Petrifilm Maya ve Küf Sayım Plakalarında maya ve küf kolonilerini birbirinden ayırmak için aşağıda belirtilen genel özelliklere dikkat edin: MAYA

Transkript

1 Petrifilm Maya ve Küf Sayım Plakasında maya ve küf kolonileri kolayca sayılabilir. Gösterge boya, maya ve küf kolonilerini boyar, böylece kontrast sağlar ve sayım işlemini kolaylaştırır. Petrifilm Maya ve Küf Sayım Plakalarında maya ve küf kolonilerini birbirinden ayırmak için aşağıda belirtilen genel özelliklere dikkat edin: MAYA Küçük koloniler vardır. Kolonilerin kesin kenarları vardır. Kolonilerin rengi pembe-ten rengi ile mavi-yeşil arasındadır. Koloniler kalkık (3 boyutlu) görünebilir. Genelde koloninin ortasında odak noktası (koyu renkli merkez nokta) yoktur. Şekil l 'de gösterilen koloniler, tipik maya özelliklerine sahiptir: Küçük ve mavi-yeşil renkli koloniler, kesin çizgili kenarlar, odak noktası olmaması (maya sayısı = 44). KÜF Büyük koloniler vardır. Kolonilerin kenarları dağınıktır. Kolonilerin rengi değişkendir. (küfler kendi pigmentlerini üretebilir) Koloniler düz görünür. Genelde koloninin ortasında odak noktası bulunur. Şekil 2'de gösterilen koloniler, tipik küf özelliklerine sahiptir: Büyük ve farklı renklerde koloniler, dağınık kenarlar, odak noktası (küf sayısı = 27).

2 MAYA Şekil 3'te gösterilen Petrifilm Maya ve Küf Sayım Plakasında, sayılabilir miktarda küf kolonisi (büyük ve yeşil koloniler, dağınık kenarlar, odak noktası) ve çok sayıda maya kolonisi görülmektedir. Maya kolonileri küçük, ten rengi ve kesin kenarlıdır, odak noktası yoktur. (Maya sayısı = 480 (yaklaşık); küf sayısı = 21). Bir karedeki (l cm2) kolonilerin ortalama sayısını hesaplayın, sonra bu rakamı 30 ile çarparak plaka başına toplam sayıyı bulun. Petrifilm Maya ve Küf Sayım Plakasının aşılı alam yaklaşık 30 cm2 yüzölçümündedir. Şekil 4'te gösterilen Petrifilm Maya ve Küf Sayım Plakasında çok sayıda (sayılamayacak kadar çok - TNTC) maya kolonisi bulunmaktadır. Plakanın kenarında görülen küçük ve mavi renkli koloniler, bu plakayı TNTC küf içeren plakadan ayırmaktadır. Bazen Petrifilm Maya ve Küf Sayım Plakalarında çok sayıda maya kolonisi bulunur ve sadece kenarlarda mavi renkli görünür (Şekil 5). Bu durumda maya sayısı TNTC kabul edilir. Eğer Petrifilm Maya ve Küf Sayım Plakalarında üreme yoksa, üst tabakayı kaldırın ve buna yapışık jeli inceleyin. Eğer çok sayıda maya varsa, jelde beyaz koloniler görülür. Bu durumda, maya sayısı TNTC kabul edilir. (Maya sayısı = TNTC).

3 KÜFLER Şekil 6'da gösterilen Petrifilm Maya ve Küf Sayım Plakasında farklı pigmentasyon, dağınık kenarlı, odak noktası içermeyen koloniler görülmektedir. Bunlar büyüktür, çoğalmaktadır, spor oluşturmaktadır ve üst üste binmektedir. Kolay sayabilmek için plakayı bölümlere ayırın ve kolonileri birbirinden ayırmak için odak noktasına bakın (küf sayısı = 59). İşaretli bölümde 15 tane küf bulunmaktadır. Şekil 7'de gösterilen plakada farklı pigmentasyon ve silik kenarlar görülmektedir, bunun nedeni çok sayıda küf kolonisi bulunması ve sporlaşma meydana gelmesidir. Odak noktalarını sayın. Gösterilen karede 4 koloni bulunmaktadır. (Küf sayısı = yaklaşık 120). Tüm plaka sayım yöntemlerinde olduğu gibi, kalabalık plakalarda olağandışı koloni özellikleri görülebilir. Doğru sayım yapabilmek için uygun şekilde sulandırma yapmak gerekir. Şekil 8'de gösterilen plakada ürün 1:10 oranında, Şekil 9'da gösterilen plakada ise aynı ürün l :100 oranında sulandırılmıştır. Şekil 9'da görülen koloniler küçüktür, soluktur ve çok sayıdadır, bu nedenle saymak zordur. Nesne biçiminde bir kabarcık görülmektedir. (Küf sayısı = TNTC). İstenilen sayım alanında ( arası koloni) koloni sayımı yapabilmek için ürünü sulandırırsanız daha kolay sayım yapabilirsiniz. Şekil 9'da gösterilen küfler büyüktür, dağınık kenarlıdır, odak noktaları vardır. (Küf sayısı = 58) Şekil 8'de gösterilen plaka çok kalabalık olduğu için küfler normal şekilde çoğalamamıştır.

4 FOSFATAZ REAKSİYONU Tüm canlı hücreler enzim fosfatazı içerir. Petrifilm Maya ve Küf Sayım Plakasında bulunan gösterge, fosfataz ile karşılaştığında çalışır, maya ve küf kolonilerim maviye boyar. Bazı ham veya işlenmiş gıda maddelerinde canlı hücreler (ve dolayısıyla fosfataz) bulunur, bu nedenle sö/ konusu mavi boya reaksiyonu meydana gelebilir. Söz konusu ürünlerde genelde iki tür renk reaksiyonu meydana gelmektedir: Düzgün mavi geri plan, veya yoğun mavi noktalar (genelde baharatlarda ve toz halinde ürünlerde görülür). Bir üründe bulunan doğal fosfatazın yol açtığı renk reaksiyonunu maya ve küf kolonilerinin yol açtığı renk reaksiyonundan ayırmak için aşağıda belirtilen özelliklere bakılır: SULANDIRMA: Mümkün ise numuneyi tekrar sulandırın, böylece mavi geri plan renk kaybolur ya da mavi noktaların sayısı azalır. PLAKADA KARIŞTIRMA: Numuneyi karıştırın, sonra 3-5 dakika çökmesini bekleyin, böylece genelde nokta halinde renk reaksiyonlarına yol açan büyük tanecik ler ortadan kaldırılır. İNKÜBASYON SICAKLIĞI: Plakaları uygun sıcaklıkta ( C) inkübe edin. Sıcaklık arttıkça enzim (fosfataz) reaksiyonları hızlanır. İNCELEME: İnkübasyon yaptıktan saat sonra Petrifilm Maya ve Küf Sayım Plakalarını inceleyin. Ürün renk değişiklikleri saat arasında meydana gelir. Renk değişikliği meydana gelmişse not edin, yorumlama sırasında bu notlara danışın. Şekil 11 'de gösterilen Petrifilm Maya ve Küf Sayım Plakası, test edilen numunede bulunan "doğal fosfataz"ın yol açtığı düzgün geri plan renge iyi bir örnektir. "Bulanık" görünüşün nedeni, plakada bulunan sulandırılmış üründeki taneciklerdir. Sayılamayak kadar çok (TNTC) maya ile küfü birbirinden ayırmak için plakanın kenarlarına dikkat edin (maya ve küf sayısı = 0). Bazı gıda maddelerinde bulunan "doğal fosfataz"ın yol açtığı yoğun mavi noktalar, Şekil 12'de gösterilmiştir. Bunların biçimlerine dikkat edin: Küçük noktalar veya düzensiz şekiller, düzensiz renkler (örneğin genelde soluk görünen koyu mavi) veya büyük taneciklerin kenarlarında bulaşma (maya ve küf sayısı = 0). Yoğun mavi nokta şeklinde renk reaksiyonlarının bir başka örneği Şekil 13'te verilmiştir. Burada noktalar çok parlak, küçük ve düzensiz şekillidir. Maya kolonileri küçüktür, mavi-yeşil renklidir, kenarları belirgindir. Küf kolonileri ise büyüktür, farklı renklerdedir, kenarları dağınıktır, merkez (odak) noktaları vardır (maya sayısı = 7; küf sayısı = 7).

5 Süre ve Sıcaklık Ürünlerin bozulmasına yol açabilecek türde mayaların ve küflerin çoğalabilmesi için inkübasyon süresinin ve sıcaklığının uygun olması gerekir. Söz konusu mayalar ve küfler genelde yavaş çoğalır, hangi yöntem kullanılırsa kullanılsın yüksek sıcaklıklara karşı duyarlıdır. Çoğalmanın uygun şekilde meydana gelmesini sağlamak için, Petrifilm Maya ve Küf Sayım Plakalarını 20 C-25 C sıcaklıkta (oda sıcaklığı) inkübe edin, 3 gün ve 5 gün sonra çoğalmayı inceleyin. Küf kolonileri tabakalar arasında çoğalır, bu nedenle Petrifilm plakaları incelendiğinde sporlar yerinden çıkmaz ve ek koloniler oluşmaz. Maya ve küf içeren plakaları daha yüksek sıcaklıklarda inkübe ederek sonuçları daha kısa zamanda almak mümkün değildir - bu durumda yanlış sonuçlar elde edilebilir, örnek olarak bkz. Şekil 15 ve 16'da gösterilen Petrifilm Maya ve Küf Sayım Plakaları. Bunlar aynı ürünü ve sulandırmayı içermektedir, fakat farklı sıcaklıklarda farklı sürelerde inkübe edilmiştir. Mikroskobik Farklılıklar Mayalar ve küfler birbirinden çok farklı organizmalardır, bunları makroskopik şekilde birbirinden ayırmak her zaman mümkün değildir. Tüm yöntemlerde en doğru ayırım mikroskopla inceleyerek yapılır. Kolonileri incelemek için ayırmak gerekirse üst tabakayı kaldırın, koloniyi jelden çıkarın. Koloniyi mikroskop lamı üzerinde bulunan bir damla steril suya aktarın,üzerine lameli örtün, sonra mikroskopla inceleyin. Oval biçimli şekiller varsa MAYADIR. Dal şeklinde, şerit şeklinde flamanlar(mycelium) varsa KÜFTÜR. Germinasyonun çeşitli evrelerinde KÜF.