Cisplatine Bağlı Akut Böbrek Yetersizliğinde İnterleukin-33 ün Rolü Uzm. Dr. Kültigin Türkmen S.Ü.M.T.F Nefroloji B.D
Konuşmanın Akışı Genel bilgiler Cisplatine bağlı ABY IL-33 Cisplatine bağlı ABY de IL-33 Böbrekte IL-33 ün yerleşim yeri IL-33 verilmesinin siplatine bağlı ABY deki etkisi Wild-type farelerde CD4 knockout farelerde Soluble ST2 füzyon protein enjeksiyonu yoluyla IL-33 inhibisyonunun siplatine bağlı ABY deki etkisi
Cisplatine bağlı ABY modeli Renal endoteliyal and proksimal tubular epitheliyal hücreler Cisplatinin ana hedefleridir Apopitosiz, nekrosiz ve inflamasyon önemli patofizyolojik mekanizmalarıdır Apopitosizin temel enzimi olan caspase-3 düzeyleri artmıştır CD4 T lenfositler renal hasar oluşumunda en önemli düzenleyici hücrelerdir
Konuşmanın Akışı Genel bilgiler Cisplatine bağlı ABY IL-33 Cisplatine bağlı ABY de IL-33 Böbrekte IL-33 ün yerleşim yeri IL-33 verilmesinin siplatine bağlı ABY deki etkisi Wild-type farelerde CD4 knockout farelerde Soluble ST2 füzyon protein enjeksiyonu yoluyla IL-33 inhibisyonunun siplatine bağlı ABY deki etkisi
IL-33 IL-33, IL-1 ailesine ait bir proinflamatuar sitokindir (Schmitz et al, Immunity, 2005) Endoteliyal hücreler, deri, akciğer ve gastrointestinal epiteliyal hücrelerin çekirdeğinde yaygın olarak bulunur 31 kda uncleaved IL-33 biyolojik olarak aktif formudur Caspase-3 aracılı proteolizis ile 18-22 kda ağırlığındaki cleaved inaktif formuna dönüştürülür
IL-33, bir alarmin molekülüdür Endojen tehlike sinyalidir İnfeksiyon ya da doku hasarına cevap olarak çeşitli hücrelerden hücre dışı ortama salınırlar İmmün sistemi aktive ederek (T helper 1 T helper 2 dönüşümü) hasarı kontrol etmeye yardımcı olur
Konuşmanın Akışı Genel bilgiler Cisplatine bağlı ABY IL-33 Cisplatine bağlı ABY de IL-33 Böbrekte IL-33 ün yerleşim yeri IL-33 verilmesinin siplatine bağlı ABY deki etkisi Wild-type farelerde CD4 knockout farelerde Soluble ST2 füzyon protein enjeksiyonu yoluyla IL-33 inhibisyonunun siplatine bağlı ABY deki etkisi
Çalışmanın Amacı Cisplatine bağlı ABY modelinde IL-33 ün yerini ve patofizyolojik mekanizmasını göstermek ve potansiyel hasar verici rolünü ortaya koymaktır
Çalışmanın Tasarımı Cisplatin 15 ya da 25 mg/kg dozlarda WT farelere intraperitoneal olarak enjekte edildi ve ABY gelişmesi sağlandı Fareler Cisplatin injeksiyonu sonrası 1., 2. ve 3. günlerde sakrafiye edildi IL-33 düzeyleri ELISA ve WB ile araştırıldı IL-33 ün lokalizasyonu IF ile gösterildi Mikrovasküler endoteliyal (MS-1) hücreler 10 ve 50 um Cisplatine ve 50 um pancaspase inhibitörüne maruz bırakıldı IL-33 ün böbrek hasarını artırıcı olası rolü rekombinant IL-33 ve soluble ST2 füzyon protein enjeksiyonu sonrası araştırıldı IL-33 ün ana hedef hücresi olan CD4 T lenfositlerin rolü IHC ve flowcytometry yöntemleri ile CD4 knockout fareler de kullanılarak incelendi
IL-33 pg/ml (n=4) Serum IL-33 (pg/ml) düzeyleri 650 600 550 500 Mean and Standard Deviation 450 400 350 300 250 200 150 100 50 0 Veh day 1 Cis day 1 Cis day 2 Cis day 3 A B C D Column
IL-33 pg/ug (n=3) Tam böbrek ekstraktında IL-33 (pg/ug) düzeyleri (ELISA) Mean and Standard Deviation 0.492 0.451 0.41 0.369 0.328 0.287 0.246 0.205 0.164 0.123 0.082 0.041 0 Veh day A 1 Cis day B 1 Cis Cday 2 Cis Dday 3 Column
IL-33 pg/ug (n=3) Böbrek nükleer extraktında IL-33 (pg/ug) düzeyleri (ELISA) 1,6 1,2 0,8 0,4 0 Vehicle Day_1 Day_2 Day_3
IL-33/Actin Mean Intensity Artmış IL-33 düzeylerinin tam böbrek ekstraktlarında gösterilmesi (Western blot) Interleukin-33 (n=2) 22 KDa Vehicle Cisplatin 1 st day Cisplatin 2 nd day Cisplatin 3 rd day Actin 43 KDa 0,8 0,6 0,4 0,2 0 Vehicle Day_1 Day_2 Day_3
Artmış IL-33 düzeylerinin böbrek nükleer ve sitoplazmik ekstraktlarında gösterilmesi (Western blot)
MS-1 hücrelerinde Cisplatin sonrası artmış IL-33 düzeyleri (Western blot) Interleukin-33 (n=2) 22 KDa Vehicle Cisplatin 50 um Cisplatin 10 um Actin 43 KDa
MS-1 hücrelerinin kültür sıvılarında Cisplatin sonrası artmış IL-33 düzeyleri ve pancaspase inhibitörü sonrası görünümü (Western blot)
IFN-γ pg/ml IL-4 pg/ml Tam böbrek ekstraktlarında sitokin düzeyleri (ELISA) IFN-γ da azalma, Th1 hücrelerinin temel belirleyicisi IL-4 de artma, Th2 hücrelerinin temel belirleyicisi IFN-γ 0.6 pg/ml Mean and Standard Deviation 3 IL-4 Mean and Standard Deviation 3.1 pg/ml 0.573 0.532 0.492 0.451 0.41 0.4 pg/ml 2 2.2 pg/ml 0.369 0.328 0.287 0.246 0.205 1 0.164 0.123 0.082 0.041 0 A B Veh day 1 Column Cis day 3 0 n=4 p=0.06 n=4 A B Veh day 1 Column Cis day 3
Konuşmanın Akışı Genel bilgiler Cisplatine bağlı ABY IL-33 Cisplatine bağlı ABY de IL-33 Böbrekte IL-33 ün yerleşim yeri IL-33 verilmesinin siplatine bağlı ABY deki etkisi Wild-type farelerde CD4 knockout farelerde Soluble ST2 füzyon protein enjeksiyonu yoluyla IL-33 inhibisyonunun siplatine bağlı ABY deki etkisi
ril-33 enjeksiyonunun (4 μgr/gün toplam 7 gün) böbrek fonksiyonlarına etkisi (serum kreatinin düzeyleri) 0,6 0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 0 ril33 SF
ril-33 enjeksiyonunun (2 μgr/gün toplam 3 gün) düşük doz Cisplatin uygulanan WT farelerde böbrek fonksiyonlarını bozması (serum kreatinin düzeyleri) 1 0,9 0,8 0,7 0,6 0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 0 CIS+VEH CIS+IL-33
ril-33 enjeksiyonunun (2 μgr/gün toplam 3 gün) düşük doz Cisplatin uygulanan WT farelerde böbrek fonksiyonlarını bozması (serum kreatinin düzeyleri) 2 1,8 1,6 1,4 1,2 1 0,8 0,6 0,4 0,2 0 Cis 15+Veh Cis 15+IL-33
ril-33 enjeksiyonunun (2 μgr/gün toplam 3 gün) düşük doz Cisplatin uygulanan CD4 KO farelerde böbrek fonksiyonlarına etkisi (serum kreatinin düzeyleri) 0,9 0,8 0,7 0,6 0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 0 CD4 KO+IL33 CD4 KO+Veh
ril-33 enjeksiyonunun (2 μgr/gün toplam 3 gün) düşük doz Cisplatin uygulanan WT ve CD4 KO farelerde böbrek fonksiyonlarına etkisi (serum kreatinin düzeyleri) 1,20 1,00 0,80 0,60 0,40 0,20 0,00 WT+VEH+15 CIS CD4 KO+VEH+15 CIS CD4 KO+IL-33+15 CIS WT+IL33+15 CIS
IL-33 enjeksiyonunun düşük doz Cisplatin uygulanan WT farelerde CD4 T lenfosit düzeylerini artırması (immun histokimyasal boyama) IL-33 enjeksiyonu + düşük doz Cisplatin SF enjeksiyonu + düşük doz Cisplatin
IL-33 enjeksiyonunun düşük doz Cisplatin uygulanan WT farelerde CD4 T lenfosit düzeylerini artırması (flowcytometry) IL-33 enjeksiyonu + düşük doz Cisplatin SF enjeksiyonu + düşük doz Cisplatin
Konuşmanın Akışı Genel bilgiler Cisplatine bağlı ABY IL-33 Cisplatine bağlı ABY de IL-33 Böbrekte IL-33 ün yerleşim yeri IL-33 verilmesinin siplatine bağlı ABY deki etkisi Wild-type farelerde CD4 knockout farelerde Soluble ST2 füzyon protein enjeksiyonu yoluyla IL-33 inhibisyonunun siplatine bağlı ABY deki etkisi
Soluble ST2 füzyon protein enjeksiyonu (100 μg/gün toplam 3 gün) sonrası böbrek fonksiyonlarının korunması (serum kreatinin düzeyleri) 3 2,5 2 1,5 1 0,5 0 ST2 CIS 20 VEH CIS 20
ST2 füzyon protein enjeksiyonu sonrası CD4 T lenfositlerin gösterilmesi (immün histokimyasal boyama) sst2 enjeksiyonu + Cisplatin SF enjeksiyonu + Cisplatin
Soluble ST2 füzyon protein enjeksiyonu sonrası CD4 T lenfosit oranları (flowcytometry) sst2 enjeksiyonu + Cisplatin SF enjeksiyonu + Cisplatin
Özet IL-33 böbrekte endoteliyal hücrelerde yerleşik olarak bulunur Cisplatin, nekrotik endotel hücrelerden ortama salınan sistemik ve lokal bir uncleaved formda IL-33 cevabına yol açar WT farelere ril-33 verilmesi Cisplatine bağlı akut nefrotoksisiteyi artırırken, CD4 KO fareler bundan korunmuştur Soluble ST2 füzyon proteinle tedavi edilmiş fareler Cisplatine bağlı ABY den korunmuştur
Sonuç IL-33, Cisplatine bağlı ABY modelinde önemli bir patofizyolojik role sahiptir