SaMag Extraction kiti Kullanım Klavuzu

Transkript

1 SaMag Extraction kiti Kullanım Klavuzu Sacace Biotechnologies SaMag-12 ve SaMag-24 otomatik ekstraksiyon sistemleri ile kullanım için SaMag V iral Nucleic Acid Extraction Kit (SM003) Sacace Biotechnologies Srl via Scalabrini, Como Italy Tel Fax mail: info@sacace.com web: mail: info@sacace.com web: Sacace SaMag Viral Nucleic Acids Extraction kit 1 VER. 15,

2 REF SM003 SaMag Viral Nucleic Acid Extraction Kit 48 İSİM SaMag Viral Nucleic Acid Extraction Kit KULLANIM AMACI SaMag Viral Nucleic Acids Extraction Kiti, serum, plazma ve diğer hücre içermeyen sıvılar gibi insan biyolojik örneklerinden, Viral DNA veya RNA ekstraksiyonu için SaMag-12/24 otomatik nükleik asit ekstraksiyon sistemi ile kullanılmak üzere tasarlanmıştır. TAHLİL PRENSİBİ Ekstraksiyon prosedürü, aşağıdaki şekilde olduğu gibi, lysis, bağlama, yıkama ve elüsyon adımlarından oluşur. Hazırlanan nükleik asitler, qpcr sekanslama (NGS), Microarray, RFLP, Southern Blot veya enzimatik manipülasyonun herhangi bir türü gibi aplikasyonlar için uygundur. SAĞLANAN MALZEMELER Reaktif kartuşu, 48 adet (6x8); Reaksiyon bölümü, 48 adet (2x 6x4); Uç tutucu, 48 adet (2x 6x4); Filtreli uç, 50 adet (50x1); Küçük uç, 50 adet (50x1); Delme iğnesi, 50 adet (50x1); Numune tüpü (2 ml), 50 adet (50x1); Elute tüp (1,5 ml), 50 adet (50x1); RNA taşıyıcı (1 mg), 1 adet; Barkod kağıdı, 1 sayfa, 48 test için reaktifler içerir. GEREKLİ AMA SAĞLANMAYAN MALZEMELER SaMag-12/24 Automatic Nucleic Acids Extraction System (Sacace Biotechnologies, Italy) Steril, RNA taşıyıcı sulandırılması için RNase içermeyen su, Tek kullanımlık, atılabilir eldivenler, pudrasız Mikropipetler Biyolojik kabin Sacace SaMag Viral Nucleic Acids Extraction kit 2 VER. 15,

3 ÜRÜN KULLANIM SINIRLARI Tüm reaktifler sadece in vitro diagnostic kullanılabilir. Bu ürünün kullanımı, DNA amplifikasyonu teknikleri konusunda eğitimli personel ile sınırlı olmalıdır. Kullanım kılavuzu ile sıkı uyum optimum sonuçlar için gereklidir. Kutu ve tüm bileşenlerin etiketleri üzerinde yazılı olan son kullanım tarihlerine dikkat edilmelidir. Son kullanım tarihlerinden sonra kitleri kullanmayın. REAKTİF KARTUŞ İÇERİRİĞİ kuyucuk-1 Proteinase K solüsyonu 30 µl kuyucuk-2 Lysis Buffer µl kuyucuk-3 Binding Buffer µl kuyucuk-4 Manyetik Boncuk Solüsyonu 800 µl kuyucuk-5 Washing Buffer µl kuyucuk-6 Washing Buffer µl kuyucuk-7 Washing Buffer µl kuyucuk-8 RNase içermeyen su 1000 µl kuyucuk-9 RNase içermeyen su 1000 µl kuyucuk-10 Boş MUHAFAZA SaMag Viral Nucleic Acid Extraction Kit, oda sıcaklığında (15-25 C) muhafaza edilmelidir. Reaktif kartuşlarını dondurmayın. Kitler uygun koşullar altında 12 ay stabildir. RNA taşıyıcıyı çözüldükten sonra 4 C (kısa süre, 1 aya kadar) 'de veya -20 C (uzun süre) muhafaza edilir. Donmuş RNA taşıyıcıyı 3 defadan fazla çözüp-dondurmayın. Uzun süreli muhafazalar (-20 C) için bölünerek kullanılması önerilir. UYARILAR VE ÖNLEMLER Reaktif ve örnekler ile çalışırken, atılabilir eldiven, laboratuar önlüğü ve göz koruyucu kullanın. İşlem sonrası ellerinizi iyice yıkayın. Ağzınızla pipetleme yapmayınız. Laboratuar çalışma alanlarında, sigara içmeyin, herhangi birşey yemeyin- içmeyin, kozmetik uygulamayın veya kontakt lenslere elle dokunmayın. Son kullanım tarihlerinden sonra kitleri kullanmayın. Tüm numuneleri ve kullanılmayan reaktifleri,yerel yönetim kurallarına uygun olarak imha edin. Örnekler potansiyel enfeksiyöz olabilir, işlemleri uygun biyogüvenlik seviye 2 veya uygun biyogüvenlik uygulamaları ile bir güvenlik kabini içerisinde gerçekleştirin. Dökülen/ saçılan tüm numune veya reaktifleri temizleyin ve %0.5 lik sodyum hipoklorit veya diğer uygun dezenfektanlarla dezenfekte edin. Numune veya reaktiflerin deri, göz veya mukoza zarları ile temasından kaçının. Deri, göz veya mukoza zarları ile temas olması halinde, hemen su ile yıkayın ve acilen tıbbi yardım alın. Malzeme Güvenlik Bilgi Formları (MSDS) istek üzerine verilebilir. Bu ürünün kullanımı, DNA amplifikasyonu teknikleri konusunda eğitimli personel ile sınırlı olmalıdır. Laboratuardaki iş akış süreci tek-yönlü olmalı, Ekstraksiyon Alanında başlamalı ve daha sonra Amplifikasyon ve Tespit Alanlarına gidilmelidir. Örnekleri, ekipmanları ve reaktifleri önceki adımın yapıldığı bölgeye/alana geri döndürmeyin. Sacace SaMag Viral Nucleic Acids Extraction kit 3 VER. 15,

4 BAŞLANGIÇ MALZEMESİ Kit, hücre içermeyen vücut sıvı havuzlardan veya plazma veya serumdan, viral nükleik asitler( örneğin HIV, HCV, HBV veya CMV gibi olanlar) ekstraksiyonu için tasarlanmıştır. Ekstraksiyondan sonra nükleik asit 4 C ( 24 saate kadar) veya daha uzun süreler için -20 C 'de muhafaza edilir. Tekrarlanan dondurma-çözme işlemlerinden kaçınılmalıdır. ÖRNEK TOPLAMA VE KORUMA Biyolojik sıvılar veya yarı-sıvı numunelerin bütün çeşitleri örn: serum, idrar veya BAL gibi işlenebilir. Başarılı bir nükleik asit purifikasyonu için, SaMag numune tüplerinin içine yüklenmeden önce homojen, temiz ve viskoz olmayan numune elde edilmesi oldukça önemlidir. Bu nedenle, bütün numunelerde (özellikle eski veya dondurulmuş olanlarda) çökeltinin olup olmadığını kontrol edin. Purifikasyon prosedürü, µl serum, plazma, CFS veya ön işlem görmüş idrar numuneleri ( EDTA veya sitrat gibi bir antiloagülan ile işlenmiş kan numuneleri plazma hazırlanması için kullanılabilir) ile kullanılmak üzere optimize edilmiştir. Numuneler, taze veya dondurulmuş (çözüldükten sonra tekrar dondurulmamış olması koşuluyla) olabilir. Toplama ve santrifüjlemeden sonra, plazma, serum veya CFS, 6 saate kadar 2 8 C 'de muhafaza edilebilir. Daha uzun süreli muhafazalar için, küçük hacimlere bölünerek 20 C veya 80 C'de dondurulmasını öneririz. Çözülmüş numuneler, oda sıcaklığında (15 25 C) ve oda sıcaklığında dengelendikleri zaman hemen işlenmelidirler. Çözünme sonrasında kısımlar halinde tekrar dondurmayın. Tekrarlanan donma-çözülme işlemleri, azalmış viral titreleri ile sonuçlanan, proteilerin çökelmelerine ve denatürasyonuna yol açar ve bu nedenler viral nükleik asit verimleri azalır. Kryopresipitatlar, örneklerde görünür durumdaysa ; 6800 x g 'de 3 dk. santrifüjleyin, süpernatantları pelletleri dağıtmadan yeni tüplere aktarın ve hemen purifikasyon prosedürüne başlayın. RNA TAŞIYICI Ekstraksiyondan öncerna taşıyıcıyının numunelere eklenmesi önerilir. İlk kullanımda RNA taşıyıcı, 1.1 ml Rnase içermeyen suyun RNA taşıyıcı tüpe ( kit ile birlikte verilmiştir) eklenmesi ve vorteksleme yoluyla karıştırılmasıyla hazırlanır. RNA taşıyıcıyı (1mg/ml) -20 C'de muhafaza edin. Test edilecek her Numune tüpüne 5 µl RNA taşıyıcı ( 100 µl snumune için),10 µl ( 200 µl numune için) veya 20 µl (f400 µl snumune için) ekleyin. PROTOKOL SaMag-12/24 enstrümanında ekstraksiyon işlemini yapmaya başlamak için, kapıyı/kapıları açın ve SaMag kullanım klavuzundaki 2.3 "Ekstraksiyon" bölümünde belirtilen adımları uygulayın. 1. Kartuşu/kartuşları yerleştirin. 2.Reaksiyon Bölümünü/Bölmelerini * yerleştirin. 3.Uç tutucuyu/tutucuları yerleştirin. 4.Delme iğnesini/iğnelerini yerleştirin. 5. Küçük ucu/uçları yerleştirin. 6. Filtreli ucu/uçları yerleştirin. 7. Numune tüpünü/tüplerini, numune rakına yerleştirin. 8. Elute tüpü/tüpleri, kapakları açık halde numune tüpüne yerleştirin**. 9. RNA taşıyıcıyı Numune tüpüne yükleyin. 10. Biyolojik güvenlik kabininde, numuneyi/numuneleri Numune tüpüne/tüklerine yükleyin. 11. Sağlanmış amplifikasyon kiti varsa, Internal Control ekleyin. 12. Numune rakını, SaMag enstrümanına aktarın. 13.SaMag-12/24 kapısını/kapılarını kapatın. 14. Viral Nükleik Asitler Ekstraksiyon kit Protokolünü, uygun çalışma hacmini, kullanılan Elüsyon tüpünü ve Elüsyon hacmini seçmek için barkod kullanın (önerilen hacimler 400 µl numune hacmi ve 50 µl elüsyon hacmidir). Sacace SaMag Viral Nucleic Acids Extraction kit 4 VER. 15,

5 NOT: Eğer 1,5 ml 'lik Elüsyon tüp seçerseniz varsayılan numune rakı kullandığınızdan ve elüsyon tüp dizisine kapakları açık halde 1,5 ml'lik tüpler yeleştirdiğinizden emin olunuz; eğer elüsyon tüpü olarak 0,2 ml'lik PCR tüpü seçerseniz, PCR numune rakı kullandığınızdan ve kapakları açık halde liyofilize PCR reaktifleri ( Sacace HCV Real TM Quant DX gibi) içeren 0,2 ml'lik PCR tüpleri yerleştirdiğinizden emin olunuz. * HER ZAMAN TÜM YÜKLENMİŞ NUMUNELERİN REAKSİYON BÖLMESİNE YERLEŞTİĞİNİ UNUTMAYIN ; AKSİ TAKTİRDE BUFFER DÖKÜLEBİLİR VE ENSTRÜMANINIZA ZARAR VEREBİLİR, BU GİBİ DURUMLARDA SACACE BIOTECHNOLOGIES SORUMLULUK KABUL ETMEZ. ** Eğer Sacace HCV Real-TM Quant DX veya HBV Real-TM Quant DX kitlerini kullanıyorsanız, 0,2 ml PCR numune rakı kullandığınızdan ve PCR Numune Rakına kapakları açık halde liyofilize 0,2 ml PCR tüpleri yerleştirdiğinizden emin olunuz. SaMag Viral Nucleic Acids Extraction Kiti ile Viral RNA/DNA ekstraktesi 20 C'de muhafaza edildiği takdirde 1 yıla kadar, daha uzun süreler için 70 C'ten daha düşük sıcaklıkta muhafaza edildiğinde stabildir. Sacace Biotechnologies Srl via Scalabrini, Como Italy Tel Fax mail: info@sacace.com web: info@sacace.com web: Sacace SaMag Viral Nucleic Acids Extraction kit 5 VER. 15,