Bacillus cereus ve Analiz Yöntemleri

Ebat: px

Şu sayfadan göstermeyi başlat:

Download "Bacillus cereus ve Analiz Yöntemleri"

Göker Abacı
5 yıl önce
İzleme sayısı:

1 Bacillus cereus ve Analiz Yöntemleri Bacillus cereus Gram pozitif ve spor olu turan g da zehirlenme etkeni bakteriler aras nda yer almaktad r. Sporlar s l i leme oldukça dirençlidir. Genellikle 10 7 /g düzeylerinde intoksikasyon etkenidir. Emetik ve diyaretik tipte olmak üzere iki ayr enterotoksin üretir. (Notermans ve Batt, 1998). Do ada yayg n olarak bulunur, çe itli g dalarda dü ük miktarlarda saptanabilmektedir. zolasyonunda do rudan ekim yöntemi ve Mannitol Egg-yolk Phenol red Polymixin (MYP) Agar gibi selektif ortamlar kullan lmas önerilmektedir. Kültür ortam ISO 7932:1993 say l ISO standard nda tan mlanm t r. Ancak MYP besiyerininin asit tamponlama özelli i dü ük oldu u için ortamda mannitolu fermente eden bakteriler (B. cereus mannitolu fermente edemez) kolayl kla geli ebilmektedir. Bu nedenle ekimlerde Oxoid taraf ndan üretilen Polymixin Pyruvate Egg-yolk Mannitol Bromthymol blue Agar n da (PEMBA) paralel olarak kullan m avantaj sa lamaktad r. Piruvat ve pepton içermesi nedeniyle bu ortamda lesitinaz aktivitesi ve spor olu umunu te vik edilmektedir. Ancak bu ortam n da tamponlama özelli i dü ük oldu u için sonuçlar 24 saatlik inkübasyon sonucunda de erlendirilmelidir. Analiz edilecek g da maddesinden yap lan seyreltimler (10-4 e kadar) MYP Agar ve PEMBA besiyerlerine 0,1 er ml paralelli olarak ekilmekte, 30 C de 24 ve 48 saat inkübe edildikten sonra sonuçlar de erlendirilmelidir. MYP Agar üzerinde muhtemel B. cereus kültürleri yüzeyleri kuru ve pürüzlü, tersi mork rm z ve etraflar nda zon bulunan koloniler olu turmaktad r. PEMBA üzerinde ise turkuaz mavi renkli, etraflar nda presipitasyon bulunan koloniler eklinde üreme gözlenmektedir. Do rulama testleri Hugh Leifson s besiyeri kullan larak, glukozun anaerobik disimilasyonu, gelatin hidrolizasyonu, nitrat indirgeme testleri, mannitol ve glukozu fermente etmeme özellikleri incelenerek yap lmaktad r. G dalarda B. cereus enterotoksini Reversed Passive Latex Agglutinasyon kitleri kullan larak do rudan saptanabilmektedir (Harrigan, 1998).

2 Mannitol Egg Yolk Polymixin Agarda (MYP) (CM929) Bacillus cereus Say m Mannitol Egg Yolk Polymixin Agar (MYP) içeri indeki mannitol, yumurta sar s ndaki lesitin ve polymyxin B nedeniyle Bacillus cereus için oldukça seçici bir besiyeridir. Mannitolu kullanmayan B. cereus su lar besiyerinde pembe koloniler olu turmakta, lesitinaz aktivitesinden dolay koloni etraf nda presipitasyon sonucu opak bir zon gözlenmektedir. Mannitol pozitif bakteriler ise phenol red indikatöründen dolay farkl renkte koloniler olu tururlar. Polymyxin B ise Gram- negatif bakterileri inhibe ederek besiyerine seçicilik kazand r r. Besiyerinin haz rlanmas Mannitol Egg Yolk Polymixin Agar (MYP) (CM929) besiyerinden 21,5 gram tart l r, 500 ml dam t k su içinde s t larak eritilir. Daha sonra 121 C de 15 dakika otoklavda sterilize edilir. Sterilizasyon sonras besiyeri 50 C ye so utulduktan sonra oda s cakl na getirilmi 50 ml Egg Yolk Emülsiyon (SR47) ile 2ml dam t k su içerisinde çözündürülmü bir vial Bacillus cereus Selektif Supplement (SR99) eklenerek kar t r l r, petrilere yakla k 20 er ml da t l r. lem G da maddesi 1:10 oran nda % 0.1 lik peptonlu su (Oxoid CM 009)ile homojenize edilir (10-1 ) ve ayn ekilde ileri seyreltimleri yap l r (10-2, 10-3, ). Her seyreltimden besiyeri içeren steril petri kutular na 0,1-0,5 ml al narak yayma yöntemiyle ekim yap l r. Petriler saat 30 C de inkübasyona b rak l r. Sonuçlar n de erlendirilmesi: Petri yüzeyinde 5 mm çap nda, pembe/mor renkli, etraf opak zon ile çevrilmi, kuru, yüzeyi pürüzlü tipik koloniler say l r. Tipik kolonilerden be er adet al narak Nutrient Agar da (CM4) geli tirilir.

3 Bacillus cereus Selective Agarda (PEMBA) (CM617) Bacillus cereus Say m Besiyerinin haz rlanmas Bacillus cereus Selective Agarda (PEMBA)(CM617) besiyerinden 20,5 gram tart l r, 475 ml dam t k su içinde tamam yla çözününceye kadar s t larak eritilir. Daha sonra 121 C de 15 dakika otoklavda sterilize edilir. Sterilizasyon sonras besiyeri 50 C ye so utulduktan sonra oda s cakl na getirilmi 25 ml Egg Yolk Emülsiyon (SR47) ile 2ml steril dam t k su içerisinde çözündürülmü bir vial Bacillus cereus Selektif Supplement (SR99) eklenerek kar t r l r, petrilere da t l r. lem G da maddesi 1:10 oran nda % 0.1 lik peptonlu su (CM 009) ile homojenize edilir (10-1 ) ve ayn ekilde ileri seyreltimleri yap l r (10-2, 10-3, ). Her seyreltimden besiyeri içeren steril petri kutular na 0,1-0,5 ml al narak yayma yöntemiyle ekim yap l r. Petriler 24 saat 35 C de inkübasyona b rak l r. nkübasyondan sonra petriler incelenir. Tipik B.cereus kolonileri say l r. Petriler oda s cakl nda bir 24 saat daha b rak larak tüm B.cereus kolonileri gözlenir. Not: Kurutulmu g dalar 90 ml Tripton-tuz çözeltisi içerisine 20 gram konularak oda s cakl nda 50 dakika kadar iyice slat l r. (Tripton-tuz çözeltisi haz rlamak için %0,3 oran nda Tryptone LP 042 ve %0,8 oran nda Sodium Chloride LP 005 kullan l r.) 90ml %0,1 lik peptonlu su bu çözeltiye ilave edilerek 10-1 lik dilüsyon yap l r. Anaerobik glukoz fermentasyonu, nitrat indirgeme ve Voges-Proskauer testleri uygulan r. Pozitif reaksiyonlar B. cereus varl n ifade eder.

5 This document was created with Win2PDF available at The unregistered version of Win2PDF is for evaluation or non-commercial use only.

Benzer belgeler

Bacillus cereus 'un Standart Analiz Yöntemi 1

Orlab On-Line Mikrobiyoloji Dergisi Yıl: 2006 Cilt: 04 Sayı: 03 Sayfa: 31-36 www.mikrobiyoloji.org/pdf/702060302.pdf Bacillus cereus 'un Standart Analiz Yöntemi 1 Selin Kalkan 2, Kadir Halkman 3 Giriş