaki kullanımlarda, kullanıcı kendi riskini kendisi alır. Üretici, kitin amacı dışında kullanıldığı durumunda da tüm ticari garantiyi reddeder.kitin kullanımında direktiflere göre çalışıldığında oluşan her türlü başarısızlık durumunda kit değişimi sınırlıdır. Bioclone Australia Pty Limited ve onun distribütörleri kitin değişimini ya da alınan kitin para iadesini sınırlandırır. Bioclone Australia Pty Limited, malın zarar görmesinden, üründen kaynaklanan kişisel kaza ya da ekonomik kayıptan sorumlu değildir. BÖLÜM No.: EKBP4 Ed. 4 Revizyon tarihi: 26 Haziran 2006

6