İçindekiler 1. Genel bakış 1.1 Giriş 1.2 Çalışma 1.3 Uygulamalar 2. Montaj 2.1 Bilgisayar gereksinimleri 2.

Transkript

1

2 İçindekiler 1. Genel bakış 1.1 Giriş 1.2 Çalışma 1.3 Uygulamalar 2. Montaj 2.1 Bilgisayar gereksinimleri 2.2 Yazılım yükleme 3. Genel Çalışma 3.1 Örnek büyüklüğü (tavsiye): 3.2 Genel ölçüm protokolü 3.3 Ölçüm sonuçlarını etkileyen faktörler 4. Ölçüm 4.1 Nükleik Asitler 4.2 Protein A Hücre Kültürleri 4.4 UV-VIS 5. Işık Şiddetini ayarlayın ve kontrol edin 5.1 Giriş 5.2 Çalışma 5.3 Işık yoğunluğu kontrolü 5.4 Işık yoğunluğu ayarı 5.5 Özel Uygulama

3 6. Sorun Giderme 6.1.Açılmayan USB aygıtı bulmak için 6.2 Örnek doğruluğu ve tekrarlanabilirliliği 6.3 Olağandışı spectrum 7. Bakım ve Garanti 7.1 Temizleme 7.2.Gerekli ürünlerin parçaları 7.3.Dalga boyunun kalibrasyonu 7.4.Çözücü uyumluluğu 7.5.Ölçüm ve optik yüzeylerin zararlı maddelerden arındırılması 8. Ekler 8.1 Enstrüman özellikleri 8.2 Absorbans hesaplama 8.3 Konsantrasyon Hesaplama (Beer-Lambert Kanunu) 8.4 Floresan Boyaların Ölçümü

4 1. Genel bakış 1.1 Giriş UVS-99 yüksek doğruluk ve tekrarlanabilirlik ile birlikte 1 ul örneği ölçen tam spektrum spektrofotometre (200 ~ 850 nm) 'dir. Bu örneği yerinde tutmak için tek başına yüzey gerilimi kullanan yeni bir numune tutma teknolojisini kullanır. Hiçbir Küvet ya da kapiler veya diğer konumlandırma araçları gerekli değildir. Bu bir labaratuvar silmekle birlikte kaydırarak temizlemek gibi kullanımı basit ve kolaydır. Ayrıca, UVS-99 seyreltme (50 daha yüksek konsantrasyonu genel bir spektrofotometre ölçebilir) olmaksızın yüksek konsantrasyon örneklerini ölçebilirsiniz.

5 1.2 Çalışma Şekil.1.1 Basit bir şekilde pipetleme ile 1 ~2.5 ul örneği ölçüm tabanı üzerine ve sonra sıvı örnek ile temas için örneğin ucuna bırakın..sıvı numune optik fiberler arasında da köprü olacaktır.hem 1 mm hem de 0.2 mm yolları kontrol edilir. UVS-99 ile otomatik olarak 10 saniye içinde tüm ölçüm işlemi tamamlayabilirsiniz.örnek geçtikten sonra ışığı analiz etmek için kullanılan bir doğrusal CCD dizisini kullanan bir spektrometre, ışık kaynağı ve pulslu Xenon flaş lambası içerir.cihaz özel bir yazılım tarafından kontrol edilir ve bir bilgisayara yüklenir. Açma Damlatma Ölçme 1.3 Uygulamalar Şekil.1.2 Seyreltilmemiş nükleik asit (2 ~ 3700 ng / ml) Saflaştırılmış proteinin A280 ( 100 mg / ml) Lowry ve Bradford Hücre yoğunluğu Genel UV / VIS spektrofotometre

6 2. Montaj 2.1 Bilgisayar gereksinimleri İşletim Sistemi: XP / Vista / Windows 7 ve üzeri Office 2003 (Excel) / Office 2007 (Excel) ve üzeri CPU: 400MHz veya üzeri 64MB RAM USB bağlantı noktası Monitör: 1024x Yazılım yükleme USB kablosu bağlanmadan önce sistem yazılımının bilgisayara yüklenmesi gerekir.uvs-99 CD-rom kurulum programları vardır.kurulum prosedürleri aşağıdaki gibidir: CDROM ünitesine ASP-3700 CD-rom unu takın. Bilgisayara CD-rom kopyalayın. Kurulum programını çift tıklatın ve yüklemeye devam etmek için "Tamam" a tıklayın.

7 Eğer dizin değiştirmek gerekirse, devam etmek için "Yükle" butonuna tıklayınız. Burada dikkat ediniz. Vista veya Windows 7 İşletim Sistemi veya üzeri için, lütfen "Sistem Yürüt",, C Yürüt altında yazılımı yüklemeyiniz. Şekil 2.2 Şekil 2.3 Kurulumu bitirmek için "TAMAM" I tıklayın.

8 Yükleme tamamlandıktan sonra, bilgisayar ile UVS-99 bağlayın ve sonra "Yeni Donanım Bulundu Sihirbazı" aşağıda gösterildiği gibi başlatmalısınız. Şekil.2.4 Sürücü aramak için sihirbazını çalıştırın. "Yazılımı otomatik olarak Kur" (Önerilen) seçeneğini seçin. "İleriyi" tıklayın ve kurulum otomatik olarak tamamlanacaktır. Şekil.2.5 Sizin UVS-99 çalışmaya hazır olmalıdır Önlemler 1.UVS-99 yazılımı bilgisayara yüklenmeden önce, güç düğmesini (1 ve 0 kapalı) açmayın. Ve bilgisayara USB kablosunu bağlamayın.

9 2.Bilgisayar USB kablosunu çıkarmadan ya da bağlamadan önce cihazı kapatıpilk olarak güç düğmesine basın. (0 kapalı) 3.Bilgisayarı başlattığınızda ya da kapattığınızda, USB kablosunu bağlamayın ya da bilgisayarı ile USB kablosu arasında bağlantıyı kesin. 4. Gücü kapatın ve UVS-99 kullanılmadığı zaman bilgisayarın USB kablosunun bağlantısını çıkarın. 5. Gücü kapatın ve bilgisayarda her türlü yazılım çeşidini yüklemeden önce bilgisayarı USB kablosunun bağlantısını kesin. 6. Yukarıdaki tüm önlemlerin ihlali amacı dışında kullanılması durumunda garanti hakkına sahip değildir. 7. Her bir ölçüm arasındaki aralığk 10 ~ 15 saniyeden fazla olması gerekir. 8. Örnekleme kolu geri sıçrama yoksa, derhal güç düğmesine kapatın ve yazılımı yeniden başlatın.

10 3. Genel Çalışma 3.1 Örnek büyüklüğü (tavsiye): Nükleik asit örnekleri: 1 ~ 2.5 ul Protein örnekleri: 1 ~ 2.5 ul Asma hücre örnekleri: 1 ~ 2.5 ul Diğer örnekler: 2.5 ul 3.2 Genel ölçüm protokolü UVS-99 ile bilgisayar arasındaki bağlantıyı kontrol edin.açma/kapatma düğmesini açın. Örnekleme kol yazılım kapalı olduğundan emin olun ve yazılımı çalıştırın.uvs-99 otomatik kontrol işlemi gerçekleştirecektir. Örnek tipi (Şekil 3.1) göre ana menüden bir modül seçin ve UVS-99 tekrar kendi kontrol işlemini gerçekleştirecektir.

11 Karartma Her zaman bir yazılım modülü açıldığında (başlatılan), "Tedbir" düğmesi aktif değildir."tedbir" butonu aktif hale gelmeden önce ilk olarak boşluk ölçülmelidir. Örnekleme kolunu kaldırın, sonra ölçüm platformu üzerine 1 ~ 2.5μl boş örnek (numune ile kullanılan çözücü tampon, veya taşıyıcı sıvı) pipetleyin. Örnekleme koluna uzanın ve her iki optik fiberler ile başlık arasındaki köprüyü kurduğunuzdan emin olun. "Boş" düğmesini tıklayın. UVS-99 hem 1 mm hem de 0.2 mm yol uzunlukları ölçecek, ve sonra sistem otomatik olarak her iki sonuç kaydedecektir. Örnekleri farklı çözümler olmadığı sürece yeniden boş bırakmamak gerekir. Ölçüm tamamlandığında, örnekleme kolunu açın ve bir laboratuvar sileceği kullanarak (örneğin Kimwipe) her iki kaidelerden gelen boşluk tampon ile silin. Örnek ölçüm "Örnek kimlik" yazın ve "Örnek Tipi" seçeneğini seçin. 1 ~2.5μl örneği ölçüm platformu üzerine örnekleme kol açılır iken pipetleyin.

12 Örnekleme koluna uzanın ve her iki optik fiberler ile başlık arasındaki köprüyü kurduğunuzdan emin olun. "Tedbir" düğmesini tıklayın ve ölçüm sonucu 10 saniye içinde ekranda belirecektir. Otomatik kaydetme: Sistem ölçümleri kaydedecektir ve otomatik kaydetme olacaktır. En fazla kayıt sayısı 1000'dir. Ölçüm tamamlandığında, örnekleme kolunu açın ve bir laboratuvar sileceği kullanarak tabandaki örneklerin ikisini de silin. Tüm örnekler ölçülür kadar ölçümü tekrarlayın. "Rapor" düğmesine tıklayın ve tüm veriler yeni bir Excel tablosuna taşınmış olacaktır. Hızlı düğmeleri UVS-99 üzerinde iki düğme vardır. "MEA" operasyon yazılımındaki "Ölçme" simgesi gibi aynıdır. "BLA" operasyon yazılımındaki "Boş" simgesi gibi aynıdır. Şekil Ölçüm sonuçlarını etkileyen faktörler

13 Ertelenmiş örnekler Ölçüm platformundan geçmeyen kalıntı örnek ölçüm sonucunda küçük bir hata ya neden olur. Ölçüm genellikle örnek taşınmasını önlemek için yeterlidir hemen sonra bir laboratuar sileceği ile tabanları temizleyin. Genellikle gerekli olmamasına rağmen 2μl sıvı alikotlar özellikle yüksek konsantrasyonda örneklerden sonra her iki tabanı temizlemek için de kullanılabilir. Örneklerin, çok sayıda ölçümünden sonra, ancak, bu üst ve alt tabanları etrafında alanları iyice temizlenmesi gerektiği tavsiye edilir. Homojenik örnekler Homojen olmayan solüsyonda örnekler, küçük hakim kullanıldığındaki partiküller, spektrofotometre dahil olmak üzere tüm ölçüm teknolojileri kullanılarak küçük hacimlerde kullanarak, özellikle oluşturulan veride önemli ölçüde sapmaya neden olur. Buharlaşma etkisi Ölçüm sırasında numunenin buharlaşması % 1-2 örnek konsantrasyonundaki artış açıklamış olacaktır. Heksan gibi yüksek uçucu solventler, büyük olasılıkla ölçüm tamamlanmasından önce buharlaşmış olacaktır. DMSO gibi daha az uçucu çözücüler ise başarılı bir şekilde kullanılabilir.

14 4. Ölçüm 4.1 Nükleik Asitler Numune Hacmi Koşullar: 1 ~ 2.5μl; 1.5 ul tavsiye edilir Aralığı: 0.1 ~ 75 Abs. Tekrarlanabilirlik: 0.1 ~ 5 Abs. ± ~ 75 Abs. ±% 2 Ölçüler: UVS-99 hem 1 mm hem de 0.2 mm yol uzunluklarını her bir örnekte ölçecektir ve daha sonra 10 mm yoluna normalleştirmek için otomatik olarak uygun bir seçim olacaktır.

15 Şekil.4.1 "Örnek kimlik" yazın ve "Örnek Tipi" seçeneğini seçin. Örnek ID: Örnek adını tanımlamak için kullanılır. Örnek Cinsi: dsdna, ssdna, RNA ve diğerleri dahil olmak üzere, ölçülen nükleik asit türünü seçmek için kullanılır. Nm / Abs: Kullanıcı tarafından seçilen dalga boyu ve ilgili absorbans.dalga boyu yazarak veya dalga boyu kutusunun solu için yukarı / aşağı okları kullanarak seçilebilir. Not: Kullanıcı tarafından seçilen dalga boyu ve absorbans herhangi bir hesaplamada kullanılmamaktadır.

16 A260: Geleneksel bir 10 mm yol olarak ölçülürse 260 nm'de temsil edilmiş örneğin absorbansı Not: Bu aslında 1 mm yol uzunluğu ile ölçülen 10X absorbansdır ve 0.2 mm yol uzunluğu ile ölçülen absorbans 50X dir. A280: Geleneksel bir 10 mm yol olarak ölçülürse 280 nm'de temsil edilmiş örneğin absorbansı Not: Bu aslında 1 mm yol uzunluğu ile ölçülen 10X absorbansdır ve 0.2 mm yol uzunluğu ile ölçülen absorbans 50X dir.. 260/280: 260 ve 280 nm örnek absorbans oranı. 260 ve 280 nm 'de absorbans oranı, DNA ve RNA'nın saflığı değerlendirmek için kullanılır. A ~ 1.8 oranı genellikle DNA için "saf" olarak kabul edilir; ~ 2.0 oranında genel RNA için "saf" olarak kabul edilir. Bu oran her iki durumda da kayda değer ölçüde daha düşük ise, bu proteini, fenol ya da diğer kirletici maddelerin varlığını ya da 280 nm'de yakınındaki kuvvetle absorbe varlığını gösterebilir. 260/230: 260 ve 230 nm dalga boyunda örnek absorbans oranı. Bu nükleik asit saflığının ikincil bir ölçüsüdür. "Saf" nükleik asit için 260/230 değerleri genellikle ilgili 260/280 değerlerinden daha yüksektir. Bunlar 1.8 ~ 2.2 aralığında yaygın olarak bulunmaktadır.oran kayda değer ölçüde daha düşük ise, bu ikinci kez arıtılmış kirletici maddelerin varlığını gösterebilir. Konsantrasyon: ng / ul - dsdna konsantrasyon = 260 nm Abs 50 - ssdna konsantrasyon = 260 nm Abs 33

17 - RNA konsantrasyonu = 260 nm Abs 40 - Diğer konsantrasyon = 260 nm Abs Sabit Otomatik kaydetme: Sistem ölçümleri kaydedecektir ve otomatik olarak ölçecektir. En fazla kayıt sayısı 1000'dir. Grafik Kaydetme: Gerekirse grafik kaydetmek için "Grafik Kaydet" tıklayın. Rapor: "Rapor" tıklayın. Tüm sonuçlar bir Excel dosyası olarak ihraç edilecek şekilde kaydedildi.absorbans veri temsil edilen dosyalarda yazılım ekranında görüntülenen dosyalar göründüğü gibi gösterilir. Şekil 4.2

18 4.2 Protein A280 Gereken numune hacmi: 1 ~ 2.5 ul, 2μl en az tavsiye edilir. Aralığı: 0.1 ~ 75 Abs. Tekrarlanabilirlik: 0.1 ~ 5 Abs ± ~ 75 Abs. ±% 2 Ölçüm: UVS-99 hem 1 mm hem de 0.2 mm yol uzunlukları ile her bir örneği ölçecektir ve daha sonra otomatik olarak normalleştirmek için uygun bir yol 10 mm seçimi olacaktır.

19 Şekil.4.3 "Örnek kimlik" yazın ve "Örnek Tipi" seçeneğini seçin. Numune ID: Örnek bir isim tanımlamak için kullanılır. Örnek Cinsi: Ölçülen protein türünü seçmek için kullanılır. - 1 Abs = 1 mg / ml: Genel bir referans ayarı 1.0 A nın 280 nm'de absorbans üreten bir % 0.1 (1 mg / ml) bir protein solüsyonu göre (yol uzunluğu 10 mm) olabilir. - BSA: Sığır Serum Albumin referansı. Bilinmeyen (örnek) protein konsantrasyonları, % 1 (10 mg / ml) BSA solüsyonu için, 280 nm'de 6.7 'lik kütle

20 imha edilme katsayısı kullanılarak hesaplanmıştır. - IgG: IgG referans. Bilinmeyen (örnek) protein konsantrasyonları,% 1 (10 mg / ml), IgG çözeltisi için, 280 nm'de 13.7 kütlesinin yok olma katsayısı kullanılarak hesaplanmıştır. - Lizozim: Lizozim referans. Bilinmeyen (örnek) protein konsantrasyonları,% 1 (10 mg / ml) Lizozim solüsyonu için ise 280 nm'de 26.4 kütlesinin yok olma katsayısı kullanılarak hesaplanmıştır. - Diğer: Kullanıcı tarafından girilen kütle yok olma katsayısı (L gm-1 cm-1). İlgili referans proteinin % 1 (10 mg / ml) solüsyonu için -Nm / Abs: Kullanıcı tarafından seçilen dalga boyu ve ilgili absorbans.dalga boyu yazarak veya dalga boyu kutusunun solu için yukarı / aşağı okları kullanarak seçilebilir. Not: Kullanıcı tarafından seçilen dalga boyu ve absorbans herhangi bir hesaplamada kullanılmamaktadır. A280: Geleneksel bir 10 mm yol olarak ölçülürse 280 nm'de temsil edilmiş örneğin absorbansı A260: Geleneksel bir 10 mm yol olarak ölçülürse 260 nm'de temsil edilmiş örneğin absorbansı A260/280: 260 ve 280 nm örnek absorbans oranı Konsantrasyon: mg / ml - Konsantrasyon (1Abs = 1 mg / ml) = A280 x 10 - Konsantrasyon (BSA) = A / Konsantrasyon (IgG) = A / 13.7

21 - Konsantrasyon (Lizozim) = A / 26.4 Otomatik kaydetme: Sistem ölçümleri kaydedecek ve otomatik olarak ölçecektir. En fazla kayıt sayısı 1000'dir. Grafik Kaydet: Gerekirse grafik kaydetmek için "Grafik Kaydet" tıklayın. Rapor: "Rapor" tıklayın. Tüm sonuçlar bir Excel dosyası olarak ihraç edilecek şekilde kaydedildi.absorbans veri temsil edilen dosyalarda yazılım ekranında görüntülenen dosyalar göründüğü gibi gösterilir. Şekil Hücre Kültürleri "Hücre Kültürleri" modülü 200 nm 850 nm arasında örnek spektrum gösterir. İki imleçler ilgili dalga boylarına ayarlanabilir. Numune Hacmi Koşullar: 1 ~ 2.5 ul; en az 2 ul önerilir Ölçüm: UVS-99 hem 1 mm hem de 0.2 mm yol uzunlukları ile her bir örneği ölçecektir ve daha sonra otomatik olarak normalleştirmek için uygun bir yol 10 mm seçimi olacaktır.

22 Şekil 4.5

23 "Örnek Kimliği" yazın. Numune ID: örnek bir isim tanımlamak için kullanılır. Λ1 / Abs: Kullanıcı tarafından seçilen dalga boyu ve ilgili absorbans.dalga boyu yazarak veya dalga boyu kutusunun solu için yukarı / aşağı okları kullanarak seçilebilir. Λ2 / Abs: Kullanıcı tarafından seçilen dalga boyu ve ilgili absorbans.dalga boyu yazarak veya dalga boyu kutusunun solu için yukarı / aşağı okları kullanarak seçilebilir. Maksimum Absorbans: Y ekseninin üst sınırını yeniden ölçmek için kullanılır. Otomatik kaydetme: Sistem ölçümleri kaydedecektir ve otomatik olarak ölçecektir. En fazla kayıt sayısı 1000'dir. Grafik Kaydet: Gerekirse grafik kaydetmek için "Grafik Kaydet" tıklayın. Rapor: "Rapor" tıklayın. Tüm sonuçlar bir Excel dosyası olarak ihraç edilecek şekilde kaydedildi.absorbans veri temsil edilen dosyalarda yazılım ekranında görüntülenen dosyalar göründüğü gibi gösterilir.

24 4.4 UV-VIS "UV-VIS" modülü UVS-99 spektrofotometrenin geleneksel bir spektrofotometre olarak çalışmasını sağlar. Örnek absorbans 200 nm 850 nm ekranda görüntülenir ve imleçler bireysel zirvelerin ölçümüne izin verir. Numune Hacmi Koşullar: 1 ~ 2.5 ul; en az 2 ul önerilir. Ölçüm: Şekil 4.6

25 "Örnek kimlik" yazın ve "Örnek Tipi" seçeneğini seçin. Numune ID: Örnek bir isim tanımlamak için kullanılır. 1 mm eğrisi: 1 mm yol ile ölçülen absorbansların eğrisini gösterir. 0.2 mm eğrisi: 0.2 mm yolu ile ölçülen absorbansların eğrisini gösterir. Λ1 / Abs: Kullanıcı tarafından seçilen dalga boyu ve ilgili absorbans.dalga boyu yazarak veya dalga boyu kutusunun solu için yukarı / aşağı okları kullanarak seçilebilir. Eğriyi göstermek için seçilen absorbans ile ilgilidir. Λ2 / Abs: Kullanıcı tarafından seçilen dalga boyu ve ilgili absorbans.dalga boyu yazarak veya dalga boyu kutusunun solu için yukarı / aşağı okları kullanarak seçilebilir. Eğriyi göstermek için seçilen absorbans ile ilgilidir. Not: Gösterilen her iki eğri, absorbans ve eğri 1 mm yol ile ilgisini ekranda gösterdi. Maksimum Absorbans: Y ekseninin üst sınırını yeniden ölçmek için kullanılır. Otomatik kaydetme: Sistem ölçümleri kaydedecektir ve otomatik olarak ölçecektir. En fazla kayıt sayısı 1000'dir. Grafik Kaydet: Gerekirse grafik kaydetmek için "Grafik Kaydet" tıklayın. Rapor: "Rapor" tıklayın. Tüm sonuçlar bir Excel dosyası olarak ihraç edilecek şekilde kaydedildi.absorbans veri temsil edilen dosyalarda yazılım ekranında görüntülenen dosyalar göründüğü gibi gösterilir.

26 Numune Konsantrasyonun hesaplanması: Bilinen örneklerin konsantrasyon eğrisini çizerek ve kurarak aynı tip diğer örneklerle diğer örneklerin'konsantrasyon değerini hesaplamak için kullanıcının izin verdiği UV-VIS modülünde bir işlevi vardır. Şekil 4.7 ile gösterildiği gibi, sol üst simge, "standart" tıklayın, daha sonra Şekil 4.8 görülmektedir. Şekil.4.7 Şekil 4.8.

27 Şekil 4.8 in sol tarafında, farklı absorbans yolu için ve aynı anda XY eksen şemasının sol tarafında uygun konsantrasyon değerlerini girmek için kullanıcılar için yedi satır vardır.absorbans ve konsantrasyon değeri kilitlendikten sonra, Şekil 4.9 görülen "OK" simgesini tıklatın. Şekil 4.9 Kullanıcı konsantrasyonu bilinen örnekleri belirli oranlarda sulandırabilir ve daha sonra onların bireysel absorbansını ölçebilir.kullanıcı için maksimum satır yedi tanedir..kullanıcı ölçülen konsantrasyonu ve absorbansı tuşlamayı tamamladıktan sonra Şekil 4.10 görüldüğü gibi "Tamam" a tıklayın,

28 Şekil 4.10 Standart eğri kurduktan ve çizdikten sonra, kullanıcı aynı örnekleri ölçtüğü zaman, çizilen sonra, kullanıcı Şekil 4.10 'da sağ alt kısmında "Örnek" çerçeve "Abs" kısmına bir absorbans değeri girebilir. Daha sonra konsantrasyon değeri otomatik olarak çizilen standart eğriye göre, "Örnek" çerçeve açacak ve "Konsantrasyon" gösterilecektir.

29 4.5 Protein Lowry Kit protokolüne göre, örneğin Protein Lowry kit alarak,lütfen yedi standartları kullanın ve büyük dalga boyu olarak dalga boyu 1 ayarlayın. Şekil 4.11 de gösterildiği gibi UVS-99 tarafından her numunenin absorbans değerini ölçün ve giriş yapın. Daha sonra "standart" ve "Tamam" simgesine tıklayın. Şekil 4.11 Ayrıca, gerçek örnekler için,lütfen büyük dalga boyu olarak dalga boyu 1 ayarlayın. Büyük dalga boyundan gelen ölçüm değeri standart eğri için ileri yapılacaktır. Örneğin konsantrasyon değeri "standart" bir modülünde "Konsantrasyon" şeklinde gösterilecektir.

30 Şekil 4.12 Numune ID: Örnek bir isim tanımlamak için kullanılır. Dalga boyu 1: Kullanıcı tarafından seçilen dalga boyu ve ilgili absorbans.dalga boyu yazarak veya dalga boyu kutusunun solu için yukarı / aşağı okları kullanarak seçilebilir. Eğriyi göstermek için seçilen absorbans ile ilgilidir.. Dalga boyu 2: Kullanıcı tarafından seçilen dalga boyu ve ilgili absorbans.dalga boyu yazarak veya dalga boyu kutusunun solu için yukarı / aşağı okları kullanarak seçilebilir. Eğriyi göstermek için seçilen absorbans ile ilgilidir. Maksimum Absorbans: Y ekseninin üst sınırını yeniden ölçmek için kullanılır. Grafik Kaydet: Gerekirse grafik kaydetmek için "Grafik Kaydet" tıklayın. Rapor: "Rapor" tıklayın ve bir iletişim kutusu açılacaktır.

31 4.5 Protein Bradforn Bradford için dalga boyu aralığı 575 nm ve 750 nm arasındadır. 575 nm büyük dalga boyudur. Yazılımda varsayılan dalga boyu 595 nm ve 725nm dir. Kullanıcı kendi dalga boyunu seçebilir. Gerekli Numune Hacmi: 1 ~ 2.5 ul; en az 2 ul önerilir. Ölçüm: Kit protokolüne göre, örneğin Protein Lowry kit alarak,lütfen yedi standartları kullanın ve büyük dalga boyu olarak dalga boyu 1 ayarlayın. Şekil 4.13 de gösterildiği gibi UVS-99 tarafından her numunenin absorbans değerini ölçün ve giriş yapın. Daha sonra "standart" ve "Tamam" simgesine tıklayın. Şekil 4.13

32 Ayrıca, gerçek örnekler için,lütfen büyük dalga boyu olarak dalga boyu 1 ayarlayın. Büyük dalga boyundan gelen ölçüm değeri standart eğri için ileri yapılacaktır. Örneğin konsantrasyon değeri "standart" bir modülünde "Konsantrasyon" şeklinde gösterilecektir. Şekil 4.13 Numune ID: Örnek bir isim tanımlamak için kullanılır. Dalga boyu 1: Kullanıcı tarafından seçilen dalga boyu ve ilgili absorbans.dalga boyu yazarak veya dalga boyu kutusunun solu için yukarı / aşağı okları kullanarak seçilebilir. Eğriyi göstermek için seçilen absorbans ile ilgilidir.. Dalga boyu 2: Kullanıcı tarafından seçilen dalga boyu ve ilgili absorbans.dalga boyu yazarak veya dalga boyu kutusunun solu için yukarı / aşağı okları kullanarak seçilebilir. Eğriyi göstermek için seçilen absorbans ile ilgilidir. Maksimum Absorbans: Y ekseninin üst sınırını yeniden ölçmek için kullanılır. Grafik Kaydet: Gerekirse grafik kaydetmek için "Grafik Kaydet" tıklayın. Rapor: "Rapor" tıklayın ve bir iletişim kutusu açılacaktır.

33 5. Işık Şiddetini ayarlayın ve kontrol edin 5.1 Giriş Eğer"düzgün olmayan" veya "dağınık" emme spektrumu hala iki tabanı temizlendikten sonra görünürse, ışık yoğunluğunu kontrol etmelisiniz.işık şiddetini yazılımda "Kontrol" modülü kullanılarak kontro edebilil ve ayarlayabilirsiniz. Bu prosedürü uyguladığınızda bir örnek gerekli değildir. 5.2 Çalışma Aşağı örnekleme kolu ile, ana menüden "Kontrol" modülünü seçin. Pencere aşağıdaki şekildeki görünür. Şekil 5.1 Birlikte çalıştığınız örnek tipini seçin. Örneğin, "Nükleik Asit" tıklandığında şekil 5.1 deki gibi pencere görünecektir.

34 Yol uzunluğu (0.2 mm veya 1 mm) seçildikten sonra, kırmızı bir referans spektrumu görünecektir. Şekil 5.2 Boş alana pozitif bir tam sayı girdikten sonra (1 ~ 20, genellikle 4 iyi bir başlangıçtır.) ve daha sonra "Veri Okuma" butonuna tıklayınız. Yazılım sizin sahip olduğunuz giriş katsayısı altında siyah bir spektrum hazırlayacaktır. Işık yoğunluğu tespit sınırı UVS-99 için 10 olmasına rağmen ışık yoğunluğu daha iyi güvenilirlik ve istikrar için 100 ~ 3500 içinde tutulmalıdır.spektrum yoğunluğu referans spektrumu yakın ve biraz daha düşük olmalıdır. Spektrum yoğunluğu için katsayıyı arttırabilirsiniz.kaydet" düğmesine tıklayarak uygun katsayıyı kaydedebilirsiniz. Ayarı kaydettikten sonra UVS-99 yazılımını yeniden başlatın.

35 Yazılımda dört ölçüm modülü vardır. Her bir modül 0.2 mm ile 1 mm yol için iki katsayı içermektedir. Ayarlamalısınız ve sırasıyla tüm sekiz katsayıları kaydetmelisiniz. 5.3 Işık yoğunluğu kontrol Işık yoğunluğu tekrarlanabilirliği spektrumlara göre kontrol edilebilir. Birkaç spektrumları elde etmek için aynı katsayı altında sürekli olarak " Tarihi Oku " butonuna tıklayınız. Tüm yoğunluk spektrumları neredeyse birbirine denk ise, gösteriyor ki yüksek tekrarlanabilirlik ile bu cihaz çalışır. Şekil 5.3 Aynı katsayısı altında 10 spektrumları (siyah) gösterir, ve tüm yoğunluk spektrumları iyi örtüşmektedir. Şekil 5.3

36 Spektrumları iyi denk getiremiyorsanız (Şekil 5.4), fotoğraf kaynak veya optik fiberlerde bazı sorunlar vardır. Bu sorunu çözmek için her iki pedestallerde deiyonize su ile fırçalanabilir.spektrumları temizlendikten sonra iyi denk getiremiyorsanız,lütfen yerel distribütöre başvurun. Şekil Işık yoğunluğu ayarı Sürekli düzgün yoğunluk spektrum almak için katsayısı ayarlanmalıdır ve ışık yoğunluğu 100 ~ 3500 içinde tutulmalıdır. Gösteriyor ki ışık kaynağının iyi çalışıyor olması referans spektrumu için yoğunluk spektrumuna spektrum yakın tutmak için de önemlidir. Şekil 5.7, 1 den 7 ye kadar katsayısı ile 7 yoğunluğunun spektrumunu göstermektedir. referans spektrumu ve biraz daha düşüğü için spektruma yakın olduğundan, katsayısı 4 de, bu durumda daha fazla uyguna ayarlayın.

37 Şekil 5.5 Işık yoğunluğunda sürekli bir düzgün bir eğri elde etmek için ışık yoğunluğu çok yüksek ise, bu çentikli bir emme spektrumuna yol açacaktır. Aksine, düşük ışık yoğunluğu yüksek konsantrasyon örnekleri ile absorbans ölçümünü etkileyecektir. 5.5 Özel Uygulama Özel bir ölçüm ışık yoğunluğunun katsayısı ayarlanarak yapılabilir. Burada UV-VIS ölçümü bir örnektir. "UV-VIS" modülünün her iki de referans spektrumu ve yoğunluk spektrumu (katsayısı = 1) aşağıda gösterilmiştir. (Şekil 5.6)

38 ŞEKİL 5.6 Şekil 5.6 da, öyle görünüyor ki katsayısı 1 den fazla olmamalıdır ya da yoğunluğu 470~ 550 nm de devamlı bir eğri almak için çok yüksek olacaktır. Ancak, örnek, K 2Cr 2O 7, bir 350 nm'de ve düşük ışık yoğunlukta (<1000) bir absorbans vardır.yüksek konsantrasyon örneklerinin algılama aralığı sınırlı olacaktır. Bu 350 nm ışık yoğunluğunu artırmak için katsayı ayarlamada gereklidir.katsayı 4 ayarlandığında, ışık şiddeti artar (Şekil 5.7) ve emme spektrumu 350 nm de düzgün hale gelir. (Şekil 5.8) Not: Katsayıyı arttırmak bazı dalga boylarında yoğunluğun soğurmasına öncülük edebililr ve absorbans ölçümünü etkileyebilir. Bu durumda,yoğunluk doymuştur (Şekil 5.7) ve 430~ 550 nm de pürüzlü bir emme eğrisine yol açar. (Şekil 5.8)

39 Şekil 5.7 Şekil 5.8

40 6. Sorun Giderme 6.1.Açılmayan USB aygıtı bulmak için Şekil 6.1 Bu hata başlangıçta yazılımda görünebilir ve genellikle bu USB kablosunun düzgün bağlanmamasına veya yazılımın düzgün yüklenmemesine işaret olabilir. Lütfen kontrol etmek için aşağıdaki adımları çift tıklayarak takip edin. USB kablosunu kontrol edin, ve hem bilgisayara hem de UVS-99 a takılı olduğundan emin olun. Güç adaptörü kontrol edin. Lütfen adaptörde üzerindeki ışık var mı diye kontrol edin. Yazılımı yeniden başlatın. Orjinal bilgisayardan merkez bağlantı noktası olan hatalı bir USB ekarte etmek için başka bir bilgisayarda spektrofotometre yükleyin ve daha sonra yazılımı çalıştırın.eğer aynı şey olursa, cihaz onarım hizmeti gerekebilir. 6.2 Örnek doğruluğu ve tekrarlanabilirliliği Sonuçlar görünüşte hatalı ya da tekrarlanamıyorsa, nedenleri örnek olabilir ya da homojen olmayan aliquat, ya da sıvı sütunun kırılması olabilir. Temsilci sonuçları elde etmek için aşağıdakileri deneyin yararlı olabilir:

41 Yazılım modülü başlamadan önce örnekleme yüzeylerinin temiz olduğundan emin olun. Kirli bir örnek pedestal hatalı absorbans (hatta negatif değerler) ve sinyal doygunluğuna neden olabilir. Her hangi bir artığı ortadan kaldırmak için de-iyonize su ile yüzeyleri temizlemek için herzaman iyi bir uygulamadır. Sıvı sütun kırılması anormal bir sonuca neden olabilir. Yeterli örnekleri (1 ~ 2.5ul) sıvı sütunu sağlam olduğunda güvence altına alabilirsiniz. Genel olarak, protein çözeltisinin yüzey gerilimini başka çözeltilere göre daha düşük olduğundan, sıvı sütunu kolayca oluşmaz.sorun gidermek için biraz de-iyonize su pedestal altı üzerine pipetleyin ve çözelti içine pedestal üstüne daha düşük pipetleyin ve yaklaşık 2 ila 3 dakika oturmasına izin verin. Temiz bir laboratuar sileceği ile her iki pedestal kuruması için silin. Temiz ve kuru bir laboratuvar sileceği ile kalınlığı artırmak için birkaç kez silin. laboratuvar sileceğine basın, sıkıca pedestal aşağısına ve "ovmak" katlanmış bir laboratuvar sileceği ile çok agresif olarak yaklaşık en az kez silin üzerinde silin. DNA örneklerini 55 C de ısıtın ve ölçümden önce vorteksleyin.uvs-99 ile ilgili olarak gerekli küçük hacimler nedeniyle, ölçülen numunenin homojen olmasını sağlamak için son derece önemlidir. Saha deneyimi bu fenomen özellik için genomik veya lambda DNA gibi büyük moleküller içeren örneklerin duyarlı olduğunu göstermiştir. Not: Küvet tabanlı spektrofotometre tarafından kullanılan büyük hacimler homojen olmayan örneğin etkisini maskeler ya da en aza indirgeyecektir.

42 Referans (boş) çözelti ve çözücünün aynı malzeme olduğunu onaylayın. Tamponlar sıklıkla UV aralığında emer. Bu nedenle, tam olarak aynı malzeme ile aletin boş olması içinörneklerin içeride askıda olması kritiktir. Örneğin çok sulandırılmadığını onaylayın. Ölçüm örneklerinde ya da algılama sınırı yakınında önemli bir miktarda değişebilir ölçümleri ile sonuçlanacaktır. Kullandığınız uygulama modülünün geçerli ölçüm aralığına bakın. 6.3 Olağandışı spektrum Pürüzlü emme spektrumu sergileyen örnek, ama normal bir şekil, dedektör doygunluk sonucu olabilir. Bu başlangıçta bir kirli örnek pedestal üstü nedeniyle olabilir. İyice her iki örnek pedestali temizlemeye çabalayın ve yazılımı yeniden başlatmayı deneyin. Çok "dağınık" veya "düzensiz" olan bir spektrum da spektrometre ulaşan yetersiz ışık yoğunluğu yetersizliliğinden olabilir. Bunun oluşmasından şüphelenilirse, Bölüm 5.Işık yoğunluğunun ayarlanması ve kontrolü ve ışık katsayısının ayarlanması na bakınız.

43 7. Bakım ve Garanti 7.1 Temizleme Örnek taşınmasını önlemek için, en önemli şey örnekleme kol ve ölçüm pedestalini temiz tutmaktır. Herbir ölçüm tamamladıktan sonra, sadece sıradan bir kuru laboratuvar sileceği kullanarak örnekleme kolu ve ölçüm pedestalin her ikisinden örneği silin. De-iyonize su ile her iki pedestallerin son bir temizliğinin de kullanıcının son ölçümünden sonra yapılması tavsiye edilir. 7.2 Gereken değişim parçaları Genel olarak, flaş lambası periyodik olarak değiştirilmesi gerekli bir parçadır. Kalan ömrünü onaylamak için flaş lambası test etmek için bir yol yoktur.flaş lambası başarısız olduğunda, ışık çıkışı çok düzensiz olacaktır ya da tamamen durur. Bu olursa lütfen yerel distribütörü başvurun. 7.3 Dalga boyunun kalibrasyonu Dalga boyu yazılım her başlatıldığında xenon lamba spektrumları bilinen inişçıkışlara dayalı otomatik kalibredir. normal kullanım koşullarında kalibrasyon gerekli değildir; gerekirse lütfen yerel distribitöre başvurun.

44 7.4 Çözücü Uyumluluğu UVS-99 yaşam bilimleri laboratuvarlarında örnek çözücü içinde kullanılan.tipik çoğu çözücü ile uyumludur. Ancak, Hidroflorik Asit (HF) lerin tüm formları bağdaşmaz,florid iyonu olarak kuvars fiber optik kablo eriyecektir. 7.5.Ölçüm ve optik yüzeylerin zararlı maddelerden arındırılması Dekontaminasyon gerekli ise, bir dezenfektan çözeltisi, sodyum hipoklorit çözeltisinin % 5.25 (taze hazırlanmış ağartıcı) biyolojik olarak ölçüm pedestalleri üzerinde aktif materyallerin mevcut olduğundan emin olmak için kullanılabilir.metal örneğin pedestalleri paslanmaz çelikten yapılmıştır ve en yaygın laboratuar çözücülere karşı dirençlidir.

45 8. Ekler 8.1 Enstrüman özellikleri Standart yol uzunluğu 1 mm Kısa yol uzunluğu (yüksek konsantrasyon örneği için) 0.2 mm Örnek hacmi 1 ~ 2.5 ul Işık kaynağı Xenon flaş lambası Detector 3072-eleman lineer silikon CCD dizi detektörü Dalgaboyu aralığı 200 ~ 850 nm Dalga boyu doğruluğu 1 nm Dalgaboyu çözünürlüğü 3 nm (Hg 'de FWHM 546 nm) Absorbans hassas absorbans Absorbans doğruluğu % 2 (257 nm 'de absorbans 0.76' da) Ölçüm hassasiyeti 0.1 ~ 5 Abs. ± ~ 75 Abs. ±% 2 Ölçüm çevrim süresi 10 saniye Boyut W20 * D15 * H12 cm Örnek kaide malzemesi paslanmaz çelik Fiber optik kablo malzeme kuvars Gerilim 12 VDC Güç 6 W DsDNA algılama aralığı 2 ~ 3700 ng / ul Protein tespit miktarı 100 mg / ml Ağırlık 1,4 kg

46 8.2 Absorbans hesaplama UVS-99 Spektrofotometre "Kapalı" olduğu zaman, bir spektrum bir referans malzeme (boş) alınır ve dalga boyu tarafından ışık şiddeti bir dizi olarak saklanır. Işık numunesinin bir ölçümü alındığında,örnek üzerinden aktarılan ışığın yoğunluğu kaydedilir.(i sample) boş bir yoğunluk (I blank) ile birlikte, örnek hesaplamak için aşağıdaki denkleme göre absorbans (ABS) kullanılır: Böylelikle, her iki örneğin ışık yoğunluğu ve absorbans hesaplanması gerekmektedir. boşluğun belirli dalga boyunda 8.3 Konsantrasyon Hesaplama (Beer-Lambert Kanunu) Beer-Lambert denklemi konsantrasyon ile hesaplanan absorbansı ilişkilendirmek için kullanılır: A = E * b * c Bir absorbans birimi (A) 'de temsil edilen absorbans olduğunda, E, litre / mol cm birimleri ile dalga boyu bağımlı molar absorptivite katsayısı (ya da yok olma katsayısı), B yol uzunluğu cm dir ve mol / litre ya da molarite (M) içinde örneğin c konsantrasyonudur.