AESKUBLOT Vasculitis Pro Ref 4002

Transkript

1 AESKUBLOT Ref 4002

2

3 Ürün Açıklaması. Kullanım Klavuzu İçerik 1 Kullanım Amacı Klinik Uygulamalar ve Test Prensibi Kit İçeriği Saklama Koşulları ve Raf Ömrü Kullanım Önlemleri ve Genel Talimatlar Numune Toplama, İşleme ve Saklama Tahlil Prosedürü Kalitatif Yorumlama Teknik Veriler Performans Verileri Dizin... 8 AESKU.DIAGNOSTICS GmbH & Co. KG Mikroforum Ring Wendelsheim, Germany Tel: Fax: Info@aesku.com

4 REF 4002

5 Ürün Açıklaması 1 Kullanım Amacı AESKUBLOT, insan serum veya plazmasındaki PR3, MPO ve GBM e karşı IgG antikorlarının kalitatif tespiti için membran bazlı immuno analiz kitidir. Antijenler, bir nitrocellulose zarı üzerinde,tam olarak tanımlanmış pozisyonlarda paralel hatlar olarak bulunurlar. Bu tahlil autoimmune vasculitis hastalıklarının ayırıcı tanısında bir araçtır. 2 Klinik Uygulamalar ve Test Prensibi Myeloperoxidase (MPO) ve proteinase 3 (PR3) karşı antikorlar, nötrofilik granülositlerin ve monositlerin sitoplazmik bileşenlerine karşı yöneltilmiş anti-nötrofil sitoplazmik antikor (ANCAs) grubuna aittir. ANCAs, autoimmune vasculitis ayırıcı tanısında önemli bir belirteçtir. Anti-PR3- antikorları polianjitis (Wegener) ile granülomatözisi için spesifik bir serolojik belirteçtir ve WG patogenezinde aktif rol oynayabilir. Anti-PR3-antikor titreleri, hastalık aktivitesi ile bağlantılıdır ve PR3 proteolitik aktivitesini inhibe ederler. Anti-MPO-antikorları, idiyopatik vaskülit veya vaskülit ilişkili hilal şekilli nekrotizan glomerülonefrit ile ilişkilidir ve mikroskopik polianjiitisin hastaların% 70'inde ve Churg-Strauss sendromu olan hastaların % 5-50 inde sık bulunurlar.günümüzde, glomerüler bazal membran (GBM) karşı otoantikorların belirlenmesi Goodpasture sendromu tanısı için serolojiktir. Bu otoimmün hastalığının adlandırılması, ilerleyen glomerulonefrit ile ölümcül bir akciğer kanaması birlikteliği ilk olarak tanımlayan Ernest Goodpasture dan sonra olmuştur. Test Prensibi Antijenler bir nitroselüloz membran üzerinde çizgiler halindedirler. Membran,spesifik olmayan reaksiyonları önlemek için bloke edilmiştir.tam olarak tanımlanmış pozisyonlarda spesifik antijeni membran şeritler, 1:101 oranında dilüte serum/plazmada inkübe edilir. Eğer hasta antikorları örnek içerisinde mevcut ise antijene bağlanır. Bağlanmamış kısım, takip eden aşamadaki yıkama işlemi ile uzaklaştırılır. Sonra, horseradish peroksidazına (konjugat) konjuge edilmiş anti-human immunoglobinleri inkübe edilir ve örneğin antijenantikor kompleksi ile reaksiyona girer Bağlanmamış konjugat, takip eden aşamadaki yıkama işlemi ile uzaklaştırılır. TBM-substrate ilave edildikten sonra enzimatik bir reaksiyonla mavi çökelti oluşur. Bu reaksiyon yıkama tamponu ile sonlandırılır. Page 1 of 8

6 Ürün Açıklaması. 3 Kit Contents HAZIRLANMASI GEREKEN MALZEMELER Madde Madde Madde Madde Madde Engelleme Reaktifi 3 x 10 ml konsantre beyaz N/A Numune tamponu hazırlanması için yağsız süttozu Yıkama Tamponu (50x) 1 x 50 ml beyaz renksiz L Tris buffer, ph 6.9 ± 0.2 hazırlamak için 20xkonsantre Madde Miktar Kapak Rengi KULLANIMA HAZIR MALZEMELER Solüsyon Rengi Açıklama/İçerik Konjugat, IgG 1 x 10 ml mavi renksiz horseradish peroxidase a konjuge Anti-human immunoglobulin G (IgG) TMB Substrat 1 x 10 ml siyah renksiz Stabilize TMB/H 2 O 2 Membran Şerit 24 şerit Renk Kodu Mor N/A Antijenle kaplanmış, kullanım amacına bakın Cımbız, inkübasyon tepsisi, referans şablonu, puanlama cetveli yapışkan şerit(çift taraflı,siyah) 1 er adet N/A N/A N/A Numune tamponu için etiketler 3 adet. N/A N/A N/A KİT İLE SAĞLANMAYAN, GEREKLİ MALZEMELER Çalkalama platfornu, silindir 1000 ml,10 ml lik pipet veya silidir, hassas pipetler (10, 1000 µl), emici vea filtre kağıdı Testlerimiz Amerika Birleşik Devletleri Farmakoloji (USP 26- NF 21) ve Avrupa Farmakoloji (Eur.Ph 4.ed.) tanımına göre, saflaştırılmış su ile kullanılmak üzere tasarlanmıştır 4 Saklama Koşulları ve Raf Ömrü Bütün reaktifleri ve membran şeritleri orijinal kutularında ve 2-8 C/35-46 de saklayınız. Dilüe edilmiş solüsyonlar, hazırlandıktan sonra 4 C de en az 6 hafta stabildir. Reaktif ve şeritler, kendileri için belirtilen son kullanma tarihleri içerisinde kullanılmalıdır Son kullanma tarihi geçmiş bileşenleri kullanmayın. TMB solüsyonunu yoğ un ı ş ı ga maruz bı rakmaktan kaçı n ı n Page 2 of 8

7 Ürün Açıklaması 5 Kullanım önlemleri ve Genel Talimatlar 5.1 Sağlık Tehlike Verileri Bu ürün sadece IN VITRO DIAGNOSTIC içindir. Bu nedenle sadece eğitimli personel ve özellikle in vitro diagnostic metodları, kitin kullanımı için tavsiye edilir. Bu ürün, amaçlanan kullanım koşulları altında, özellikle toksik veya tehlikeli olarak kabul edilir olmasa da maksimum güvenlik için aşağıdakilere bakınız: Öneriler ve Önlemler Bu kit potansiyel tehlikeli bileşenler içerir. Kit reaktifleri her ne kadar göz ve cilt için tahriş edici olarak sınıflandırılmamış olsa da, reaktiflerin gözle temasından kaçınılması ve atılabilir eldiven giyilmesi önerilir Substrate koruyucu olarak kathon (1% v/v) içerir.kesinlikle yutmayınız ve cilt veya mukus tabaka ile temas ettirmeyiniz Kit çalışırken herhangi bir şey yemeyin veya içmeyin, sigara içmeyin. Ağızınızla pipetleme yapmayınız Bulaşıcı hastalıkları taşıma riski olan hasta numuneleri ulusal düzelmemelere göre işlenmelidir 5.2 Genel Kullanım Talimatları Mevcut çeşitli AESKUBLOT-testlerini ayırt etmek için, şeritlerin referans hattı üstüne bir renk kodlaması uygulanmıştır. Renk kodu sarı oranj mavi Kahve rengi mor siyah yeşil AESKUBLOT ANA-12 Pro ANA-17 Pro Myositis Pro Liver Pro Gastro Pro Borrelia-G ve Borrelia-M Etiketleme dahil ürün bilgilerinin yanlış olması halinde, lütfen üretici firmayla veya kit sağlayıcınızla irtibata geçiniz. Engelleme reaktifi veya yıkama tamponu farklı lotlarda ve test kitlerinde değiştirilebilir (ortak olarak kullanılabilir). Ancak diğer bütün bileşenler sadece kendi test kitlerine spesifiktir ve değiştirilemezler. Autoimmunity ve borrelia tanı testlerinin bileşenlerini arasında değişim yapmayın! Konjugat kullanımı için polystyrene aletler kullanmayın. Testin optimal performansı için bütün bileşenleri kullanmadan önce, oda sıcaklığına getirin (20-32 C/ F), iyice karıştırın ve önerilen inkübasyon şemasının takip edin. Bileşenleri asla 37 C/ 98.6 F. den yüksek sıcaklığa maruz bırakmayın. Substrate solusyonunu daima kaliteli yeni pipet uçları ile pipetleyin.bu reaktifi ışıktan koruyun. Konjugatı asla daha önceden başka reaktifler ile kulanınmış pipet uçlarıyla pipetlemeyin. Bantın renk yoğunluğunun, diğer referans metodolojileri ile elde edilen antikor titreleri ile ilişkili olması gerekmez. Bilinen normal kan vericilerden alınan numuneler, antikorlar içerebilir Page 3 of 8

8 Ürün Açıklaması Hasta örneği, bağışıklık kompleksleri veya diğer immünoglobulin kümelerini içeriyorsa, spesifik olmayan bağlanmalar neticesinde alınan yanlış pozitif sonuçlar göz ardı edilmemelidir. Kesin klinik tanı, sadece yapılan test sonuçlarına dayandırılmamalı, tüm klinik ve laboratuar bulguları hekim tarafından değerlendirilmiş olmalıdır.tanının doğrulanması için farklı teşhis metotları kullanılmalıdır. 6 Numune Toplama, İşleme ve Saklama Tercihen taze toplanmış serum örnekleri kullanın. Kan almada ulusal yönergeler takip edilmelidir.ikterik,lipemik, hemolize veya bakteri bulaşmış numuneleri kullanmayın. Serumdaki partiküller düşük hızlı santrifüjleme(<1000 x g) ile giderilmiş olmalıdır. Kan örnekleri temiz, kuru ve boş tüpler ile toplanmış olmalıdır. Santrifüj işleminden sonra serum numuneleri ilk 8 saat içerisinde kullanılmalıdır. Alternatif olarak, ;numuneler ayrı ayrı ve sıkıca kapatılarak, 48 saate kadar kullanım için 2-8 C/35-46 de muhafaza edilmeli, daha uzun süreli kullanımlar için -20 C/-4 F de dondurulmalıdır. Tekrarlanan çözülme ve dondurma işlemlerinden kaçının. Isıyla inaktive olmuş numuneleri kullanmayın. 7 Tahlil prosedürü 7.1 Çalışama Öncesi Hazırlık Konsantre içersinde oluşmuş tuz olmayan kristalleri olup olmadığına bakın. Eğer oluşmuşsa, konsantreyi hafifçe ısıtarak (oda sıcaklığı yeteli olacaktır) kristalleri yok edin Yıkama tamponunu distile su ile 1:20 oranında dilüe edin ( örn : 50 ml+ 950 ml) Numune tamponu hazırlamak için : 1 şişe Engelleme Reaktifi içerisine 10 ml yıkama tamponu ekleyin ve iyice karıştırın 7.2 Test Adımları Manuel Çalışma Önemli Notlar: Şeritlerin inkübasyon sırasında kurumasına izin vermeyin. Şeritlere parmak ile dokunmayın, cımbız kullanın. Dilüe edilmiş numuneleri, üzerinde taşınması önlemek için şerit inkübasyonundan sonra tamamen çıkartın. İnkübasyon esnasında şeritleri sürekli çalkalayın. İnkübasyon tepsisinin bir yanına numune tamponu, konjugat ve subtrate ile birlikte yıkama tamponunu verin..şerit üzerinde akmasına izin vermeyin. Page 4 of 8

9 Ürün Açıklaması. Adım Açıklama 1. Teste başlamadan önce 7.1 adımındaki hazırlıkların yapılmış olduğundan emin olun. 2. Şeritleri inkübasyon tepsisine,doğru yerleştirin (referans hattı ve renk kodu yukarıda olmalı) coding upwards). İnkubasyon tepsisine700 µl yıkama tamponu ve 300 µlnumune tamponu koyun. Şeriti solüsyon ile ıslatın ve çalkalayarak 10 dakika inkübe edin. KONTROLLER & NUMUNELER 3. Numune tamponlu belirlenmiş inkübasyon tepsisine 10 µl serum/plazsma numunesini pipetleyin C/ FDe çalkalayarak 30 dakika inkübe edin. Sonra numuneyi tamamen çıkartın 5. 3 kez,1.5 ml yıkama tamponu ile çalkalayarak 10 dakika yıkayın. Her yıkama aşamasından sonra yıkama tamponunu çıkartın. KONJUGAT 6. Şeritli her inkübasyon tepsisinin içerisine 700 µl yıkama tamponu ve 300 µl konjugat pipetleyin C/ F de çalkalayarak 30 dakika inkübe edin. Konjugatı çıkarın. Page 5 of 8

10 Product Ref Product Desc kez,1.5 ml yıkama tamponu ile çalkalayarak 10 dakika yıkayın.her yıkama aşamasından sonra yıkama tamponunu çıkartın SUBSTRAT 9. Şeritli her inkübasyon tepsisinin içerisine 700 µl dh 2 O ve 300 µl substrat pipetleyin C/ F de çalkalayarak 15 dakika inkübe edin, yoğun ışıktan koruyun. Substratı çıkartın. STOP Şeritli her inkübasyon tepsisine 2 ml dh 2 O pipetleyin. 10 dakika çalkalayarak inkübe edin. dh 2 O ı çıkartın. Şerit inkübasyon tepsisini çıkartın. Şeriti filtre kağıdı arasında kurutun. 13. Analiz sonuçlarını 24 saat içinde alın Page 6 of 8

11 ÜrünRef Ürün Açıklaması. 8 Kalitatif Yorumlama 8.1 Manuel Analiz Test sonuçları - Fonksiyonel kontrol görünür, - Cut-off kontrol görünür, - Cut-off kontrolün renk yoğunluğu fonksiyonel kontrolün renk yoğunluğundan daha zayıf ise, geçerli kabul edilir. Kurumuş şeritler,referans hattı ile aynı hizada ayarlanana hesap tablosuna yerlerştirilir. Şerit referans hattı ile referans şablonunu hizalayın.sonuçlar sadece, her şeritin cut off kontrolü referans alınarak yorumlanır. Her test kiti, test içinde tüm gruplarla kanıtlanabilir renk kopyası içerir. Analiz cut-off kontrol renk yoğunluğu ile bantların renk yoğunlukları karşılaştırılması yoluyla yürütülür. Yoğunluklarda önemli ölçüde fark yok ise test belirsizdir (şüpheli). Renk yoğunluğu daha fazla olan sonuçlar pozitif, daha zayıf olanlar ise negatiftir Sonuçlar hesaplama tablosu üzerine kayıt edilebilir. Kontrol değerlerinin uygun kriterlerde olmaması durumunda, test geçersizdir ve tekrarlanmalıdır. Sınır değerde olan numunelerin tekrar test edilmesi önerilir. Aşağıdaki teknik konular kontrol edilmelidir: -Reaktiflerin (hazırlanan) son kullanım tarihleri, -Muhafaza koşulları -Pipetlerin, ekipmanların inkübasyonun kondusyonları -Yıkama metodları. Test edilen numuneler, anormal sonuçlar veya herhangi bir sapma gösteriyorsa veya doğrulama kriterleri operatörün sorumluluğu dışındaki nedenler dışında uygun çıkmıyorsa, lütfen üretici firma veya test kitini sağlayıcı firma ile irtibata geçiniz. Tıbbi laboratuarlar ulusal düzenlemelere bağlı kalarak, kendi kontrollerini ve / veya iç havuz serumlarını kullanarak, iç kalite kontrollerini gerçekleştirmelidir. 8.2 Otomatik Analiz AESKUSCAN software, test şeritlerinin analizin ve sonuçların dökümalarını yorumsuz sağlar. 9 Teknik Veriler Örnek Malzemesi serum veya plazma Örnek Hacmi: 10 µl dilüte serum (1x numune tamponu ile 1:101 ) Toplam İnkübasyon Süresi: 155 dakika (20-32 C/ F de) Muhafaza: 2-8 C/35-46 (Sadece orijinal şişeleriyle) Test: 24 test Page 7 of 8

12 Ürün Açıklaması. 10 Performans Verileri 10.1 Bağıl Hassasiyet ve Özgünlük Pozitif anlaşma-kabulun (bağıl hassasiyet) belirlenmesi için IIF veya ELISA antikor-pozitif 50 hastanın serumu, AESKUBLOT Vaskülit Pro ile test edildi Negatif anlaşma- kabulün (bağıl özgünlük) belirlenmesi için, 170 kan bağışçısının serumu analiz edildi. Pozitif anlaşma (bağıl hassasiyet) Negatif anlaşma (bağıl özgünlük) PR3 96 % 100 % MPO 92 % 100 % GBM 100 % 100 % 11 Dizin Csernok E, Muller A, Gross WL (1999). Immunopathology of ANCA-associated vasculitis. Intern Med. 38: Dolman KM, Stegman CA, van de Wiel BA, Hack CE, von dem Borne AE, Kallenberg CG, Goldschmeding R (1993). Relevance of classic anti-neutrophil cytoplasmic autoantibody (canca)-mediated inhibition of proteinase 3-alpha 1-antitrypsin complexation to disease activity in Wegener s granuloma-tosis. Clin Exp Immunol.93: Falk, RJ Jennette JC (1988). Antineutrophil cytoplasmic autoantibodies with specificity for myeloperoxidase in patients with systemic vasculitis and idiopathic necrotizing and crescentic glomerulonephritis. N Engl J Med. 318: Goldschmeding R, van der Schoot CE, ten Bokkel Huinink D, et al. (1989). Wegener s granulomasis autoantibodies identify a novel di isopropylfluorphosphate-binding protein in the lysaomes of human neutrophils. J Clin Invest. 84: Kalluri R, Wilson CB, Weber M (1995). Identification of the a3 chain of type IV collagen as the common autoantigen in anti basement membrane disease and Goodpasture syndrome. J Am Soc Nephrol. 6: Turner AN, Rees AJ (1998). Anti-glomerular basement membrane disease. In: Rapidly progressive glomerulonephritis. Pusey CD, Rees AJ, eds., Oxford University Press, Oxford. Page 8 of 8

13 In Vitro Diognostic kullanım içim Pour diagnostic in vitro Ιn Vitro Diagnostikum Para uso Diagnóstico in vitro Katalog numarası Référence Catalogue Bestellnummer Número de catálogo Lot Lot Chargen Bezeichnung Lote CE Uygunluk Beyanı Déclaration CE de Conformité Europäische Konformität Déclaracão CE de Conformidade 24 test 24 tests 24 Bestimmungen For in vitro diagnostic use Para uso diagnóstico in vitro In Vitro ιαγνωστικό µέσο Cataloge number Numéro de catálogo Αριθµός παραγγελίας Lot Lote Χαρακτηρισµός παρτίδας ECDeclaration of Conformity Declaración CE de Conformidad Ευρωπαϊκή συµφωνία 24 tests 24 pruebas 24 προσδιορισµοί 24 Testes Kullanım için talimatlara bakın Voir les instructions d utilisation Gebrauchsanweisung beachten Ver as instrucões de uso Önce kullanım Utilise avant le Verwendbar bis Utilizar antes de 2-8 C (35-46 F) de saklayın Conserver à 2-8 C Lagerung bei 2-8 C Conservar entre 2-8 C İmalatçı Fabriqué par Hergestellt von Fabricado por nitrocellulose kaolanmış şerit Strip de nitrocellulose couché Nitrozellulosemembran-Streifen mit aufgebrachten Antigenen Tira de nitrocelulose revestido yıkama tamponu Tampon de Lavage Waschpuffer Solucão de lavagem 10 ml ile hazırlayın reconstituer avec 10 ml rekonstituiren mit 10 ml reconstituir com 10 ml Numune tamponu Tampon Echantillons Probenpuffer Diluente de amostra konjugat Conjugé Konjugat Conjugado Substrat tamponu Substrat Substratpuffer Substrato See instructions for use Ver las instrucciones de uso Λάβετε υπόψη τις οδηγίες χρήσης Use by Utilizar antes de Χρήση µέχρι Store at2-8 C (35-46 F) Conservar a 2-8 C Φυλάσσεται στους 2-8 C Manufactured by Fabricado por Κατασκευάζεται από Coated nitrocellulose strip Tira de nitrocelulosa recubierta Επίστρωση λωρίδα νιτροκυτταρίνης Wash buffer Solución de lavado Ρυθµιστικό διάλυµα πλύσης Reconstitutewith 10 ml reconstituir con 10 ml Ανασύσταση µε 10 ml Sample buffer Tampón Muestras Ρυθµιστικό διάλυµα δειγµάτων Conjugate Conjugado Σύζευγµα Substratebuffer Tampón sustrato Ρυθµιστικό διάλυµα υποστρώµατος