Androloji ve Embriyoloji Laboratuar Uygulamaları S.EGE 2013

Ebat: px

Şu sayfadan göstermeyi başlat:

Download "Androloji ve Embriyoloji Laboratuar Uygulamaları S.EGE 2013"

Ebru Gökçek
7 yıl önce
İzleme sayısı:

1 Androloji ve Embriyoloji Laboratuar Uygulamaları S.EGE 2013

3 Patrick Steptoe ve Robert Edwards İlk IVF bebeği Louise Brown doğdu ICSI bebeği doğdu. Embriyo dondurma, IVM, In vitro maturasyon PB ve Blastomer, Trophoektoderm biopsisi ile PGT Preimplantasyon Genetik Tanı testleri

4 Androloji Laboratuarı: Spermiogram Ejakulatuar spermlerin ICSI ve IUI için hazırlanması, PESA, Mikroskobik TESE ve TESA Testikuler spermlerin incelenmesi ve hazırlanması, Spermlerin fertilizasyon kapasitesi, Sperm canlılık testleri.. Intra Uterin Inseminasyon..IUI

5 Embriyoloji Laboratuar uygulamaları IVF In vitro Fertilizasyon ICSI Intra sitoplazmik sperm injeksiyonu AHA Asisted hatching PGT için Embriyo Biopsi Embriyo dondurma: Vitrifikasyon yöntemi ile Gamet dokularının vitrifikasyonu: Onkolojik hastalarda Oosit ve ejakulat vitrifikasyonu

6 Embriyolarda HLA tiplemesi: Hasta çocuğun tedavisi için kemik iliği naklinin gerekli olduğu durumlarda, embriyolar HLA tipine göre ayıklanabilmekte ve hasta çocuğa HLA uyumlu olan embriyoların transferi yapılabilmektedir...

13 PB, Blastomer, Trofektoderm biopsisi

16 WHO Laboratory manual for the human semen Fifth edition, 2010 WHO, Dept. of Reproductive Health and Research

17 Parametre WHO 1999 WHO 2010 Semen hacmı > 2ml. 1.5 ml Toplam semen 40 x 10⁶ 39 x 10⁶ Sperm sayısı/ ml 20 x 10⁶ 15(12-16) x 10⁶ Total motilite % >%50 %40 Canlılık % 75 %58(55-60) Morfoloji %15 4 (3-4) ph Peroksidaz + Lökosit <1 x 10⁶ 1 x 10⁶

18 Sperm analizi Renk : opak beyaz Koku: atkestanesi Volüm: 2 ml. ph: 7.2 Viskozite, akışkan normal Sıvılaşma zamanı: dak. Sperm kons.: 20 mil./ml Total sperm sayısı: 40 mil. Motilite: Ejakulasyondan sonra 60 dak. içinde %50 veya daha fazlası Vitalite: %75 den fazlası motil Beyaz küreler: 1 mil dan az olmalı, Aglutinasyon: şiddet ve formu belirtilmeli, MAR testi % 50 den az olmalı, Döküntü, bakteri, lokosit,kan ve immatür hücreler. WHO 2010

19 Örnek toplama; çalışma şartları Cinsel perhiz süresi 3-5 gün arası Masturbasyon yöntemi, Sıvılaşma zamanı : dakika Sayısı yetersiz örneklerde 2. kez örnek isteme, yada Frozen sperm. Kullanılan malzemelerin sperm toksik olmamalı.. Sperm toksik : siyah lastik Kültür ortamı, kullanılan inkübatör ( gaz karışımı ve 37 C ayarlı olmalı.

20 Makler Sayım Kamerası İnsan spermini hareketli iken saymak için geliştirilmişdir. IM da 20x büyültmede kullanılır. 0.1x0.1 mm lik 100 kareden oluşur. 10 kare sayıldığında milyon olarak / ml başına düşen sperm sayısını verir.

21 Sperm sayımı..

22 Sperm hareketliliği A- İleri hızlı hareket % B- İleri yavaş hareket % C- Olduğu yerde yada dairesel hareket % D- Hareketsiz sperm %

23 Sperm Morfolojisi Spermak boyası Papanicolaou, Shorr or Diff-Quik * Kruger Strict Criteria * WHO

24 Sperm Morfolojisi Sperm hücre yapısı: Baş: 4-5 µm uzunluk 2.5 µm genişlik Boyun: bağlantı parçası -proksimal sentriol : 5-7 µm Kuyruk: 55 µm Spermin aksonemi: 1 çift santral-9 çift Mt.(9+9+2)

25 Sperm morfolojisi: Sperm fonksiyonu Baş anomaliler -Büyük baş sivri- küçük- uzamış baş-vakuollü baş -Pin head piriform amorf baş-bisefalik baş -Round head/ akrozom yok -Küçük akrozom 2- Mid piece Boyun anomalileri-kırık boyun-sit.droplet, distal,proksimal 3- Kuyruk anomalileri-çift kuyruk-eksen dışında bağlı kuyruk-kıvrık kuyruk, 4-Mix anomali ( baş ve boyun) 5- Elonge spermatid 6- Germ hücresi

26 Normal morfolojide sperm yapısı: Normal sperm; Akrozom: başın %40-70 Vakuol>2, başın>%20 Orta kısım:başla eşit uz. Aks: baş- kuyruk düz. Sit. Droplet: <başın 1/3 Kuyruk Esas: 45 µm

27 Sperm morfolojisine etki eden faktörler: Viral enfeksiyonlar/ yüksek ateş Radyasyon Sigara Alkol-uyuşturucu Varikosel/ testiküler anomaliler Kruger Strict Criteria < %4 Infertil % 4-14 Subfertil >%14 Fertil

28 Semen sınıflama terminolojisi -Normozospermi -Oligozospermi -Asthenospermi -Teratospermi -Oligoasthenoteratospermi -Kriptozospermi -Azospermi -Aspermi -Polispermi

29 Sperm morfoloji bozuklukları Epididim patolojisi DNA defekt / kromozomal bozukluklar Immatür kromatin Anöploidi Fertilizasyon bozuklukları

33 Spermde Hemizona Testi Sperm antikorlarının tespiti Ig A,Ig M,Ig G ** MAR testi %50 / IBT %20 ** Zona-sperm bağlanma testi = Morfoloji %4 ** Hemizona test: Sperm Canlılık testı **Eosin Y- Nigrosin / tripanmavisi **HOST Testi ** Fruktoz testi: ngm/ml ** Post Coital Test:

34 Sperm sayısına göre ÜYT seçimi IUI için TMSS >5 milyon/ mot. %35-40 >36 yaş : 3 siklus IUI başarısı % IVF: oosit / ICSI : canlı sperm ( HOST) Mikrocerrahi ile PESA,TESE, TESA ve MESA: %10 T estiküler yetmezlik /biletral obstrüksiyon : %7

35 1992 Palermo ve ark. NOA da TESE- ICSI -NOA de TESE de sperm bulma % Gebelik başarı oranı % Germinal aplazi, maturasyon arrest %58

36 IUI Intra Uterin Sperm inseminasyonu

37 IUI için Sperm hazırlama teknikleri: Swimm-up tekniği: -Yukarı doğru yüzdürme - Standart yıkama ve yüzdürme Gradyan tekniği: % 90/ %40 -Mini gradyant tekniği : colloidal silica coated with silane Hams F 10/ Human Tubal Fluid/ EBSS+ protein *Santrifüj zamanı / Sperm hücre sayısı

38 Yoğunluğa göre sıralayıcı sol. Yönt :Gradient Yöntemi: Kolloidal / Silan parçacıkları silisle kaplıdır.. 1. Percoll; Pharmacia AB, Upsala, Sweden 2. İsolate; Irvine Scientific, Santa Ana, CA, USA 3. Pure sperm:nidakon, Goteborg Sweden.

39 İdeal sperm hazırlama metodu: -Hızlı basit ve ucuz olmalı Örnekteki tüm hareketli spermler elde edilmeli, Spermde fizyolojik değişime yol açmamalı, Ölü sperm yada bakteri içermemeli, Toksik madde içermemelidir.

40 Sperm. IUI

41 ocak Şubat Mart Nisan Mayıs Haziran 0 Sperm IUI

Benzer belgeler

Yardımcı üreme teknolojisi (YÜT) son yıllarda birçok infertil çiftin çocuk sahibi olmalarını sağlamaktadır.

İlknur M. GÖNENÇ Yardımcı üreme teknolojisi (YÜT) son yıllarda birçok infertil çiftin çocuk sahibi olmalarını sağlamaktadır. Bilim adamları Miriam F. Menkin ve John Rock ın ilk olarak 1944 yılında bir