AESKUBLOT Gastro Pro Ref 4005

Transkript

1 AESKUBLOT Ref 4005

2

3 Kullanım Klavuzu İçerik 1 Kullanım Amacı Klinik Uygulamalar ve Test Prensibi Kit İçeriği Saklama Koşulları ve Raf Ömrü Kullanım Önlemleri ve Genel Talimatlar Numune Toplama, İşleme ve Saklama Tahlil Prosedürü Kalitatif Yorumlama Teknik Veriler Performans Verileri Literatür... 8 AESKU.DIAGNOSTICS GmbH & Co. KG Mikroforum Ring Wendelsheim, Germany Tel: Fax: Info@aesku.com

4 1 Kullanım Amacı AESKUBLOT insan serum veya plazmasında gliadin karşı IgA ve IgG karşı antikorları, ttg, mannnan (ASCA),parietal hücre antijeni, intrinsic faktörün kalitatif ve kantitatif tepiti için membran bazlı enzim immunoanaliz kitidir. Antijenler, nitroselüloz zarı üzerinde tam olarak tanımlanmış pozisyonlarda paralel çizgiler olarak yer almaktadır. Bu tahlil Çölyak hastalığı, pernicious anaemia ve inflammatory bowl hastalığı tanısı için bir araçtır. 2 Klinik Uygulamalar ve Test Prensibi Gastrointestinal sistemin her bir bölümü, otoimmün gastrointestinal hastalıklardan etkilenebilir. Hastalıklar, çoğu kez semptomların ilk başlangıcından yıllar sonra teşhis edilir ve birçok durumda ağır bir seyri vardır. Çölyak hastalarında genellikle IgA eksikliği vardır. Bu test yalancı negatif sonuçları önlemek amacıyla, IgA ve IgG antikorlarını tespit eder. Karşı antikorlar: Gliadin, Çölyak hastalığı için tipiktir. IgA tipi, aslen çölyak hastalığı için spesifiktir. IgG tip antikorları, Crohn's hastalıklı hastalarda %40-50, ülseratif kolitli hastalarda %10-20 oranında görülürler. ttg (doku transglutaminaz), Çölyak hastalığı ve dermatitis herpetiformis (Duhringsche hastalığı)nın karakterize edilmesi için önemlidir. Endomisyal antikorlar için tek hedef antijen değilse, ttg esas ve Çölyak hastalığı için güvenilir bir belirteçtir (hassasiyet %95-100, özgünlük %90-97 ). Mannan (ASCA), Crohn's hastalığı için %97 spesifikliğe sahiptir, Crohn's hastalığı ve ülseratif kolit hastalıklarının ayırıcı tanısı için gereklidir. Crohn hastalığı olan hastaların % 75'ine kadar görülürler, buna karşılık ülseratif kolitli hastalarda antikor seviyesi artmıştır. paryetal hücreler, pernicious anemia olan hastaların % oranında immunofluorescence ile tespit edilebilir, fakat, sağlıklı bireylerin % 2-5 inde de bulunabilir. Ayrıca otoimmün endokrinal hastalıklar ve kronik atrofik gastritis tip A hastalıklı hastalarda da görülürler. intrinsic faktör, pernicious anaemia için, sağlıklı kan bağışçı popülasyonunda % 100 özgüllük ile % hassasiyet gösterir. Bu antikorlar otoimmün tiroid hastalıkları ve kronik atrofik gastrit tipi A olan hastalarda da tespit edilir. Test Prensibi Antijenler nitroselüloz zar üzerine sıralar olarak uygulanmıştır. Membran spesifik reaksiyonları önlemek için bloke olur. Tam olarak tanımlanmış pozisyonlardaki spesifik antijenli membran-stripler, 1:101 oranındaki serum / plazma örneklerinde inkübe edilir. Eğer hasta antikorları, örnek içerisinde mevcut İse antijene bağlanır. Bağlanmamış kısım, takip eden aşamadaki yıkama işlemi ile uzaklaştırılır. Sonra, horseradish peroksidazına (konjugat) konjuge edilmiş anti-human immunoglobinleri inkübe edilir ve mikroplaka içindeki örneğin antijen-antikor kompleksi ile reaksiyona girer. Bağlanmamış konjugat, takip eden aşamadaki yıkama işlemi ile uzaklaştırılır.. TBM-substrate eklenmesiyle enzimatik reaksiyon oluşur ve mavi çökelti oluşur. Reaksiyon distile sui le sonlandırılır. Page 1 of 8

5 3 Kit İçeriği HAZIRLANMASI GEREKEN MALZEMELER Madde Miktar Kapak rengi Solüsyon rengi Açıklama/İçerik Blocking Reagent (Bloklama reaktifi) Her biri 3x10 ml konsantre beyaz N/A Sample buffer ile hazırlanmak üzere yağsız kuru süt tozu 3x10 ml Wash Buffer(yıkama tamponu) (20x) 1 x 50 ml beyaz renksiz 1 L de hazırlanmak üzere 20x konsantre Tris buffer, ph 6.9 ± 0.2 KULLANIMA HAZIR MALZEMELER Madde Miktar Kapak rengi Conjugate, IgG 1 x 10 ml mavi Conjugate, IgA 1 x 10 ml kırmızı TMB Substrate 1 x 10 ml siyah Solüsyon rengi renksiz renksiz renksiz Açıklama/İçerik Horseradish peroxidase a konjuge Anti-human immunoglobulin G (IgG) Horseradish peroxidase a konjuge Anti-human immunoglobulin A (IgA) Stabilize TMB/H 2 O 2 Membrane strip 24 strip Renk kodu: bsiyah N/A Antijenlerle kaplı, kullanım amacı kısmına bakın cımbız, referans şablonu, puanlama tablosu, yapışkan strip ( çift taraf,siyah) 1 er adet N/A N/A N/A İnkübasyon tepsisi 3 adet N/A N/A N/A sample buffer için etiketler 3 adet N/A N/A N/A KİT İLE SAĞLANMAYAN, GEREKLİ MALZEMELER Çalkalama platformu, silindir 1000 ml, pipett veya silindir 10 ml için, hassas pipetler (10, 1000 µl), kurutma veya filter kağıdı. Testlerimiz Amerika Birleşik Devletleri Farmakoloji (USP 26- NF 21) ve Avrupa Farmakoloji (Eur.Ph 4.ed.) tanımına göre, saflaştırılmış su ile kullanılmak üzere tasarlanmıştır. 4 Saklama Koşulları ve Raf Ömrü Bütün reaktifleri ve membrane stripleri orijinal kutularında, 2-8 C/35-46 F de muhafaza edin. Hazıtlanmış veye sulandırılmış solüsyonlar, hazırlandıktan sonra 2-8 C/35-46 F de en az 6 hafta stabildir. Reaktifler ve stripler, her bileşenin belirtilen son kullanma tarihi içinde kullanılmalıdır. Bileşenleri son kullanma tarihlerinden sonra kullanmayın. TMB çözeltisini yoğun ışığa maruz bırakmaktan kaçının. Page 2 of 8

6 5 Kullanım Önlemleri 5.1 Sağlık Tehlike Verileri Bu ürün sadece IN VITRO DIAGNOSTIC kullanım içindir. Bu nedenle, bu kitin performansı için sadece eğitimli personel ve özellikle in vitro diagnostik yöntemler tavsiye edilir. Bu ürün, amaçlanan kullanım koşullarında, özellikle toksik veya tehlikeli olarak kabul edilir olmasa da maksimum güvenlik için aşağıdakilere bakınız: Öneriler ve Önlemler Bu kit potansiyel tehlikeli bileşenler içerir. Kit reaktifleri her ne kadar göz ve cilt için tahriş edici olarak sınıflandırılmamış olsa da, reaktiflerin gözle temasından kaçınılması ve atılabilir eldiven giyilmesi önerilir Substrat koruyucu olarak kathon (1% v/v) içerir. Yutulmamalı ve deri veya mukoza zarı ile temasa girmesine izin verilmemelidir. Kit çalışırken sigara içmeyin, herhangi bir şey yemeyin veya içmeyin. Ağızınızla pipetleme yapmayın. Hasta numuneleri bulaşıcı hastalıkları bulaştırma riskli olarak ele alınmalı ve ulusal koşullara uygun olarak işlenmelidir. 5.2 Genel Kullanım Talimatları Mevcut çeşitli AESKUBLOT-testlerini ayırt etmek için renk kodlaması, striplerin referans çizgisinin üstünde uygulanmıştır: Renk Kodu sarı turuncu mavi kahverengi mor siyah yeşil AESKUBLOT ANA-12 Pro ANA-17 Pro Myositis Pro Liver Pro Vasculitis Pro Borrelia-G and Borrelia-M Etiketleme dahil ürün bilgilerinin yanlış olması halinde, lütfen üretici firmayla veya kit sağlayıcınızla irtibata geçiniz. Blocking Reagent ve wash buffer, lotlar ve test kitleri arasında değiştirilebilir.diğer bütün bileşenler her test kiti için spesifiktir ve birbirleri arasında değiştirlemezler. Otoimmünite ve Borrelia tanı testleri arasında maddeleri değiştirmeyin! Konjugat kullanımında, polistiren kılcalları(kapiller) kullanmayın. Testin optimal performansı için bütün bileşenleri kullanmadan önce oda sıcaklığına getirilmesi(20-32 C/ F), iyice çalkalanması ve inkubasyon şemasının takip edilmesi önerilir. Bileşenleri 37 C/98.6 F den yüksek sıcaklığa maruz bırakmayın. Page 3 of 8

7 Substrate solüsyonunu daima kaliteli yeni pipet ıçlarıyla pipetleyin, reaktifi ışıktan koruyun. Konjugatı, daha önceden başka reaktifler ile kullanımış pipet uçlarıyla pipetlemeyin. Bant renk yoğunluğunun, diğer referans metodolojileri ile elde edilen antikor titreleri ile ilişkili olması gerekmez. Normal bilinen kan vericilerden alınan numuneler otoantikorlar içerebilir. Hasta örneği yüksek düzeyde bağışıklık kompleksleri veya diğer immünoglobulin agregasyonları içeriyorsa, spesifik olmayan bağlanmalardan ötürü oluşan yalnış pozitif sonuçlar gözardı edilemez. Kesin klinik tanı, sadece yapılan test sonuçlarına dayandırlmamalı, tüm klinik ve laboratuvar bulguları bir hekim tarafından değerlendirilmiş olmalıdır. Tanının doğrulannması için farklı teşhis metodları kullanılmalıdır. 6 Numune Toplama, İşleme ve Saklama Tercihen yeni toplanmış( alınmış) serum örnekleri kullanın. Kan almada Ulusal yönergeler takip edilmelidir. İkterik, lipemik, hemolize veya bakteri bulaşmış numuneleri kullanmayın. Serumdaki partiküller düşük hızlı santrifüjleme ile (<1000 x g) giderilmiş olmalıdır. Kan örnekleri temiz, kuru ve boş tüpler ile toplanmış olmalıdır Santrifüj işleminden sonra serum numuneleri ilk 8 saat içerisinde kullanılmalıdır. Alternatif olarak, numuneler ayrı ayrı ve sıkıca kapatılarak, 48 saate kadar kullanım için 2-8 C/35-46 Fde muhafaza edilmeli, veya daha uzun süreli kullanımlar için -20 C/-4 F de dondurulmalıdır. Numuneleri tekrar tekrar çözüp dondurmaktan kaçının. Isıyla inaltive olmuş numuneleri kullanmayın. 7 Tahlil Prosedürü 7.1 Çalışma Öncesi Hazırlık Konsantrenin içinde tuz kristallerinin oluşup oluşmadığına bakın. Eğer oluşmuşsa, kristalleri eritmek için konsantreyi biraz ısıtmak (oda sıcaklığı) yeterli olacaktır. Konsantre wasf buffer I (yıkama tamponu) 1:20 oranında distile su ile dilüe edin (örn: 950 ml + 50 ml). Sample buffer (numune tamponu) hazırlamak için: 1 şişe Blocking Reagent içine 10 ml wash buffer ilave edin ve iyice karıştırın. 7.2 Test Adımları Önemli Notlar: Tam olarak bu protokolü izleyin. Protokolde belirtilen iki bileşenin basamak 2,6,9 da tepsiye ilave edilip edilmediğinden emin olun. Stribin inkübasyon adımları sırasında kurumasına izin vermeyin. Stribe parmaklarınızla dokunmayın, cımbız kullanın. Strip inkübasyonundan sonra üzerine taşmasından kaçınarak, dilüe numunleri tamamen kaldırın. İnkübasyon aşamasında, stribi sürekli sallayın. Page 4 of 8

8 İnkübasyon tepsisinin bir yanına wash buffer ile birlikte sample buffer, konjugat ve substrat verin. Strip üzerine akmasına izin vermeyin. Adım Açıklama 1. Teste başlamadan önce 7.1 adımındaki hazırlıkların yapılmış olduğundan emin olun 2. Stribi inkübasyon tepsisine doğru yerleştirin(referans hattı ve renk kodu yukarıda olmalıdır). İnkubasyon tepsisine700 µl wash buffer ve 300 µl sample buffer koyun. Stribi solüsyon ile ıslatın ve çalkalayarak 5 dakika inkübe edin. KONTROLLER & NUMUNELER 3. Sample buffer lı belirlenmiş inkübasyon tepsisine 10 µl serum/plazma numunesini pipetleyin C/ FDe çalkalayarak 30 dakika inkübe edin. Sonra numuneyi tamamen çıkartın kez,1.5 ml wash buffer ile çalkalayarak 5 dakika yıkayın. Her yıkama aşamasından sonra yıkama tamponunu çıkartın. KONJUGAT 6. Stripli her inkübasyon tepsisinin içerisine 700 µl wash buffer ve 300 µl konjugat pipetleyin. Page 5 of 8

9 C/ F de çalkalayarak 30 dakika inkübe edin. Konjugatı çıkarın kez,1.5 ml wash buffer ile çalkalayarak 5 dakika yıkayın.her yıkama aşamasından sonta wash buffer ı çıkartın. SUBSTRAT 9. Stripli her inkübasyon tepsisinin içerisine 700 µl dh 2 O ve 300 µl substrat pipetleyin C/ F de çalkalayarak 15 dakika inkübe edin, yoğun ışıktan koruyun. Substratı çıkartın. STOP Stripli her inkübasyon tepsisine 2 ml dh 2 O pipetleyin. 1 dakika çalkalayarak inkübe edin. dh 2 O ı çıkartın. Bu basamağı bir kez daha tekrarlayın. Strip inkübasyon tepsisini çıkartın. Stribi filtre kağıdı arasında kurutun. 13. Analiz sonuçlarını 24 saat içinde alın. Page 6 of 8

10 8 Kalitatif Yorumlama 8.1 Manual Analiz Test sonuçları -Fonksiyonel kontrol görünür, -Cut-off kontrol görünür, -Cut-off kontrolün renk yoğunluğu fonksiyonel kontrolün renk yoğunluğundan daha zayıf ise, geçerli kabul edilir. Kurumuş strip,referans hattı ile aynı hizada ayarlanarak hesap tablosuna yerlerştirilir. Strip referans hattı ile referans şablonunu hizalayın.sonuçlar sadece, her stribin cutoff kontrolü referans alınarak yorumlanır. Her test kiti, test içinde tüm bantlarla kanıtlanabilir renk kopyası içerir Analiz cut-off kontrol renk yoğunluğu ile bantların renk yoğunlukları karşılaştırılması yoluyla yürütülür. Yoğunluklarda önemli ölçüde fark yok ise test belirsizdir (şüpheli). Renk yoğunluğu daha fazla olan sonuçlar pozitif, daha zayıf olanlar ise negatiftir Sonuçlar hesaplama tablosu üzerine kayıt edilebilir. Kontrol değerlerinin uygun kriterlerde olmaması durumunda, test geçersizdir ve tekrarlanmalıdır. Sınır değerde olan numunelerin tekrar test edilmesi önerilir. Aşağıdaki teknik konular kontrol edilmelidir: -Reaktiflerin (hazırlanan) son kullanım tarihleri, -Muhafaza koşulları -Pipetlerin, ekipmanların inkübasyonun kondusyonları -Yıkama metodları. Test edilen numuneler, anormal sonuçlar veya herhangi bir sapma gösteriyorsa veya doğrulama kriterleri operatörün sorumluluğu dışındaki nedenler dışında uygun çıkmıyorsa, lütfen üretici firma veya test kitini sağlayıcı firma ile irtibata geçiniz. Tıbbi laboratuarlar ulusal düzenlemelere bağlı kalarak, kendi kontrollerini ve / veya iç havuz serumlarını kullanarak, iç kalite kontrollerini gerçekleştirmelidir. 9 Teknik Veriler Örnek Malzemesi Örnek Hacmi: Toplam İnkübasyon Süresi: Muhafaza: Test: serum veya plazma 10 µl numune C/ F da 112 dakkika 2-8 C/35-46 F de; sadece orijinal şişelerinde 24 tests Page 7 of 8

11 10 Performans Verileri 10.1 Bağıl Hassasiyet ve Özgünlük Pozitif uyuşumun (bağıl hassasiyet) belirlenmesi için IIF veya ELISA antikoru pozitif olan 30 hastanın serumu AESKUBLOT ile test edildi. Negatif uyuşumun (bağıl özgünlük) belirlenmesi için, 100 kan bağışçısının serumu analiz edildi. Pozitif uyuşum (bağıl hassasiyet) Negatif uyuşum (bağıl özgünlük) gliadin 100 % 100 % ttg 100 % 100 % mannan (ASCA) 100 % 100 % parietal cell antigen 100 % 100 % intrinsic factor 100 % 100 % 11 Literatür Carmel R (1992). Reassessment of the relative prevalences of antibodies to gastric parietal cell and to intrinsic factor in patients with pernicious anaemia: influence of patient age and race. Clin Exp Immunol. 89(1): Catassi C, Rätsch I-M, Fabiani E, Rossini M, Coppa GV, Giorgi PL, Bordicchia F, Candela F (1994). Celiac disease in the year 2000: exploring the iceberg. The Lancet. 343: Dietrich W, Ehnis T, Bauer M, Donner P, Volta U, Riecken EO, Schuppan D (1997). Identification of tissue transglutaminase as the autoantigen of celiac disease. Nat Med. 3: Dietrich W, Laag E, Schöpper H, Volta U, Ferguson A, Gillett H, Riecken EO, Schuppan D. (1998). Autoantibodies to tissue transglutaminase as predictors of celiac disease. Gastroenterology. 115: Mäki M, Collin P (1997). Coeliac disease. Lancet. 349: Oh R, Brown DL (2003). Vitamin B12 deficiency. Am Fam Physician. 67: Shan L, Molberg O, Parrot I, Hausch F, Filiz F, Gray GM, Sollid LM, Khosla C (2002). Structural basis for gluten intolerance in Celiac Sprue. Science 297: Toh Ban-Hock, Alderuccio, F. (2004). Pernicious anaemia. Autoimmunity. 37: Toh Ban-Hock, van Driel Ian R. (1997). Pernicious anaemia. NEJM. 337: Page 8 of 8

12 In Vitro Diagnostik kullanım için Pour diagnostic in vitro Ιn Vitro Diagnostikum Para uso Diagnóstico in vitro katalog numarası Référence Catalogue Bestellnummer Número de catálogo lot Lot Chargen Bezeichnung Lote CE uygunluk Beyanı Déclaration CE de Conformité Europäische Konformität Déclaracão CE de Conformidade 24 test 24 tests 24 Bestimmungen 24 Testes Kullanım için talimatlara bakın Voir les instructions d utilisation Gebrauchsanweisung beachten Ver as instrucões de uso Da utilizzarsi entro Utilise avant le Verwendbar bis Utilizar antes de 2-8 C de muhafaza Conserver à 2-8 C Lagerung bei 2-8 C Conservar entre 2-8 C Üretici Fabriqué par Hergestellt von Fabricado por Nitrroselluloz kaplı strip Strip de nitrocellulose couché Nitrozellulosemembran-Streifen mit aufgebrachten Antigenen Tira de nitrocelulose revestido Yıkama tamponu Tampon de Lavage Waschpuffer Solucão de lavagem Bloklama Reaktifi réactif de blocage Blockier-Reagenz Bloqueio de reagente 10 ml ile hazırlayın reconstituer avec 10 ml rekonstituiren mit 10 ml reconstituir com 10 ml Numune tamponu Tampon Echantillons Probenpuffer Diluente de amostra Konjugat Conjugé Konjugat Conjugado Substrat tamponu Substrat Substratpuffer Substrato For in vitro diagnostic use Para uso diagnóstico in vitro In Vitro ιαγνωστικό μέσο Cataloge number Numéro de catálogo Αριθμός παραγγελίας Lot Lote Χαρακτηρισμός παρτίδας EC Declaration of Conformity Declaración CE de Conformidad Ευρωπαϊκή συμφωνία 24 tests 24 pruebas 24 προσδιορισμοί See instructions for use Ver las instrucciones de uso Λάβετε υπόψη τις οδηγίες χρήσης Use by Utilizar antes de Χρήση μέχρι Store at 2-8 C (35-46 F) Conservar a 2-8 C Φυλάσσεται στους 2-8 C Manufactured by Fabricado por Κατασκευάζεται από Coated nitrocellulose strip Tira de nitrocelulosa recubierta Επίστρωση λωρίδα νιτροκυτταρίνης Wash buffer Solución de lavado Ρυθμιστικό διάλυμα πλύσης Blocking Reagent Reactivo bloqueante Αντιδραστήριο αποκλεισμού Reconstitute with 10 ml reconstituir con 10 ml Ανασύσταση με 10 ml Sample buffer Tampón Muestras Ρυθμιστικό διάλυμα δειγμάτων Conjugate Conjugado Σύζευγμα Substrate buffer Tampón sustrato Ρυθμιστικό διάλυμα υποστρώματος

13