CRYPTOCOCCUS TÜRLERĠNĠN ĠDENTĠFĠKASYONU Süleyha HĠLMĠOĞLU POLAT Ege Üniversitesi Tıp Fakültesi Tıbbi Mikrobiyoloji Anabilim Dalı
Cryptococcus türleri 38 40 tür İnsanda infeksiyon etkeni: - C. neoformans - C. laurentii - C. albidus - C. uniguttulatus - C. adeliensis -..
Cryptococcus neoformans 4 serotip? - C. neoformans var. neoformans Serotip A, D, AD - C. neoformans var. gattii Serotip B, C - C. neoformans var. grubii - Serotip A??
Mikrobiyolojik inceleme için gelen örnekler Beyin Omurilik Sıvısı (BOS) Balgam Kan İdrar Prostat sıvısı Doku
BOS ta Cryptococcus Her BOS örneğinden mutlaka: - Mikroskobik inceleme yapılmalı * Direkt * Çini mürekkebi - Kriptokok antijeni aranmalı
BOS ta Cryptococcus Çini mürekkebi Kalkoflor beyazı
BOS ta Cryptococcus antijeni Olumlu Olumsuz
Deri kazıntı örneğinde çini mürekkebi ile kapsüllü maya blastosporları
Kan kültürü şişesinden hazırlanan Gram preparasyonda Cryptococcus
Mutlaka: Kültür Ġki Sabouraud-dekstroz agar (SDA), Bir Staib agar siklohekzimitsiz (26 ve 35 o C) (26 o C) Bir Kanlı agar a ekim (35 o C) *** Örnek miktarı yeterli ise olabildiğince fazla SDA plağa ekim yapılması üretilme şansını artırır
Kültür Sabouraud-dekstroz agar (SDA) - 30-35ºC ( 37 o C de daha yavaş) * C neoformans 37 o C de ürer patojenite - 24-48 saat faktörü!! - Krem renkli - Mükoid koloni Ġlk kuşku!!!
Kuşkulu maya kolonisi identifikasyonu Kuşkulu koloni Germ tüp testi Pozitif: Candida albicans Üre hidrolizi testi Olumsuz Olumlu
Kuşkulu maya kolonisi identifikasyonu Üre hidrolizi testi olumsuz Pirinç unu Tween 80 agar Klamidospor Var Yok Candida albicans Psödohif
Kuşkulu maya kolonisi identifikasyonu Psödohif Var Yok Gerçek hif Var Yok Blastospor Candida spp. Artrokonidyum Annelides Blastoschizomyces spp.
Kuşkulu maya kolonisi identifikasyonu Artrokonidyum Var Yok Gerçek hif Geotrichum spp. Candida veya Cryptococcus dışı maya
Kuşkulu maya kolonisi identifikasyonu Üre hidrolizi testi olumlu Pirinç unu Tween 80 agar Psödohif Var Yok Artrokonidyum Renk
Kuşkulu maya kolonisi identifikasyonu Üre hidrolizi olumlu, pödohif var Artrokonidyum Var Yok Blastosporlar Trichosporon spp. Candida krusei, Candida lipolytica ve diğerleri
Kuşkulu maya kolonisi identifikasyonu Üre hidrolizi testi olumlu, pödohif yok Renk Pembe Beyaz Rhodotorula spp. Nitrat +, İnozitol Cryptococcus spp.
Kuşkulu maya kolonisi identifikasyonu Üre hidrolizi testi olumlu, pödohif yok, beyaz koloni Cryptococcus spp. SDA da (37ºC) ve Staib agarda (26ºC) üreme Staib agarda beyaz koloni Cryptococcus spp. Staib agarda kaverengi koloni Cryptococcus neoformans Nitrat -, İnozitol +
Kuşkulu maya kolonisi identifikasyonu Cryptococcus neoformans Karbonhidrat asimilasyon Canavanine-glycine-bromthymol agar testleri (API 20C vaya AUX, RapID, YeastID, Üreme yok Üreme var Vitek,..) C neoformans C neoformans var. neoformans var. gattii Serotiplendirme
Kültürden direkt preparasyon Tomurcuklanan maya hücreleri 5-15 μm
Çini mürekkebi preparasyon Kapsül Tomurcuklanan maya hücresi
Kapsül doğada ince dokuda çapı artıyor Kent L. Buchanan and Juneann W. Murphy
Kültür Staib agar (Bird Seed Agar veya Caffeic Acid Agar) - Beşinci gün - Kahverengi
Staib agar (Fenol oksidaz testi) Kreatininli Kreatinsiz
Kültür Staib agarda doğadan izolasyon
Üre hidrolizi Christensen urea agar - 4 saat Sıvı by. 15 dk
Pirinç unu Tween 80 agar Yuvarlak, köşegenimsi blastosporlar Hif yok Nadiren psödohif
Karbonhidrat asimilasyon testi
C. neoformans - C. gattii ayrımı Canavanine-glycine-bromthymol blue (CGB) agar (C. gattii = ürer ve besiyerini 24 saat 5 günde maviye dönüştürür) (C. neoformans = üremez, besiyeri sarı)
C. neoformans - C. Gattii ayrımı Crypto-check serotiplendirme kiti
C. neoformans - C. gattii ayrımı C. neoformans Yuvarlak blastospor Mükoit veya mat koloni Kanattlı dışkısı içeren toprakta Staib agarda açık kahve (sütlü çikolata) rengi koloniler CGB agarda üreyemez C. gattii Eliptik blastospor Koloniler daha mükoit Ökaliptus ağaçlarının bulunduğu toprakta Staib agarda koyu kahve (bitter çikolata) rengi koloniler CGB agarda ürer
Güvercinli çocuk (Picasso)