Diyabetik Sıçanlarda Vitre İçine Uygulanan Mezenkimal Kök Hücrelerin Etkisi

Transkript

1 Diyabetik Sıçanlarda Vitre İçine Uygulanan Mezenkimal Kök Hücrelerin Etkisi Eren Çerman 1, Ülkü Arığ 2, Muhsin Eraslan 1, Fatih Mahmut Bulut 2, Özlem Şahin 1, Selvinaz Özkara 3, Fügen Vardar Aker 3, Erdal Karaöz 4, Tunç Akkoç 2 1 Marmara Üniversitesi Göz Hastalıkları Anabilim Dalı 2 Marmara Üniversitesi,Çocuk Sağlığı ve Hastalıkları Ana Bilim Dalı Pediatrik Allerji İmmunoloji Bölümü,İstanbul 3 Haydarpaşa Numune Eğitim ve Araştırma Hastanesi,Patoloji Ana Bilim Dalı,İstanbul 4 Kocaeli Üniversitesi,Kök Hücre ve Gen Tedavileri Araştırma ve Uygulama Merkezi,Kocaeli

2 Çalışma içerisinde adı geçen herhangi bir ticari firmayla finansal bağlantım yoktur.

3 Diyabetik Retinopati Yaşabağlı Maküla Dejeneransı Stargardt hastalığı Retinitis Pigmentoza

4 2011

5 Prize Presentation Giriş Nobel ödülünü aldıktan sonra retina rejenerasyonu üzerinde çalışacaklarını açıkladı. 6 kişi üzerinde klinik çalışmaya başlandı. Sonuçları henüz açıklanmadı. Shinya Yamanaka 2012 yılında Nobel Tıp ödülünü almıştır.

6

7 Sıçan Kemik İliği Kaynaklı MKH lerin İnvert Mikroskop Görüntüsü, Pasaj 3 (x20 Büyütme)

8 Kök Hücrelerin akım sitometrisi ile karakterizasyonu

9 Deney Hayvanları ve kullanılan ilaçlar Erkek, >300 gr Rattus norvegicus albino Wistar 12 saat gündüz gece adaptasyonunda Anestezi için Diyabet için Periton içine 100 mg/kg ketamin hidroklorid 10 mg/kg xylazine Periton içine 60mg/kg streptozotosin (STZ) 20 μl solüsyonda 200x10 3 Mezenkimal Kök hücre içeren solüsyon vitre içine enjekte edildi

10 1. hafta 3. hafta Kontrol 12. hafta MKH Diyabet STZ SF 3. hafta MKH Kontrol SF Paired t test, Wilcoxon

11 ERG 12 saat adaptasyon sonrası skotopik ERG MetroVison ERG cihazı kullanıldı Flaş ERG Gümüş elektrodlar Viscotears, Mydfrin, Tropamid

12 Işık gücü ve ERG -25db = 0.01 cd.s.m db = 0.1 cd.s.m -2-5 db = 0.3 cd.s.m -2 RC = 3 cd.s.m -2 OP= 3 cd.s.m -2

13 Gaussian dağılım fomülü a dalgasının Tahmini tmax Vmax

14 b Dalgasının Tahmini Gecikmiş Gaussian dağılım fomülü

15 Osillatuar Potansiyel : Gabor Fonksiyonu

16 Osillatuar Potansiyel : Gabor Fonksiyonu

17 Immünohistokimya Vimentin (Müller) Glial Fibriller Asidik Protein (GFAP) (Müller) Rodopsin Dapi Yapılan boyamada diyabet ile kontrol grubu araştırmacılar kör olarak çalışıldı ve boyanma istatistiksel olarak araştırıldı.

18 Immünfloresans GFP ile MKH'ler. Vimentin ve GFAP ile Müller hücreleri İki sekonder antikor kullanılarak GFP ekspresyonu gösteren hücrelerin hangi retina hücresine dönüşmüş olabileceği araştırıldı. Rodopsin ile fotoreseptörler Dapi ile hücre çekirdekleri işaretlendi.

19 SONUÇLAR VE TARTIŞMA

20 68 Wistar Albino ratın 148 ERG sonucu incelendi. 24 ratın 48 gözüne ait ERG 27 adet 12 haftalık diyabetik ratın 54 ERG Tedaviden sonra 1. haftada 7 ratın 14 gözüne ait ERG 2. Haftada 13 ratın 26 gözüne ait ERG 3. Haftada 5 ratın 10 gözüne ait ERG

21 Kontrol ERG - Diyabetik ERG Ortalama 3 cd.s.m -2 ışık gücündeki ERG p<.001 p<.001 Kontrol Diyabet Ortalama Osilatuar Potansiyel Dalgası SumOP ms: p=0.045 SumOP uv: p=0.03 Kontrol Diyabet paired T test

22 Kontrol Diyabetik MKH Sham Kontrol Diyabet MKH SF Zaman (ms) p=0.26

23 Amplitüd (uv) Kontrol Diyabetik Sham MKH Zaman (ms)

24 Ortalama ışık yoğunluğu- cevap diyagramı

25 Işık yoğunluğuna göre 12 haftalık diyabet boyunca yapılan 3 aylık takipte ERG bulguları

26

27 Immünohistokimya : Vimentin Diyabetik ratlarda anlamlı derecede yükselmiş vimentin ekspresyonu gözlendi MKH enjekte edilen ratlarda hasta kontrole göre anlamlı fark gözlenmedi

28 Immünohistokimya : GFAP Diyabetik ratlarda anlamlı derecede yükselmiş GFAP ekspresyonu gözlendi MKH enjekte edilen ratlarda hasta kontrole göre anlamlı gliozis azalması gözlendi (p<0.01)

29 Immünohistokimya : Rodopsin Diyabetik ratlar ile kontrol ratlar arasında anlamlı fark gözlenmedi.

30 Shame enjekte edilen ratlarla GFP işaretli MKH enjekte edilen rat retinasında GFP ekspresyonu

31 Ganglion hücre tabakasında GFP ve GFAP koekspresyonu

32 Ganglion hücre tabakasında GFP ve GFAP koekspresyonu

33

34

35 Sham MSC

36

37 Bulgularımız vitre içine enjekte edilen kemik iliği kaynaklı mezenkimal kök hücrelerin ağırlıklı olarak retinanın Müller ve Mikroglia gibi gliyal hücrelerine dönüştüklerini göstermektedir.

38 Diyabette Müller hücre apoptozu Müller hücrelerinin diyabette artmış GFAP ekspresyonu yaptığı (reaktif gliosis ) Müller hücrelerinin invert retinada ışığı alt tabakalara ileten optik fiber gibi davrandığı Sinapslarda kılıf görevi gördüğü Müller hücrelerinin balıklarda yeniden programlanarak kök hücrelere dönüştüğü ve daha sonra retinanın diğer hücrelerine dönüşebildiği gösterilmiştir.

39 Teşekkürler...