Kullanım Talimatı. In Vitro Diagnostik Kullanım İçin SADECE İHRACAT İÇİN

Transkript

1 INFINITI MTHFR Testi Kullanım Talimatı In Vitro Diagnostik Kullanım İçin SADECE İHRACAT İÇİN Üretim Yeri: AutoGenomics, Inc., 2980 Scott Street, Vista, CA USA Yetkili AB Temsilcisi: BÜHLMANN Laboratories AG Baselstrasse 55 CH-4124, Schönenbuch, Switzerland 1 of 10

2 KULLANIM AMACI INFINITI INFINITI MTHFR denemesi, insan kanından elde edilmiş DNA daki MTHFR (A1298C and C677T) nokta mutasyonunu tespit etmek ve genotiplemek için, polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) primerleri, hibridizasyon matrixleri, termal cycler, kamera ve yazılım olmalk üzere bir dizi reaktif ve aletlerden oluşan in vitro diagnostik bir cihazdır. INFINITI MTHFR denemesi, yetkili hekimin reçetesi üzerine klinik laboratuvarlar tarafından kullanılmak üzere oluşturulan kalitatif bir testtir. MTHFR nin tespit edilmesi ve genotiplenmesinde kullanılan INFINITI MTHFR denemesi thrombophilia???? şüphesi taşıyan hastaların değerlendirilmesinde tanıya yardımcı olarak gösterilmektedir. TEMEL BİLGİLER (1, 2) Genetik risk faktörleri venöz tromboza kişisel yatkınlıkla ilişkilendirilmektedir. Kalıtsal tromboz ile ilişkilendirilen en yaygın mutasyon Factor V Leiden G1691A mutasyonudur ve aktive edilmiş protein C ye direnç ile sonuçlanmaktadır. Bu mutasyon genel populasyona oranla göreceli yüksel bir yaygınlık göstermektedir (Beyaz ırk da %5) ve aktive edilmiş protein C vakalarının %85-95 inden sorumlu tutulmaktadır. (2) Factor V Leiden G1691A mutasyonu venöz tromboz için heterozigotlarda 3 den 8 e, homozigotlarda 30 dan 140 a artan olasılık oranlarında risk haline gelmektedir (3). Kalıtsal tromboz ile ilişkilendirilmiş en yaygın ikinci mutasyon, protrombin (Faktör II) genindeki G20210A mutasyonudur. Bu mutasyon yüksek plazma protrombin seviyeleri ile ilişkilendirilmektedir ve genel populasyonun % 1-2 sinde görülmektedir. (2) Protrombin G20210A mutasyonunun heterozigot taşıyıcıları venöz tromboz için yaklaşık 3-8 kat daha yüksek risk altındadır. Homozigot taşıyıcılar oldukça enderdir ve homozigot mutasyon ile ilişkili risk miktarı hakkındaki bilgiler çok kısıtlıdır. Faktör V Leiden G1691A ve Faktör II (Protrombin) G20210A mutasyonlarının ikisini de bulunduran heterozigotluk durumlarında, mutasyonlardan birini bulunduran heterozigot duruma nazaran trombozun başlangıcı daha erken olmakta ve hastalık daha şiddetli yaşanmaktadır. Yüksek plazma homosistein seviyeleri venöz tromboz için bir diğer risk faktörüdür ve metilen tetra-hidrofolat redüktaz (MTHFR) genindeki bir genetik varyasyon ile ilişkilendirilmektedir. MTHFR C677T varyasyonu ısıkararsız enzim ve homosisteinin tekrar-metilasyonu için gerekli bir kofaktör olan folat üretiminde düşüş ile sonuçlanmaktadır. MTHFR A1298C mutasyonu C677T mutasyonu ile birlikte görüldüğünde artan plazma homosistein düzeyleri ve düşük plazma folat miktarı ile ilişkilendirilmektedir. TEST PRENSIBI /TESTE BAKIŞ INFINITI MTHFR denemesi, MTHFR (A1298C ve C677T) mutasyonlarını eş zamanlı olarak tespit etmek için tasarlanmıştır. Test protokolü 5 temel proses üzerine kuruludur: (a) İnsan kanından DNA izolasyonu (b) Saflaştırılmış DNA ın PCR amplifikasyonu (c) Analite özgü primer uzantı (ASPE) kullanarak Floresans işaretleme (d) Yıkamanın ardından bir microarray için ASPE primerlerinin hibridizasyonu 2 of 10

3 (e) Mikroarray ın taranması (f) MTHFR genotiplerinin sinyal tespit ve analizi AutoGenomics (c) den (f) e kadar basamaklar INFINITI Analizörü ile otomatik yapılmaktadır. Testin şematik özeti aşağıdadır; CİHAZ TANIMI INFINITI MTHFR denemesi insanda tam perifer kan örneğinden elde edilen DNA dan MTHFR (A1298C ve C677T) mutasyonlarının tespit edilmesi ve genotiplenmesinde kullanılan AutoGenomics tescilli, film- temelli microarray teknolojisini proses otomasyonu, reaktif yönetimi ve yazılım teknolojisi ile kombinleyen in vitro diagnostik bir metotdur. The INFINITI MTHFR denemesi BioFilmChip Microarray, Intellipac Reaktif Modülü ve Qmatic İşeltim Yazılımı kullanan INFINITI Analizörden faydalanır. BioFilmChip Microarray DNA analizleri için tasarlanmış tescilli çoklu tabaka komponent ile kaplı polyester filmlerden meydana gelmiştir. Tabakalar, test performansını arttırmak için çok amaçlı bir yüzey sağlamak üzere tasarlanmıştır. INFINITI MTHFR Yakalama Probları içeren microarray çip (L-Chip) lerden oluşmuştur. Kullanılmamış yakalama probları çeşitli spesifik testler için kullanılabilir. Bu sebeple, aynı microarrayde çoklu denemeler geliştirilebilir. Intellipac Reaktif Modülü, test reaktiflerinin yerleştirildiği ve bütünleşmiş hafıza çipinin bulunduğu bir iletişim hattıdır. Lot numarası, son kullanma tarihi, miktar kullanımı gibi reaktif bilgileri hafıza çipinde arşivlenmekte ve çalışma raporunda görüntülenmektedir. INFINITI Analizörü klinik çoklu sistemlerinde, klinik bir örnekten gelen çoklu sinyalleri ölçmek ve ayrıştırmak amacıyla kullanılan bir cihazdır. INFINITI Analizatörü işaretlenmiş hedef DNA nın BioFilmChip microarraylerde hibritleşmesiyle oluşan florasansı ölçmek üzere tasarlanmıştır. INFINITI Analizör; MTHFR testini otomatikleştirmiş ve örneklerin(pcr ürünü) dağıtımı, reaktif yönetimi, hibridizasyon, tespit ve sonuç analizi gibi farklı prosesleri bütünleşmesini sağlamıştır. Test otomatik olarak tamamlanır ve noktalar aynı odaklı dahili bir mikroskop tarafından okunmaktadır. Sonuçlar genotip çağrı şeklinde analiz edilmekte ve sunulmaktadır. 3 of 10

4 INFINITI Analizörü iki ana bileşenden oluşmaktadır: pipetleme ve optik modül. Cihazın işlemesinden çeşitli türde elektronik bileşenler sorumludur. Bunlar: hepsi USB porta bağlı olmak üzere çoklu basamaklı motorlar, ısıtma ve soğutma cihazları, barkod okuyucu, fotomultiplikatör tüp ve kameradır. Pipetleme Modülü Pipetleme modülü reaktiflerin aspirasyonu ve dağıtımına dair bütün işlemler ve çoğaltılmış DNA örneklerinin microarraylere dağıtılmasından sorumludur. Örnekler işlem gördükten ve microarraylerde hibridize edildikten sonra floresans sinyallerin ölçülmesi için optik modüle transfer edilmektedir. Optics Modül - Optik modül 3 aşamalı, ışık geçirmez bir aksamdan oluşmaktadır: kamera, lazer ve fotoğraf çoğaltıcı tüp (PMT). Microarray işleme başlanmasından önce kapalı bir kanat içerisine otomatik olarak ulaştırılır. Optik iskele çok hassas olan X-Y-Z hareketlerini uygular( her basamakta 2 mikron). 760 nm dalga boyunda lazer diyot kullanan bir kamera floresans boya ile boyanmış her kayıt noktasının1.2x1.2mm lik bir fotoğrafını çeker. Bu fotoğrafların analiz edilmesi ile üç kayıt noktası belirlenir. Üç kayıt noktası temel alınarak bütün biyo-noktaların kordinatları tespit edilebilir. Tarama sırasında, iskele Z ekseni boyunca hareket ederek çipi fokuslar, X va Y eksenleri boyunca hareket ederek microarray deki özgün noktaların yerini belirler. INFINITI Analizatörü nün nasıl kullanılacağına dair gerekli bilgiler, INFINITI Kullanıcı El Kitabı nda bulunmaktadır. INFINITI Analizatörü CE onaylıdır. INFINITI Analizatörü donanım i yerleşik bir bilgisayara kurulu olan ve LCD ekran ile görüntülenen Qmatic işletim yazılımı tarafından kontrol edilmektedir. INFINITI Analizatör modülü, multitasking real time yazılım tarafından kontrol edilmektedir. Qmatic işletim yazılımı INFINITI Analizatörün; deneme protokolü, akış düzenlenmesi, robot teknolojisi, optik tespit ve sonuç analizi gibi bütün işlemlerini kontrol edebilen bir program yöneticisine sahiptir. Sonuçlar LCD ekrandan görülebilmektedir. Sonuçlar sayısal ve grafiksel olarak verilmektedir. Sonuçlar ayrıca çizelge halinde basılı olarak alınabilir. (printer INFINITI Analizörün bir parçası değildir.) UYARILAR VE ÖNLEMLER Gereksinimler In vitro diagnostik kullanım için. Eğitimli laboratuar personeli tarafından kullanılmalıdır. Bu test, sadece EDTA içinde toplanan tam kan ile çalışılmalıdır. Kan örneklerini dondurma/çözündürmekten kaçının. Örnekler en kısa sürede çalışılmalıdır. Bu prosedür ile Heparin kullanmayın; Heparin PCR ı etkileyebilir. Çapraz kontaminasyon riskini en aza indirmek için, numune hazırlama, PCR reaksiyonunu hazırlamak ve PCR ürün analizi gibi işlemler CLSI de olduğu üzere onaylanmış talimatlara göre yapılmalıdır(molecular Diagnostic Methods for Genetic Diseases: Approved Guideline). Tüm hasta numuneleri potansiyel tehlikelidir ve insan kaynaklı materyaller çok dikkatli alınmalıdır. Hiçbir test yöntemi HCV, HIV veya diğer bulaşıcı ajanların bulunmadığına dair tam bir güvence vermez. CLSI talimatlarını takip edin (Molecular Diagnostics Methods for Infectious Diseases; Approved Guidelines; MM3-A). 4 of 10

5 Farklı lotlardan reaktifleri karıştırmayın/havuz yapmayın. Son kullanım tarihi geçmiş kit veya reaktifleri kullanmayın. Reaktifleri ve kitleri ürün etiketine yazan koşullara göre saklayın. Laboratuar İşlemleri Laboratuar kullanımı için normal önlemleri izleyin. Ayrı kaplarda veya farklı lotlardaki reaktifleri karıştırmayın. Güvenli laboratuar prosedürlerini izleyin: ağız ile pipetleme yapmayın; koruyucu giysiler (örneğin, tek kullanımlık eldiven, laboratuar önlüğü gibi) ve koruyucu gözlük takın; laboratuarda çalışma alanlarında yemek yemeyin, içecek ve sigara içmeyin. Numunelere ve reaktiflere dokunduktan sonra ellerinizi iyice yıkayın. Atıkların İşlenmesi Kullanılmayan reaktif, örnek ve atıkları bulunduğu ülke, federal, eyalet ve yerel yönetmeliklere göre imha edin. Malzeme Güvenlik Bilgi Formları (MSDS) AutoGenomics Müşteri Hizmetleri tarafından istek üzerine gönderilebilir. Örnek Hazırlama Kullanılan DNA ekstraksiyon kiti ile birlikte verilen prospektüste güvenlik talimatlarına bakın. PCR ürünü mikroarray üzerine yüklemeden önce saklanamaz. Hemen kullanın. INFINITI Analizörü Cihazı kullanmadan önce INFINTI Analizör Kullanıcı El Kitabı nı okuyun. "Notlar" a özellikle dikkat edin. Kullanıcı El Kitabı nde Güvenlik Uyarıları ve Dikkat Edilmesi Gerekenleri izleyin. Cihazı kurarken Kurulum Gereksinimleri Bölümü ne bakın. Cihaz çalışırken hata ile karşılaşıldığında Hatalar Bölümü ne bakın. Bir sorun ile karşılaşıldığında Yardım Bölümü ne bakın. SAKLAMA/STABILITE BioFilmChip Microarray: 12 ay Oda Sıcaklığında (15 C ila 30 C) Intellipac Reaktifi: 12 ay Buzdolabında (2 C ila 8 C) Not: Açıldıktan 30 gün sonra Intellipac kullanmayın. Amplifikasyon Mix: 18 ay Dondurucuda (-30 C ila -15 C) Not: Ürünlerin son kullanma tarihi ürün üzerindeki etiketlerde bulunmaktadır. 5 of 10

6 NUMUNE TOPLAMA VE STABILITE AutoGenomics Periferik kan EDTA lı (Mor kapak) tüpte toplanmalıdır. Örnekler dondurulup çözülmemelidir. Örnekler mümkün olan en kısa sürede çalışılmalıdır. SAĞLANAN MATERYALLER (Her paket 48 test içermektedir.) AutoGenomics Ürün kodu Factor II-V Leiden Magazin BioFilmChip Microarray Her pakette 4 magazin, her magazinde 12 test bulunmaktadır. AutoGenomics Ürün kodu Number Factor II-V Leiden Intellipac Reaktif Modülü: Her pakette 2 modül, her modülde 24 test bulunmaktadır. Intellipac modülü içeriği: 1.1 ml ASPE master mix, içeriği; Etiketlenmiş dctp Allele Özgü Primerler PCR Ekstansiyon Tamponu 2.6ml Hibridizasyon Tamponu SSC Sodyum Azid Hibridizasyon Pozitif Kontrol AutoGenomics Ürün Kodu Factor II Amp Mix. Her pakette 4 x 250µl vials AMP Mix bulunmaktadır. İçeriği; dntp ler dctp PCR Primer Mix MgCl 2 PCR Reaksiyon Tamponu AutoGenomics Product Number : Wash buffer GEREKEN VE AUTOGENOMICS TARAFINDAN SAĞLANMAYAN REAKTİFLER DNA Ektraksiyon Kiti - INFINITI Faktör II için Sistem Denemesi kandan başarıyla saflaştırılmış genomik DNA kullanarak Faktör II (Protrombin) G20210A mutasyonunu tespit edebilmektedir. Absorbans aralığı: nm ve DNA saflığı1,7 2,0 aralığında olmalıdır. Bu şartname ile uyumlu herhangi bir DNA ekstraksiyon yöntemi kullanılabilir. INFINITI Faktör II-V Leiden için Sistem Denemesi ticari olarak mevcut çeşitli kitlerle test edilmiştir ve kullanıcılar daha fazla bilgi için AutoGenomics ile bağlantı kurulabilir. Distile su (DNAaz ve RNAaz sız) Titanyum Taq DNA Polimeraz ( Önerilen Titanyum Taq DNA Polimeraz ve sağlayıcısını öğrenmek için AutoGenemics Ürün Katalog una bakınız.) Titanyum Taq DNA Polimeraz ( Önerilen Titanyum Taq DNA Polimeraz ve sağlayıcısını öğrenmek için AutoGenemics Ürün Katalog una bakınız.) EKİPMANLAR Aşağıdaki ekipmanlar gereklidir fakat test ile beraber sağlanmamaktadır: 6 of 10

7 Ürün Kodu : INFINITI Analizör - Qmatic işletim yazılımı ile birlikte AutoGenomics Ürün Kodu : INFINITI Atık treyleri AutoGenomics Ürün Kodu : INFINITI 24 well plate/lidler AutoGenomics Ürün Kodu : INFINITI Temp Cycle Plate AutoGenomics Ürün Kodu : INFINITI Atık trey / Stir Bars AutoGenomics Ürün Kodu : INFINITI Pipet uçları 8-kuyucuk Düz Strip Kap (Genesee Scientific, Catalog No ) Pipetler Mini santrifüj Pipet uçları Mikrofüj tüp rakları Termocycler Vortex PCR için 0.2 ml inceliğinde Wall tüpleri 1.5 ml mikro santrifüj tüpleri 24 lük Well Plate (24 WP) TEST PROSEDÜRÜ DNA Ekstraksiyonu Kullanılan DNA ekstraksiyon kiti ile birlikte verilen talimatları izleyin. AutoGenomics Tavsiye Edilen DNA Kontrolleri Pozitif kontrollerin (heterozigot ve / veya homozigot örnekleri) çalışılan her teste dahil edilmesi önerilir. Ayrıca, negatif kontrol ( vahşi tip numune) ve bir no template kontrol (moleküler derecede su) ayrıca her test çalışmasına dahil edilmelidir. Coriell DNA örnekleri ( pek çok tesbit edilmiş genotip için uygun bir pozitif kontroldür. PCR Reaksiyonu Not: Titanyum Taq DNA polimeraz buz üstünde tutun. Reaktifleri oda sıcaklığında çözüp hemen buz içerisinde muhafaza edin. Amplifikasyon Mix tüpünü 2 5 sn santrifüj edin. Kontaminasyondan kaçınmak amacıyla PCR reaksiyonu aksamı için ayrılmış bir alan kullanın. Pipetleri ve çalışma alanını taze hazırlanmış % 10 luk çamaşır suyu ile dezenfekte edin. Örnekleri ve kontrolleri çalışırken değişik filtre ipuçları ve eldiven kullanılmalıdır. PCR ürünleri microarraylere yüklenmeden önce depolanamaz. Süratle kullanın. 1. PCR Master Mix i hazırlayın Amplifikasyon mix µl Titaniyum Taq polimeraz 0.25 µl PCR Master mix in toplam hacmi 18.0 µl Not: Gereken reaktif miktarını uygulanan testin sayısına göre hesaplayın. 2. PCR maste mixi hafifçe vorteksleyiniz, 18 μl PCR master mixi 24 kuyucuklu plate deki kuyucuklarına ekleyin. 7 of 10

8 3. Kuyucuklara 2 μl örnek DNA (25 ng/μl ) ekleyin. PCR master mix 18.0 µl Örnek DNA sı 2.0 µl Amplifikasyon rxnunun toplam hacmi 20.0 µl kuyucuklu-plate i 8-kuyucuklu flat strip kapaklarıyla kapatın termocycler a yerleştirin ve aşağıdaki programı kullanarak amplifikasyon reaksiyonunu başlatınız. Basamaklar Sıcaklık o C Süre Döngü Sayısı dak N/A sn 15 sn 15 sn 40x 3 4 Bekle 1 Not: Eppendorf Mastercycler EP (aluminyum blok) kullanıldığında ramp rate kurulumu %75 olduğunda total döngü için geçen zaman 1 saat 9 dak. dır( +5 dak.). Diğer Termal Cycler lar kullanıldığında eş zamanı elde edecek şekilde ramp ayarı yapınız. Örnek Yükleme Lütfen INFINITI Analizör Kullanıcı El Kitabı na bakın (Kısım kodu: EM 34000) 24-well pleyti INFINITI Analizöre yükleyiniz. Test spesifik magazin, Intellipack pipet uçları ve yıkama solusüsyonlarını cihaza yükleyiniz. INFINITI Analizör ün İşleyişi Lütfen INFINITI Analizör Kullanıcı El Kitabı na bakın (Kısım kodu: EM 34000) KALİTE KONTROL Termal cycler ın düzenli aralıklarla AutoGenomics 'özelliklerine göre bakımı yapılmalı ve kalibre edilmelidir. KISITLAMALAR Bu metottan elde edilen sonuçlar sadece genel klinik tanı bağlamında yorumlanmalıdır. AutoGenomics alınan herhangi bir klinik karardan sorumlu değildir. Bu prosedür ile bir mutasyonun tespit edilmesi bir başka mutasyonun olmadığının garantisini vermez. Başka bir mutasyonun varlığı olasıdır ve bu kit tarafından tespit edilmemiştir. 8 of 10

9 SONUÇLARIN YORUMLANMASI AutoGenomics INFINITI MTHFR için Sistem Denemesinden elde edilen sonuçlar, MTHFR A1298C ve MTHFR C677T mutasyonları için genotipleri tespit edilerek genotip çağrısı biçiminde sunulmuştur. Mutasyonlar W (Yabani tip), H (Heterozigot) veya M (Mutant) olarak tespit edilir. Genotip "çağrı" ya ek olarak oran ve sinyal (RFU) her analit için verilmiştir. Sonuç bulunamaz ve ekranda sonuç sayfasının sağ alt köşesinde hata mesajı gözlenir ise denemenin tekrar edilmesi gerekmektedir. Test mesajı neden genotip çağrısı yapılamadığını belirtecektir. Test çalışırken bir hata oluşursa Test Error mesajı görünecektir. Örneğin; low DNA. Bir Error Log dosyası sorunu tanımlamak için oluşturulur. Hatalar hakkında daha fazla bilgi için; INFINITI Analizör Kullanıcı El Kitabı nın Arıza Teşhisi kısmına başvurunuz. Hata mesajına veya probleme bağlı olarak, deneme, ancak sorun çözüldükten sonra tekrarlanabilir. ATIK INFINITI Faktör II için Sistem Denemesi atıkları, laboratuvarlarda meydana gelen yaygın çöplerdendir ve klinik laboratuvarın politika/prosedürlerine uygun olarak işlem görmelidirler. PERFORMANS ÖZELLİKLERİ Analitik Spesifite Özgüllük ile ilgili çalışmalar analiz gelişimi sırasında yapılmıştır. PCR primer özgünlüğü bir jel üzerinde amplikon boyutuna göre belirlenmiş ve amplikon sıralaması yapılmışır. ASP primer özgünlüğü bilinen genomik örnekleri kullanılarak test tarafından gönderilen doğru genotipler ile tespit edilmiştir. Prob un yakalama spesifitesi farklı oligoların hibridizasyonu ile tespit edilmiştir ve sadece bilinen noktaya doğru oligo hibridleşmesini göstermektedir. Analitik Duyarlılık INFINITI Factor II-V Leiden için Sistem Denemesi, en düşük 1 ng en yüksek 300 ng DNA yı ölçebilmektedir. BU deneme için en düşük 25 ng DNA önerilmektedir. Yüzde Uyum INFINITI MTHFR denemesi referans metot ile %100 uyum göstermektedir. Kıyaslamanın sonuçları aşağıdaki tabloda özetlenmiştir; Genotip Test edilmiş sayı İlk çalışmada doğru çağrı sayısı İlk çalışmada yanlış çağrı sayısı İlk çalışmadaki geçersiz çağrı* sayısı İlk çalışmanın uyumu Doğru çalışma sayısı tekrar çalışmal a dahil. Yanlışçalışma sayısı tekrar çalışmaları dahil. Geçersiz çalışma sayısı tekrarlanmı ş çalışmalar dahil. Genel uyum MTHFR C677T WT % % MUT % % HET % % total % % MTHFR A1298C 9 of 10

10 WT % % MUT % % HET % % total % % TOTAL % % Duyarlılık / Tekrarlanabilirlik Çipten çipe: Aynı örneği ve aynı INFINITI Analizörü kullanarak, bir lotta 3 BioFilmChip microarray olmak üzere denemede beş kez tekrarlanmıştır. Her her vahşi tip çağrı veren mutasyonun üç tekrarlı sonuçlarında CV değerlerinin %9 12 aralığında olduğu tespit edilmiştir.. Her seferinde farklı INFINITI Analizörü kullanılmak üzere iki kez tekrarlanmıştır. Bütün çağrılar %100 doğrudur. Lottan lota: BioFilmChip microarrayin üç lotu her seferinde farklı bir örnekle aynı cihaz kullanılarak 4 kere test edilmiştir. RFU okumadaki dört testten üçünde (p > 0.05) lottan lota farklılıkları İki yönlü ANOVA da tespit etmemiştir ve bir çalışmadaki lottan lota farklılıklar tespit edilmiştir (0.05 > p > 0.01). Genotip çağrıları %100 doğrudur. Günden güne: Bilinen genomik örnekler aynı cihaz kullanılarak her gün 12 defa olmak üzere üç gün denenmiştir ikinci gün ve üçüncü gün aralığındadır.. Genotip çağrıları %100 doğrudur. Hassasiyet / Tekrarlanabilirlik - Cihaz Bir DNA örneği üç farklı INFINITI Analizör ve tek lot BioFilmçipleri kullanılarak 5 kez çalışılmıştır. Cihaz içi: Tek cihaz tek çip 5 çalışma %CV oranı: % Genotip çağrılar %100 tekrarlanabilir. Cihazlar arası: Tek cihaz tek çip 5 çalışma %CV oranı:% % 12. Genotip çağrılar %100 tekrarlanabilir. Üç farklı günde Standart (non-assay) Microarray Çip kullanılarak üç farklı cihaz test edilmiştir. Her cihaz testinde Standart (non-assay) Microarray Çip deki yakalama probları 24 kez okunmuş, ortalaması alınmış, spot için %CV hesaplanmıştır. Test edilen üç cihaz için, %CV oranları listesi; Cihaz Ave %CV %CV Oranı % % % % % % Örnek Taşınması ( Carry-over) 300 ng konsantrasyonundaki vahşi tip örneklerin (FV-WT; FII-WT)ardından 10 ng konsantrasyonundaki pozitif örneklerin (FV-WT; FII-M), 300 ng konsantrasyonundaki heterozigot örneklerin (FV-H; FII-H) ve No Template Kontrol leri nin uygulandığı çalışmalarda örnek taşınması gözlenmemiştir. No Template Kontrol veya su altı kez çalışılmıştır. İnterferans Çalışmaların sonuçları göstermiştir ki; 8mg/dL bilirubin, 70mg/dL kolestrol ve 1333v/dL heparin düzeylerinde interferans gözlenmemektedir. Çalışmalar oral anti koagülan ile yapılmamıştır, talep edilmemiştir. 10 of 10

11 REFERANSLAR 1. Peterson LC, Hedner U, Wildgoose P. In: High KA, HR Roberts eds. Molecular basis of thrombosis and hemostasis. New York: Marcel Dekker, Grody W, Griffin J, Taylor A, Korf B, Heit, J. (2001) American College of Medical Genetics Consensus Statement on Factor V Leiden Mutation Testing, Genetics in Medicine, 3:2, Salomon O. et al; Single and Combined Prothrombotic Factors in Patients With Idiopathic Venous Thromboembolism; Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 1999;19: ) 1999 American Heart Association, Inc. 11 of 10