RIDASCREEN Entamoeba. Makale no: C 1701

Transkript

1 RIDASCREEN Entamoeba Makale no: C 1701 R-Biopharm AG, Landwehrstr. 54, D Darmstadt, Germany Tel: +49 (0) / Fax: +49 (0) Χ

2 1. Kullanım amacı In vitro diyagnostik kullanım için. RIDASCREEN Entamoeba bir ELISA testi olup gaitada Entamoeba histolytica sensu lato kalitatif tespiti için kullanılır. 2. Özet ve testin açıklaması Her yıl dünya genelinde yaklaşık 500 milyon insan Entamoeba histolytica sensu lato den enfekte oluyor. Moleküler genetic araştırmalar gösterdi ki; Entamoeba histolytica adı verilen protozoa konvansiyonel iki tespit metodu belirlenir:patojenik türler, Entamoeba histolytica sensu stricto ve (şu an ki bilgiye göre) patojenik olmayan türler-, Entamoeba dispar. Entamoebadan enfekte olan insanların % 90 nı, E. dispar sahiptir. Her yıl olan,amoebik kolit ya da hepatik abse durumlarının yaklaşık olarak milyonun 80,000 kişisi E. histolytica tarafından hastalanıp, ölümle sonuçlanır. 4 nükleili kistleri ağız yoluyla bulaşan enfeksiyondur.bunlar ince bağırsakta gelişerek çekirdekli parazite dönüşür, tropozoit artar ve kalın bağırsakta değişime uğrar. Enkapsülasyon muhtemelen kalın bağırsağın daha düşük alanlarında gelişir. Bunun yanında, kistler ve tropozoitler sadece hızlandırılmış bağırsak pasajında bulunur.amiplerin klinik belirtileri, kolon mukoz membranda, bağırsağın lumeninden parasitlerin invazyonu ile tetiklenir. Fakositalize olmuş eritrositlerle tropozoitler sıklıkla aynı zamanda bulunur. Bu tropozoitler ölçülerinden dolayı, forma magna olarak bilinir. Semptomlar ise ishal, dizanteri ya da amiptir.komplikasyonları, yayıldıktan sonra ortaya çıkabilir, hepatik abse, pulmuner abse, nadir olarak ta beyinsel absedir, tedavi edilemez ölüm ile sonuçlanır. Amiplerin akut intestinal aklinik semptomları kramplar abdominal ağrılar, mide bulantısı ve ağır kanlı ishal. Akut dönem kronikleşebilir ishal kabızlığa dönüşür, abdominal ağrılar, bulantı ve kusma görülür.semptomda tamamen kistsiz eliminasyonda tarif edildi. Yaklaşık olarak akut amip dizanterinin %10 u ekstra-intestinal komplikasyonlarla sonuçlanır örneğin: hepatik abse ya da diğer organlarda invazyon. Ekstra olarak, intestinal amip,antikorların serolojik determinasyonu ile tespit edilir. İntestinal amipler komplike mikroskobik prosedür ile teşhis edilir. Ama, parasit dansitesi çok küçük olduğu için, bu testin hassasiyeti bu metot ile tek bir numuneyle, çok tecrübeli bir persenol olsa bile % 75 dir.metot aynı zamanda amip ile bağırsak epitelleri, granüller,makrofajlar ve mantar ile karışma riski taşır. ELISA gibi hassas immuno testde amip antijeni tespit edilir. Büyük bir avantaj sağlar:diyagnostik metot subjektif değerlendirmeye dayanmaz morforlojik yömtemden çok daha hassastır. Morfolojik yöntemle ayırt edilmeyenler buy olla tespit edilir. Sadece entamoebanın invasif formu antikorların oluşumuna sebep olur.klinik semptonların başında genellikle antikor titreleri kullanılabilir. Spesifik antikor determinasyonu E. histolytica. RIDASCREEN Entamoeba

3 için kullanılabilir. Bu titreler, aynı zamanda intestinal ve ekstra intestinal amiplerin miktarı arasındaki farklılığı gösterir.bu da uygulanacak tedavi için karar vermede rol oynar. 3. Test prensibi RIDASCREEN Entamoeba testi, sandviç tip metotda spesifik antikorlar kullanır. Kuyucukların yüzeyine kaplanan Entamoeba histolytica sensu lato antijenlerine karşı olan Entamoeba-spesifik antikorları ile kuyucuklar kaplıdır. Gaita süspansiyonu ve kontroller kuyucuklara pipetlenir. Entamoeba histolytica sensu lato antijenlerine karşı peroksidazla konjuge edilmiş antikorlar eklenir ve daha sonra oda ısısında (20 25 C) inkübe edilir. Entamoeba histolytica sensu lato antijenleri, sabitlenen antikorlar ve konjuge edilen antikorlar sandviç kompleksini oluşturur. Bağlanmayan enzimle etiketlenmiş antikorlar yıkanarak atılır.renksiz olan substrat eklendikten sonra, numune pozitif ise kuyucukta mavi renge döner. Stop solüsyonu eklendikten sonra da renk sarıya döner. Oluşan rengin şiddeti numunede bulunan Entamoeba histolytika antijenlerinin konsantrasyonu ile doğru orantılıdır. RIDASCREEN Entamoeba

4 1. Sağlanan Reaktifler 96 teste yetecek kadar içinde reaktif vardır. Pleyt 96 test. Mikrokuyucuklu pleyt, 12 mikrokuyucuklu strip (kırılabilir) ; Entamoeba histolytica sensu lato antijenlerine karşı entamoebaspecific antikorları ile kaplı Diluent ml Numune-dilüsyon buffer, protein-buffer NaCl solüsyonu;% 0.1 Kathon; kullanıma hazırdır; mavi renkli Yıkama 100 ml Yıkama bufer, fosfat bufer NaCl solüsyonu (10-kat konsantre); %0.1 Thimerosal içerir. Kontrol ml İnaktive edilmiş Entamoeba histolytica sensu lato; kullanıma hazırdır.% 0.1 Kathon içerir. Konjugat 10 ml Peroksidaz -konjugat monoklonal antikor Entamoeba histolytica sensu lato karşı stabilize edilmiş protein solüsyonunun içinde ; %0.05 ProClin300içerir; kullanıma hazır,mavi renkli Substrat 10 ml Üre peroksidaz/tmb; kullanıma hazır Stop 6 ml Stop reaktifi, 1 N sülfürik asit kullanıma hazır 5. Saklama gereklilikleri Tüm reaktifler 2 8 C de saklanabilir ve etiketin üzerinde basılı tarih kadar kullanılabilir. Dilüe edilen yıkama solüsyonu 2 8 C de saklanır. Maksimum 4 hafta kullanılabilir.mikrobiyal kontaminasyona mutlaka önlenmelidir. Miadı geçtikten sonra kalite garantisi geçerli değildir. Alüminyum çanta kilidinden açılmalı, kilit yırtılmamalı. Kullanılmayan kuyucular çantanın içine geri konulmalıdır ve 2 8 C de inkübe edilmelidir. Renksiz substrat, bozulmasını engellemek ya da okside olarak mavi renge dönüşmesinin önüne geçmek için, direk olarak gün ışığından korunarak saklanmalıdır. Açılan substrat mavi renge dönerse kullanılmamalıdır. RIDASCREEN Entamoeba

5 6. Ek olarak gerekli reaktifler ve ekipmanlar 6.1. Reaktifler - Distile ya da deiyonize su 6.2. Aksesuarlar - Test tüpleri - Tek kullanımlık pipetler (Makale no: Z 0001) - Vorteks mikser (opsiyonel, Bölüm9.3. bakınız) - Mikropipet µl ve 1 ml hacim çekebilen - Mezür (1000 ml) - Saat - Mikropleyt yıkayıcı (300 µl) - Mikropleyt okuyucu (450 nm ve referans filtre 600 nm ) - Filtre kağıdı (laboratuvar havlusu) - %0.5 hipoklorit solüsyonu içeren atık kabı 7. Kullanıcılar için önlemler Sadece in vitro diyagnostik kullanım içindir. Mutlaka eğitimli bir personel tarafından kullanılmalıdır.medikal laboratuvar çalışanları için olan rehber takip edilmeli ve oradaki direktiflere tamamen uyulmalıdır. Kitte bulunan pozitif kontroller inaktive edilmiş entamoeba içerir. Buna rağmen kontroller ve numuneler mutlaka enfekte materyal gibi, ulusal güvenlik kurallarına göre muamele görmelidir. Numuneler ya da reaktifler ağız ile pipetlememeli ve yaralı deriyle, mukoz membran ile teması önlemelidir. Numuneler, eldiven giyilerek çalışılmalı ve test bittiği zaman eller yıkanmalıdır. Numuneler veya reaktifler ile çalışırken sigara içmeyiniz, yemek yiyip içmeyiniz. Numune dilüsyon buffer, konjugat ve koruyucu olarak % 0.1 Kathon içerir. Bu madde deri veya mukoz membran ile temas edilmesine müsaade edilmemelidir. Konjugat bufer koruyucu olarak %0.05 ProClin300 içerir.bu madde deri ya da mukoz mebran ile temas ettirilmemelidir. Yıkama buferı koruyucu olarak, %0.1 Thimerosal içerir. Deri ve mukoz membran bu madde ile temas ettirilmemelidir. RIDASCREEN Entamoeba

6 Üre peroksidaz yanmaya sebep olur.dikkatli kullanınız. Stop reaktifi 1 N sülfürik asit içerir. Deri ve elbiselerinizi koruyunuz. Eğer deriye temas ederse bol su ile yıkayınız. Tüm reaktiflere ve materyallere, enfeksiyon kapma riski olan numuneler gibi davranılmalı ve uygun bir dezenfektan veya otoklav ile 121 C de en az 1 saat dezenfekte edilmelidir. DİKKAT: Zehirli gazların oluşumunu önlemek için,stop reaktifi içeren her atık sıvı hipoklorit solüsyonu eklemeden önce nötralize edilmelidir. 8. Numune toplama ve saklama Gaita numuneleri hiçbir katkı maddesi olmayan temiz bir kaba konmalıdır ve test başlamadan önce 2 8 C de bekletilmelidir.eğer 3 günden fazla saklamak gerekiyorsa, numuneler 20 C de saklanmalıdır. Bu durumda da numuneler test edilmeden önce oda ısısında tamamen çözülmelidir. Tekrar tekrar çözüp dondurmaktan kaçınılmalıdır.gaita numunesi ve rektal swap taşıma konteynır ile toplanmalıdır, bu transport medyanın içinde koruyucular, hayvan serumu, metal iyonları, oksitleme ajanı ya da deterjan içerir bunlarda RIDASCREEN Entamoeba test testine olumsuz etki yapar. Eğer rektal swap kullanıldıysa, test için, yeteri kadar gaita (yaklaşık 100 mg) alındığından emin olunuz. 9. Test procedure 9.1. Genel bilgi Tüm reaktifler ve Mikropleyt Pleyt kullanmadan önce oda sıcaklığına getirilmeli (20 25 C) Kuyucuklar oda sıcaklığına gelene kadar alüminyum çantadan çıkarılmamalıdır.reaktifler kullanılmadan önce karıştırılmalıdır.kullanılmayan kuyucuklar ve reaktifler 2 8 C de saklanmalıdır.kullanılan kuyucuklar tekrar kullanılmamalıdır.zarar görmüş paketteki malzemeler kullanılmamalıdır. Çapraz reaksiyonu önlemek için numunelerin kit komponentleri ile temasından sakınılmalıdır.test direk olarak gün ışığına maruz kalmamalıdır. Kuyucuğun üzerini kapatıp veya film ile sarıp buharlaşma kayıplarını engellemenizi tavsiye ederiz. RIDASCREEN Entamoeba

7 9.2. Yıkama buferı hazırlama 1 hacim yıkama konsantre bufer ile Yıkama 9 hacim distile suyu karıştırın. Yıkama bufer içinde olan herhangi bir kristalleşme kullanmadan önce 37 C de su banyosunda çözülerek kullanılmalıdır Numune hazırlama 1 ml RIDASCREEN numune dilüsyon buferı Diluent 1 etiketlediğiniz test tüpüne koyunuz. Tek kullanımlık pipet ile gaitayı çekiniz.(makale no: Z 0001) yaklaşık olarak 100 µl ikinci işareti geçene kadar.numune dilüsyon bufer içine koyunuz.katı gaitalar için, yaklaşık olarak mg kadar spatül ile alınır ve numune dilüenti bufer içine bırakılır.gaita süspansiyonunu pipetle çekip bırakarak ya da alternatif olarak mikser veya Vorteks ile karıştırınız.kısa bir süre partiküllerin çökmesi için bekletilir. Temiz süpernatant kullanılır.eğer test prosedürü ELISA cihazında çalışılacaksa mutlaka süpernatantın temiz olması gerekir.bu durumda,numuneyi 5000 rpm de (yaklaşık olarak g) 5 dakika boyunca santrifüj edilmelidir İlk İnkübasyon Yeteri kadar kuyucuk çalışma çerçevesine yerleştirildikten sonra 2 damla (100 µl) pozitif kontrol Kontrol +, numune dilüsyon buferı Diluent 1 (= kontrol) ve numune süspansiyonu kuyucuklara konur.sonra üzerine, 2 damla (100 µl) enzim-konjugat antikor Konjugat konur ve karıştırılır, oda sıcaklığında (20 25 C) de 60 dakika inkübasyona bırakılır Yıkama Yıkamada tamamen direktiflere uymak doğru sonuç elde etmek için çok önemlidir. Kuyucuklarda inkübe edilen madde mutlaka dezenfeksiyon için hipoklorit içeren atık kabına atılmalıdır. Bundan sonra, kalan damlaları için emici bir kağıt üzerinde vurarak alınız.bundan sonra her seferinde 300 µl olmak üzere, yıkama bufer ile 5 defa yıkayınız.her yıkamadan sonra her yıkamadan sonra, emici kağıda vurarak kalan damlalar emdirilir. ELISA yıkayıcı kullanıyorsanız, cihazın mikropleyt tipine uygun olduğu kontrol edin.daha da ötesi partiküle sahip olan numune süspansiyonu pipetlenmiş ise ilk yıkama manuel olarak yapılmalıdır, yoksa yıkayıcının uçlarını tıkayabilir. Aynı zamanda yıkama işleminde tüm sıvının emildiğinden emin olunuz.her yıkamadan sonra kalan damlaları absorbe edecek bir kağıda veya havluya emdiriniz.optimum yıkama sonucunu elde etmek için kuyucuk başına en az 600 μl yıkama buffer kullanılması önerilir.yıkama sayısı daha iyi sonuç elde etmek için 5 den fazla yapılabilir. RIDASCREEN Entamoeba

8 9.6. İkinci İnkübasyon Her kuyucuğa 2 damla (100 μl) substrat Substrat eklenir.daha sonra karanlıkta oda sıcaklığında (20-25 C) 15 dakika inkübe edilir.her kuyucuğa, bir damla (50 µl) stop reaktifi Stop eklenerek reaksiyon bitirilir.dikkatlice karıştırılır.(yavaşça pleytin kenarını çarparak) Oluşan rengi 450 nm de okuyunuz.referans filtre olarak 600 nm (opsiyonel) kullanılır. Sonra mikropleyt olmadan havaya karşı kalibre ediniz. Not: Yüksek pozitif numuneler,substratı siyah sediment olarak çöktürebilir. 10. Kalite Kontrol reaktifin miadı Kalite kontrol amacı için, ve pozitif numune çalışılır; testin doğru çalıştığından ve reaktiflerin stabilitesinden emin olunur.negatif kontrol (O.D.) 450 nm de < 0.2 ise ve pozitif kontrol > 0.8 at 450 nm doğru çalışılmıştır. Eğer kontrol >0.2 ise yıkamanın yetersiz olduğunu ifade eder.eğer bulunan değerler beklenenlerden farklı ise ve substratta bulanıklık varsa ya da maviye dönüşmüş ise reaktifin eskidiğini gösterebilir. Şart koşulan değerlerle sonuçlar çakışmazsa, test tekrar edilmeden önce aşağıdaki noktalar kontrol edilmelidir: Kullanılan reaktiflerin miadı Kullanılan ekipmanların fonksiyonları(örn:kalibrasyon) Test prosedürünü kontrol edin Kit kontaminasyonuna yönelik akma veya herhangi bir gözle görülen bir bozulma substrat maviye dönmüş olmamalıdır. Bunlardan emin olduktan sonra, yeni kaset ile testi tekrar ettiğinizde, eğer kontrol bandı görünür değilse, lütfen üretici ya da R-Biopharm distirübütör ile kontak kurunuz. RIDASCREEN Entamoeba

9 11. Değerlendirme ve yorumlama cut-off hesaplama Cut-off oluşturmak için, 0.15 O.D. kontrolün O.D. sine eklenir Test sonucu Cut-off = kontrol O:D: Cut off değerinden % 10 da yüksek O.D. ye sahip numuneler pozitif olarak değerlendirilir. Eğer sonu. Cut of değerinin % ± 10 arasında ise şüpheli olarak değerlendirilir.eğer testin tekrarı da gri zonda çıkarsa numune olarak değerlendirilmelidir. Cut off değerinin %10 altında çıkan değerler ise olarak değerlendirilir. 12. Metot Limitleri RIDASCREEN Entamoeba test gaitadaki Entamoeba antijenlerini tespit eder. Testin şiddeti, klinik semptomların şiddetini ortaya çıkarmak için kullanılamaz. Sonuçlar klinik tablo ile birlikte yorumlanmalıdır. Test spesifik görünür bantların şiddeti ile klinik semptomların şiddetini ortaya çıkarmak için kullanılamaz. Sonuçlar klinik tablo ile birlikte yorumlanmalıdır. Pozitif sonuçlar, diğer bulaşıcı patojenlerin olmadığı anlamına gelmez. Negatif sonuçlar Entamoeba enfeksiyonu olmadığını göstermez Bu enfeksiyon aralıklı olarak salgılanan patojenler ya da numune olan çok küçük miktardaki patojenler tarafından olabilir.eğer hasta anemik ya da Entamoeba histolytica tarafından enfekte olduğu şüphesi varsa bir başka gaita numunesi alınarak 4 hafta sonra,test tekrar edilmelidir. Şüphe duyulan diğer amipler RIDASCREEN E. histolytica IgG, (Article no: K 1721) kiti kullanılarak konfirme edilir. Şüpheli sonuçlara sebep gaitada virüslerin homojen dağılımında olmamasından kaynaklanabilir.eğer bu olursa, aynı veya yeni numuneden ikinci bir süspansiyon hazırlanıp test edilmelidir. RIDASCREEN Entamoeba

10 13. Performans niteliği Test kalitesi Klinik çalışma, RIDASCREEN Entamoeba testi toplam 276 gaita numunesine yapıldı. Münih te 1999 eylül 2000 mart tarihleri arasında yurtdışından dönen ve çeştli şikayetleri olan hastanede yatan veya poliklinik hastalarından numune alındı.tüm numuneler direk mikroskop kullanılarak yumurtalar ve parasitler 10 dakika boyunca iki tecrübeli mikroskopist tarafından iron haematoxylin ve SAF zenginleştirici kullanılarak incelendi. Taze numunelerden posiyonlar alınarak 20 C donduruldu. Daha sonra, numuneler çözüldü ELISA yöntemine göre, çalışma yapıldı.diğer intestinal parasitler ile çapraz bir reaksiyon olmadığı görüldü.sonuçlar aşağıdadır. Tablo 1. Tablo 1: RIDASCREEN Entamoeba ELISA ve mikroskop sonuçları Mikroskopi pozitif RIDASCREEN Entamoeba pozitif Hassasiyet 81.8 % Özgüllük 99.2 % PPW 81.8 % NPW 99.2 % Çapraz reaksiyon RIDASCREEN Entamoeba testi kullanılarak, intestinal yolda bulunan diğer patojenik organizmalar test edildi ve çapraz reaksiyon görülmedi.araştırmalarda kullanılan bakterial süspansiyon bir gece BHI içinde süspansiyonu içinde bekletildi, konsantrasyonu patojenler/ml. Ve 450 nm de ölçüldü.sonuçlar Tablo 2 de listelendi. Tablo 2: Çapraz reaksiyonlar patojenik mikroorganizmalarla Test germ Orjinal Sonuç Süspansiyon Acinetob. lwoffii DSM Aeromonas hydrop. anaerogenes DSM Aeromonas hydrop. hydrophila DSM Citrob. freundii LI* İzole Citrob. freundii DSM RIDASCREEN Entamoeba

11 Enterob. cloacae DSM Enterococcus faecalis DSM Enterococcus faecium ATCC E. coli LI* İzole E. coli LI* İzole E. hermanii DSM Pseudom. aeruginosa DSM Pseudom. fluorescens DSM Pseudom. fluorescens DSM Salmonella agona LI* İzole Salmonella braenderup LI* İzole Salmonella infantis LI* İzole Lactococcus lactis DSM Listeria innocua 6a, LI* Isolate Proteus mirabilis DSM Proteus mirabilis DSM Proteus vulgaris DSM Providencia stuartii DSM Salmonella Ohio LI* İzole Salmonella typhimurium LI* İzole Serratia proteamaculans DSM Shigella flexneri DSM Shigella sonnei DSM Staph aureus DSM Staph aureus LI* İzole Strep. agalactiae LI* İzole Strep. dysgalactiae LI* İzole Strep. uberis LI* İzole E. coli O22:H8, VT1 İzole E. coli O157:H7, VT1+2 İzole Negative control, USP Positive control test kit Cut-off *Isolates Orijin Sonuç Süspansiyon Candida albicans ATCC RIDASCREEN Entamoeba

12 Salmonella enteritidis DSM Campylobacter jejuni DSM Campylobacter coli DSM Campylobacter fetus DSM Morganella morganii DSM Pozitif kontrol Negatif kontrol Cut-off Solcan yumurtası ve parasitlerle çapraz reaksiyon Farklı gaita numuneleri mikroskopik olarak ve 1 : 10 dilüsyon kullanılarak RIDASCREEN Entamoeba testi yapıldı. Sonuçlar Tablo 3 dedir. Tablo 3: Solcan yumurtası ve parazitlerle çapraz reaksiyon testi Mikroskopta bulunanlar RIDASCREEN Entamoeba Eggs of Schistosoma mansoni Eggs of Taenia solium Eggs of Trichuris trichiura Eggs of Ascaris lumbricoides Eggs of Enterobius vermicularis Eggs of Hymenolepis nana Eggs of Ankylostoma duodenale Cysts of Entamoeba coli Cysts of Entamoeba hartmanni Cysts of Iodamoeba bütschlii Cysts of Blastocystis hominis Cysts of Giardia lamblia Cysts of Cryptosporidia Presizyon Intra-test, Entamoeba histolitika preparatı kullanılarak 4 farklı konsantrasyonda 24 ölçüm yapıldı.ortalama değer, standart sapma ve CV hesaplanır. Inter test, Entamoeba histolitika preparatı 4 farklı konsantrasyonda 21 bağımsız ölçüm (3 teknisyen 7 farklı günde ) çalışıldı. RIDASCREEN Entamoeba

13 Ortalama değer, standart sapma ve CV hesaplanır. (21 test/ numune). Sonuçlar tablo 4 de listelenir. Tablo 4: RIDASCREEN Entamoeba testleri Negatif Düşük pozitif Güçlü Pozitif Pozitif kontrol Intra-test Ortalama O.D. Standart deviasyon CV (%) Inter-test Ortalama OD Standard deviasyon CV (%) RIDASCREEN Entamoeba

14 Referanslar 1. Bracha, R. et al.: Differentiation of clinical isolates of Entamoeba histolytica by using specific DNA probes. Clin. Microbiol. 28 (No. 4), (1990). 2. Citronberg, R. J., Semel, J. D.: Severe vaginal infection with Entamoeba histolytica in a woman who recently returned from Mexico: Case report and review. Clin. Infect. Dis. 20, (1995). 3. Espinosa-Cantellano, M., Martinez-Palomo, A.: Entamoeba histolytica: Mechanism of surface receptor capping. Exp. Parasitol. 79, (1994). 4. Katzwinkel-Wladarsch, S. et al.: Direct amplification and differentiation of pathogenic and nonpathogenic Entamoeba histolytica DNA from stool specimen. Am. J. Trop. Med.-Hyg. 51 (1), (1994). 5. Kean, B. H. et al.: Epidemic of amoebiasis and giardiasis in a biased population. Brit. J. Ven. Dis. 55, (1979). 6. Mannweiler, E.: Immundiagnostik der Amöbiasis. Der Mikrobiologe 5. Jg., Heft 6, (1995). 7. Ohnishi, K. et al.: Brain abscess due to infection with Entamoeba histolytica. Am. J. Trop. Med. Hyg. 51 (2), (1994). 8. Petter, R. et al.: Characterization of two distinct gene transcripts for ribosomal protein L 21 from pathogenic and nonpathogenic strains of Entamoeba histolytica. Gene 150, (1994). 9. Reed, Sh. L.: New Concepts regarding the pathogenesis of amebiasis. Clin. Infect. Dis. 21 (Suppl. 2), (1995). 10. Strachan, W. D. et al.: Immunological differentiation of pathogenic and non-pathogenic isolates of Entamoeba histolytica. Lancet 12, (1988). 11. van Lunzen, J., Tannich, E., Burchard, G.-D.: Amöbenruhr und Amöbenleberabszeß. Deutsches Ärzteblatt 93, Heft 2, (1996). RIDASCREEN Entamoeba