ACCESS. Access AMH PRENSİP REF B İnceleyen: Tarih. İnceleyen: Tarih KULLANIM AMACI

Transkript

1 ACCESS Immunoassay Systems Kullanma talimatı Copyright 2014 Beckman Coulter, Inc. Access AMH anti-müllerian hormonu (AMH) REF B13127 YILLIK GÖZDEN GEÇİRME İnceleyen: Tarih İnceleyen: Tarih PRENSİP KULLANIM AMACI Access AMH testi, Access İmmunoassay Sistemleri kullanılarak over rezervinin değerlendirilmesine yardımcı olmak üzere insan serum ve plazmasındaki anti-müllerian hormon (AMH) seviyelerinin kantitatif tayinine yönelik paramanyetik partiküllü bir kemilüminesans immünotesttir. ÖZET VE AÇIKLAMA Anti-Müllerian hormon (AMH), disülfit köprüleri ile bağlanan 72 kda lık iki eşit monomerden oluşan bir dimer olarak dolaşan bir glikoproteindir. AMH transforme edici büyüme faktörü-β ailesine aittir. 1,2 AMH ismi ilk tanımlanan işlevi olan fetal cinsel farklılaşma için verilmiştir: erken fetal yaşam sırasında erkeklerde Müller kanalının regresyonu. Erkeklerde AMH, testislerin Sertoli hücreleri tarafından salgılanır. Puberteye dek AMH konsantrasyonları yüksektir ve daha sonra yavaşça puberte sonrası düzeylerine düşer. 3 Puberte sırasında AMH üretimindeki düşüş pubertal gelişim evresi ile ilişkilidir. AMH konsantrasyonundaki en önemli düşüş Tanner evre II ve III arasında gerçekleşir ve testislerde meydana gelen testosteron konsantrasyonu artışıyla eş zamanlıdır; bu artış kan testosteron konsantrasyonunun artışından önce oluşur. 4 Dişi fetüsün erken gelişiminde, AMH bulunmaması Müller kanalının gelişimini devam ettirmesine imkan vererek dişiye ait iç anatomik yapıları ortaya çıkarır. 5 Dişilerde, AMH ekspresyonu preantral over foliküllerinin granüloza hücrelerinde yaklaşık 36. gebelik haftasında gözlenmektedir ve bu hücreler tarafından menopoza dek üretilmektedir. 6,7 Erişkin kadınlarda AMH konsantrasyonları yaşam döngülerinin büyüme fazına giren küçük foliküllerin sayısını yansıtır, bu sayı yumurtalıkta kalan primordiyal foliküllerin sayısı veya yumurtalık rezervi ile orantılıdır. 5,8,9 AMH nin bir kadının üreme dönemi boyunca azalması oosit/folikül havuzunun yaşla birlikte sürekli azaldığını ve dolayısıyla ovaryen yaşlanmayı yansıtır. 10 AMH konsantrasyonları yaşla birlikte düşse de, çalışmalar menstrüasyon gören kadınlarda AMH konsantrasyonlarındaki günlük değişkenliğin AMH nin menstrüasyon döngüsünün herhangi bir gününde ölçülmesine imkan verecek kadar düşük olduğunu göstermektedir. 11 AMH, ilk olarak infertil bir kadının kontrollü over stimülasyonuna yanıtını öngörmek için, over rezervinin değerlendirilmesinde kullanılmıştır. 12 AMH reprodüktif yaşlanmanın iyi bir göstergesi olarak belirlendiğinden, araştırma çalışmaları AMH nin belirli bir kadının menopoz zamanını tahmin etmek için kullanılabileceğini de göstermiştir. 10 Ayrıca çalışmalar, AMH nin polikistik over sendromlu (PCOS) kadınları teşhis etmek ve izlemek için kullanılabileceğini ve AMH konsantrasyonlarının PCOS li normogonadotropik anovulatuar kadınlarda artmış olduğunu göstermiştir. 13,14 EYLÜL 2014 Sayfa 1 / 11

2 Çalışmalar yumurtalığın granüloza hücreli tümörlerinde AMH konsantrasyonlarının arttığını ve AMH nin overektomi yapılan hastaların takibinde duyarlı ve spesifik bir marker olarak işlev görebileceğini ortaya koyar. AMH nin erken saptanması çok önemlidir, çünkü granüloza hücreleri yüksek nüks etme sıklığı ile tanımlanmaktadır. 15,16 Araştırmalar prepubertal kız çocuklarında AMH tayininin hafif virilizasyonun gonad kaynaklı ve gonad kaynaklı olmayan nedenlerinin ayırt edilmesine yardımcı olduğunu göstermektedir ,XX prepubertal virilizasyonlu kız çocuklarında AMH düzeyleri saptanabilir düzeylerde değil iken, testosteron salgısı, androjen duyarsızlığı, disgenetik testis ve ovotestis bulunan çocuklarda kadınlardaki ortalama AMH konsantrasyonundan daha yüksektir. Virilizan Sertoli-Leydig hücreli over tümörü bulunan kızlarda çok yüksek AMH konsantrasyonları bulunmaktadır. 18 Miadında doğan yeni doğanlarda kriptorşidizm görülme sıklığı %3-6 olup testisin spontane inişine bağlı olarak yaşamın üçüncü ayı itibarıyla %1-2 ye düşer. Çalışmalar AMH konsantrasyonlarının normal erkek AMH konsantrasyonları sergileyen inmemiş testisi çok düşük veya saptanabilir olmayan düzeylerde konsantrasyona sahip anorşiden ayırt ettirebildiğini ortaya koymuştur. 18 Çocuklarda ara cinsiyetleri inceleyen çalışmalar AMH konsantrasyonlarının Sertoli hücre fonksiyonlarını yansıttığını ve sıklıkla testosteron ölçümü ile birlikte ölçüldüğünü gösterir. Testiküler disgenezi normal erkeklere kıyasla hem AMH hem de testosteron konsantrasyonlarının düşüklüğü ile karakterizedir. AMH aynı zamanda erkeklerde erken ve geç puberte için FSH, LH ve testosteron ölçümleri ile birlikte çalışılmaktadır. 19 METODOLOJİ Access AMH testi, eşzamanlı tek adımlık immunoenzimatik ("sandviç") testtir. Örnek, MES tamponu içinde alkalin fosfataza konjuge bir fare monoklonal anti-amh antikoru, proteinli TRIS tamponlu salin ve TRIS tamponunda bir fare monoklonal anti-amh antikoru ile kaplanmış paramanyetik parçacıklar ile birlikte bir tepkime kabına eklenir. Tepkime kabında inkübasyondan sonra katı faza bağlı materyaller, bağlı olmayanlar yıkanıp temizlenirken manyetik alanda tutulur. Daha sonra kemilüminesans substrat Lumi-Phos* 530, kaba eklenir ve bu tepkime ile üretilen ışık bir lüminometre ile ölçülür. Işık üretimi, örnekteki AMH konsantrasyonuyla doğru orantılıdır. Örnekteki analit miktarı, depolanmış, çok noktalı bir kalibrasyon eğrisinden belirlenir. ÖRNEK NUMUNELERIN TOPLANMASI VE HAZIRLANMASI 1. Serum ve plazma (lityum heparin) önerilen örneklerdir. 2. Kan örneklerinin kullanımı, çalışılması ve saklanması ile ilgili olarak aşağıdaki tavsiyelere uyun: 20 Tüm kan örneklerini hastadan kan alınması ile ilgili standart önlemlere dikkat ederek toplayın. Dik, kapalı pozisyonda santrifüj öncesinde serum örneklerinin tamamı ile pıhtılaşmasını sağlayın. - Jel veya pıhtı aktivatörü içeren koagüle edilmemiş tüpler karıştırma işlemi biter bitmez dik pozisyonda saklanmalıdır. - Santrifüj öncesi serum/hücre temas süresi tüp üreticisinin önerisine göredir. Daha düşük ısılarda veya hasta antikoagülan tedavisi alıyorsa pıhtılaşma yavaşlayabilir. Tüpleri daima tapalı halde tutun. Fiziksel olarak serum veya plazmayı hücrelerle temas etmekten en kısa sürede ayırın. Örnekleri, kapakları sıkıca kapalı halde oda sıcaklığında (15 ila 30 C) 24 saatten daha uzun süre olmamak kaydıyla saklayın. Test 24 saat içinde tamamlanmayacak ise örnekleri 2 ila 8 C aralığında soğutun. Test 6 gün içinde tamamlanmayacak ise veya örnekler 6 günden sonra sevk edilecek ise -20 C veya daha düşük sıcaklıkta dondurun. 3. Numune hazırlarken aşağıdaki yönergeleri uygulayın: Analizden önce fibrin kalıntılarının ve hücresel maddelerin giderildiğinden emin olun. Access AMH TR Kullanma talimatı B15631 B Sayfa 2 / 11 EYLÜL 2014

3 Santrifüjleme işlemi için kan toplama tüpü üreticisinin talimatlarını izleyin. 4. Her laboratuar kendi kan toplama tüplerinin ve serum ayrıştırma ürünlerinin kabul edilebilirliğini belirlemelidir. Bu ürünler değişik üreticiler ve zaman zaman da lotlar arasında farklılık gösterebilir. 5. Örnekleri iki kereden fazla çözmeyin. 6. Lipemik veya hemolize örnekleri test etmekten kaçının. REAKTİFLER ÜRÜN BILGILERI Access AMH Reaktif Paketi Kat. No. B13127: 100 tayin, 2 paket, 50 test/paket Kullanıma hazır biçimde sunulur. Dik durumda saklayın ve 2 ila 10 C ye soğutun. Cihaz üzerinde kullanmadan önce en az iki saat süreyle 2 ila 10 C de tutun. 2 ila 10 C de saklandığında, etikette belirtilen son kullanma tarihine dek stabildir. İlk kullanımdan sonra 2 ila 10 C de 31 gün süreyle stabildir. Olası bozulma belirtileri kutudaki elastomerik tabakanın kırılması veya aralık dışı kontrol değerleridir. Reaktif kutusu hasarlı ise (örn. kırık elastomer) kutuyu atın. R1a: Yüzey aktif madde, protein (sığır), < %0,1 sodyum azid, %0,1 ProClin*** 300 içeren TRIS tamponu içindeki monoklonal anti-amh ile kaplanmış Dynabeads** paramanyetik parçacıklar. R1b: MES tamponu, yüzey aktif madde, protein (sığır, rekombinant), < %0,1 sodyum azid, %0,1 ProClin 300 içinde anti-amh alkalin fosfataz konjugatı. R1c: Yüzey aktif madde, protein (fare, sığır), < %0,1 sodyum azid, %0,1 ProClin 300 içeren TRIS tamponu. **Dynabeads, Norveç, Oslo da bulunan Dynal A.S. in tescilli markasıdır. ***ProClin, Rohm and Haas Company veya bağlı şirketlerinin ya da alt kuruluşlarının ticari markasıdır. UYARILAR VE TEDBİRLER İn vitro diagnostik kullanım içindir. Hasta örnekleri ve kandan elde edilen ürünler, belirtilen prosedür kullanılarak minimum risk ile rutin biçimde çalışılabilir. Fakat bu ürünleri, kaynağına, işlenmesine veya ön sertifikalarına bakılmaksızın evrensel koruma önlemlerine ve iyi klinik laboratuar uygulamalarına uygun olarak bulaşıcı potansiyele sahip maddeler gibi kullanın. Dekontaminasyon için uygun bir dezenfektan kullanın. Bu maddeleri ve kaplarını yerel yönetmeliklere ve kılavuzlara uygun olarak saklayın ve atın. Sodyum azit kurşun ve bakırla reaksiyona girebilir ve oldukça patlayıcı özellikte metal azitler oluşturabilir. Sıvıları boşaltırken, azit birikimini önlemek için bol suyla yıkayın. 21 Xi. Tahriş edici: %0,1 ProClin 300. R 43: Ciltle temasında hassasiyete neden olabilir. S 28-37: Ciltle temasından sonra, bolca sabun ve suyla hemen yıkayın. Uygun eldivenler takın. Malzeme Güvenlik Veri Sayfası (MSDS) istendiğinde edinilebilir. EYLÜL 2014 Sayfa 3 / 11

4 GEREKLİ OLAN ANCAK REAKTİF KİTİ İLE BİRLİKTE VERİLMEYEN MALZEMELER 1. Access AMH Calibrators Sıfır ve yaklaşık 0,16, 0,6, 4, 10 ve 24 ng/ml de sağlanır (1,1, 4,3, 29, 71 ve 171 pmol/l). Kat. No. B Access AMH KK (Kalite Kontrol) veya piyasada bulunan diğer kontrol materyali. Yaklaşık 1, 5 ve 15 ng/ml (7,1, 36 ve 107 pmol/l) olarak tedarik edilir. Kat. No. B Access Sample Diluent A Flakon Kat. No Seyreltici Paketi Kat. No. A79783 (UniCel DxI sistemi cihaz üzeri seyreltme özelliğiyle kullanmak için.) 4. Access Substrate Kat. No Access 2, UniCel DxC 600i: Access Yıkama Tamponu II, Kat. No. A16792 UniCel DxI 600, UniCel DxI 800, UniCel DxC 880i, UniCel DxC 860i, UniCel DxC 680i, UniCel DxC 660i: UniCel DxI Yıkama Tamponu II, Kat. No. A16793 EKIPMAN VE MALZEMELER R1 Access AMH Reaktif Paketleri KALİBRASYON KALİBRASYON BİLGİSİ Tüm testler için aktif kalibrasyon eğrisi gereklidir. Access AMH testi için her 31 günde bir kalibrasyon gereklidir. Kalibrasyon teorisi, kalibratörlerin yapılandırılması, kalibratör test isteği girişi ve kalibrasyon verilerinin incelenmesi hakkında bilgi için uygun sistem kılavuzlarına ve/veya Yardım sistemine başvurun. KALİTE KONTROL Kalite kontrol materyalleri hasta örneklerinin özelliklerini taklit eder ve immünohistokimyasal testlerin sistem performansının izlenmesinde gereklidir. Örnekler parti formatından ziyade rastgele erişim formatında herhangi bir zamanda işlenebileceği için kalite kontrol materyalleri her bir 24 saatlik zaman diliminde eklenmelidir. 22 En azından analitin iki düzeyini kapsayan Access AMH KK veya piyasada bulunan diğer kalite kontrol materyallerini ekleyin. Kontrollerin daha sık kullanılması veya ek kontroller kullanılması, iyi laboratuar uygulamaları ya da laboratuar akreditasyon şartları ve ilgili yasaların gerektirdiği koşullara dayanarak kullanıcının takdirine bırakılmıştır. Hazırlama ve saklama için üretici talimatlarını izleyin. Her bir laboratuar uygun performansı sağlamak için ortalama değerleri ve kabul edilebilir aralıkları oluşturmalıdır. Kabul edilebilir aralıklarda yer almayan kalite kontrol sonuçları geçersiz test sonuçlarını gösterebilir. Bu analit için kabul edilebilir son kalite kontrol test noktasını elde edene dek üretilen tüm test sonuçlarını inceleyin. Kalite kontrol sonuçlarını gözden geçirmek için uygun sistem kılavuzlarına ve/veya Yardım sistemine başvurun. TEST PROSEDÜRLERİ Prosedürle İlgili Yorumlar 1. Kurulum, başlatma, çalışma prensipleri, sistem performansının özellikleri, çalışma talimatları, kalibrasyon prosedürleri, çalışmanın kısıtlamaları ve önlemler, riskler, bakım ve sorun giderme ile ilgili özel tanımlar için uygun sistem kılavuzlarına ve/veya Yardım sistemine başvurun. 2. Cihaza takmadan önce kutuyu birkaç kez hafifçe tersyüz çevirerek yeni (delinmemiş) reaktif kutularının içeriğini karıştırın. Açık (delinmiş) kutuları tersyüz çevirmeyin. Access AMH TR Kullanma talimatı B15631 B Sayfa 4 / 11 EYLÜL 2014

5 3. Her tayinde, örnek kabı ve sistem ölü hacimlerine ek olarak yirmi (20) μl örnek kullanın. DxI sistemi cihaz üstü seyreltme özelliğiyle, her bir tayin işlemi için örnek kabı ve sistem ölü hacimlerine ek olarak kırk beş (45) µl örnek kullanın. Gerekli minimum örnek hacmi için uygun sistem kılavuzlarına ve/veya Yardım sistemine başvurun. 4. Örnek sonuçları için sistemin varsayılan ölçüm birimi ng/ml dir. Bildirim birimlerinin Uluslararası Birim Sistemine (SI Birimi) (pmol/l (pm)) değiştirilmesi için uygun sistem kılavuzlarına ve/veya Yardım sistemine başvurun. Konsantrasyonların Uluslararası Sisteme manuel olarak çevrilmesi için ng/ml değerini 7,14 çarpım faktörü ile çarpın. Prosedür Örneklerin çalışılması, testlerin yapılandırılması, test talepleri ve test sonuçlarının incelenmesi hakkında bilgi almak için uygun sistem kılavuzlarına ve/veya Yardım sistemine başvurun. SONUÇLARIN YORUMLANMASI Hasta test sonuçları, sistem yazılımı tarafından otomatik olarak belirlenir. Örnekteki analit miktarı, saklanan kalibrasyon verileri kullanılarak, ölçülen ışık üretiminden belirlenir. Hasta test sonuçları uygun ekran kullanılarak incelenebilir. Örnek sonuçlarının incelenmesiyle ilgili eksiksiz talimatlar için uygun sistem kılavuzlarına ve/veya Yardım sistemine başvurun. SONUÇLARIN RAPORLANMASI BEKLENEN SONUÇLAR 1. Spesifik popülasyonların uygun şekilde sunulmasını sağlamak için her laboratuar kendi referans aralıklarını oluşturmalıdır. 2. Bir çalışmada sağlıklı görünen erişkin kadınlardan, erişkin erkeklerden ve yeni doğanlardan toplanan serum örneklerinde Access 2 İmmunoassay Sisteminde Access AMH testi kullanılarak AMH konsantrasyonları ölçülmüştür. Erişkin Referans Grubu Yaş Aralığı (yıl) N Median ng/ml (pmol/l) Kadınlar ,71 (26,49) Kadınlar ,27 (16,21) Kadınlar ,88 (13,43) Kadınlar ,62 (11,60) Kadınlar ,29 (2,05) Kadınlar ,01 (0,06) Erkekler > ,87 (34,77) 95% RI ng/ml (pmol/l) 0,96-13,34 (6,82-95,22) 0,17-7,37 (1,22-52,66) 0,07-7,35 (0,53-52,48) 0,03-7,15 (0,20-51,03) 0,00-3,27 (0,00-23,35) 0,00-1,15 (0,00-8,19) 0,73-16,05 (5,20-114,60) EYLÜL 2014 Sayfa 5 / 11

6 Pediatrik Referans Grubu Yaş Aralığı (gün) N Medyan ng/ml (pmol/l) Erkekler ,94 (335,17) 95% RI ng/ml (pmol/l) 15,11-266,59 (107, ,49) Kadınlar ,16 (1,17) 0,01-3,39 (0,04-24,19) PROSEDÜR İLE İLGİLİ NOTLAR SINIRLAMALAR 1. Örnekler alt tespit limiti ve belirli tetkikin en yüksek kalibratör değeri analitik aralığında (yaklaşık 0,02-24 ng/ml [0, pmol/l]) doğru şekilde ölçülebilir. Bir örnek, testin alt saptama sınırından daha azını içeriyorsa, sonuçları o değerden daha düşük olarak bildirin (örneğin < 0,02 ng/ml [< 0,14 pmol/l]). DxI sistemi cihaz üzeri dilüsyon özelliği kullanıldığında, sistem sonuçları 20 ng/ml (146 pmol/l) değerinden küçük olarak bildirir. Bir örnek, en yüksek Access AMH Kalibratör (S5) değerinden fazlasını içeriyorsa, sonucu o değerden daha büyük olarak bildirin (örneğin, > 24 ng/ml [> 171 pmol/l]). Alternatif olarak, bir hacim örneği 15 hacim (1/16) Access Sample Diluent A ile veya bir hacim örneği 9 hacim (1/10) Access Sample Diluent A ile seyreltin. Örnek dilüsyonunun test isteğine girilmesi hakkındaki talimatlar için ilgili sistem kılavuzlarına ve/veya yardım sistemlerine başvurun. Sistem, dilüsyon için ayarlanmış sonuçları bildirir. DxI sistemi cihaz üzeri dilüsyon özelliği, bir hacim örneği dokuz hacim Access Sample Diluent A ile kullanarak dilüsyon prosesini otomatik hale getirir. Örneklerin miktarı yaklaşık 240 ng/ml (1.714 pmol/l) değerine kadar ölçülebilir. Sistem, dilüsyon için ayarlanmış sonuçları bildirir. 2. Antikor içeren testler için, hasta örneğindeki heterofil antikorların etkileşim potansiyeli mevcuttur. Rutin olarak hayvanlara maruz kalan veya immünoglobülinlerin ya da immünoglobülin fragmanlarının kullanıldığı immünoterapiye veya diagnostik prosedürlere tabi tutulan hastalar, immunoanalizlerle etkileşime girebilecek antikorlar, örn. HAMA üretebilir. Ayrıca, hasta örneklerinde insan anti-keçi gibi heterofil antikorlar da bulunabilir. 23,24 Etkileşime giren bu tür antikorlar hatalı sonuçlar üretebilir. Bu antikorlara sahip olduğundan şüphe duyulan hastaların sonuçlarını dikkatle değerlendirin. 3. Hasta örneğinde diğer potansiyel enterferanslar bulunabilir ve bunlar immünotestlerde hatalı sonuçlara neden olabilir. Literatürde bildirilen bazı örnekler romatoid faktör, endojen alkalin fosfataz, fibrin ve alkalin fosfataza bağlanabilen proteinleri kapsar. 25 Bu tür enterferansların karıştığından şüphelendiğiniz hasta sonuçlarını dikkatle değerlendirin. 4. Access AMH sonuçları aşağıdakiler dahil hastanın klinik durumunun tamamı dikkate alınarak yorumlanmalıdır: semptomlar, klinik öykü, ilave testlerden alınan veriler ve diğer uygun bilgiler. 5. Access AMH testi, 1000 ng/ml ye kadar bir kanca etkisi göstermez. PERFORMANS ÖZELLİKLERİ YÖNTEMLERİN KARŞILAŞTIRILMASI Yöntem karşılaştırma için temsili veriler yalnızca örnek olarak verilmiştir. Her bir laboratuarda elde edilen performans farklılık gösterebilir. Test aralığındaki 104 değerin Access 2 İmmunoassay Sisteminde Access AMH testi ve manuel AMH Gen II ELISA (Kat. No. A79765) testi kullanılarak karşılaştırılması Passing Bablok regresyonu ve r hesaplamaları için Spearman korelasyonu ile aşağıdaki istatistik verileri vermiştir: Access AMH TR Kullanma talimatı B15631 B Sayfa 6 / 11 EYLÜL 2014

7 n Gözlem Aralığı (ng/ml) Kesim (Intercept) (ng/ml) Eğim (%95 CI) Korelasyon Katsayısı (r) 104 0,16-21,7 0,12 0,91 (0,89-0,94) 0, ,16-9,88 0,09 0,95 (0,92-0,97) 0,99 Doğrusallık Lineerlik için temsili veriler yalnızca örnek olarak verilmiştir. gösterebilir. Her bir laboratuarda elde edilen performans farklılık CLSI EP6-A ya göre, 26 bir yüksek örnek (> 24 ng/ml) ve bir düşük örnek (< 0,02 ng/ml) eşit dağılmış 7 örnek konsantrasyonu oluşturmak üzere karıştırılmıştır. Karıştırılan 7 örneğin dört kopyası, düşük örneğin 8 kopyası ve yüksek örneğin 4 kopyası tek bir Access 2 cihazında çalışılmıştır. Access AMH testi > 0,16 ng/ml ve 0,04 ng/ml örnekler ile 0,16 ng/ml örnekler için doğrusallıktan %5,0 sapma ile birlikte doğrusal olmak üzere tasarlanmıştır. Polinom regresyon yöntemini kullanarak analiz yapan bir çalışma > 0,16 ng/ml ve < 0,00 ng/ml örnekler ve 0,16 ng/ml örnekler için doğrusallıktan maksimum sapmanın %2,45 olduğunu göstermiştir. İmpresizyon İmpresizyon için temsili veriler yalnızca örnek olarak verilmiştir. Her bir laboratuarda elde edilen performans farklılık gösterebilir. Access AMH testi 0,16 ng/ml konsantrasyonlarda toplam belirsizlik %10,0 ve < 0,16 ng/ml konsantrasyonlarda 0,032 ng/ml toplam standart sapma (SS) sergiler. İnsan serum örnekleri kullanan bir çalışma test başına 2 kopya ile birlikte 20 günde toplam 40 test kapsamıştır. CLSI EP5-A2 27 kılavuzuna göre aşağıdaki veriler hesaplanmıştır. Numune Büyük Ortalama ng/ml (n=80) Çalışma Sırasında Arasında Çalışma Total İmpresizyon SD (ng/ml) % CV SD (ng/ml) %CV SD (ng/ml) %CV Örnek 1 0,13 0,003 N/A 0,003 N/A 0,004 N/A Örnek 2 2,63 0,038 1,5 0,073 2,8 0,083 3,1 Örnek 3 10,45 0,177 1,7 0,254 2,4 0,310 3,0 Örnek 4 17,81 0,265 1,5 0,472 2,6 0,541 3,0 Analitik Özgüllük/Etkileşimler Analitik özgüllük/etkileşimler için temsili veriler yalnızca örnek olarak verilmiştir. performans farklılık gösterebilir. Her bir laboratuarda elde edilen AMH konsantrasyonları yaklaşık 1 ve 5 ng/ml (7,1 ve 36 pmol/l) olan serum örneklerine aşağıdaki maddelerin birden fazla konsantrasyonu eklenmiş ve tek bir Access 2 İmmunoassay Sisteminde çalışılmıştır. Değerler CLSI EP7 A2 de belirtildiği şekilde hesaplanmıştır. 28 Enterferans, kontrollerin (etkileşime giren madde eklenmemiştir) ve eşleştirilmiş test örneklerinin (etkileşime giren madde eklenmesiyle) test edilmesi ile belirlenmiştir. Aşağıdaki maddeler belirtilen konsantrasyonlarda test edildiğinde önemli bir etkileşim (dozda %10 değişimi geçen) gözlenmemiştir. Madde Asetaminofen Asetilsalisilik Asit Askorbik Asit Eklenen En Yüksek Konsantrasyon 20 mg/dl 65 mg/dl 170 µmol/l EYLÜL 2014 Sayfa 7 / 11

8 Madde Bilirubin (Konjuge) Bilirubin (konjuge olmayan) Biotin Gama Globulin Hemoglobin Heparin (Düşük Moleküler Ağırlıklı) Ibuprofen Multi vitamin İntralipidler Total protein (insan serum albumini) Ürik Asit Eklenen En Yüksek Konsantrasyon 43 mg/dl 40 mg/dl 735 nmol/l 60 mg/ml 300 mg/dl 3000 U/L 50 mg/dl 1% (v/v) 37 mmol/l 12 g/dl 1,4 mmol/l AMH konsantrasyonları yaklaşık 1 ve 5 ng/ml (7,1 ve 36 pmol/l) olan serum örneklerine aşağıdaki maddelerin birden fazla konsantrasyonu eklenmiş ve tek bir Access 2 İmmunoassay Sisteminde çalışılmıştır. Değerler CLSI EP7-A2 de belirtildiği şekilde hesaplanmıştır. 28 Aşağıdaki maddeler belirtilen konsantrasyonlarda test edildiğinde anlamlı bir çapraz reaktivite (%5 anlamlı çapraz reaktiviteyi geçen) gözlenmemiştir. Madde İnhibin A Aktivin A hlh hfsh TGF β-1 Eklenen En Yüksek Konsantrasyon 100 ng/ml 16,32 μg/ml 100 miu/ml 115 miu/ml 65 ng/ml Boş Limiti Boş Limiti için temsili veriler yalnızca örnek olarak verilmiştir. gösterebilir. Her bir laboratuarda elde edilen performans farklılık Access AMH testinin 0,01 ng/ml (0,07 pmol/l) bir Kör Limiti (LoB) olması tasarlanmıştır. Bir çalışmada LoB, CLSI EP17-A2 ye dayalı bir protokol kullanılarak test edilmiştir. 29 Bir sıfır analit örneğinin toplam 240 tekrarı, Access AMH S0 kalibratör, birden fazla Access 2 Sisteminde çok sayıda reaktif paketi ve kalibratör lotunun kullanıldığı 12 çalışmada ölçülmüştür. Bu çalışma, Access AMH için LoB değerini 0,0024 ng/ml (0,017 pmol/l) olarak belirlemiştir. Algılama Limiti Tespit Limiti için temsili veriler yalnızca örnek olarak verilmiştir. Her bir laboratuarda elde edilen performans farklılık gösterebilir. Access AMH testinin 0,02 ng/ml (0,14 pmol/l) bir Tespit Limiti (LoD) olması tasarlanmıştır. Bir çalışmada LoD, CLSI EP17-A2 ye dayalı bir protokol kullanılarak test edilmiştir. 29 Her biri yedi düşük seviye örnekten dokuz tekrar, birden fazla reaktif paketi lotu ve birden fazla Access 2 Sisteminde on çalışmadaki bir kalibratör lotu kullanılarak ölçülmüştür. Bu çalışma, Access AMH için LoD değerini 0,0049 ng/ml (0,035 pmol/l) olarak belirlemiştir. Kantitasyon Limiti Kantitasyon Limiti için temsili veriler yalnızca örnek olarak verilmiştir. Her bir laboratuarda elde edilen performans farklılık gösterebilir. Access AMH TR Kullanma talimatı B15631 B Sayfa 8 / 11 EYLÜL 2014

9 Access AMH testinin 0,08 ng/ml (0,57 pmol/l) bir Kantitasyon Limiti (LoQ) olması tasarlanmıştır. Bir çalışmada LoQ, CLSI EP17-A2 ye dayalı bir protokol kullanılarak test edilmiştir. 29 Yedi düşük seviye örnekten dokuz tekrar, birden fazla reaktif paketi lotu ve birden fazla Access 2 Sisteminde on çalışmadaki bir kalibratör lotu kullanılarak ölçülmüştür. Bu çalışma, Access AMH için LoQ değerini 0,010 ng/ml (0,071 pmol/l) olarak belirlemiştir. EK BİLGİLER Beckman Coulter, Access, UniCel and DxI are trademarks of Beckman Coulter, Inc.; Beckman Coulter, Access, UniCel and DxI are registered in the USPTO and SIPO. *Lumi-Phos, Beckman Coulter, Inc. in bir yan kuruluşu olan Lumigen, Inc in ticari markasıdır. EYLÜL 2014 Sayfa 9 / 11

10 REFERANSLAR 1. Picard JY, Benarous R, Guerrier D, Josso N, Kahn A. Cloning and expression of cdna for anti-müllerian hormone. Proc Natl Acad Sci USA. 1986;83(15): Teixeira J, Maheswaran S, Donahoe PK. Müllerian inhibiting substance: an instructive developmental hormone with diagnostic and possible therapeutic applications. Endocr Rev. 2001;22(5): Josso N, Rey RA, Picard JY. Anti-Müllerian hormone: a valuable addition to the toolbox of the pediatric endocrinologist. Int J Endocrinol. 2013;2013: Grinspon RP, Rey RA. Anti-müllerian Hormone and Sertoli cell function in paediatric male hypogonadism. Horm Res Paediatr. 2010;73(2): La Marca A, Broekmans FJ, Volpe A, Fauser BC, Macklon NS, on behalf of the ESHRE Special Interest Group for Reproductive Endocrinology--AMH Round Table. Anti-Müllerian hormone (AMH): what do we still need to know? Hum Reprod. 2009;24(9): Rajpert-De Meyts E, Jørgensen N, Graem N, Müller J, Cate RL, Skakkebaek NE. Expression of anti-müllerian hormone during normal and pathological gonadal development: association with differentiation of Sertoli and granulosa cells. J Clin Endocrinol Metab. 1999;84(10): Weenen C, Laven JSE, von Bergh ARM, Cranfield M, Groome NP, Visser JA, Kramer P, Fauser BCJM, Themmen APN. Anti-Müllerian hormone expression pattern in the human ovary: potential implications for initial and cyclic follicle recruitment. Mol Hum Reprod. 2004;10(2): Ledger WL. Clinical utility of measurement of anti-müllerian hormone in reproductive endocrinology. J Clin Endocrinol Metab. 2010;95(12): Fiçicioglu C, Kutlu T, Baglam E, Bakacak Z. Early follicular antimüllerian hormone as an indicator of ovarian reserve. Fertil Steril. 2006;85(3): Freeman EW, Sammel MD, Lin H, Boorman DW, Gracia CR. Contribution of the rate of change of antimüllerian hormone in estimating time to menopause for late reproductive-age women. Fertil Steril. 2012; 98(5): La Marca A, Grisendi V, Griesinger G. How much does AMH really vary in normal women. Int J Endocrinol. 2013;2013: Nelson SM, Yates RW, Lyall H, Jamieson M, Traynor I, Gaudoin M, Mitchell P, Ambrose P, Fleming R. Anti-Müllerian hormone-based approach to controlled ovarian stimulation for assisted conception. Hum Reprod. 2009;24 (4) Homburg R, Crawford G. The role of AMH in anovulation associated with PCOS:a hypothesis. Hum Reprod. 2014; 29(6): Pigny P, Jonard S, Robert Y, Dewailly D. Serum anti-müllerian hormone as a surrogate for antral follicle count for definition of the polycystic ovary syndrome; J Clin Endocrinol Metab, 2006;91(3): La Marca A, Volpe A. The anti-mullerian hormone and ovarian cancer. Human Reprod Update. 2007;13(3): Chang HL, Pahlavan N, Halpern EF, MacLaughlin DT. Serum Müllerian inhibiting substance/anti-müllerian hormone levels in patients with adult granulosa cell tumors directly correlate with aggregate tumor mass as determined by pathology or radiology. Gynecol Oncol. 2009;114(1); Access AMH TR Kullanma talimatı B15631 B Sayfa 10 / 11 EYLÜL 2014

11 17. Lindhardt Johansen M, Hagen CP, Johannsen TH, Main KM, Picard JY, Jørgensen A, Rajpert-De Meyts E, Juul A. Anti-Müllerian hormone and its clinical use in pediatrics with special emphasis on disorders of sex development. Int J Endocrinol. 2013;2013: Lee MM, Misra M, Donahoe PK, MacLaughlin DT. MIS/AMH in the assessment of cryptorchidism and intersex conditions. Mol Cell Endocrinol. 2003;211(1-2); Rey R, Lukas-Croisier C, Lasala C, Bedecarrás P. AMH/MIS: what we know already about the gene, the protein and its regulation. Mol Cell Endocrinol. 2003;211(1-2); Approved Guideline - Procedures for the Handling and Processing of Blood Specimens for Common Laboratory Tests, G-P44-A Clinical and Laboratory Standards Institute. 21. DHHS (NIOSH) Publication No , August Current Intelligence Bulletin 13 - Explosive Azide Hazard. Available at Cembrowski GS, Carey RN. Laboratory quality management: QC QA. ASCP Press, Chicago, IL, Kricka L. Interferences in immunoassays - still a threat. Clin Chem 2000; 46: Bjerner J, et al. Immunometric assay interference: incidence and prevention. Clin Chem 2002; 48: Lingwood D, Ballantyne JS. Alkaline phosphatase-immunoglobulin conjugate binds to lipids in vitro, independent of antibody selectivity. Journal of Immunological Methods 2006; 311: Approved Guideline - Evaluation of the Linearity of Quantitative Measurement Procedures: A Statistical Approach, EP6-A. April Clinical and Laboratory Standards Institute. 27. Approved Guideline - Evaluation of Precision Performance of Quantitative Measurement Methods EP5-A2. August Clinical and Laboratory Standards Institute. 28. Approved Guideline - Interference Testing in Clinical Chemistry, EP7-A2. November Clinical and Laboratory Standards Institute. 29. Approved Guideline - Evaluation of Detection Capability for Clinical Laboratory Measurement Procedures, EP17-A2. June Clinical and Laboratory Standards Institute. Immunotech S.A.S. a Beckman Coulter Company, 130, avenue de Lattre de Tassigny, BP 177, Marseille cedex 9, France, EYLÜL 2014 Sayfa 11 / 11