EkA-01 Tplam Mezfil Aerb Bakteri Sayýmý 1mL 10 g (ml) gýda, 90 ml MRD (Merck 1.12535) ile hmjenize edilir. Gerekli seyreltmeler yapýlýr. Sývý gýdalar dðrudan analize alýnabilir. PCA (Merck 1.05463) besiyerine ekim yapýlýr. Petri kutularý amaca göre 28 ºC ya da 37 ºC'da 48 saat inkübasyna býrakýlýr. Ýnkübasyn snunda besiyerinde luþan tüm klniler sayýlýr, gýdadaki tplam mezfil aerb bakteri sayýsý hesaplanýr. Petri kutularý tklavlandýktan snra yýkanýr/atýlýr. 335
EkA-02 Klifrm Bakterilerin Sayýlmasý; Katý Besiyeri (ISO 4832) 10 g (ml) gýda, 90 ml MRD (Merck 1.12535) ile hmjenize edilir. Sývý gýdalar dðrudan analize alýnabilir. VRB Agar (Merck 1.01406) besiyerine ekim yapýlýp, ikinci kat VRB ilave edilir. Petri kutularý 30-32 C ya da 35-37 C'da 24 saat inkübasyna býrakýlýr. 1-2 mm çapýnda kýrmýzýmsý bir presipitat znu ile çevrili kyu kýrmýzý klniler sayýlýr. Sterilizasyndan snra petri kutularý yýkanýr/atýlýr. 336
EkA-03 Klifrm Bakterilerin Sayýlmasý; EMS Yöntemi (ISO 7725) 10 g (ml), gýda 90 ml MRD (Merck 1.12535) ile hmjenize -2-3 edilir. 10 ve katý gýdalarda 10 seyreltiler hazýrlanýr. Ýçlerinde Durham tüpü bulunan LST Brth (Merck 1.10266) -1-2 -3 besiyerinden; katý gýdalarda 10 ; 10 ve 10, sývý gýdalardan 0-1 -2 10 ; 10 ve 10 seyreltilerden lmak üzere 3'er tüpe 1'er ml ekim yapýlýr. Tüpler 35-37 C'da 24 saat inkübasyna býrakýlýr. Bulanýklýk ve Durham tüplerinde gaz luþumu pzitif larak deðerlendirilir. EMS tablsu kullanýlarak gýdadaki klifrm grup bakteri sayýsý hesaplanýr. Sterilizasyndan snra tüpler yýkanýr. 337
EkA-04 100 ml Suda Klifrm Bakteri ve E.cli Aranmasý 100 ml su örneði steril bir kaba alýnýr. Üzerine 1 pþet Readycult Clifrms (Merck 1.01298) ilave edilir. Çalkalanýp, 35-37 C'da 24 saat inkübasyna býrakýlýr. Besiyeri renginin yeþile dönüþmesi klifrm pzitif larak deðerlendirilir. Klifrm pzitif lan örnek, lþ bir yerde kýsa dalga bylu UV lambasý (Merck 1.13203) ile incelenir. Bunlardan flresan ýþýma verenler E. cli larak deðerlendirilir. Sterilizasyndan snra kullanýlmýþ malzeme yýkanýr. 338
EkA-05 Membran Filtrasyn Yöntemiyle Sularda Klifrm Bakteri Aranmasý 100 ml Su VAKUM 100 ml su, membran filtrasyn sisteminden geçirilir, filtre Lactse TTC Agar with Tergitl 7 (Merck 1.07680) üzerine yerleþtirilir. Filtrenin, bakterilerin tutulmuþ lduðu üst kýsmý Petri kutusuna yerleþtirmede yine yukarýda lmalýdýr. Petri kutusu tabaný üzerinde lacak þekilde 30-32 C ya da 35-37 C'da 24 saat inkübasyna býrakýlýr. Sarý-prtakal renkli klniler klifrm grup bakteri larak deðerlendirilir ve su örneðindeki klifrm grup bakteri sayýsý hesaplanýr. 339
EkA-06 E. cli Sayýlmasý; Katý Besiyeri 10 g (ml), gýda 90 ml MRD (Merck 1.12535) ile hmjenize edilir. Sývý gýdalar dðrudan analize alýnabilir. Flurcult VRB Agar'a (Merck 1.01406) ya da Chrmcult Clifrm Agar'a (Merck 1.10426) ya da Chrmcult TBX Agar'a (Merck 1.16122) ekim yapýlýr. VRB Agar ekiminde ikinci kat VRB Agar ilave edilir. Her ikisi de 35-37 C'da lmak üzere Flurcult VRB Agar 18 saat ve Chrmcult Clifrm Agar 24 saat inkübasyna býrakýlýr. Chrmcult TBX Agar ise 44 C'da 18-24 saat inkübe edilir. U.V. Flurcult VRB Agar'da 1-2 mm çapýnda kýrmýzýmsý bir presipitat znu ile çevrili kyu kýrmýzý ve kýsa dalga bylu UV lamba (Merck 1.13203) ile lþ bir yerde flresan veren klniler, Chrmcult Clifrm Agar'da 1-2 mm çaplý mavi-menekþe klniler, Chrmcult TBX Agar'da mavi-yeþil klniler sayýlýr ve gýdadaki E. cli sayýsý hesaplanýr. Sterilizasyndan snra petri kutularý yýkanýr/atýlýr. 340
EkA-07 E. cli Sayýlmasý; Hýzlý EMS Yöntemi 10 g (ml), gýda 90 ml MRD (Merck 1.12535) ile -2-3 hmjenize edilir. 10 ve katý gýdalarda 10 seyreltiler hazýrlanýr. Ýçlerinde Durham tüpü bulunan Flurcult LST Brth -1-2 (Merck 1.12588) besiyerinden; katý gýdalarda 10 ; 10-3 0-1 -2 ve 10, sývý gýdalardan 10 ; 10 ve 10 seyreltilerden lmak üzere 3'er tüpe 1'er ml ekim yapýlýr. Tüpler 35-37 C'da 24 saat inkübasyna býrakýlýr. U.V. U.V. U.V. Bulanýklýk ve Durham tüplerinde gaz luþumu görülen klifrm pzitif tüpler lþ bir yerde kýsa dalga bylu UV lambasý (Merck 1.13203) ile incelenir. Bunlardan flresan ýþýma verenler E. cli larak deðerlendirilir (bakýnýz; ek ABC). Flresan ýþýmadan emin lunmazsa tüplere 1 ml 1 N NaOH eklenip tekrar incelenir. EMS tablsu kullanýlarak gýdadaki E. cli sayýsý hesaplanýr. Sterilizasyndan snra tüpler yýkanýr. 341
EkA-08 Singlepath E.cli O157 Test Kiti Uygulama Þemasý 342
EkA-09 Singlepath Vertxins Test Kiti Uygulama Þemasý 343
EkA-10 Salmnella Aranmasý (ISO 6579) 25 g (ml) gýda, 225 ml TPS (Merck 1.07228) ile hmjenize edilir. Hmjenizat 35-37 ºC'da 16-20 saat inkübasyna býrakýlýr. Ýnkübasyndan snra Selenit Sistin (Merck 1.07709) ve RVS Brth (Merck 1.07700) selektif zenginleþtirme besiyerlerine ekim yapýlýr. Selektif zenginleþtirmede 10 ml RVS Brth'a ön zenginleþtirme kültüründen 0,1 ml eklenir ve inkübasyn 42-43 C'da 24 saat larak yapýlýr. SS Brth kullanýmýnda ise 100 ml besiyerine 10 ml ön zenginleþtirme kültürü ilave edilir ve 37 C'da 24 saat inkübasyna býrakýlýr. Her 2 selektif zenginleþtirme kültüründen ayrý ayrý lmak üzere Brilliant Green Fenl Red (BGFRL; Merck 1.10747) Agar ile labratuvarýn tercihine býrakýlan baþka bir selektif katý besiyerine sürme yapýlýr. Rambach Agar (Merck 1.07500), Xylse Lysine Dexychlate (XLD) Agar (Merck 1.05287) ve özellikle XLT 4 Agar (Merck 1.13919 ve Merck 1.08981) önerilmektedir. Petri kutularý 37 ºC'da 24 saat inkübasyna býrakýlýr. Tipik klniler varsa bunlardan 5 adedi ayrý ayrý lmak üzere Triple Sugar Irn (TSI) Agar (Merck 1.03915), Urea Brth (Merck 1.08483) ve Lysine Irn Agar (Merck 1.11640) besiyerinde tanýmlanýr. Salmnella için tipik klniler; BGFRL Agar'da etrafý parlak kýrmýzý bir zn ile çevrili, pembe kýrmýzý renkli, XLD Agar'da besiyeri ile ayný renkte, yarý saydam, bazen siyah merkezli, XLT4 Agar'da siyah renkli ve Rambach Agar'da kýrmýzý renklidir. Singlepath Salmnella da kullanýlabilir (bakýnýz; ek ABC). Çalýþmada kullanýlan bütün malzeme tklavlandýktan snra yýkanýr/atýlýr. 344
EkA-11 Singlepath Salmnella Test Kiti Uygulama Þemasý 25 g (ml) gýda 225 ml TPS (Merk 1.07228) besiyerine ilave edilir. Gerekirse hmjenizasyn 345
EkA-12 Listeria Aranmasý (ISO 11290) 25 g (ml) gýda, 225 ml 1/2 Fraser Brth (Merck 1.10398 ve Merck 1.10399) ile hmjenize edilir. Hmjenizat 30 ºC'da 24 saat inkübe edilir. Gýdadaki Listeria'nýn hasar görmüþ lduðu düþünülüyrsa selektif katkýsý ilave edilmemiþ Fraser Brth besiyerinde hmjenize edilip, 30 ºC'da 4 saat kendi halinde býrakýlýr. Daha snra selektif katký ilave edilip ayný sýcaklýkta 20 saat daha inkübe edilir. Bu sürenin snunda 10 ml tam Fraser Brth besiyerine 0,1 ml inküle edilir, paralel larak PALCAM Agar (Merck 1.11755 ve Merck 1.12122) ile Oxfrd Agar (Merck 1.07004 ve Merck 1.07006) besiyerlerine öze ile sürme yapýlýr. Tam kuvvette Fraser Brth 35-37 ºC'da 48 saat, PALCAM ve Oxfrd Agar 35-37 º C'da 24 saat inkübe edilir. Tam kuvvette Fraser Brth besiyerinden 24 ve 48 saatlerde ayný besiyerlerine sürme yapýlýr. 1/2 Fraser Brth besiyerinden yapýlmýþ ilk Petri kutularý deðerlendirilir. Listeria için tipik klniler; PALCAM Agar'da 1,5-2 mm çapýnda, zeytin yeþili gri renkli, bazen siyah merkezli ancak her zaman siyah znlu, Oxfrd Agar'da ise 2-3 mm çapýnda, siyahýmsý yeþil kahverengi, siyah znlu, çökük merkezlidir. Tipik klnilere hemliz, CAMP testi, ramnz ve ksilz testleri yapýlýr, Singlepath Listeria da kullanýlabilir (bakýnýz; ek ABC). Kullanýlmýþ tüm malzeme tklavlandýktan snra yýkanýr/atýlýr. 346
EkA-13 Singlepath Listeria Test Kiti Uygulama Þemasý 347
EkA-14 Singlepath Campylbacter Test Kiti Uygulama Þemasý 25 g gýda 225 ml ya da 25 ml gýda 200 ml Bltn Brth (Merck 1.00068 ve Merk 1.00069) besiyerine ilave edilir. Gerekirse hmjenizasyn yapýlýr. 348