Anti-HCV (+)/ HCV-RNA (-) olgularda HCV-spesifik lenfosit yanıtının ELISPOT metodu ile saptanması

Ebat: px

Şu sayfadan göstermeyi başlat:

Download "Anti-HCV (+)/ HCV-RNA (-) olgularda HCV-spesifik lenfosit yanıtının ELISPOT metodu ile saptanması"

Nuray Fırat
6 yıl önce
İzleme sayısı:

Anti-HCV (+)/ HCV-RNA (-) olgularda HCV-spesifik lenfosit yanıtının ELISPOT metodu ile saptanması Uluhan Sili 1, Abdurrahman Kaya 2, Selda Aydın 3, Nur Hondur 4, Ali Mert 5, Fehmi Tabak 4, Reşat

1 Anti-HCV (+)/ HCV-RNA (-) olgularda HCV-spesifik lenfosit yanıtının ELISPOT metodu ile saptanması Uluhan Sili 1, Abdurrahman Kaya 2, Selda Aydın 3, Nur Hondur 4, Ali Mert 5, Fehmi Tabak 4, Reşat Özaras 4, Recep Öztürk 4 1 Marmara U niversitesi, Tıp Fakültesi, İnfeksiyon Hastalıkları ve Klinik Mikrobiyoloji AD, İstanbul 2 Süleymaniye Kadın Doğum ve C ocuk Hastalıkları EAH, İnfeksiyon Hastalıkları Bo lumü, İstanbul 3 İstanbul Medipol U niversitesi, Tıp Fakültesi, İnfeksiyon Hastalıkları ve Klinik Mikrobiyoloji AD, İstanbul 4 İstanbul U niversitesi, Cerrahpaşa Tıp Fakültesi, İnfeksiyon Hastalıkları ve Klinik Mikrobiyoloji AD, İstanbul 5 İstanbul Medipol U niversitesi, Tıp Fakültesi, İç Hastalıkları AD, İstanbul

2 Hepatit C virüsü Dünya nüfusunun ~%3 ünün (~170 milyon) HCV ile enfekte olduğu tahmin edilmektedir 3-4 milyon yeni infeksiyon / sene U lkemizdeki prevelansı ~%1 (~700,000) Akut HCV infeksiyonunun %55 - %85 i kronikleşmektedir Son yıllarda etkin tedavisi var ancak pahalı Henüz aşısı yok

3 HCV virolojisi Flaviviridae ailesi Lipid zarflı, 9500 nt, (+) ssrna genom

4 HCV poliproteini 3000 aa

5 Anti-HCV (+) liğine yaklaşım Anti-HCV (+) TEKRAR 2x (-) (+) STOP HCV-RNA (-) (+) Kronik KC Hastalığı TEKRAR (-) Yanlış seropozitiflik Kontrol edilmiş akut HCV

6 Soru: Anti-HCV (+) olup HCV-RNA (-) olması yanlış seropozitifliği mi, yoksa akut HCV nin Metot: başarılı kontrolünü mü go sterir? HCV-spesifik lenfosit yanıtının ELISPOT metodu ile saptanması spesifik hücresel immün yanıt varlığı başarıyla kontrol altına alınmış geçirilmiş akut HCV infeksiyonu

7 Metot Periferik kan mononükleer hücrelerin (PKMNH) ayrıştırılması HCV peptitleri (core, NS2 ve NS3) ile uyarma Pozitif kontrol: influenza NP1 peptitleri Antijen spesifik lenfositlerin çoğalması (2 hafta) ELISPOT metodu ile antijen spesifik lenfositlerin saptanması

8 T-lenfosit yanıtı Lenfositler resepto rleri aracılığıyla hedef hücre yüzeyindeki peptid (epitop)-majör histokompatibilite kompleksini (MHK) tanırlar

9 Peptid dizini (epitop kütüphanesi) 15 aa uzunlukta, birbirleriyle 11 aa örtüşen peptid dizinleri Olası tüm CD4 ve CD8 epitoplarının kapsanması Viral antijen

10 HCV spesifik lenfositlerin çoğaltılması PKMNH 0. gün Lenfosit soyu 14. gün ELISPOT

11 ELISPOT IFN-γ salgılayan hücrelerin sayılması Aktifleşen lenfositler spesifik oldukları antijenle karşılaştıklarında IFN-γ salgılarlar Yakalanan IFN-γ nokta (spot) oluşturur LENFOSİT IFN- IFN- IFN-

12 ELISPOT spot-forming unit (SFU) nokta oluşturan birim

14 Çalışma Grubu Anti-HCV (+)/ HCV-RNA (-) n=8 Kalıcı Virolojik Yanıtlı Grup n=7 Kronik HCV İnfeksiyonlu Grup n=5 Erkek/Kadın, n (%) 4/4 (50/50) 1/6 (14/86) 3/2 (60/40) Yaş, sene 51.5 (29 67) 52 (31 56) 57 (22 78) ALT, IU/L 20 ( ) 15.7 (6.7 22) 67.7 (20 202) Histolojik Aktivite Endeksi NA 5.5 (0 11) 5 (4 6) Fibroz NA 1 (0 5) 2 (1 2) Anti-HCV test edilme sayısı HCV-RNA test edilme sayısı 2 (2 6) NA NA 2 (2 3) NA NA Tedavi öncesi HCV-RNA, NA NA IU/mL ( ) En son HCV-RNA, IU/mL 0 (0 0) 0 (0 0) ( ) Genotip, n NA 1a (1), 1b (5), 3a (1) 1b (5)

İnfluenza spesifik lenfosit yanıtı 300 250 İnfluenza yanıtlı hücreler (SFU/ 100,000) 200 150

15 İnfluenza spesifik lenfosit yanıtı İnfluenza yanıtlı hücreler (SFU/ 100,000) * 0 Anti-HCV (+) HCV-RNA (-) 8/8 Kalıcı Virolojik Yanıtlı 6/7 Kronik HCV İnfeksiyonlu 5/5

HCV spesifik lenfosit yanıtı 120 100 HCV yanıtlı hücreler (SFU/ 100,000) 80 60 40 20 *

16 HCV spesifik lenfosit yanıtı HCV yanıtlı hücreler (SFU/ 100,000) * 0 Anti-HCV (+) HCV-RNA (-) 5/6 Kalıcı Virolojik Yanıtlı 7/7 Kronik HCV İnfeksiyonlu 4/5

17 SONUÇ Anti-HCV (+) olup HCV-RNA (-) olan ve tıbbi o zgeçmişinde akut hepatit geçirme o yküsü olmayan 6 hastanın 5 inde (%83) HCV-spesifik lenfosit yanıtı go sterilmiştir Bulgularımız bu hastaların immün sistemlerinin akut HCV infeksiyonunu kontrol edebildiği sonucunu desteklemektedir Bu başarılı lenfosit yanıtlarının daha detaylı incelenmesi aşı geliştirilmesine katkı sağlayabilir

18 TEŞEKKÜR Peptit dizinleri Asst. Prof. Ann Leen, Ph.D. Center for Cell and Gene Therapy, Baylor College of Medicine, Houston, Texas İstanbul U niversitesi, Bilimsel Araştırma Projeleri Birimi, BYPS-1-26/ no lu Prof. Dr. Recep Öztürk adına olan proje desteği Otomatize ELISPOT okuyucusu Biolog Serpil Efe, Prof. Dr. Ahmet Soysal, Prof. Dr. Mustafa Bakır Marmara U niversitesi, Tıp Fakültesi, C ocuk Hastalıkları AD, C ocuk İnfeksiyon Hastalıkları BD İstatistik Analiz Prof. Dr. Pınar Ay, Marmara U niversitesi, Tıp Fakültesi, Halk Sağlığı AD

19 İlginiz için Teşekkürler! Sorularınız? Yrd. Doç. Dr. Uluhan Sili Marmara U niversitesi, Tıp Fakültesi İnfeksiyon Hastalıkları ve Klinik Mikrobiyoloji AD uluhan@hotmail.com uluhan.sili@marmara.edu.tr

20 Antijen Spesifik Lenfosit Yanıtını Saptama Metodu + HCV-peptit karışımı (core, NS2, NS3) HCV yanıtlılar boş fito pep. HCV INF NP pep. PKMNH days ELISPOT + Influenza NP1 peptit Influenza yanıtlılar

21 Antijen Spesifik Lenfosit Yanıtı Çalışma Grubu- HCV Kalıcı Virolojik Yanıt- HCV Kronik HCV Enfeksiyonu- HCV YK NE MG CK HA YC HB MT 0 GÖ AT SG SÇ BY GE ŞD 0 FÜ RG İK KE MİY Çalışma Grubu- Influenza Kalıcı Virolojik Yanıt- Influenza Kronik HCV Enfeksiyonu- Influenza YK NE MG CK HA YC HB MT 0 GÖ AT SG SÇ BY GE ŞD 0 FÜ RG İK KE MİY

Benzer belgeler

Dr. Funda Şimşek SB Okmeydanı EAH Enfeksiyon Hastalıkları ve Klinik Mikrobiyoloji

Dr. Funda Şimşek SB Okmeydanı EAH Enfeksiyon Hastalıkları ve Klinik Mikrobiyoloji Sunum Kapsamı HCV tanımı HCV enfeksiyonunun seyri Epidemiyoloji HCV genotiplerinin önemi, dağılımı Laboratuvarımızdaki