Kullanım Talimatları SAS-3 SERUM PROTEIN. Katalog No:

Transkript

1 Kullanım Talimatları SAS-3 SERUM PROTEIN Katalog No:

2 KULLANIM AMACI SAS-3 Serum Protein kiti agaroz jel elektroforezi ile serum proteinlerinin ayrılması ve miktarının belirlenmesini amaçlar. Farklı patolojik koşullar altında, özgün çeşitlilikteki konsantrasyonlarına bağlı olarak, her birinin özgün fonksiyonları ile serum, 100 ün üzerinde bağımsız protein içerir. Tiselius tarafından taşıyıcı elektroforezin tanımlanmasından ve sırasıyla zone elektroforezin kullanılmasından beri, serum proteinleri, özel bir ph da yüklerine bağlı olarak fraksiyonlarına ayrılır. SAS-3 Serum protein kiti serum proteinlerini, bir agaroz jelde yüklerine göre 5 ana sınıfa (albumin,alfa I-globulin,alfa 2-globulin,beta-globulin ve gama globulin) ayırır. Proteinlerin daha sonra boyanması, görünmeleri ve miktarlarının yorumlanmasını sağlar. Her klasik elektroforetik zon,albumin hariç,normalde 2 veya daha fazla komponent içerir. Bu fraksiyonların ilgili oranlarının, çeşitli hastalık durumlarının pragnozu ve diyagnozunda yardımcı, yararlı olduğu kanıtlanmıştır. UYARILAR VE ÖNLEMLER Tüm kitler yalnızca in-vitro diagnostikte kullanım içindir. Herhangi bir kit bileşenini ağzınızla pipetlemeyin, ağzınıza sürmeyin. Tüm kit bileşenlerinin işlemi sırasında eldiven giyin. Risk, güvenlik koşulları ve atım bilgisi için ürün güvenlik kağıdına başvurun. BİLEŞENLER 1 - SAS-3 Serum Protein Jel Koruyucu olarak sodyum azid ve thimersol ile bir Tris/Barbital bufferı içeren agaroz. Paket içindeki jel kullanım için hazırdır. 2 - Konsantre Mavi Asit Boya Konsantre mavi asit boya içerir. Şişe içeriği 700ml saf su ile dilüe edilir. Kullanım öncesi karıştırılır ve filtre edilir. İyi kapatılmış bir şişede saklanır. 3 - Konsantre Boya Arındırıcı Solüsyon Konsantre boya arındırıcı solüsyon içerir. Şişe içeriği 5 litre saf su ile dilüe edilir. Sıkı kapatılmış bir şişede saklanır. 4 - Diğer Kit Bileşenleri Her kit kullanım talimatları ve 10 jeli tamamlamak için yeterli miktarda kurutma kağıdı C içerir. SAKLAMA VE RAF ÖMRÜ 1 - SAS-3 Serum Protein Jel Jeller derecede saklanmalıdır ve paket üzerinde belirtilen son kullanma tarihine kadar stabildir. DOLABA KOYMAYIN VEYA DONDURMAYIN. Jelin bozulması belirtebilir,1) jelin dondurulması kristal görünümü belirtir, 2) jelin kuruması, çatlama ve kuruluğu veya 3)bakteriyal ya da fungal kaynaklı agarozun görülür kontaminasyonunu belirtir. 1

3 2 - Mavi Asit Boya Konsantre boya derecede saklanmalıdır ve etiket üzerinde belirtilen son kullanma tarihine kadar stabildir. Dilüe edilmiş boya solüsyonu derecede 6 ay stabildir. Boya kapasitesinin azalmasını önlemek için derhal kullanılan boyanın çıkarılması tavsiye edilir. Zayıf boyama performansı, boya solüsyonunun bozulduğunu belirtebilir. 3 - Boya Arındırıcı Solüsyon Konsantre boya arındırıcı solüsyon derecede saklanmalıdır ve etiket üzerinde belirtilen son kullanma tarihine kadar stabildir. Dilüe arındırıcı solüsyon derecede 6 ay stabildir. SAĞLANMAYAN FAKAT GEREKSİNİLEN ÖĞELER Katalog No Numune Aplikatör Ucu (1x10) Katalog No Numune Aplikatör Ucu (5x10) Katalog No Tek kullanımlık numune kapları (100) Katalog No.3100 REP Prep NUMUNE TOPLANMASI VE HAZIRLANMASI Tercih edilen numune taze toplanmış serumdur. Numuneler 4 güne kadar derecede,2 haftaya kadar 2-6 derecede veya 6 aya kadar 20 derecede saklanabilir. İdrar ve CSF de ayrıca izleyen uygun konsantrasyon adımında (50-100x) kullanılabilir. Plazma kullanımı beta ve gama fraksiyonları arasında bir fibrinojen bandına sebep olur. Etkileyici Faktörler: 1) Hemoliz, alfa 2 ve beta fraksiyonlarında yanlış yükselmelere sebep olabilir. 2) Buharlaşmaya bağlı olarak, kapatılmayan numunelerde yanlış sonuçlar elde edilebilir. ADIM-ADIM PROSEDÜR 1. Cihaza aşağıdaki parametreleri programlayın: Adım Zaman(dk:sn) Sıcaklık(derece) Voltaj Diğer Elektroforezler Numune Yükleme 00:30 21 Hız 1 Numune Uygulama 00:30 21 Hız 1* Elektroforez(80) 12: Elektroforez(100) 09: Kurutma 08:00 54 Boyama Boya 04:00 Dolaşım AÇIK Boya arındırma 02:00 Dolaşım AÇIK Boya arındırma 02:00 Dolaşım AÇIK 2

4 Kurutma 12:00 63 * SAS-3 için pozisyon 1 kullanılır. 2. Aplikatör ucunun doğru sayısını cihaz üzerinde pozisyonuna bağlayarak yerleştirin: Numune sayısı Aplikatör Pozisyonu SAS ,A,9,13, ,7,12,16 3. Tek kullanımlık uygun numune kaplarına 35μl numune pipetleyin. Buharlaşmadan numuneleri koruyun. 4. Jeli paketinden çıkarın ve kaplamasını atın. 5. 2ml REP Prep i bölmenin sol tarafına boşaltın ve dikkatlice bölme içine jeli koyun, bölme içinde iğneler ile jel bağlarındaki delikleri hizalayın ve jelin altında kabarcık oluşturmamaya dikkat edin. Elektrot kollarına elektrotlar eklenir böylece jel blokları ile temasa ederler. 6. Jelin yüzeyi kurutma kağıdı C ile kurutulur, kurutma kağıdı alınır. 7. Serum Protein test programını seçin ve uyarıları izleyin, numuneleri uygulayın ve elektroforezi yapın. 8. Elektroforezi takiben, elektrotları alın ve Gel Block Remover kullanarak her iki jelin kurutucusunu alın. 9. Boyama kabı jel tutucusuna jel tutturulur. 10. Boyama ünitesinde Serum Protein test programı seçilir ve izleyen uyarılar, Boyama, Boya arındırma ve jel kurutma. 11. Boyama döngüsünün sonunda, boyama alanından jeli alın. Jel şimdi incelenmek için hazırdır. KALİTE KONTROL Kemtrol Serum Kontrolleri (Katalog No.7024 ve 7025) her plaka çalışmasında ve prosedürün tüm basamaklarını doğrulamak için kullanılabilir. Uygun test değerleri için sağlanan paket içeriğine bakın. SONUÇLARIN YORUMLANMASI Her laboratuvarda bu yöntem için üretilen normal değerlere karşı jellerin değerlendirilmesi tavsiye edilir. Serum protein değerlendirilmesinin gözden geçirilmesinin tamamlanması için, Ritzmann,S.E,1982 bakınız. Çalışmalar erkekler ve hamile olmayan kadınlar için aynı değerler olduğunu gösterir. Hamilelik dönemlerinde ve oral kontraseptif kadınlarda bazı farklılıklar görülür. Yaşın normal değerler üzerine biraz etkisi vardır. Kordon kanında düşürülmüş total protein, albümin, alfa2 ve beta fraksiyonları, çok az yükselmiş alfa 1 ve normal veya 3

5 yükselmiş gama fraksiyonu bulunur.(geniş materyal kaynağı) Gama globulinler yaklaşık 3 aya kadar hızlı damlarlar, bu zamanda diğer fraksiyonlar yetişkin seviyesine erişir. Gama globulinlerin yetişkin seviyelerine yaşına kadar erişilmez. 40 yaşın üzerinde albümin azalır, beta globulin artar. 1.Kalitatif Değerlendirme: İlgili özel bantların varlığı veya yokluğu için jeller görsel olarak araştırılabilir. 2.Kantitatif Değerlendirme: 595nm de, oturtulan jeller taranır. Diğer bir durumda, özel serum proteinlerinde bir azalma veya yükselme veya genel olmayan serum bileşenlerinin tespiti ileri araştırmaları gerektirir. Tamamlanan jeli tanımlanmamış bir zaman için stabildir. SINIRLAMALAR Doğrusal olmayan tüm elektroforez prosedürleri için, tekrarlanabilir ve kararlı optimal sonuçları sağlamak için kullanım talimatları izlenmelidir. Kullanım talimatlarını izlerken meydana gelen hata elde edilen sonuçları etkileyebilir. REFERANS DEĞERLERİ yaşları arasında erkek ve kadın donörlerden 20 normal numune kullanılarak aşağıdaki normal değerler elde edilmiştir (yayınlanan bu değerler yalnızca bir kılavuzdur): Protein Fraksiyonu Ortalama (%) +,-2SD Aralığı Albümin Alfa Alfa Beta Gama PERFORMANS ÖZELLİKLERİ Tekrarlanabilirlik Jel İçi (n=60) Jel Arası (n=180) Ortalama (%) CV(%) Ortalama (%) CV(%) Albümin Alfa Alfa Beta Gama

6 Hassasiyet Metod, bant başına tamamlanan jelde bir ayrık bant gibi kanıtlanan,belirlenmiş proteinin en düşük konsantrasyonunda,0.3 g/l ye kadar hassastır. Doğrusallık Metodun doğrusallığı, jel performansı gibi densitometre özelliğinin bir fonksiyonudur. Laboratuarda kullanılan densitometreye bağlı metodun doğrusallığının belirlenmesi her müşteriye tavsiye edilir. BİBLİYOGRAFYA 1. Alper, C.A. 'Plasma Protein Measurements as a Diagnostic Aid', N. Eng. J. Med., 1974; 291 : Tiselius, A. 'A New Apparatus for Electrophoretic Analysis of Colloidal Mixtures', Trans. Faraday Soc., 1937; 33 : Ritzmann, S.E. and Daniels, J.C. 'Diagnostic Proteinology: Separation and Characterization of Proteins, Qualitative and Quantitative Assays' in Laboratory Medicine, Harper and Row, Inc., Hagerstown, Tietz, N.W. (Ed.), Textbook of Clinical Chemistry, W.B. Saunders Co., Philadelphia, pages , Ritzmann, S.E. (Ed.), Protein Abnormalities Volume 1 : Physiology of Immunoglobulins - Diagnostic and Clinical Aspects, Allen R. Liss, Inc., New York, Tietz, N.W. (Ed.), Textbook of Clinical Chemistry, (3rd Edition), W.B. Saunders Co., Philadelphia, page 524,