Onclarity HPV Assay (04)

Transkript

1 (04) Onclarity HPV Assay Türkçe KULLANIM AMACI BD Onclarity HPV Assay (HPV Testi), yüksek riskli insan papillomavirüsü (HPV) tiplerinin kalitatif tespitine yönelik amplifiye edilmiş bir DNA testidir. Test, yüksek riskli tüm HPV tiplerini (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66 ve 68) tespit eder ve yüksek riskli altı tipin (HPV 16, 18, 31, 45, 51 ve 52) genotiplendirilebilmesini sağlar. BD Onclarity HPV Assay ile test edilen servikal örnekler arasında, BD Onclarity HPV Cervical Brush Collection Kit, (BD SurePath veya ThinPrep Pap testi için işlemden önce veya sonra çıkarılan bir alikotun kullanıldığı) BD SurePath Preservative Fluid ve PreservCyt Solution bulunmaktadır. BD Onclarity HPV Assay, BD Viper LT Sistemi ile gerçekleştirilir. ÖZET VE AÇIKLAMA Human papillomavirus (HPV), %50'si yaşamlarında belirli bir noktada genital HPV'si olan cinsel olarak aktif kişiler olmakla birlikte, dünyada en yaygın cinsel yolla bulaşan virüstür. İnsanlar çoğu kez enfekte olduklarını bilmezler ve virüsün diğer kişilere yayılmasını önlemek için önlemler almazlar. Genital yolu enfekte edebilen 40'tan fazla HPV tipi mevcuttur. 1 Pek çok durumda, HPV enfeksiyonları geçicidir ve vücut kendi kendine virüsü temizler. Ancak bazı durumlarda, virüs kalıcıdır ve normal hücrelerin kansere yol açacak şekilde anormal hale gelmesine neden olur. Bu onkojenik HPV tipleri yüksek riskli olarak sınıflandırılır ve HPV 16 ve 18'i içerir. Diğer tipler, kansere neden oluyor gibi görünmediği için düşük riskli olarak kabul edilir. Dünya Sağlık Örgütüne (WHO) göre, HPV her yıl yaklaşık kişinin ölümüne neden olan, dünya genelinde kadın kanser mortalitesinin en büyük ikinci nedenidir. Sadece Avrupa'da, hastalık her yıl kişinin ölümüne neden olmaktadır. 2 Servikal kanserlerin yaklaşık %70'inin HPV tip 16 ve 18'den kaynaklandığı tahmin edilmektedir. 3 Günümüzde Pap testleri, servikal hücrelerde değişiklikler söz konusu ise doktora bilgi verebilmektedir. Bu hücreler anormal ise, bu servikal değişikliklerin servikal kansere neden olabilen bir HPV suşundan kaynaklanıp kaynaklanmadığına karar vermek için HPV testi yapılabilir. Tüm moleküler testler farklı HPV tiplerini ayırt edemez. BD Onclarity HPV Assay, BD Viper LT Sistemi ile test edildiğinde yüksek riskli insan papillomavirüsü (HPV) tiplerinin kalitatif tespitine yönelik amplifiye edilmiş bir DNA testidir. Test, HPV tiplerini 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66 ve 68 tespit eder ve yüksek riskli tipler 16, 18, 31, 45, 51, 52 ve genotip grubuna göre rapor edilen diğer yüksek riskli genotiplerin eş zamanlı tanımlanmasına olanak tanır (P1: 33/58; P2: 56/59/66; P3: 35/39/68). BD Onclarity HPV Assay ile test edilebilen servikal örnekler arasında, BD SurePath Preservative Fluid (Koruyucu Sıvı), (BD SurePath Pap testi için işlemden önce veya sonra çıkarılan bir alikotun kullanıldığı) PreservCyt Solution (Solüsyon) (PreservCyt Pap testi için işlemden önce veya sonra çıkarılan bir alikotun kullanıldığı) ve BD Onclarity HPV Cervical Brush Collection Kit (Servikal Fırça Toplama Kiti) bulunmaktadır. PROSEDÜR İLKELERİ BD Onclarity Human Papillomavirus (HPV) Assay, BD SurePath Preservative Fluid (BD SurePath Pap testi için işlemden önce veya sonra çıkarılan bir alikotun kullanıldığı), PreservCyt Solution (PreservCyt Pap testi için işlemden önce veya sonra çıkarılan bir alikotun kullanıldığı) ve BD Onclarity HPV Cervical Brush Collection Kit, uygun reaktifler, BD Viper LT Sistemi ve BD FOX Ekstraksiyon ile kullanım için tasarlanmıştır. Matriksi, homojenize etmek, hücreleri parçalamak ve ekstrakte edilebilen ve çoğaltılabilen DNA'yı açığa çıkarmak için örneklere BD Pre-warm Heater'da (Ön Isıtma Isıtıcısı) bir ön ısıtma adımı uygulanır. Soğuttuktan sonra, örnekler başka bir kullanıcı müdahalesi olmadan, hedef DNA'nın ekstraksiyonu ve amplifikasyonunda yer alan tüm adımların gerçekleştiği BD Viper LT Sistemine yüklenir. Örnek, çözünür bir filmde ferrik oksit partikülleri içeren bir ekstraksiyon tüpüne aktarılır. Daha sonra, ph'ı düşürmek ve negatif yüklü DNA'ya bağlanan ferrik oksit üzerindeki pozitif yükü indüklemek için asit eklenir. Ardından partiküller ve bağlanan DNA mıknatıslarla ekstraksiyon tüpünün kenarlarına çekilir ve işlenen örnek atılmak üzere aspire edilir. Partiküller yıkanır ve saflaştırılmış DNA'yı ayrıştırmak için yüksek ph'lı bir elüsyon tamponu eklenir. Son olarak, eluatın ph'ını DNA amplifikasyonu için optimuma ayarlamak üzere nötralizasyon tamponu kullanılır. BD Onclarity HPV Assay, amplifikasyon primerleri ve gerçek zamanlı polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) kullanan floresan işaretli detektör probları kullanarak hedef DNA'nın eşzamanlı amplifikasyonu ile tespitini temel almaktadır. Reaktifler, 14 HPV genotipini ve insan beta globin genine ait DNA fragmanından oluşan örnekten türetilmiş bir dahili kontrolü tespit edebilen üç tüp (G1, G2 ve G3) içinde kurutulur. Her bir tek tüp, amplifikasyon primerlerini, floresan işaretli detektör problarını, DNA polimerazı, nükleotidleri ve ilgili testlere yönelik amplifikasyon için gerekli diğer reaktifleri içerir. BD Viper LT Sistemi, bir miktar saflaştırılmış DNA solüsyonunu her ekstraksiyon tüpünden, sonrasında kontaminasyonu önlemek için kapatılan üç BD Onclarity HPV PCR tüpüne (G1, G2 ve G3) pipetler. HPV DNA'nın varlığı veya yokluğu, sinyalin önceden belirlenen bir eşik değeri geçtiği PCR döngüsü ile belirlenir. Ayrıca test, örnek işlenmesi, ekstraksiyonu ve amplifikasyonunu değerlendirmek için dahili kontrol olarak bir insan beta globin geni fragmanını ekstrakte eder, amplifiye eder ve tespit eder. SAĞLANAN REAKTİFLER VE MALZEMELER: Her BD Onclarity HPV Assay Reagent Pack (Reaktif Paketi) şunları içerir: BD Onclarity HPV G1 PCR tüpleri, 2 x 96: her G1 PCR tüpü, stabilizörler ve tampon bileşenleriyle birlikte yaklaşık 32,5 pmol oligonükleotid, 20 pmol floresan işaretli detektör probu, 80 nmol dntps ve 0,52 ünite DNA polimeraz içerir. BD Onclarity HPV G2 PCR tüpleri, 2 x 96: her G2 PCR tüpü, stabilizörler ve tampon bileşenleriyle birlikte yaklaşık 42,5 pmol oligonükleotid, 30 pmol floresan işaretli detektör probu, 80 nmol dntps ve 0,52 ünite DNA polimeraz içerir. BD Onclarity HPV G3 PCR tüpleri, 2 x 96: her G3 PCR tüpü, stabilizörler ve tampon bileşenleriyle birlikte yaklaşık 42,5 pmol oligonükleotid, 25 pmol floresan işaretli detektör probu, 80 nmol dntps ve 0,52 ünite DNA polimeraz içerir. NOT: Her torbada bir desikant çantası bulunur. 1

2 Control Set for the BD Onclarity HPV Assay: Yaklaşık kopya linearize HPV 16 plazmidi içeren 24 adet BD Onclarity HPV Pozitif Kontrol Tüpü, kopya HPV 18 linearize plazmid, kopya HPV 56 linearize plazmid ve taşıyıcı nükleik asit içinde insan beta globin DNA dizilimi içeren kopya plazmid ve 24 adet sadece nükleik asit içeren BD Onclarity HPV Negatif Kontrol Tüpü. Taşıyıcı nükleik asit ve plazmidlerin konsantrasyonları spektrofotometrik olarak belirlenir. BD Onclarity HPV Liquid-Based Cytology (LBC) Diluent Tubes: Her biri tuz, deterjan ve koruyucu ile birlikte yaklaşık 1,7 ml tampon içeren 400 tüp. BD FOX PCR Extraction Tubes (Ekstraksiyon Tüpleri): Çözünür bir filmde, her biri yaklaşık 10 mg demir oksit içeren 8 tüpten oluşan 48 strip. BD Viper PCR Extraction Reagent Trough with Piercing Tool (Delme Aracı ile Ekstraksiyon Reaktifi Oyuğu): her 5 boşluk Ekstraksiyon Reaktifi oluğu, koruyucu ve 15,5 ml Atık Nötralizasyon Solüsyonu ile birlikte, yaklaşık 16,5 ml Bağlayıcı Asit, 72,5 ml Yıkama Tamponu, 25,4 ml Elüsyon Tamponu, 19,4 ml Nötralizasyon Tamponu içerir. CİHAZ, EKİPMAN VE SARF MALZEMELERİ Sağlanan malzemeler: BD Onclarity HPV Cervical Brush Collection Kit, BD Viper LT Cihazı, BD Viper LT Instrument Plates, BD Viper LT Pipette Tips, BD Viper LT Solid Waste Liners, BD Viper LT System PCR Tube/Tray Kit, BD Viper LT System PCR Accessory Kit, BD Viper Pre-warm Heater, BD Viper LT Specimen Rack, BD Viper Neutralization Pouches, BD Viper System'da (Ekstrakt Edilmiş Mod) kullanım için Örnek Tüpleri ve Kapakları, BD ProbeTec Chlamydia trachomatis/neisseria gonorrhoeae (CT/GC) Amplified DNA Assay Endocervical Specimen Collection and DRY TRANSPORT Kit. Gerekli fakat sağlanmamış malzemeler: Nitril eldivenler, değiştirme pipetleri, 0,5 ± 0,05 ml kapasiteli polipropilen aerosole dirençli uçlar, polipropilen aerosole dirençli uçlar, %0,5 (v/v) sodyum hipoklorit, %1 (v/v) sodyum hipoklorit, %3 (w/v) hidrojen peroksit, izopropil alkol, moleküler biyolojik kullanım için uygun nükleaz içermeyen su. Saklama ve İşleme Gereklilikleri: BD Onclarity HPV LBC Diluent (Dilüent) ve BD Onclarity HPV Cervical Brush Diluent (Servikal Fırça Dilüent) 2 25 C'de saklanmalıdır. Diğer tüm reaktifler 2 33 C sıcaklıkta saklanabilir. Açılmamış Reaktif Paketleri son kullanma tarihine kadar stabildir. Açılan bir torba, PCR tüpleri uygun şekilde kapatıldıkları sürece 4 hafta boyunca veya daha önce geliyorsa son kullanma tarihine kadar stabildir. Dondurmayın. UYARILAR VE ÖNLEMLER 1. In vitro Diyagnostik Kullanım içindir. 2. Klinik örneklerde hepatit virüsleri ve İnsan İmmün Yetmezlik Virüsü de dahil olmak üzere patojenik mikroorganizmalar bulunabilir. Kan veya diğer vücut sıvılarıyla kontamine olan tüm öğelerle çalışılırken, Standart Önlemler 4-7 ve kurumsal düzenlemeler uygulanmalıdır. BD Viper LT Sistemine özel ek uyarılar, tedbirler ve notlar için BD Viper LT Sistemi Kullanıcı Kılavuzuna bakın. Örnek: 3. Sıvı esaslı sitoloji örnekleri için sadece BD Onclarity HPV LBC Dilüent tüplerini kullanın. 4. Servikal fırça örnekleri için sadece BD Onclarity HPV Cervical Brush Collection Kit'i kullanın. 5. BD Onclarity HPV Assay den optimum performans alabilmek için, örneğin uygun şekilde toplanması, işlenmesi ve nakledilmesi gereklidir. 6. Gereksiz kanamaları azaltmak için, örnek toplama sırasında servikal fırçayı aşırı döndürmeyin. 7. Laboratuvara gidecek olan her örnek uygun şekilde etiketlenmiş olmalıdır. 8. Servikal fırça milini kırarken, sıçramayı, dökülmeyi ve aerosol oluşumunu önlemek için dikkat edin. Servikal fırça uç kısmının kontaminasyonunu önleyin. 9. Örnekle çalışma adımları sırasında çapraz kontaminasyondan kaçınmaya özen gösterin. Örnek kaplarının birbirine değmediğinden emin olun ve kullanılan malzemeleri açık kapların üzerinden geçirmeden atın. Eldivenler örnekle temas ederse, çapraz kontaminasyonu önlemek için eldivenleri derhal değiştirin. 10. BD Onclarity HPV LBC Diluent tüpüne LBC örneğinin az veya fazla uygulanması test performansını etkileyebilir. Ayrıca tüplerin fazla doldurulması, BD Viper LT cihazında sıvı taşmasına yol açabilir ve kontaminasyona neden olabilir. 11. Servikal örnekler, BD Onclarity HPV LBC Diluent tüpü veya BD Onclarity HPV Cervical Brush Diluent tüpünün son kullanma tarihinden önce alınmalı ve test edilmelidir. 12. Örnekleri BD Onclarity HPV LBC Dilüent tüplerine aktarmak için sadece polipropilen aerosole dirençli pipet uçları kullanın. Test/Reaktif: 13. BD Onclarity HPV Positive and Negative Controls ün sulandırılmadan itibaren 24 saat içinde ön ısıtma işlemi yapılmalıdır. 14. BD Viper LT Sisteminde sadece delinebilir kapakları olan örnek ve kontrol tüplerini kullanın. Cihazı çalıştırmadan önce delinebilir kapakları çıkarmayın. Cihazı çalıştırmadan önce, delinmiş olan delinebilir kapakları, yeni delinebilir kapaklarla değiştirdiğinizden emin olun. 15. Farklı lot numaralarına sahip kitlerdeki kit reaktiflerini değiştirmeyin veya bu reaktifleri karıştırmayın. 16. BD Onclarity HPV Cervical Brush Diluent tüpü laboratuvara içinde fırça bulunmaksızın geldiyse test edilmemelidir. Hatalı negatif sonuç gözlenebilir. 17. BD Viper LT pipet uçlarını, sadece BD Viper LT Sistemi ile birlikte BD tarafından sağlandığı şekilde kullanın. 18. BD Viper PCR Extraction Reagent Trough with Piercing Tool. 2

3 TEHLİKE H314 Ciddi yanıklara ve göz hasarına neden olur. H302 Yutulması halinde zararlıdır. P260 Tozunu/dumanını/gazını/sisini/buharını/spreyini solumayın. P280 Koruyucu eldiven/koruyucu kıyafet/göz koruyucu/yüz koruyucu kullanın. P303/361/353 CİLDİN (veya saçın) ÜZERİNDE OLMASI HALİNDE: Kirlenmiş tüm giysilerinizi hemen kaldırın/çıkarın. Cildinizi su/duş ile durulayın. P304/340 SOLUNMASI HALİNDE: Maruz kalan kişiyi açık havaya çıkarın ve rahat nefes alabileceği pozisyonda olmasını sağlayın. P405 Kilit altında saklayın. P501 Malzemeyi/kabı ulusal/bölgesel/yerel/uluslararası yönetmeliklere göre atın. 19. PCR tüplerinde, BD Viper LT Sistemi ile birlikte sadece BD Viper LT Clear Plate Sealers'ı kullanın. 20. Kullanılmamış PCR tüplerini içeren reaktif torbaları açıldıktan sonra dikkatlice KAPATILMALIDIR. Reaktif torbalarını tekrar kapatmadan önce torbada desikant bulunduğundan emin olun. 21. PCR tüpleri, plak BD Viper LT Sisteminden çıkarılmadan önce, BD Viper LT Clear Plate Sealers ile uygun şekilde KİLİTLENMELİDİR. Plağın kapatılması amplifikasyon ve tespit için kapalı bir reaksiyon sağlar ve cihazın ve çalışılan alanın amplifikasyon ürünleri ile kontamine olmasını önlemek için gereklidir. Kapatma malzemesini PCR tüplerinden kesinlikle çıkarmayın. 22. Çalışma alanının amplifikasyon ürünleri ile kontaminasyonunu önlemek için test edilen PCR tüplerini atmak için BD Viper LT Sistemi PCR Accessory Kit'te (Aksesuar Kiti) bulunan atık çantalarını kullanın. Atmadan önce çantaların düzgün şekilde kapatıldığından emin olun. 23. BD Viper LT tasarımı test ortamında amplikon kontaminasyonu olasılığını düşürdüğünden bu işlem için özel çalışma alanları gerekmese de, kontaminasyonun önlenmesi, özellikle de manipülasyon sırasında örnek kontaminasyonunun önlenmesi için diğer önlemlerin alınması gerekmektedir. 24. Eldivenler örnekle temas ederse veya ıslaksa, diğer örneklerin kontamine olmasını önlemek için ELDİVENLERİ DEĞİŞTİRİN. Eldivenleri çalışma alanından ayrılmadan veya çalışma alanına girmeden önce değiştirin. 25. Kontaminasyon durumunda, temizleme talimatları için BD Viper LT Sistemi Kullanıcı Kılavuzu'na başvurun. 26. BD Viper LT cihazına temizlemeyle giderilemeyen şekilde sıvı dökülmesi veya cihazın DNA ile kontamine olması gibi beklenmedik durumlar oluştuğunda BD Teknik Servis ve Destek birimini arayın. ÖRNEK TOPLAMA VE NAKİL BD Onclarity HPV Assay ile test edilebilen servikal örnekler arasında, BD Onclarity HPV Cervical Brush Collection Kit, (BD SurePath Pap testi için işlemden önce veya sonra çıkarılan bir alikotun kullanıldığı) BD SurePath Preservative Fluid ve (ThinPrep Pap test için işlemden önce veya sonra çıkarılan bir alikotun kullanıldığı) PreservCyt Solution bulunmaktadır. ABD içi ve uluslararası nakil için örnekler, klinik örneklerin ve etyolojik ajanların/bulaşıcı maddelerin taşınmasına ilişkin ilgili devlet, federal ve uluslararası gerekliliklere uygun şekilde etiketlenmelidir. Nakil sırasında, saklama için uygun sıcaklık ve süre koşulları sağlanmalıdır. SERVİKAL FIRÇA ÖRNEĞİ Toplama 1. BD Onclarity HPV Cervical Brush'ı (Servikal Fırça) endoservikse, os da yalnızca çoğu kılın dibi açıkta kalana kadar sokun. ¼ ½ tur arası tek yönde yavaşça döndürün. Gereksiz kanamaları önlemek için fırçayı aşırı döndürmeyin. 2. BD Onclarity HPV Cervical Brush Diluent tüpünden kapağı çıkarın ve fırçayı hemen tüpün dibine yerleştirin. 3. Mili sonuç çizgisinden dikkatli bir şekilde kırın İçeriğin sıçramasını önleyin. 4. Tüpün kapağını sıkıca kapatın. SERVİKAL FIRÇA ÖRNEĞİ SAKLAMA VE NAKLETME BD Onclarity HPV Cervical Brush Diluent tüpleri içindeki servikal fırça örnekleri saklanmalı ve 2 30 C'de saklanırlarsa toplama sonrası 30 gün içinde veya -20 C'de dondurularak saklanırlarsa toplama sonrası 30 gün içinde laboratuvar ve/veya test alanına nakledilmelidir. Örnek saklama ve nakliye süresi, Cervical Brush Diluent tüpünün son kullanma tarihini geçmemelidir. LBC ÖRNEK TOPLAMA BD SurePath veya PreservCyt örnekleri, BD SurePath veya PreservCyt prospektüsünde açıklandığı gibi endoservikal bir fırça ya da bir fırça/spatula kombinasyonu kullanılarak toplanmalıdır. BD SurePath veya PreservCyt örnekleri toplandıklarında, BD Onclarity HPV LBC Örnek Dilüent tüplerine aktarılmadan önce, orijinal şişelerinde, 2 30 C'de 30 gün boyunca ya da -20 C'de 30 gün saklanabilir ve nakledilebilir. LBC ÖRNEĞİNİN SAKLANMASI VE NAKLEDİLMESİ: LBC Örneğinin BD Onclarity HPV LBC Diluent Tüplerine Aktarımı - BD SurePath veya ThinPrep Test için İşlemeye Yönelik Olarak Bir Alikotun Çıkarılması. 0,5 ml BD SurePath veya PreservCyt örneği alikotu, BD SurePath veya ThinPrep Pap testi için işlemden önce veya sonra, orijinal şişesinden BD Onclarity HPV LBC Örnek Dilüent tüpüne manuel aktarılır. BD Onclarity HPV LBC Örnek Dilüent tüpü ve BD SurePath veya PreservCyt örnek şişesiyle çalışırken eldiven kullanın. Eldivenler örnekle temas ederse, diğer örneklerin kontamine olmasını önlemek için eldivenleri derhal değiştirin. 3

4 BD SurePath testi için İşlemeden Önce veya İşlendikten Sonra BD SurePath Örnek Aktarımı NOT: BD SurePath liquid-based Pap testini gerçekleştirmeden önce BD SurePath örnek şişesindeki bir alikotun çıkarılmasıyla ilgili talimatlar için BD PrepStain Slayt İşlemcisi veya BD Totalys SlidePrep Prospektüsüne bakın. NOT: İşleme için her defasında bir örnek kullanın. 1. Bir BD Onclarity HPV LBC Diluent tüpünü hasta tanıtıcısıyla etiketleyin. 2. BD Onclarity HPV LBC Diluent tüpünün kapağını çıkarın. 3. Homojen bir karışım sağlamak için, BD SurePath örnek şişesini saniye boyunca vorteksleyin. 4. Aerosole dirençli bir uç kullanarak, örnekten 0,5 ml'yi vortekslemeden itibaren bir dakika içinde hızla BD Onclarity HPV LBC Diluent tüpüne aktarın. 5. Pipet ucunu atın. NOT: Her örnek için ayrı bir pipet ucu kullanılmalıdır. 6. BD Onclarity HPV LBC Diluent tüpünün kapağını sıkıca kapatın. 7. BD Onclarity HPV LBC Diluent tüpünü örnek ile seyreltim sıvısının iyice karışmasını sağlamak için 3 4 kez ters çevirin. ThinPrep Pap testi için İşlemeden Önce veya İşlendikten Sonra PreservCyt Örnek Aktarımı NOT: ThinPrep testini gerçekleştirmeden önce PreservCyt örnek şişesindeki bir alikotun çıkarılmasıyla ilgili talimatlar için ThinPrep 2000/3000 Sistemi Prospektüsü Kullanıcı Kılavuzu Ekine bakın. NOT: İşleme için her defasında bir örnek kullanın. 1. Bir BD Onclarity HPV LBC Diluent tüpünü hasta tanıtıcısıyla etiketleyin. 2. BD Onclarity HPV LBC Diluent tüpünün kapağını çıkarın. 3. Homojen bir karışım sağlamak için, PreservCyt örnek şişesini yüksek hızda 8 12 saniye boyunca vorteksleyin. 4. Aerosole dirençli bir uç kullanarak, örnekten 0,5 ml'yi vortekslemeden itibaren bir dakika içinde hemen BD Onclarity HPV LBC Diluent tüpüne aktarın. 5. Pipet ucunu atın. NOT: Her örnek için ayrı bir pipet ucu kullanılmalıdır. 6. BD Onclarity HPV LBC Diluent tüpünün kapağını sıkıca kapatın. 7. BD Onclarity HPV LBC Diluent tüpünü örnek ile seyreltim sıvısının iyice karışmasını sağlamak için 3 4 kez ters çevirin. BD HPV LBC Diluent tüplerine Aktarılan Örneklerin Saklanması ve Nakli BD Onclarity HPV LBC Diluent tüpüne manuel aktarıldıktan sonra, seyreltilmiş örnek 2 30 C'de 15 gün boyunca veya -20 C'de muhafaza edildiğinde 30 gün boyunca saklanabilir. TÜM ÖRNEKLER İÇİN İŞLEME PROSEDÜRÜ NOT: Örnekler donmuşsa, işleme devam etmeden önce oda sıcaklığında tam olarak çözündüklerinden ve karıştıklarından emin olun. 1. Tube Layout Report u (Tüp Yerleşim Raporu) kullanarak, örnekleri sırayla BD Viper LT Specimen Rack'e (Örnek Yuvası) yerleştirin ve konumlarına kilitleyin. 2. Örnekler ön ısıtılmaya hazırdır. 3. Kontaminasyonu önlemek için devam etmeden önce eldivenleri değiştirin. KALİTE KONTROL HAZIRLIĞI 1. Bir BD Onclarity HPV Negatif Kontrolün ve bir BD Onclarity HPV LBC Diluent tüpünün kapağını açın. 2. BD Onclarity HPV LBC Diluent tüpünün tüm içeriğini BD Onclarity HPV Negatif Kontrolün içine dökün. 3. Yeniden sulandırılmış BD Onclarity HPV Negatif Kontrolün kapağını kapatın. Boş olan BD Onclarity HPV LBC Diluent tüpünün kapağını kapatın ve atın. 4. Bir BD Onclarity Pozitif Kontrolün ve bir BD Onclarity HPV LBC Diluent tüpünün kapağını açın. 5. BD Onclarity HPV LBC Diluent tüpünün içeriğini BD Onclarity HPV Pozitif Kontrolün içine dökün. 6. Yeniden sulandırılmış BD Onclarity HPV Pozitif Kontrolün kapağını kapatın. Boş olan BD Onclarity HPV LBC Diluent tüpünün kapağını kapatın ve atın. 7. Tube Layout Report u (Tüp Yerleşim Raporu) kullanarak, yeniden sulandırılmış BD Onclarity HPV Negatif Kontrolü BD Onclarity LT Specimen Rack içinde uygun bir konuma yerleştirin. 8. Tube Layout Report u (Tüp Yerleşim Raporu) kullanarak, yeniden sulandırılmış BD Onclarity HPV Pozitif Kontrolü BD Onclarity LT Specimen Rack içinde uygun bir konuma yerleştirin. 9. Kontroller örneklerle ön ısıtma işlemine hazırdır. NOT: Kontrollerin sulandırmadan itibaren 24 saat içinde ön ısıtma işlemi yapılmalıdır. ÖN ISITMA PROSEDÜRÜ NOT: Ön ısıtma prosedürü, BD Viper LT Sistemine yüklenmeden önce örnek matriksinin homojen olmasını sağlamak için tüm örneklere uygulanmalıdır. Örneklere ön ısıtma işleminin yapılmaması, BD Onclarity HPV Assay ve/veya BD Viper LT Sisteminin performansı üzerinde olumsuz bir etkiye neden olabilir. NOT: Soğutulmuş veya dondurulmuş örnekler ön ısıtma işlemi öncesinde oda sıcaklığında tamamen çözülmelidir. 1. BD Viper LT Specimen Rack'i BD Pre-warm Heater'a (Ön Isıtma Isıtıcısı) yerleştirin ve BD Viper LT Cihazında BD Onclarity HPV Assay ön ısıtma protokolünü seçin. 4

5 2. BD Pre-warm Heater (Ön Isıtma Isıtıcısı), BD Onclarity HPV Assay ön ısıtma protokolüne göre örneklere ve kontrollere otomatik olarak ön ısıtma işlemi uygulayacaktır. 3. BD Onclarity HPV Assay ön ısıtma protokolü tamamlandıktan sonra, yuvayı ısıtıcıdan çıkarın ve BD Viper LT cihazına yükleyin. 4. Örneklerin ve kontrollerin test edilmesi için Test Prosedürüne bakın. 5. Ön ısıtma işleminden sonra örnekler, BD Viper LT Sisteminde test edilmeden önce 2 30 C'de 7 gün boyunca veya -20 C'de 30 gün boyunca ek ön ısıtma işlemi olmadan saklanabilir. 6. Ön ısıtma işleminden sonra kontroller, BD Viper LT Sisteminde test edilmeden önce 2 30 C'de 24 saat boyunca ek ön ısıtma işlemi olmadan saklanabilir. TEST PROSEDÜRÜ Sistem bileşenlerinin çalıştırılması ve bakımına ilişkin özel talimatlar için BD Viper LT Sistemi Kullanıcı Kılavuzu'na başvurun. HPV testi için optimum ortam koşulları %20 85 Bağıl Nem için C olarak bulunmuştur. KALİTE KONTROLÜ Kalite kontrol, ilgili yerel, devlet ve/veya federal düzenlemeler veya akreditasyon gerekliliklerine veya laboratuvarınızın standart Kalite Kontrol prosedürlerine uygun olarak gerçekleştirilmelidir. Kullanıcının, uygun Kalite Kontrolü uygulamaları için ilgili CLSI yönergelerine ve CLIA düzenlemelerine uyması önerilir. BD Onclarity HPV Assay için Kontrol Seti ayrı olarak temin edilir. Her test çalışmasında ve her yeni reaktif lotu numarası için bir Pozitif ve bir Negatif Kontrol bulunmalıdır. Kontrollerin BD Viper LT Sistemi Kullanıcı Kılavuzu nda belirtildiği şekilde konumlandırılması gerekir. HPV Pozitif Kontrolü sadece önemli reaktif hatalarını izlemek içindir. HPV Negatif Kontrolü reaktif ve/veya ortam kontaminasyonunu izlemek içindir. Yerel, devlet ve/veya federal yönetmelikler veya sertifikasyon sağlayan kurumların gereklilikleri veya kılavuz ilkelere göre ek kontroller test edilebilir. BD Viper LT Sistemi İçin Genel KK Bilgisi: PCR tüplerinin konumu, LCD monitörde renk kodlu bir plaka yerleşim ekranında gösterilmiştir. Tüp içindeki artı sembolü (+), pozitif KK örneğini belirtir. Tüp içindeki eksi sembolü (-), negatif KK örneğini belirtir. Her reaktif kit lot numarası için bir KK çifti girilmelidir. KK çiftleri doğru şekilde girilmezse, yuvayı kaydetmenizi ve çalışmaya tamamlanana kadar devam etmenizi engelleyen bir mesaj kutusu belirir. Test için ek (opsiyonel) KK tüpleri girilebilir. Bu tüpler, normal örnekler olarak test edilir ve çalışmanın Pass/Fail (Başarılı/Başarısız) durumunu etkilemez. BD Viper LT Sistemi Kullanıcı Kılavuzuna bakın. NOT: BD Onclarity HPV Controls (Kontroller) BD Viper LT Specimen Rack'e yükleme öncesinde manuel olarak sulanmalıdır. Kalite Kontrol Sonuçlarının Yorumlanması: Hastalara ait sonuçları elde etmek için, BD Onclarity HPV Pozitif Kontrol ve BD Onclarity HPV Negatif Kontrolün sırasıyla pozitif ve negatif test sonucu vermesi gerekir. Kontroller beklenen performansı göstermezse, çalışma döngüsü geçersiz sayılır ve cihaz hasta sonuçlarını raporlamaz. Kontrollerin herhangi biri beklenen sonuçları vermezse, yeni bir kontrol seti, yeni ekstraksiyon tüpleri, yeni ekstraksiyon reaktifi oluğu ve yeni PCR tüpleri kullanarak tüm çalışma döngüsünü tekrarlayın. Sorun çözülemezse, daha fazla bilgi için BD Teknik Servis ve Destek birimini arayın. Tablo 1: Kalite Kontrol Sonuçlarının Yorumlanması Kontrol Tipi Tube Result Report (Tüp Sonucu KK Eğilimi Raporu) Sembolü BD Onclarity HPV Pozitif Kontrolü OK KK Geçti BD Onclarity HPV Pozitif Kontrolü KK Hatası BD Onclarity HPV Pozitif Kontrolü KK Hatası BD Onclarity HPV Pozitif Kontrolü KK Hatası BD Onclarity HPV Negatif Kontrolü OK KK Geçti BD Onclarity HPV Negatif Kontrolü KK Hatası BD Onclarity HPV Negatif Kontrolü KK Hatası BD Onclarity HPV Negatif Kontrolü KK Hatası Tube Result Report (Tüp Sonucu Raporu) sembollerinin tanımı için Test Sonuçlarının Yorumlanması bölümüne bakın. TEST SONUÇLARININ YORUMLANMASI BD Onclarity HPV Assay, klinik örneklerde Human Papillomavirüsün (HPV) varlığını tespit etmek için gerçek zamanlı polimeraz zincir reaksiyonunu kullanır. Tüm hesaplamalar BD Viper LT yazılımı tarafından otomatik olarak gerçekleştirilir. Klinik açıdan ilişkili HPV DNA'nın varlığı veya yokluğu, sinyalin önceden belirlenen bir eşik değeri geçtiği PCR döngüsü (Ct) ile belirlenir. Test, örnek işlenmesi, ekstraksiyonu, amplifikasyonunu değerlendirmek ve PCR inhibitörlerinin varlığını göstermek için dahili kontrol olarak bir insan beta-globin geni fragmanını ekstrakte eder, amplifiye eder ve tespit eder. HPV'ye özgü sinyal döngü eşik değerinden daha yüksekse, sonucun yorumlanmasında algoritma tarafından dahili kontrol kullanılır. HPV'ye özgü sinyal döngü eşik değerinden düşük veya döngü eşik değerine eşitse, dahili kontrol algoritma tarafından göz ardı edilir. HPV örnekleri için, Tüp Sonuçları Raporunda bir HR sonucu (tüm genotiplerin kombinasyonu) belirir. Bu sütundaki pozitif sembol, HPV testinin tespit edebildiği bir veya birkaç genotipin pozitif sonucunun olduğunu gösterir. GT sütunu, bölgenizde mevcut olmayan genotiplerin sonuçlarını raporlanması için kullanılır. Bu sonuçlar elde edilebilir. Sütunlarda özel genotipler ve birleştirilmiş genotipler görülür. Bir genotipin sonuçları elde edilmişse, bu sonuçlar aşağıda açıklandığı gibi raporlanır. Herhangi bir genotipin sonucu otomatik alma için yapılandırılmamışsa, bu sonuçlar bir kilit simgesi ile maskelenir. 5

6 Çalışma tamamlandığında, cihaz özel genotipleri almak / raporlamak için yapılandırılabilir. Otomatik genotip raporlama yetkilendirme talimatları için BD Viper LT Sistemi Kullanıcı Kılavuzu'na bakın. Test kontrollerinin sonuçları beklenenden farklıysa, hasta sonuçları raporlanmaz. Beklenen kontrol değerleri için Kalite Kontrol bölümüne bakın. Raporlanan sonuçlar aşağıdaki şekilde belirlenir. Tablo 2: BD Onclarity HPV Assay İçin Yüksek Riskli HPV Genotipi HPV Test Sonuçlarının Yorumlanması Yüksek Riskli HPV Sonucu Yorum Sonuç HR Yüksek Riskli HPV tipleri için pozitif HPV HR Pozitif HR Yüksek Riskli HPV tipleri için negatif HPV HR Negatif Varsa, HPV DNA tespit edilemez. Dahili Kontrol Hatası Varsa, HPV DNA tespit edilemez. Varsa, HPV DNA, tespit edilemez. Varsa, HPV DNA tespit edilemez. Ekstraksiyon Aktarım Hatası Sıvı Seviyesi Hatası Hata Tablo 3: BD Onclarity HPV Assay İçin Özel HPV Genotipi HPV Test Sonuçlarının Yorumlanması HPV Genotip Sonucu Yorum Sonuç 16 HPV tip 16 için Pozitif HPV tip 16 Pozitif 16 HPV tip 16 için Negatif HPV tip 16 Negatif 18 HPV tip 18 için Pozitif HPV tip 18 Pozitif 18 HPV tip 18 için Negatif HPV tip 18 Negatif 45 HPV tip 45 için Pozitif HPV tip 45 Pozitif 45 HPV tip 45 için Negatif HPV tip 45 Negatif P1 HPV tip 33 ve/veya 58 için Pozitif HPV tip 33 ve/veya 58 Pozitif P1 HPV tip 33 ve/veya 58 için Negatif HPV tip 33 ve/veya 58 Negatif 31 HPV tip 31 için Pozitif HPV tip 31 Pozitif 31 HPV tip 31 için Negatif HPV tip 31 Negatif P2 HPV tip 56, 59 ve/veya 66 için Pozitif HPV tip 56, 59 ve/veya 66 Pozitif P2 HPV tip 56, 59 ve/veya 66 için Negatif HPV tip 56, 59 ve/veya 66 Negatif 51 HPV tip 51 için Pozitif HPV tip 51 Pozitif 51 HPV tip 51 için Negatif HPV tip 51 Negatif 52 HPV tip 52 için Pozitif HPV tip 52 Pozitif 52 HPV tip 52 için Negatif HPV tip 52 Negatif P3 HPV tip 35, 39 ve/veya 68 için Pozitif HPV tip 35, 39 ve/veya 68 Pozitif P3 HPV tip 35, 39 ve/veya 68 için Negatif HPV tip 35, 39 ve/veya 68 Negatif GT GT Pozitif HPV Genotip sonucu/sonuçları bölgenizde mevcut değildir Negatif HPV Genotip sonucu/sonuçları bölgenizde mevcut değildir HPV genotip sonucu alım için uygundur HPV genotip sonucu alım için uygun değildir Pozitif HPV Genotip sonucu/sonuçları sınırlıdır Negatif HPV Genotip sonucu/sonuçları sınırlıdır Genotip sonucu kilitlidir HPV Negatif sonucu, Dahili Kontrol hatası, Sıvı Seviyesi hatası veya Ekstraksiyon Aktarım hatası DNA Kontaminasyonu Varlığının İzlenmesi Çalışma alanının ve ekipman yüzeylerinin DNA kontaminasyonu varlığı açısından izlenmesi için aşağıdaki test prosedürleri en az ayda bir kez gerçekleştirilmelidir. Kontaminasyonun bir sorun oluşmadan önce tespit edilebilmesi için ortamın izlenmesi önemlidir. 1. Test edilecek olan her alan için, BD ProbeTec Chlamydia trachomatis/neisseria gonorrhoeae (CT/GC) Amplifiye Edilmiş DNA Testi Endoservikal Örnek Toplama ve KURU NAKİL Kitine ait temiz bir toplama swabı kullanın. 2. Küçük temiz bir kap içine bir miktar moleküler biyolojik kullanım için uygun nükleaz içermeyen su boşaltın. 3. Swabı moleküler biyolojik kullanım için uygun nükleaz içermeyen su içine batırın ve ilk alanı geniş bir süpürme hareketi uygulayarak silin. 4. BD Onclarity HPV LBC Diluent tüpünün kapağını çıkarın ve swabı Seyreltim Sıvısı içine sokun. Swabı BD Onclarity HPV Diluent içinde 5 10 sn çevirerek karıştırın. 5. Swabı tüpün iç kısmına sürüp sıvının tüpün tabanına akmasını sağlayın. 6

7 6. Sıçramasını önlemek için BD Onclarity HPV LBC Diluent tüpünün kapağını dikkatlice çıkarın. Swabı atın. 7. Siyah delinebilir kapakla BD Onclarity HPV LBC Diluent tüpünün kapağını sıkıca kapatın. 8. İstenen her alan için bu işlemi tekrarlayın. 9. Tüm swab örnekleri alındıktan ve akıtıldıktan sonra, tüpleri Ön Isıtma Prosedürüne göre işleyin ve ardından Test Prosedürünü uygulayın. Ortamın İzlenmesi ve Temizleme Prosedürleriyle ilgili daha fazla bilgi için BD Viper LT Sistemi Kullanıcı Kılavuzu'na başvurun. Kontaminasyon sorunu çözülemezse, daha fazla bilgi için BD Teknik Servis ve Destek birimini arayın. PROSEDÜRÜN KISITLI OLDUĞU ALANLAR 1. Testin optimum performans göstermesi için örneğin doğru şekilde toplanması ve işlenmesi gerekir. Bu ek sayfasındaki Örnek Toplanması ve Nakli bölümlerine bakın. 2. Negatif bir test sonucu enfeksiyonun var olmadığını göstermeyebilir; çünkü test sonuçları örneğin uygun olmayan şekilde alınmasından, teknik hatalardan, örneğin karıştırılmasından veya örnekte mevcut olan organizma sayısının testin duyarlılık sınırının altında olmasından etkilenebilir. 3. BD Onclarity HPV Assay kalitatif sonuçlar sağlar. 4. BD Onclarity HPV Assay kullanımı, test prosedürü ve BD Viper LT Sistemi hakkında eğitim almış personel ile sınırlanmıştır. PERFORMANS ÖZELLİKLERİ BD Onclarity HPV Cervical Brush örnekleri, BD SurePath örnekleri ve/veya PreservCyt örnekleri, anormal Pap testi veya HPV enfeksiyonu nedeniyle takip için başvuran protokole uygun 836 kadından veya Avrupa'daki coğrafik olarak ayrı iki klinik bölgede rutin muayene için kliniğe gelen kadınlardan toplanmıştır. İki örnek, kaydolan her denekten aşağıdaki sıraya göre toplanmıştır: (BD Onclarity HPV Cervical Brush Diluent tüpü içinde nakledilmiş) bir BD SurePath örneği (Bölge A) veya bir PreservCyt örneği (Bölge B) ve bir BD Onclarity HPV Cervical Brush örneği. Toplanan her sitoloji şişesi için, 0,5 ml'lik kısım BD Onclarity HPV LBC Diluent tüpüne alınmıştır. Sitoloji, HPV DNA sonuçları (digene Hybrid Capture 2 (hc2) High-Risk HPV DNA Test) ve Roche LINEAR ARRAY HPV Genotyping Test (RLA) sonuçları, örneklerin çoğu için mevcuttur. Histoloji sonuçları, bir yüksek risk kliniğine gelen deneklerin çoğu için mevcuttur. Ayrıca her bölge, sitoloji sonuçları, HPV DNA sonuçları (digene Hybrid Capture 2 Yüksek Riskli HPV DNA Testi), Roche LINEAR ARRAY HPV Genotiplendirme Test sonuçları ve uygulanabildiği yerde histoloji sonuçları ile ilişkili kalıntı örneklerini (BD SurePath veya PreservCyt ) dahil etmiştir. Dahil edilen her örnek için, 0,5 ml'lik kısım BD Onclarity HPV LBC Diluent tüpüne alınmıştır. Histoloji sonuçlarının 234 kadın için mevcut olduğu 510 uygun retrospektif örnek dahil edilmiştir. Tüm örnekler BD Viper LT Sisteminde test prospektüsü ve kullanıcı kılavuzuna göre test edilmiştir. Her ortam türü için, (1) Cervical Intraepithelial Neoplasia (Servikal İntraepitelyal Neoplazi - CIN2) veya daha fazla histoloji sonucu ya da (2) Cervical Intraepithelial Neoplasia (Servikal İntraepitelyal Neoplazi - CIN3) veya daha fazla histoloji sonucu olarak tanımlanan hastalığın tespitine yönelik klinik duyarlılık ve özgüllük hesaplanmıştır. Son veri analizi, 472 BD SurePath örneği, 361 PreservCyt örneği ve toplam 515 BD Onclarity HPV Cervical Brush örneğinden elde edilen BD Onclarity HPV test sonuçlarını içerir. A Bölgesi için 247 BD Onclarity HPV Cervical Brush örneği (BD Onclarity HPV Cervical Brush Diluent tüpünde) ve B Bölgesi için 268 BD Onclarity HPV Cervical Brush örneği (BD Onclarity HPV Cervical Brush Diluent tüpünde). BD Onclarity HPV testi ve hc2 testine yönelik yüksek dereceli servikal hastalık tespitinin performans hesaplamaları BD SurePath ortamı için Tablo 4 e 5'te, PreservCyt ortamı için Tablo 8 ve 9'da ve BD Onclarity HPV Cervical Brush örnekleri için Tablo 12 ve 13'te sunulmuştur. BD Onclarity HPV testi sonuçları, digene Hybrid Capture 2 Yüksek Riskli HPV DNA Testi ve Roche LINEAR ARRAY HPV Genotiplendirme Testinden elde edilen sonuçlarla da karşılaştırılmıştır (birleşik karşılaştırıcı). hc2 ve RLA (yüksek risk) testlerinden elde edilen pozitif bir sonuç, birleşik karşılaştırıcı pozitif, hc2 ve RLA (yüksek risk) testlerinden elde edilen negatif bir sonuç, birleşik karşılaştırıcı negatif olarak tanımlanır ve iki test uyumlu olmadığında (veya sonuçlar her iki test için mevcut değilken), birleşik karşılaştırıcı sonucu çözümlenmemiş olarak tanımlanır. Her ortam türünün birleşik karşılaştırıcı ile kıyaslanması için, pozitif, negatif ve toplam uyumluluk yüzdesi hesaplanmıştır. Son veri analizi, 670 BD SurePath örneği ve 674 PreservCyt örneğinden elde edilen BD Onclarity HPV Assay ve birleşik karşılaştırıcı sonuçlarını (histoloji durumuna bakılmaksızın) içermektedir. (Tablo 6 ve 10) Her ortam türü için çalışma popülasyonunda hastalığın (CIN2+ ve CIN3+) mutlak riski, BD Onclarity HPV testindeki her genotip veya genotip grubu için hesaplanmıştır. Mutlak riskler, genotip (veya genotip grubu) tek başına varken ve/veya diğer genotiplerin varlığında hesaplanır. Her ortam türü için bir mutlak risk tablosu gösterilmiştir. Her ortam sadece bir bölgede toplanmıştır; dolayısıyla popülasyon varyasyonuna bağlı olarak HPV ve genotip pozitiflik oranlarında farklılıklar beklenebilir. (Tablo 7 ve 11) BD SurePath Örneği Klinik Performansı Tablo 4: Histoloji Sonuçları (CIN2+) ile Karşılaştırıldığında BD SurePath Ortamı ile BD Onclarity HPV Assay Performansı BD Onclarity HPV Assay hc2 HPV DNA Testi Tahmin %95 Güven Aralığı Tahmin 95% Güven Aralığı Duyarlılık %97,9 (190/194) (%94,8, %99,2) %98,4 (190/193) (%95,5, %99,5) Özgünlük %22,7 (63/278) (%18,1, %27,9) %17,0 (47/277) (%13,0, %21,8) Tablo 5: Histoloji Sonuçları (CIN3+) ile Karşılaştırıldığında BD SurePath Ortamı ile BD Onclarity HPV Assay Performansı BD Onclarity HPV Assay hc2 HPV DNA Testi Tahmin 95% Güven Aralığı Tahmin 95% Güven Aralığı Duyarlılık %97,7 (126/129) (%93,4, %99,2) %98,4 (126/128) (%94,5, %99,6) Özgünlük %18,7 (64/343) (%14,9, %23,1) %14,0 (48/342) (%10,8, %18,1) 7

8 Tablo 6: Birleşik Karşılaştırıcı ile Karşılaştırıldığında BD SurePath Ortamı ile BD Onclarity HPV Assay Performansı Birleşik Karşılaştırıcı Sonucu BD Onclarity HPV Assay Pozitif Negatif Çözümlenmemiş* Toplam Pozitif Negatif Toplam Pozitif Uyumluluk Yüzdesi (%95 Güven Aralığı) %98,5 (%97,1, %99,2) * hc2 ve RLA sonuçları uyumluluk göstermemektedir veya sonuçlar her iki test için mevcut değildi. Negatif Uyumluluk Yüzdesi (%95 Güven Aralığı) %89,3 (%78,5, %95,0) Tablo 7: BD SurePath Ortamı ile BD Onclarity HPV Assay Genotipleri için Mutlak CIN2+ ve CIN3+ Riski BD Onclarity HPV Assay Genotipi HPV16 HPV18 HPV45 HPV33/58 HPV31 HPV56/59/66 HPV51 HPV52 HPV35/39/68 Bir veya birkaç genotipe bağlı enfeksiyon Mutlak Risk CIN2+ %63,9 (99/155) %50,0 (24/48) %46,7 (21/45) %49,4 (42/85) %64,2 (52/81) %25,5 (25/98) %41,7 (15/36) %35,1 (20/57) %36,0 (27/75) PreservCyt Örneği Klinik Performansı %95 Güven Aralığı (%56,1, %71,0) (%36,4, %63,6) (%32,9, %60,9) (%39,0, %59,8) (%53,3, %73,8) (%17,9, %35,0) (%27,1, %57,8) (%24,0, %48,1) (%26,1, %47,3) Tek bir genotip veya genotip grubuna bağlı enfeksiyon Mutlak Risk CIN2+ %64,9 (48/74) %50,0 (7/14) %23,5 (4/17) %47,1 (16/34) %72,7 (16/22) %0,0 (0/29) %25,0 (2/8) %33,3 (4/12) %33,3 (7/21) %95 Güven Aralığı (%53,5, %74,8) (%26,8, %73,2) (%9,6, %47,3) (%31,5, %63,3) (%51,8, %86,8) (%0,0, %11,7) (%7,1, %59,1) (%13,8, %60,9) (%17,2, %54,6) Bir veya birkaç genotipe bağlı enfeksiyon Mutlak Risk CIN3+ %43,9 (68/155) %43,8 (21/48) %31,1 (14/45) %31,8 (27/85) %40,7 (33/81) %13,3 (13/98) %25,0 (9/36) %19,3 (11/57) %17,3 (13/75) %95 Güven Aralığı (%36,3, %51,7) (%30,7, %57,7) (%19,5, %45,7) (%22,8, %42,3) (%30,7, %51,6) (%7,9, %21,4) (%13,8, %41,1) (%11,1, %31,3) (%10,4, %27,4) Toplam Uyumluluk Yüzdesi (%95 Güven Aralığı) %97,7 (%96,1, %98,6) Tek bir genotip veya genotip grubuna bağlı enfeksiyon Mutlak Risk CIN3+ %47,3 (35/74) %42,9 (6/14) %17,6 (3/17) %23,5 (8/34) %50,0 (11/22) %0,0 (0/29) %12,5 (1/8) %16,7 (2/12) %19,0 (4/21) %95 Güven Aralığı Tablo 8: Histoloji Sonuçları (CIN2+) ile Karşılaştırıldığında PreservCyt Ortamı ile BD Onclarity HPV Assay Performansı BD Onclarity HPV Assay hc2 HPV DNA Testi (%36,3, %58,5) (%21,4, %67,4) (%6,2, %41,0) (%12,4, %40,0) (%30,7, %69,3) (%0,0, %11,7) (%2,2, %47,1) (%4,7, %44,8) (%7,7, %40,0) Tahmin %95 Güven Aralığı Tahmin %95 Güven Aralığı Duyarlılık %94,7 (160/169) (%90,2, %97,2) %97,0 (160/165) (%93,1, %98,7) Özgünlük %50,5 (97/192) (%43,5, %57,5) %40,8 (75/184) (%33,9, %48,0) Tablo 9: Histoloji Sonuçları (CIN3+) ile Karşılaştırıldığında PreservCyt Ortamı ile BD Onclarity HPV Assay Performansı BD Onclarity HPV Assay hc2 HPV DNA Testi Tahmin %95 Güven Aralığı Tahmin %95 Güven Aralığı Duyarlılık %94,4 (85/90) (%87,6, %97,6) %97,7 (85/87) (%92,0, %99,4) Özgünlük %37,3 (101/271) (%31,7, %43,2) %29,8 (78/262) (%24,6, %35,6) 8

9 Tablo 10: Birleşik Karşılaştırıcı ile Karşılaştırıldığında PreservCyt Ortamı ile BD Onclarity HPV Assay Performansı BD Onclarity HPV Assay Birleşik Karşılaştırıcı Sonucu Pozitif Negatif Çözümlenmemiş* Toplam Pozitif Negatif Toplam Pozitif Uyumluluk Yüzdesi (%95 Güven Aralığı) %96,1 (%93,0, %97,9) * hc2 ve RLA sonuçları uyumluluk göstermemektedir veya sonuçlar her iki test için mevcut değildi. Negatif Uyumluluk Yüzdesi (%95 Güven Aralığı) %98,7 (%96,9, %99,4) Tablo 11: PreservCyt Ortamı ile BD Onclarity HPV Assay Genotipleri için Mutlak CIN2+ ve CIN3+ Riski BD Onclarity HPV Assay Genotipi HPV 16 HPV 18 HPV 45 HPV 33/58 HPV 31 HPV 56/59/66 HPV 51 HPV 52 HPV 35/39/68 Bir veya birkaç genotipe bağlı enfeksiyon Mutlak Risk CIN2+ %77,1 (84/109) %50,0 (12/24) %50,0 (6/12) %70,0 (28/40) %67,7 (42/62) %34,0 (18/53) %48,0 (12/25) %73,9 (17/23) %38,5 (10/26) %95 Güven Aralığı (%68,3, %84,0) (%31,4, %68,6) (%25,4, %74,6) (%54,6, %81,9) (%55,4, %78,0) (%22,7, %47,4) (%30,0, %66,5) (%53,5, %87,5) (%22,4, %57,5) Tek bir genotip veya genotip grubuna bağlı enfeksiyon Mutlak Risk CIN2+ %81,4 (57/70) %45,5 (5/11) %25,0 (1/4) %75,0 (15/20) %71,0 (22/31) %11,1 (2/18) %27,3 (3/11) %85,7 (6/7) %40,0 (2/5) BD Onclarity HPV Cervical Brush Örneği Klinik Performansı %95 Güven Aralığı (%70,8, %88,8) (%21,3, %72,0) (%4,6, %69,9) (%53,1, %88,8) (%53,4, %83,9) (%3,1, %32,8) (%9,7, %56,6) (%48,7, %97,4) (%11,8, %76,9) Bir veya birkaç genotipe bağlı enfeksiyon Mutlak Risk CIN3+ %44,0 (48/109) %29,2 (7/24) %16,7 (2/12) %35,0 (14/40) %30,6 (19/62) %9,4 (5/53) %16,0 (4/25) %26,1 (6/23) %15,4 (4/26) %95 Güven Aralığı (%35,1, %53,4) (%14,9, %49,2) (%4,7, %44,8) (%22,1, %50,5) (%20,6, %43,0) (%4,1, %20,3) (%6,4, %34,7) (%12,5, %46,5) (%6,1, %33,5) Toplam Uyumluluk Yüzdesi (%95 Güven Aralığı) %97,6 (%96,1, %98,5) Tek bir genotip veya genotip grubuna bağlı enfeksiyon Mutlak Risk CIN3+ %50,0 (35/70) %18,2 (2/11) %0,0 (0/4) %50,0 (10/20) %41,9 (13/31) %0,0 (0/18) %18,2 (2/11) %42,9 (3/7) %20,0 (1/5) %95 Güven Aralığı (%38,6, %61,4) (%5,1, %47,7) (%0,0, %49,0) (%29,9, %70,1) (%26,4, %59,2) (%0,0, %17,6) (%5,1, %47,7) (%15,8, %75,0) (%3,6, %62,4) Tablo 12: Histoloji Sonuçları (CIN2+) ile Karşılaştırıldığında BD Onclarity HPV Cervical Brush ile BD Onclarity HPV Assay Performansı Tesis A B BD Onclarity HPV Assay hc2 HPV DNA Testi Tahmin %95 Güven Aralığı Tahmin %95 Güven Aralığı Duyarlılık %97,2 (104/107) (%92,1, %99,0) %99,1 (106/107) (%94,9, %99,8) Özgünlük %17,9 (25/140) (%12,4, %25,0) %21,4 (30/140) (%15,4, %28,9) Duyarlılık,0 (121/121) (%96,9,,0) %97,5 (116/119) (%92,8, %99,1) Özgünlük %37,4 (55/147) (%30,0, %45,5) %43,0 (61/142) (%35,1, %51,2) Tablo 13: Histoloji Sonuçları (CIN3+) ile Karşılaştırıldığında BD Onclarity HPV Cervical Brush ile BD Onclarity HPV Assay Performansı Tesis A B BD Onclarity HPV Assay hc2 HPV DNA Testi Tahmin %95 Güven Aralığı Tahmin %95 Güven Aralığı Duyarlılık %97,3 (72/74) (%90,7, %99,3) %98,6 (73/74) (%92,7, %99,8) Özgünlük %15,0 (26/173) (%10,5, %21,1) %17,3 (30/173) (%12,4, %23,7) Duyarlılık,0 (60/60) (%94,0,,0) %98,3 (57/58) (%90,9, %99,7) Özgünlük %26,4 (55/208) (%20,9, %32,8) %31,0 (63/203) (%25,1, %37,7) 9

10 Analitik Çalışmalar Klinik Eşikte Analitik Duyarlılık: HPV pozitif hücre hatları kullanılarak BD Onclarity HPV Assay için HPV klinik eşiğindeki saptama sınırı (LOD) belirlenmiştir: SiHa (HPV 16), HeLa (HPV 18) ve MS751 (HPV 45) ile aşağıdaki HPV genotiplerine yönelik dizileri içeren klonlanmış plazmid DNA'sı: HPV negatif hücre hattı (C33A) içeren BD SurePath Preservative Fluid, PreservCyt Solution ve BD Onclarity HPV Cervical Brush Diluent tüpünde HPV 31, 33, 35, 39, 51, 52, 56, 58, 59, 66 ve 68. HPV hücre hatları ayrı ayrı test edilirken, HPV plazmidleri üç grup halinde toplu olarak test edilmiştir: 1) HPV 31, 33, 51, 52 ve 59; 2) HPV 56, 58, 68; ve 3) HPV 35 ve 66. HPV hücre hatları için altı hedef düzeyin her birinden en az kırk beş kopya ve HPV plazmidleri için altı hedef düzeyin her birinden en az yirmi kopya, en az üç reaktif lotu ve en az üç BD Viper LT Sistemi üzerinde test edilmiştir. LOD, en az %95 oranında klinik eşiğin üzerinde pozitif sonuçları olan seyreltilmemiş örnekteki HPV DNA'nın düzeyidir. Her HPV genotipinin ve ortamının maksimum LOD değeri Tablo 14'te tanımlanmıştır. Tablo 14: Analitik Duyarlılık Hedef BD SurePath Ortamı (%95 Güven Aralığı) PreservCyt Ortamı (%95 Güven Aralığı) BD Onclarity HPV Cervical Brush Diluent (%95 Güven Aralığı) SiHa (HPV 16) hücre/ml 1584 ( ) 1835 ( ) 137 ( ) HeLa (HPV 18) hücre/ml 915 ( ) 1786 ( ) 51 (46 56) MS751 (HPV 45) hücre/ml 3793 ( ) 5425 ( ) 305 ( ) HPV 31 kopya/ml 3652 ( ) 4118 ( ) 692 ( ) HPV 33 kopya/ml 7326 ( ) 8272 ( ) 1376 ( ) HPV 35 kopya/ml 6820 ( ) 7282 ( ) 1552 ( ) HPV 39 kopya/ml 7894 ( ) 8272 ( ) 1531 ( ) HPV 51 kopya/ml 6697 ( ) 5909 ( ) 1229 ( ) HPV 52 kopya/ml 3582 ( ) 4184 ( ) 833 ( ) HPV 56 kopya/ml 4976 ( ) 4774 ( ) 836 ( ) HPV 58 kopya/ml ( ) ( ) 2990 ( ) HPV 59 kopya/ml 4400 ( ) 4374 ( ) 772 ( ) HPV 66 kopya/ml 3793 ( ) 4462 ( ) 701 ( ) HPV 68 kopya/ml ( ) ( ) 2079 ( ) Çapraz Reaktivite: BD Onclarity HPV Assay'in BD Viper LT Sisteminde analitik özgüllüğünü değerlendirmek için yüksek riskli ve düşük riskli HPV hedef dizilerini içeren klonlanmış plazmid DNA'sı ile birlikte bakteri, maya ve kültürlenen virüsler kullanılmıştır. Potansiyel her çapraz reaktan, HPV negatif hücre hattı (C33A) içeren BD SurePath Preservative Fluid ve PreservCyt Solution'da ayrı ayrı test edilmiştir. Mikroorganizmalar Tablo 15 ve Tablo 16'da tanımlanmıştır. BD Onclarity HPV Assay, test edilen mikroorganizmaların hiçbiri ile çapraz reaksiyon vermemiştir. 10

11 Tablo 15: Analitik Özgünlük için Test Edilen Mikroorganizmalar Bakteri* Virüsler** Actinomyces israelii Adenovirus tip 5 Atopobium vaginae EBV-1, B95-8 Suşu Bacteroides fragilis Bacteroides ureolyticus HCMV, AD169 Suşu HIV-1 Bifidobacterium adolescentis HSV1 Bifidobacterium breve HSV2 Bifidobacterium longum ssp. longum Yüksek risk HPV*** Chlamydia trachomatis HPV 16 Clostridium perfringens HPV 18 Corynebacterium genitalium HPV 31 Enterobacter cloacae ssp. cloacae HPV 33 Enterococcus faecalis HPV 35 Enterococcus faecium HPV 39 Escherichia coli HPV 45 Fusobacterium nucleatum ssp. nucleatum HPV 51 Gardnerella vaginalis HPV 52 Klebsiella pneumonia ssp. ozaenae HPV 56 Lactobacillus acidophilus HPV 58 Mycobacterium smegmatis HPV 59 Mycoplasma genitalium HPV 66 Neisseria gonorrhoeae HPV 68 Peptostreptococcus anaerobius Prevotella bivia Prevotella disiens Proteus mirabilis Proteus vulgaris Providencia stuartii Pseudomonas aeruginosa Staphylococcus aureus Staphylococcus epidermidis Streptococcus agalactiae Streptococcus pyogenes Ureaplasma urealyticum Maya/Protozoa**** Candida albicans Trichomonas vaginalis * Aşağıdakiler dışında, bakteriler yaklaşık 1,0 x 10 7 CFU/mL'de test edilmiştir: Chlamydia trachomatis (1,0 x 10 7 EB/mL), Mycobacterium smegmatis (2,5 x 10 6 CFU/mL), ve Ureaplasma urealyticum (8,0 x 10 6 CFU/mL). ** Virüsler 1,0 x 10 6 VP/mL'de test edilmiştir. *** Yüksek riskli HPV plazmid DNA'sı 1,0 x 10 6 kopya/ml'de test edilmiştir. **** Maya (Candida albicans yaklaşık 1,0 x 10 7 CFU/mL'de test edilmiştir; Protozoa (Trichomonas vaginalis) 1,4 x 10 6 CFU/mL'de test edilmiştir. Tablo 16: Analitik Özgünlük için Test Edilen düşük riskli HPV Plazmidler HPV 6 HPV 69 HPV 11 HPV 70 HPV 26 HPV 73 HPV 30 HPV 82 HPV 34 HPV 97 HPV 53 HPV 67 HPV c85 * Düşük riskli HPV plazmid DNA'sı 1,0 x 10 6 kopya/ml'de test edilmiştir. 11

12 İnterferant Maddeler: BD Viper LT Sisteminde BD Onclarity HPV Assay için olası interferans, klinik servikal örneklerde bulunabilen eksojen ve endojen maddelerle belirlenmiştir. Tasarlanmış HPV negatif örnekleri ve HPV pozitif örnekleri (3 x LOD'de SiHa, HeLa ve MS751 hücreleri ile birlikte güçlendirilmiş), her bir olası interferant maddenin varlığında ve yokluğunda test edilmiştir. Bu çalışmalarda kullanılan maddeler Tablo 17'de tanımlanmıştır. Konsantrasyonlar, BD Onclarity HPV Assay'de herhangi bir interferansla sonuçlanmayan en yüksek madde düzeyini temsil eder. Tablo 17: Olası İnterferant Maddeler BD Onclarity HPV Cervical BD SurePath Ortamı PreservCyt Ortamı Brush Diluent Olası İnterferant Madde Test edilen konsantrasyon Test edilen konsantrasyon Test edilen konsantrasyon KY Vajinal Kayganlaştırıcı %10 (a/h) %6 (a/h) %10 (a/h) VCF Vajinal Kontraseptif Film %3 (a/h) %10 (a/h) %10 (a/h) VCF Vajinal Kontraseptif Köpük %10 (a/h) %10 (a/h) %10 (a/h) Conceptrol Kontraseptif Jel %1 (a/h) %10 (a/h) %10 (a/h) Monistat 3* %2 (a/h) %2 (a/h) %1,8 (a/h) Clotrimazole 7 %10 (a/h) %10 (a/h) %10 (a/h) Vagistat-1 Tioconazole %2 (a/h) %2 (a/h) %2 (a/h) Klindamisin Vajinal Krem %9 (a/h) %10 (a/h) %10 (a/h) Summer's Eve Antiseptik Su %10 (h/h) %10 (h/h) %10 (h/h) Zovirax (Asiklovir) Krem %10 (a/h) %8 (a/h) %10 (a/h) Vandazole Jel (Metronidazol Vajinal Jel, %0,75) %10 (a/h) %10 (a/h) %10 (a/h) Summer's Eve Deodorant %2 (a/h) %3 (a/h) %2 (a/h) Bovin Müsini %10 (h/h) %10 (h/h) %10 (h/h) Progesteron 20 ng/ml 20 ng/ml 20 ng/ml Östradiol 1,2 ng/ml 1,2 ng/ml 1,2 ng/ml Tam Kan %3 (h/h) %5 (h/h) %5 (h/h) Lökositler 1x10 6 hücre/ml 1x10 6 hücre/ml 1x10 6 hücre/ml Semen %10 (h/h) %10 (h/h) %10 (h/h) Asetik Asit Yıkama** %5 (h/h) %5 Kan (h/h), Kan + Asetik Asit Yıkama %2,5 Asetik Asit Yıkama (h/h) * Listelenenlerden yüksek konsantrasyonlar, BD Viper LT Sisteminde ekstraksiyon sırasında sıvı seviyesi hatalarına neden olmuştur. ** Asetik Asit Yıkama, 1 birim Buzlu Asetik Asit: 9 birim CytoLyt solution'dan oluşur. 12

13 Kompetetif Hedef İnterferant: Miks bir enfeksiyon sırasında yüksek düzeyde bulunan bir hedef ve düşük düzeylerde bulunan diğer hedef nedeniyle HPV tespitinin inhibisyonu olasılığı BD Onclarity HPV Assay'de değerlendirilmiştir. SiHa, HeLa ve MS751 hücreleri, 3 x LOD'de kompetetif HPV hedefinin/hedeflerinin varlığında veya yokluğunda 1,0 x 10 6 kopya/ml'de HPV negatif hücre hattı (C33A) içeren BD SurePath Preservative Fluid, PreservCyt Solution ve BD Onclarity HPV Cervical Brush Diluent tüpünde ayrı ayrı veya toplu olarak değerlendirilmiştir (Tablo 18). Tablo 18: Kompetetif Hedef İnterferant HPV Assay Tüp Tipi G1 birlikte amplifiye edilmiş hedefleri içeren G1 Genotipleri G1 birlikte amplifiye edilmiş hedefleri içeren G2 Genotipleri G1 birlikte amplifiye edilmiş hedefleri içeren G3 Genotipleri 3 x LOD'de Ayrı HPV Hücresel Hedefler 1 x 10 6 kopya/ml'de HPV Plazmidler Rekabet Eden Genotiplerin Varlığında veya Yokluğunda (HPV Plazmidler) HPV Hücresel Hedef Tespiti SiHa (HPV 16) HPV 18 + HPV 45 Evet HeLa (HPV 18) HPV 16 + HPV 45 Evet HPV 45 (MS751) HPV 16 + HPV 18 Evet SiHa + HeLa + MS751 SiHa + HeLa + MS751 HPV 31 + HPV 33 + HPV 56 + HPV 58 + HPV 59 + HPV 66 HPV 35 + HPV 39 + HPV 51+ HPV 52 + HPV 68 Evet Evet Tekrarlanabilirlik: BD Onclarity HPV Assay'in tekrarlanabilirliği, BD Viper LT cihazında, negatif, yüksek negatif, düşük pozitif ve orta derecede pozitif örnekleri içeren dört üyeli bir panel kullanılarak değerlendirilmiştir. Pozitif panel üyeleri, bir HPV negatif hücre hattı (C33A) içeren HPV negatif klinikbd SurePath örnekleri ve BD Onclarity HPV Cervical Brush Diluent havuzları içinde toplu olarak güçlendirilmiş SiHa, HeLa ve MS751 hücrelerinden oluşmuştur. Panel, 12 gün boyunca üç reaktif lotu ve üç cihazın eşit dağılımı üzerinden test edilmiştir. Veriler Tablo 19 de özetlenmiştir. 13