BioKits SOYA TEST KİTİ. 96 Kuyu Kat. No T. Enzim immunotest ile gıda ürünlerinde Soya Proteininin KALİTATİF ve KANTİTATİF tespiti

Transkript

1 BioKits SOYA TEST KİTİ 96 Kuyu Kat. No T Enzim immunotest ile gıda ürünlerinde Soya Proteininin KALİTATİF ve KANTİTATİF tespiti 2 8 C de saklama Kantifikasyon Aralığı: % Ürün: Soya Protein Tepnel Research Products & Services One Newtech Square Deeside Industrial Park Deeside, Flintshire CH5 2NT. United Kingdom T : +44 (0) F : +44 (0) West Avenue Stamford CT USA T : (888) or (203) F : @tepnelbiosystems.com 1

2 1. Giriş Bitkisel proteinler su ve yağın tutmasına yardımcı yapıştırıcı gibi davranarak genelde doku iyileştirmek için et ürünlerine eklenir ve genişletir veya et proteinleri yerine kullanılır (1). Soya proteini en önemli ve sık kullanılan bitkisel protein katkı maddelerinden biridir. Mikroskopi (2), SDS-poliakrilamide jel elektroforez (3) ve peptit analizleri (4) ile soya proteininin miktarınını ve tanısını belirlemek için kullanılan geleneksel testlerdir ve ayrıca hepsinin zaman alan ve kesin olmayan sonuçlar verebilen prosedürleri vardır. BIOKITS Soya Protein Assay kit enzim immunoassay temelli çalışır (5,6) ve sebze, et ve diğer proteinlerin varlığında Soya proteini için hassas ve özgün bir testtir (7). BIOKITS Soya Assay kiti gıdalarda, özellikle ham veya işlenmiş karışık et ürünlerinde soya proteinin kantitatif tespiti için kullanılmak üzere tasarlanmıştır. Test alerjik düzeyde soya proteini tespit için tasarlanmamıştır. 2. Prensib BIOKITS Soya Assay dolaylı yarışmalı bir enzim immunotesttir ve iki ana prosedürden oluşur: Numune hazırlama ve ekstraksiyonu: Numuneler homojen hale getirilir ve L-sistinde renatürasyonun ardından 100C de bir üre-dithiothreitol bufferında çözdürülür. Filtreleme sonrası numune Immunoassay prosedürü ile Soya proteinin içeriğinin belirlenmesi öncesi dilüe edilir. Enzim Immunoassay: Dolaylı bir yarışmalı ELISA testinde renk oluşumu dilüe edilmiş ekstre de orijinal soya protein konsantrasyonuyla ters orantılıdır. Numunede soya proteininin miktarı bilinen soya protein konsantrasyonunun standartlarından elde edilmiş bir kalibrasyon eğrisiden okunarak belirlenir. 3. Özellikler Yöntem: İndirek yarışmalı enzim immunotest Kantifikasyon aralığı: % (aralık değişebilir, bölüm 12 bakın.) Ölçüm birimleri: Kalibrasyon: Tespit sayısı: Örnek hazırlama: Soya Protein Kjeldahl analysed (N x 6.25) Purina PP500E Soya Isolate extract. Sertifikasız referans materyal yoktur. 96 (standart ve kontroller dahil) Tampon hazırlama, karıştırma ve filtreleme Gerekli zaman: Numune Ekstraksiyon zamanı yaklaşık 40 dakika (5 numune) Test İnkübasyon Zamanı 120 dakika Özgünlüğü Test izole soya (Purina PP500E) kullanılarak standartlaştırılır. Soya preparatının diğer türleri testte biraz farklı reaksiyona girebilir. Eğer test edilecek soya preparatının türleri bilinirse, soya tozunun bir numunesi testte sonra dahil 2

3 olur ve SOYA KONTROL e ek olarak çalışılmalıdır. Test soya preparatı ile elde edilen kurtarma faktörü, sonra test numuneleri için bir düzeltme faktörü olarak uygulanabilir. 4. Güvenlik / COSHH Not: "İyi laboratuvar pratiği"in teknikleri, bu kit kullanıldığı zaman kullanılmalıdır; Eğer böyle pratikler kullanılırsa, reaktifler sağlık için çok düşük potansiyelli bir risk oluşturur. Güvenlik için kıyafetler (Eğer gerekirse laboratuvar önlüğü, gözlüğü ve eldiven giyin) giyin ve reaktiflerin deri ile temasından kaçının; yemeyin. Deri/ gözlerle herhangi bir temastan yıkama/sulamayla tedavi edilmelidir. Analitik numunelerin alerjik, toksik veya bulaşıcı potansiylerini bilmekte önemlidir. 5. Kit Bileşenleri Her bir kit 96 tespit için yeterli materyaller içerir (standart ve kontroller dahil). Her kitin bileşenleri aşağıda verilmektedir: 6. Gerekli fakat sağlanmayan materyaller 3

4 7. Numune ve kontrolin ekstraksiyonu ve hazırlanması 7.1. Numune ekstraksiyon reaktiflerinin hazırlanması (32 kuyu için yeterli) STOCK 0.25M TRIS-HCL PH 8.6 (200 ML) 1. Bir 250ml beher içine tam olarak 6.06g (±0.06g) Tris (hidroksimetil) metilamin tartın. 2. Bütün Tris solüsyon olana kadar karıştırın ve yaklaşık 150 ml saf su ekleyin. 3. ph ı ph 8.6 (±0.2) ya ayarlamak için 1.0M HCL ekleyin (yaklaşık ml). 4. Miktarı belli olacak şekilde 200 ml volumetrik erlene aktarın ve 200ml (±2ml) saf suyla tamamlayın. 0.05M TRIS BUFFER ph 8.6 (600 ml) 1. Saf suyun 480ml (±4.8ml) sini stokun 120 ml (±1.2ml)sine eklenmesi ile stok 0.25M Tris-HCL ph 8.6 ya dilüe edilir. UREA-DTT EXTRACTION BUFFER (100 ml) ml konik şişe içine urenin 80.0 g (±0.8g) ını tartın ml (±0.2ml) saf suya ve 20 ml (±0.2ml) stok 0.25M Tris-HCl ekleyin. 3. Üre çözülene kadar Bunsen flame üzerinde yavaşça sabit bir şekilde karıştırarak ısıtın. 4. Sıcak üre solüsyonuna 0.29 g (±2mg) DDT ekleyin ve çözülene kadar döndürerek karıştırın ºC (±2ºC) de su banyosuna şişeyi aktarın ve bu sıcaklıkta tutun. * Not: Solüsyonun kullanım öncesi veya sırasında herhangi bir noktada kristalize olmasına izin vermeyin. RENATURASYON SOLÜSYONU (1000 ml) ml beher içine 1.8 g (±0.02g) L-sistin tartın. Volumetrik pipet kullanarak 1.0M NaOH in 20.0 ml(±0.2ml) sini ekleyin. Hafifçe karıştırarak L-sistini tamamen çözün litre beher içinde 900 ml (±9ml) saf suda çözün ve 3.5 g (±0.03g) NaCl tartın. 3. Sabit bir şekilde karıştırarak NaCl solüsyonuna 20 ml (±0.2ml) L-sistin solüsyonu yavaşça ekleyin; saf suyla kalan L-sistin solüsyonunu durulayarak tamamen aktarın. 4. Sabit bir şekilde karıştırarak ph ölçülüyorken L-sistin-NaCl solüsyonuna 1.0M HCl den 8 ml (±8μl) ekleyin. 5. Son olarak yaklaşık 1.0M HCl in 1.5-3ml sini ekleyerek ph 9.0 a ayarlayın, sonra saf suyla 1.0litre (±1ml) yi toplam hacme tamamlayın. 7.2 Çamurun hazırlanması (0.7 ile 14% kantifikasyon aralığı için bölüm 12 e bakın) 1. Blender konteyner içine numunenin yaklaşık 12.0 g (±0.12g)ını doğru olarak tartın. Çalışma kâğıdının üzerine W1 olarak doğru ağırlığı kaydedin. 2. Blender konteyner içine 0.05M Tris-HCl Buffer ph 8.6 ın yaklaşık 48.0 g (±0.48g) doğru olarak tartın. Çalışma kâğıdının üzerine W2 olarak doğru ağırlığı kaydedin. 3. Uygun düzgün bir homojen karışım elde edene kadar numuneyi harmanlayın. 4. Blender konteynerında dokundan büyük parça bırakmadan, dikkatlice bir 100 ml lik behere çamurun mümkün olduğu kadarını aktarın. 5. Bir homogeniser kullanarak numuneyi tamamen homojenleştirin. Son karışımı düzgün bir şekilde kolaylıkla (1mm pipetin uç çapı) homogenati pipetleyin ml tıkanmış konikal şişeye ayrı ayrı her homogenati yaklaşık 2.5 g (±0.02g) doğru olarak tartın. (Bu, denge tavasına direk olarak şişeyi yerleştirerek yapılabilir 4

5 ve bir pasteur pipeti kullanarak homogenate aktarılabilir. Dışarıda kurumasına izin verilmeden ve pipetlenmeden önce homogenatin iyice karıştırıldığından emin olun). Çalışma planının üzerine W3 olarak doğru ağırlığı kaydedin ºC* olan su banyosuna her bir şişeyi yerleştirin; bu üre-dtt ekstraksiyon bufferına eklenmeden önce homogenati ve şişeyi önceden ısıtın. 7.3 Soya Kontrolünün hazırlanması 1. Bir 50ml tıkanmış konikal şişe içine SOYA CONTROL un yaklaşık 40mg (±0.4mg)ını doğru olarak tartın. Çalışma kağıdının üzerine W4 olarak doğru ağırlığı kaydedin M Tris-HCl buffer ph 8.6 ın 2.5 ml (±25 μl) sini şişeye ekleyin; döndürerek süspansiyon içine tozu yavaşça karıştırın. 3. Et numuneleri için önceden ısıtılmış olan 50ºC de bir su banyosuna şişeyi yerleştirin. 7.4 Soya Kontrolünün ve çamurun ekstraksiyonu 1. 50ºC de su banyosondaki soya protein kontrol şişesine ve numunenin her biri için 100ºC de dereceli bir pipet kullanarak üre-dtt ekstraksiyon Bufferın 7.5 ml (±0.1ml) sini ekleyin. NOTE: Pipet ucunda ürenin kristalleşmesini ve soğumasını önlemek için üre-dtt ekstraksiyon buffer şişesi içinde pipeti dik bırakın. 2. Her şişeyi kapayın ve düzgün bir süspansiyon oluşturmak için yavaşça döndürerek iyice karıştırın. 100ºC* deki su banyosuna şişeyi hemen transfer edin. 3. Sık sık karıştırarak 60 dakika (±1 dak.) boyunca 100ºC de şişeyi inkübe edin ºC deki su banyosundan bütün şişeleri çıkarın ve kristalleşmeden üre-dtt ekstraksiyon bufferı korumak için hepsini 50ºC deki su banyosuna yerleştirin. 7.5 Ekstraksiyon numunelerin ve kontrollerin renatürasyonu 1. Su banyosunda 50ºC de her şişe için Renatürasyon Solüsyonun 20 ml si sabit bir şekilde karıştırılarak yavaşça ekleyin. Döndürülerek her şişenin içindekileri iyice karıştırın ve 50ºC deki su banyosunda şişelerin yerini değiştirin ºC* deki su banyosundan sırasıyla her şişeyi çıkarın ve 50ºC de Renatürasyon Solüsyonunda 10 mllik üç hacim kullanarak 100 ml volumetrik erlene içindekilerin miktarları belli olacak şekilde aktarın. Döndürerek iyice karıştırın ve oda sıcaklığına soğuması için bırakın. Oda sıcaklığında Renatürasyon Solüsyonla 100ml ye tam olarak hacmi tamamlayın. 3. Tekrarlanan ters dönme ile iyice karıştırın ve hemen her şişenin içindekileri bir büzgülü veya katlanmış 18,5 cm çaplı Whatman No.1 filtre kağıdıyla filter edin. Sadece filtratın ilk 10 ml (±2ml) sini toplayın. 4. Test öncesi filtratın 100μl (±1μl) sine 900μl(±9μl) Working Assay Diluent Solution ekleyerek 1:9 oranında kontrol ve numuneyi dile edin. 8. Enzim Immunoassay 8.1 Hazırlama 1. Test numuneleri, Soya Kontrol (bölüm 7) ve kit materyallerini hazırlayın (yukarı bakın). 2. Kit kutusundan tüm reaktifleri çıkarın ve test başlamadan önce oda sıcaklığına (18 22 C) ulaşması için bekletin. 5

6 3. Soya Standards, Anti-Soya Protein, Anti-Rabbit Conjugate, TMB Substrate ve Stop Solution kullanıma hazırdır. Herhangi bir hazırlık gerekmez, alt üst ederek sadece karıştırın (çalkalamayın). 4. Konsatre yıkama solüsyonu: 10 kat konsantre olarak sağlanmıştır. Working Wash Solüsyonu hazırlamak için 1:9 oranında saf suyla dilue edin. Örneğin volimetrik şişe/silindire 100ml (± 1ml) ekleyin ve saf su ile 1.0 litre (± 10mls) e tamamlayın. 5. Diluent konsantre türü 1: 5 kat konsantre olarak sağlanmıştır. Working Assay Diluent Solüsyonu hazırlamak için 1:4 oranında saf suyla dilue edin. Örneğin 32 mikrokuyu için, 26ml (± 0.1ml) saf su için 6.5ml (± 0.1ml) ekleyin. 6. Soya Protein Plakası: Folyo poşetini açın. Mikrokuyu modülünü çıkarın, kullanılacak kadar mikrokuyu stripi çıkarın ve kullanılmayanları tekrar nem tutucu içinde olucak şekilde tekrar folyo poşetine koyun. Not: Bir kalem kullanarak, kullanılan şeritlerin üst kenarında başlayarak sütunu numaralandırın; bu durum hangi stripin nereye ait olduğunu gösterecektir Test Procedure BIOKITS Soya Assay Kit 8-kuyu striplerin kullanımı çeşitli formatlarda gösterilebilir; gerekli reaktif hacimlerinin özetleri bölüm 13 de verilirmiştir ve örnek test planları ekli çalışma kağıdında gösterilmiştir. İmmunotestler ilk olarak tanıtıldığında 24 veya 32 test kuyu gruplarının seçilmelidir. Blank and Maximum Binding kuyuları hariç bütün reaksiyon kuyuları çift çalışılmalıdır ve kuyuların her çiftinin ortalama absorbans değeri hesaplanmalıdır. Sonuçlar çalışma planında 32 test kuyuları üzerine kaydedilebilir. 32 test kuyusuyla 10 kuyu standartlar için (5 çift çalışma), 2 kuyu kontrol (1 çift çalışma) için ve sırasıyla Substrat Blank ve Maksimum Binding için her birine 1 kuyu kullanılır. Test numuneleri için 18 kuyu bırakılır (9 çift çalışma). Not: Test çalışılmaya başlandığında, tüm adımlar mikrokuyu boyunca "drift" test olasılığını azaltmak için kesintisiz tamamlanmalıdır. Prosedür Hacim Açıklama Ekleme 50 μl (±0.5μl) Uygun test kuyusu içinde SOYA STANDART veya dilüe SOYA KONTROL ekstratı, dilüe numune ekstratı pipetleyin. Ekleme 50 μl (±0.5μl) Maximum Binding kuyusu içine Working Assay Diluent Solüsyonu pipetleyin. Substrate blank boş bırakılmalıdır. Not: Kontaminasyonu önlemek için her bir pipetleme adımı için ayrı pipet ucu kullanın. Ekleme 50 μl (±0.5μl) Her bir test kuyusu içinde ANTI- SOYA PROTEIN dağıtın. Substrate blank kuyusu hariç. Dikkat: Mikrokuyulara pipet ucunun değdirmeyin. Sütun 1 de "M" kuyusundan düzenli olarak başlayarak çalışın ve tüm sütunlar antikor içerene kadar devam edin. Karıştırma/inkübe etme Oda sıcaklğında sabit karıştırarak 10 dakika (±30secs) inkübe edin. Yıkama Working Wash Solüsyonu ile 6

7 beş kez yıkayın* Ekleme 100 μl (±1.0μl) Her test kuyusu içine ANTI- TAVŞAN KONJUGATINı dağıtın. Substrate blank kuyusu hariç. Karıştırma/inkübe etme Oda sıcaklğında sabit karıştırarak 10 dakika (±30secs) inkübe edin. Yıkama Working Wash Solüsyonu ile beş kez yıkayın* Ekleme 100 μl (±1.0μl) Her test kuyusu içine TMB SUBSTRATE dağıtın. Substrate blank kuyusu dahil. Karıştırma/inkübe etme Oda sıcaklğında sabit karıştırarak 10 dakika** (±30secs) inkübe edin. Ekleme 50 μl (±0.5μl) Her test kuyusu içine STOP SOLUTION dağıtın. Substrate blank kuyusu dahil, TMB SUBSTRATE eklemek için aynı sırayı kullanın. Karıştırma 10 saniye (±1sec) boyunca karıştırın. Absorbans ölçme STOP SOLUTION eklenerek 30 dakika içinde bir plaka okuyu kullanarak absorbanse (OD450nm) okunur. *Yıkama: Kuyuların içinde kalanları da tam uzaklaştırmak için bir lavabo üzerinde ters çevirerek hızlı hareketle vurarak boşaltın. Working Wash Solution içeren 500ml yıkama şişesi kullanarak yukardan başlayarak her kuyuyu doldurun, saniye boyunca bekletin sonra plakayı yukarıda açıklandığı gibi boşaltın: her üç yıkamada bir bu yıkama sırasını tekrarlayın. Emici kağıt ile kalan sıvı ve kabarcıkları uzaklaştırın. Plaka ters çevrildiğinde, çerçeveden striplerin dışarı taşmasını engellemek için uzun kenarların çerçeveye iyice oturduğundan emin olun. Alternatif olarak, inkübasyon süresinin sonunda Microwell washerini kullanarak kolon 1 de tüm kuyuların içeriğini aspirte edin sonra Working Wash Solüsyonuyla kuyuları doldurun. Kuyuların her kolonu için bu sırayı tamamlayın (tüm kuyular şimdi Wash Solution ile doldurulur). Kolon 1 için Microwell yıkamaya geri dönün ve çekme/doldurma dizisini dört kez tekrarlayın (her kolon beş kez yıkanmış olacaktır). Son olarak, tüm kuyuları çekmek için Microwell yıkama kullanın sonra baloncukları ve Yıkama Solüsyonunun artan damlacıklarını uzaklaştırmak için emici kağıdının üzerine plakayı ters çevirerek biraz vurun. **Absorbans ölçme: 450 nm filtresine uygun bir microplate okuyucusu kullanarak blanki havada okutun. Kolon 1 de "B" kuyusunda başlayan test kuyularının her birinin absorbansını ölçün; kolon 2 in üstüne geçmeden önce kolon 1 in okunmasını tamamlayın. Bütün kuyular ölçülene kadar bu işlemi tekrarlayın. Tüm okumalar STOP SOLÜSYONU eklenerek 30 dakika içinde tamamlanmalıdır. Çalışma tablosunda verilen test kuyusu üzerindeki sonuçları kaydedin ve ortalama absorbans değerleri hesaplayın. Not: Renk gelişme oranı laboratuvar koşullarına bağlıdır ve uygun OD450nm düzeyleri elde etmek için takip edilmelidir. 7

8 9. Sonuçların hesaplanması Gıda numunelerinde Soya proteinin bilinmeyen değer düzeyleri bir kalibrasyon eğrisiyle belirlenir. Beş SOYA STANDARTının her biri için ortalama absorbance değerini çizin ve düz çizgi çizin veya komşu noktalara katılması için en iyi eğriyi seçin. Numunelerin ve SOYA KONTROLun soya protein düzeylerini belirlemek için her çif çalışmadan ortalama absorbance değerini alın ve kalibrasyon eğrisinden uygun soya protein [S.P.] konsantrasyonun ara değeri bulun (Çeşitli standart eğri veri örneği için analizin ek belgesi bakın). [S.P.] değeri aşağıdaki detaylar gibi hesaplamalar ve ek çalışma kağıdı kullanılarak numunede % Soya protein hesaplamak için kullanılabilir. Örnek çalışma hesaplanması [S.P.] Standart eğriden okunana soya protein konsantrasyonu (μg/ml) W1 Et numune ağırlığı (grams) W2 Tris Buffer ağırlığı (grams) W3 Şişeye eklenen homojenatın ağırlığı (grams) W4 Şişeye eklenen kontrol toz ağırlığı (mgs) W5 Et ekstratının ağırlığı [ W1 / (W1+W2) ] W %SP % Numunede soya proteini ( [S.P.] / W5) 100 % R % Soya Kontrolün geri kazanımı ( [S.P.] / [W4 Protein Değeri]) μg/ml standarttan daha büyük olan absorbans değeri veren numune içerik olarak 0.7% soya proteinden daha az olarak yorumlanmalıdır, 70μg/ml standarttan daha küçük absorbans değeri veren numune eğer 12.0 gram numune protokolü kullanılsaydı 14% soya proteininden daha büyük olarak yorumlanmalıdır (Bölüm 12 bakın). 10. Raf ömrü Dilue edilmiş yıkama bufferı: 1:9 oranında dilüe edildiğinde yıkama bufferı oda sıcaklığında kapalı temiz kaplarda en az 1 hafta için stabildir. Dilue edilmiş test dilüenti: Taze test dilüenti her bir test için hazırlanmalıdır. 8

9 Ekstraksiyon Reaktifleri: Taze ekstraksiyon reaktifleri günlük hazırlanmalıdır. Ekstre edilmiş numuneler: Ekstre edilmiş numuneler (filtrelenmiş) testten önce 2 ile 8ºC de 48 saate varana kadar saklanabilir veya -20 º C'de birkaç ay boyunca dondurularak (ya filtrelenmiş yada dilüe edilmiş ekstreler) saklanmalıdır. Kit Reaktifler: Kit 2-8ºC de saklanmalıdır. Kitin ve bileşenlerin raf ömrü, ilgili etiket üzerindeki son kullanma tarihi ile gösterilir. Kit reaktiflerinin açıldığı andan itibaren yüksek sıcaklıklara (Yani oda) maruz kalması en aza indirilmelidir. Antikor duyarlı plaka:: kuru tutulmalı ve iyi kapatılmalıdır; Eğer gerekirse kurutucu kapsülü (eğer hala aktifse turuncu kalıntı olur), 100 º C deki bir fırına yerleştirilerek tekrar kurutulabilir. Bu saklama talimatlarıyla uygun şekilde açılması sağlanan reaktifler 2-8 ºC de birkaç hafta veya ay için stabil olmalıdır. 11. Performans Özellikleri Test ortam sıcaklığında en iyi performansı vermek için tasarlanmıştır(19-23ºc). Substrat Blankı çıplak gözle renksiz olarak gözükmelidir. Görünür renk ANTI- TAVŞAN KONJUGAT ile TMB SUBSTRAT'in kirliliğini veya bitişik kuyulara ekleme esnasında ANTI-TAVŞAN KONJUGAT ın sıçratması görünebilir. Maksimum bağlayıcı (Bzero; sıfır standart) absorbansı 1.4 absorbans biriminden daha büyük olmalıdır(a450nm). Maksimum bağlayıcı kuyuyun absorbans ile 3.5 μg/ml standartın ortalama absorbansı oranı (substrate blank düzeltilmiş) 0.4 den daha büyük olmalıdır. Soya Control %'in bir aralığıyla bir kurtarma değerini verir. Eğer maksimum bağlayıcı, standartlar ve substrat blankse, absorbance değerleri ve oranları teknik özellikler içindedir ancak kontrol kurtarma değeri devamlı olarak yüksek veya düşük olan ekstaksiyon prosedürü hatalı durumda olabilir. 19ºC altında veya 23 º C yukarısında sıcaklıklarda inkübasyonlar yüksek performans sağlamak için sırasıyla azaltılmış veya uzatılmış olabilir. Zayıf tekrarlanma (altı Zero Standard kuyusu %CV > % gibi) TMB substrate kirlenmesini veya Avidin Peroksidaz sıçramasını ve yetersiz yıkama göstergesidir. Böyle tutarsızlık testin performansı sırasında bir sorun göstergesidir ve GEÇERSİZ olabilir ve tekrarlanması gereklidir. 12. Kantifikasyon aralığı BioKits SOYA PROTEIN ASSAY numunenin toplam ıslak ağırlığının 14% un 0.7'si soya protein düzeylerini ölçmek için tasarlanmıştır. Bu aralık dışında soya proteininin düzeylerini içeren numuneler, çamur hazırlamak için kullanılan 0.05M Tris-HCl Buffer için numune oranında değişiklik ile ölçülebilir. Testin aralığını genişletmek veya azaltmak için aşağıdaki tabloya bakın. 9

10 13. Reaktif Hacmi Gereksinimlerine Örnek 14. Bibliyografya 1. Kinsella et al (1979) J. Am. Oil Chem. Soc., Vol. 56, No. 3, p Flint & Meech (1978). Analyst., Vol. 103, p Guy et al (1973) J. Sci. Food Agric., Vol. 24, p Bailey (1976) J. Sci. Food Agric., Vol. 27, p Hitchcock et al (1981) J. Sci. Food Agric., Vol. 32, p Crimes et al (1984) J. Assoc. Publ. Analysts., Vol. 22, p Griffiths et al (1984) J. Sci. Food Agric., Vol. 35 p Cleland (1964) Biochemistry., Vol. 3, No. 4, p