SYPHILIS IgM EIA TEST K TLER

Transkript

1 SYPHILIS IgM EIA TEST K TLER Ürün Kodu: Bio-Rad tarafından da ıtımı yapılmaktadır Bio-Rad kodu: boulevard Raymond Poincaré MARNES LA COQUETTE FRANSA Tel.: Faks: Lab21 Healthcare Ltd. Lanwades Business Park, Kentford CB8 7PN NG LTERE Tel.: + 44 (0) Faks: + 44 (0) info@lab21.com internet:

2 TR Lab21 Healthcare Ltd Sifilis IgM Antikorlarını mmünoenzimatik Yöntemle Algılama Dozajı 96 test Ürün Kodu Kullanım Alanı Bu kit insan serumu veya plazmasında Treponema pallidum enfeksiyonuna özel IgM antikorlarının algılanmasına yöneliktir; sifilis enfeksiyonlarına ayırıcı te his koymakta kullanılır. YALNIZCA in vitro TE H S Ç N KULLANILIR Açıklama Treponema pallidum spiroketası vasıtasıyla geli en enfeksiyonlarda organizmanın verdi i primer yanıt IgM sınıfı antikorlar üretmektir. Ardından IgG sınıfı antikorlar belirecektir; bu antikorlar hastalı ın tüm safhalarında algılanabilir. IgM sınıfı özel antikorlar sonunda azalarak, ortadan kaybolur: Dolayısıyla bu antikorların bulunması enfeksiyonun kısa bir süre önce geli ti ini göstermesi açısından faydalı bir göstergedir. Lab21 Healthcare Syphilis Total Antibody EIA (Üret No: 60093/60094) gibi tarama testlerine paralel olarak kullanılan Syphilis IgM EIA için mmünoenzimatik Test sifilis vakalarına te his koymak ve bu vakaları saptamak için kullanılabilir. Sifilis anneden fötüse geçebilir. IgM sınıfı antikorlar plasentaya nüfuz edemez: T. pallidum'a özel IgM antikorlarının neonatal kan numunelerinde algılanması konjenital sifilis te hisine yardımcı olabilir. Prensip Mikrotiter tüpü hazneleri IgM sınıfı anti-human antikorlarından olu an bir kaplama ile birlikte teslim edilir. Serum veya plazmada bulunan Treponema pallidum'a özel IgM sınıfı antikorlar numune üstü kaplı haznelerde inkübe edildi i anda, ba lanacaktır. Serbest kalan donanım yıkandıktan sonra, peroksidaz ile konjugat olu turan treponema antijenleri ilave edilir; bu durumda bunlar kendilerine özgü tüm ba lı insan antikorlarına ba lanır. Ba ka bir yıkama a amasından sonra, haznelere substrat/kromojen karı ımı doldurulur ve kromojenin rengindeki de i im enzimatik markörün varlı ına i aret eder. Her haznenin optik absorbansı uygun dalga boylarında ölçülür; ardından bu absorbans anti-treponema pallidum IgM sınıfı antikorların bulunup bulunmadı ını tespit etmek amacıyla kontrol numuneleri ile kar ıla tırılır. Kitin çeri i R1 R2 R3 R4 R5 Plaka (8 haznelik 12 sıra halinde yerle tirilmi 96 hazne), Numune Sulandırma Tamponu Konjugat (11 x konsantrasyonlu) Konjugat sulandırma tamponu Yıkama (20 x konsantrasyonlu) Anti-human IgM sınıfı antikorlar ile kaplı polistiren Protein ve sürfaktanlar içeren tampon Peroksidaz ile konjugat olu turan Treponema pallidum antijenleri Stabilizör ve sürfaktanlar içeren tampon Bir sürfaktan içeren salin solüsyon Kırmızı Mavi Mavi Renksiz 1 (96 test) 20 ml 1,2 ml 12 ml 125 ml R6 Pozitif kontrol nsan serumu Turuncu 0,5 ml R7 Negatif kontrol nsan serumu Sarı 0,5 ml R8 Substrat Üre peroksit ve tetrametilbenzidin Pembe 12 ml R9 Durdurma solüsyonu 0,5M H2SO4 Renksiz 12 ml Kullanılmayan haznelerin yerle tirilece i po etler Kullanım ekli 2

3 Uyarılar ve Önlemler Yalnızca in vitro te his için kullanılır. Bu test düzgün bir e itim almı klinik laboratuar personeli tarafından kullanılmak üzere tasarlanmı tır. Kullanılan tüm insan kaynaklı malzemeler teste tabi tutulmu ve HIV, Hepatit B ve Hepatit C enfeksiyonu açısından negatif sonuç vermi tir. Bununla birlikte söz konusu insan kaynaklı malzemeler potansiyel olarak bula ıcı addedilmelidir; söz konusu malzemeler ayrıca bu tür malzemeler ile ilgili yürürlükteki standartlara uygun ekilde i lenmeli ve atılmalıdır. Kan numuneleri patojen organizmalar içerebilir. Mutlaka eldiven takın; atılacak malzemeleri uygun yöntemlerle sterilize edin. Cihazların bakım ve kalibrasyonu imalatçının talimatlarına uyulmak suretiyle do ru ekilde yapılmalıdır. Parti numaraları farklı olan ba ka kitlere ait reaktifleri birlikte kullanmayın veya birbirinin yerine koymayın. i e kapaklarının ilgili i elere takıldı ından emin olun. Bu kiti son kullanma tarihi geçtikten sonra kullanmayın. Depolama ve Dayanma Teslim edilen tüm reaktifler 2 ila 8 o C sıcaklıkta orijinal konteynerlerinde saklandı ı takdirde (aralarında hiçbir bula ma olmaması kaydıyla) son kullanma tarihine kadar kullanılabilir. Sulandırılmı yıkama tamponu 2 ila 8 o C sıcaklıkta 4 hafta dayanır. Yalnızca teste tabi tutulacak sıra sayısı için yeterli miktarda, sulandırılmı konjugat olu turun; sulandırılmı bu konjugat 12 saat dayanır. Orijinal ambalajlarından çıkarılan ve teslim edilen po etlerde 2 ila 8 o C sıcaklıkta saklanan üstü örtülü plakalar, açıldıktan sonra 4 hafta boyunca kullanılabilir. Gerekli Cihazlar Kalibrasyonu ve bakımı do ru ekilde yapılmı ve 10, 50 ve 100 mikrolitre (numune ve reaktifler) ve yakla ık 300 mikrolitrelik (yıkama sıvıları) hacimler da ıtabilen pipetleme tertibatları. 450 nm, 550 nm ve 620 nm filtrelerle donatılmı plaka veya bant okuyucuları. 37 o C inkübatör. Sifilis için yapılan Lab21 Healthcare'in IgM EIA dozajı sıvıların kullanılması ve sonuçların yorumlanması için kolayca otomatik hale getirilebilir. Birden fazla sistem bu amaçla kullanılabilir: Otomasyon konusunu danı mak için kit ve otomasyon sistemleri imalatçılarına ba vurun. Cihaz a a ıdaki tolerans seviyelerine sahip olmalıdır: Da ıtılan hacim +/- %10 nkübasyon sıcaklı ı +/- 2 o C nkübasyon süresi +/- 2 dakika Numuneler Serum veya plazma numuneleri (EDTA, sodyum sitrat veya heparin ile alınan) kullanılabilir. Numuneler testten önce 1 hafta boyunca 2 ila 8 o C sıcaklıkta saklanabilir. Daha uzun saklama süreleri gerekiyor ise, numuneler maksimum 20 o C sıcaklıkta dondurulmalı ve çözdürme i leminden sonra iyi karı tırılmalıdır. Hemolizli, ikterik veya lipemik numunelerin dozajı analiz sırasında yapılabilir, ancak numune gösterge sistemi güvenilir olarak kabul edilemez. Bakteri bula an veya gözle görülür madde partiküleri içeren numuneler teste tabi TUTULMAMALIDIR. Viral inaktivasyon gerçekle tirmek amacıyla 56 o C sıcaklı a kadar ısıtılan numuneler bu dozajda kullanılabilir. Dozaj Protokolü (Manüel) Her türlü kullanımdan önce tüm reaktifleri ve numuneleri 18 ila 25 o C sıcaklı a kadar ısıtın. Kullanımdan hemen sonra, tavsiye edilen saklama ko ullarında saklayın. Kullanımdan önce, 1 hacim yıkama tamponunu 20 hacim damıtık veya demineralize su ile karı tırarak yıkama tamponunu sulandırın. Teste tabi tutulacak numune sayısı için gerekli sayıda hazne sırası (R1) ve ayrıca kontroller için de 5 hazne alın (üç örnekli negatif kontrol ve iki örnekli negatif kontrol). Kullanılmayan plakaları hava geçirmez plastik po etin içinde saklayın ve saklama ko ullarını 2 ile 8 o C arasında bulunan bir sıcaklı a getirin. Kontroller Teste tabi tutulan tüm partilerde, negatif kontroller üç kez ve pozitif kontroller de iki kez teste tabi tutulmalıdır. Numunelerin lave Edilmesi Bir haznedeki R2 numune sulandırma tamponundan 100 L pipetleyin ardından her hazneye 10 L numune veya kontrol ilave edin. Haznelerin içeri inin numune ilave edildikten sonra do ru ekilde karı tırıldı ından emin olun. 3

4 Haznenin içinde, numune sulandırma tamponu renk de i tirir ve rengi numunenin ilave edildi i anda, kırmızı/pembeden açık bir renge/sarıya döner. Bu renk de i imi, numune sulandırma tamponu ilave edildikten sonra plakanın ölçümü 550 nm'de yapılarak, ardından numunenin ilave edilmesinden sonra 450 nm'de yapılarak ölçülebilir. Tampon üzerinde yapılan örnek okumaya kıyasla kaydedilen optik yo unluk artı ı, numunenin ilave edildi i haznelerde gerçekle ir. Renk de i imi, ilave edilen numune hacminin miktarı ile ba lantılı de ildir. malat esnasında sulandırılan kalite kontrol serumları bu renk de i ikli ini gösteremezler. 37 o C sıcaklıkta 30 dakika inkübe edin; buharla maya engel olmak için üstünü örtün. Yıkama Yeterli miktarda R5 yıkama solüsyonu sulandırın (20 hacim damıtık veya demineralize su, artı boruları doldurmak, pompaları alı tırmak için gerekli hacim içinde 1 hacim) Her döngüde tam bir dolum ve bo altma sa lamak için, haznelerin içeri ini çekin ve çalı ma konsantrasyonundaki yıkama tamponu ile 5 kez yıkayın. Gerekirse, artık sıvıları çıkarmak için, emici bir kâ ıt üzerinde ters çevrilmi plakaya sert bir darbe indirerek i lemi sonlandırın. Konjugatın Hazırlanması Konjugat, peroksidaz R3 ile birle tirilmi 1 kısım Treponema pallidum antijeninin 10 kısım R4 konjugatı sulandırma tamponuna ilave edilmesi ile hazırlanır. Sadece teste tabi tutulacak numune ve kontrol sayısına yetecek kadar konjugat hazırlayın; her hazneye 50 l sulandırılmı konjugat ilave edin. 12 saat sonra her türlü sulandırılmı konjugat artı ını atın. Örne in, 2 sıra için, peroksidaz R3 ile birle tirilmi 100 l Treponema pallidum antijenini, 1 ml R4 konjugatı sulandırma tamponuna ilave edin. Sadece dozajlar için gerekli miktarı sulandırın. Konjugatın lave Edilmesi Her hazneye pipetle 50 L sulandırılmı konjugat ilave edin. Konjugat ilavesi 550 nm'de bir ölçüm yapılarak do rulanır; konjugat ilave edilmi bir haznenin absorbans de eri 0,080'in üzerinde olmalıdır. 37 o C sıcaklıkta 60 dakika inkübe edin; buharla maya engel olmak için üstünü örtün. Yıkama Her döngüde tam bir dolum ve bo altma sa lamak için, haznelerin içeri ini çekin ve çalı ma konsantrasyonundaki yıkama tamponu ile 5 kez yıkayın. Gerekirse, artık sıvıları çıkarmak için, emici bir kâ ıt üzerinde ters çevrilmi plakaya sert bir darbe indirerek i lemi sonlandırın. Substratın lave Edilmesi Tüm haznelere substrat/kromojen R8 karı ımından 50 L ilave edin. Substrat ilavesi 550 nm'de bir ölçüm yapılarak do rulanır; substrat ilave edilmi bir haznenin absorbans de eri 0,080'in üzerinde olmalıdır. 30 dakika boyunca 18 ila 25 o C sıcaklıkta, ı ık almayan bir yerde inkübe edin. Renk Developmanının Durdurulması Tüm haznelere pipetle 50 L R9 durdurma solüsyonu ilave edin ve karı tırın (renk maviden sarıya döner). 10 dakika içinde, tüm haznelerin absorbansını 450 nm dalga boyunda ölçün ve kaydedin; haznelerde bulunabilecek her türlü optik kusur etkisinin giderilebilmesi için, bu ölçüm ve kayıt tercihen nm aralı ında yapılan bir referans okuma i lemi ile gerçekle tirilmelidir. Sonuçların Yorumlanması Kontrollerin Geçerlili i Negatif kontrol absorbanslarının ortalaması 0,100'ün altında olmalı ve her negatif kontrolün antikor indeksi 0,7'nin altında olmalıdır. Pozitif kontrol absorbanslarının ortalaması 1,200'ün üzerinde olmalı ve her pozitif kontrolün antikor indeksi 8,0'in üzerinde olmalıdır. Kontrollerden birinin ölçülen de erleri bu de er aralıklarının dı ında ise, dozajı tekrarlayın. 4

5 Sonuçların Hesaplanması E ik de er (VS) negatif kontrollerin ortalaması (NC) + 0,100 absorbans birimi olarak hesaplanır. Yani (NC1 + NC2 + NC3) + 0,100 3 Antikor indeksi (AI) kontrol veya test numunesinin absorbansı e ik de er (VS) ile bölünerek belirlenir. AI = Kontrol veya test numunesinin absorbansı VS AI de erleri 0,9'un altında olan numuneler sifilis IGM antikorları açısından NEGAT Ftir. AI de erleri 1,1 de erine e it veya bu de erin üzerinde olan numuneler sifilis IgM antikorları açısından POZ T Ftir. AI de erleri 0,9 ve 1,1 arasında olan numuneler (0,9 < EQL < 1,1) ÜPHEL dir. üpheli bir sonuç elde edilmesi durumunda, numuneler yeniden çift olarak teste tabi tutulmalıdır. Yeni dozaj da üpheli sonuç verirse, yeni bir numune istenmelidir. Aktif bir sifilis enfeksiyonu te hisi sadece sifilis IgM testinin verdi i pozitif sonuca dayanamaz; bu te his ayrıca ba ka test sonuçlarına ve klinik kanıtlara da dayanmalıdır. Performans Özellikleri Do ruluk Test içi ve testler arası do ruluk üç düzeyde, bir negatif numune ve yüksek yo unlukta ara IgM yanıtı niteli indeki iki pozitif numune ile de erlendirmeye tabi tutulmu tur. Test içi do ruluk belirtilen düzeylerde birbirine paralel 48 ölçüm kullanılarak hesaplanmı tır. Testler arası do ruluk 5 farklı dozaj sırasında, numunelerin dozajını dört kopya olarak gerçekle tirmek suretiyle hesaplanmı tır. Test içi VARYASYON KATSAYISI % Testler arası VARYASYON KATSAYISI % Negatif 11,7 12,4 Ara Pozitif 2,9 5,0 Güçlü Pozitif 3,6 7,6 Özgüllük Testin klinik özgüllü ü kan donörlerinden alınmı 87 plazma ve serum numunesinin dozajı gerçekle tirilerek de erlendirilmi tir. Numuneler sifilis için Lab21 Healthcare'in IgM dozajı ve rakip bir dozaj ile teste tabi tutulmu tur. Lab21 Healthcare'in sifilis IgM dozajı tüm numunelerin negatif oldu unu ve bu ekilde % 100'lük bir özgüllük olu tu unu ortaya koymu tur. Duyarlılık Bu kitin performansını (CE) i aretini ta ıyan di er ürünler ile, sifilis serolojisi alanında uzmanla mı laboratuarlara teslim edilen numuneler üzerinde kar ıla tırmak için birçok klinik inceleme gerçekle tirilmi tir. Sonuçların toplamı a a ıda verilmi tir: Do rulanmı vakalar Di er pozitif sifilis serolojisi Di er negatif sifilis serolojisi IgM Poz (2 kit) IgM Poz (sadece NML) IgM Poz (Sadece di er kit) Bir sifilis serokonversiyon paneli (Serologicals Inc, USA) kullanılarak ilave duyarlılık incelemeleri gerçekle tirilmi tir; Lab21 Healthcare'in sifilis IgM kiti ve piyasada mevcut ba ka iki IgM kiti arasında %100 oranında bir uyum saptanmı tır. 5

6 Kaynakça 1. Larson S.A. et al Laboratory Diagnosis and interpretation of Tests for Syphilis. Clinical Microbiology Reviews 1995; 8: Pope V. et al A manual of tests for Syphilis. 3. Norris S.J. Polypeptides of Treponema pallidum: Progress toward understanding their structural, functional and immunological role.microbiological Reviews, 1993;l 57: Egglestone S.I. & Turner A.J.L. Serological Diagnosis of syphilis, Communicable Disease and Public Health 2000; 3:

7 UK Use By DE Verwendbar bis ES Fecha de caducidad IT Utilizzare entro FR Utiliser jusque SE Använ före DK Holdbar til P Fecha de caducidad UK Temperature limitation DE Zulässiger Temperaturbereich ES Limite de temperatura IT Limiti di temperatura FR Limites de température SE Temperaturbegränsning DK Temperaturbegrænsning P Limite de temperatura UK Manufacturer DE Hersteller ES Fabricante IT Fabbricante FR Fabricant SE Tillverkare DK Producent P Fabricante UK In Vitro Diagnostic Medical Device DE In Vitro Diagnostikum ES Producto sanitario para diagnóstico in vitro IT Dispositivo medico-diagnostico in vitro FR Dispositif médical de diagnostic in vitro SE In vitro-diagnostik DK Medicinsk udstyr til in vitro-diagnostik P Producto sanitario para diagnóstico in vitro UK Consult Instructions for Use DE Gebrauchsanweisung beachten ES Consulte las instrucciones de uso IT Consultare le istruzioni per l'uso FR Consulter les instructions d'utilisation SE Se handavanddebeskrivningen DK Se brugsanvisning P Consulte las instrucciones de uso UK Batch code DE Chargenbezeichnung ES Codigo de lote IT Codice del lotto FR Code du lot SE Lot nummer DK Lotnummer P Codigo de lot I60117 CE V /06/25