TC ÇANKIRI KARATEKİN ÜNİVERSİTESİ HPLC-TOF/MSANALİZ RAPORU. Uluyazı Kampüsü Tel:

BİTKİ ARAŞTIRMA LABORATUVARI Talep Eden: Talep Edenin Adresi: TC ÇANKIRI KARATEKİN ÜNİVERSİTESİ HPLC-TOF/MSANALİZ RAPORU Uluyazı Kampüsü 18100 Tel: 0376 2132626-8016 E-mail: nmr@karatekin.edu.tr Mada Grup Eğitim Enerji Dan. İnş. Mob. Tar. San. Tic. A.Ş. Cumhuriyet Mah. Erdem Öztürk Sok. Çiğdem Apt. 8/4 Rapor No: 02 Rapor Tarihi: Numune Adet: 20.12.2016 Çankırı/Merkez RAPOR Mada Grup A.Ş tarafından verilen propolis (Madeva marka) ve diğer ticari propolis örneklerindeki kimyasal bileşenler; GC-MS ve HPLC-TOF/MS cihazları ile analiz edilmiştir. GC-MS Analiz Metodu: Propolis örneğindeki nispeten apolar özellikteki maddeler analizi için 10 g kuru propolis örneği 5 ml hekzan ile çözüldü. Çözeltinin yarısı direk olarak cihaza verilerek analiz edildi. Propolisin yağ asidi analizi için çözeltinin diğer yarısına 5ml metanolde hazırlanmış 2M KOH (Potasyum hidroksit) çözeltisi ilave edildi. Karışım 2500 rpm de 30 sn boyunca karıştırıldı. DİREK ESTER Oluşan üst fazdan (yağ asidi metil esterlerinin bulunduğu üst faz) alınıp süzülerek GC-MS (Agilent Technologies 7890A GC System, 5975 with Triple-Axis Detector mass spectrometer) cihaza verildi. Analiz sonucunda elde edilen değerler aşağıdaki tabloda % bağıl oranlar olarak verilmiştir. Tablo 1: GC-MS Analiz sonuçları RT (min) DİREK ESTER BİLEŞİK İSMİ 17,163 0,13 1-Tetradecanol 19,294 0,06 Lauric acid, methyl ester 20,208 0,07 1-Hexadecene 22,129 0,11 Myristic acid, methyl ester 24,487 0,03 1H-2-Indenol, 2,3,4,5,6,7-hexahydro-1-(2-hydroxy-2-methylpropyl) 25,175 0,03 0,08 geranyl-α-terpinene 26,265 36,79 Palmitic acid, methyl ester

2 26,626 0,01 geranyl-α-terpinene 27,372 1,45 0,68 geranyl-p-cymene 27,867 0,04 Verticiol 28,178 0,18 geranyl-α-terpinene 29,025 0,08 Manool oxide 29,805 0,09 Sclareol 31,089 0,79 Geranyllinalool 31,416 0,19??? 31,483 18,23 Oleic acid, methyl ester 31,885 2,69 Stearic acid, methyl ester 32,196 0,82 Sclareol 32,297 0,89 geranyl-α-terpinene 32,750 1,21 0,33 5-(7a-Isopropenyl-4,5-dimethyl-octahydroinden-4-yl)-3-methyl-pent-2-enal 32,842 0,18??? 32,968 0,47 Acetic acid, (1,2,3,4,5,6,7,8-octahydro-3,8,8-trimethylnaphth-2-yl)methyl ester 33,177 0,36 0,25 5-(7a-Isopropenyl-4,5-dimethyl-octahydroinden-4-yl)-3-methyl-pent-2-enal 33,395 0,20 Retinol 33,656 0,29??? 33,723 0,56 1-Naphthalenepentanol, decahydro-5-(hydroxymethyl)-5,8a-dimethyl-γ,2-bis(methylene)-, (1α,4aβ,5α,8aα)- 33,773 0,44 11-Dehydrocorticosterone 33,840 0,28 4,8,13-Cyclotetradecatriene-1,3-diol, 1,5,9-trimethyl-12-(1-methylethyl)- 33,941 3,12 0,90 Docosane 33,951 0,35 13-Eicosenoic acid, methyl ester 33,991 0,37 Pentacyclo[12.3.0.0(1,13).0(2,10).0(5,9)]heptadecan-6-ol-15-one, 5-methyl-13-methoxycarbonyl- 34,058 0,41??? 34,352 0,78 0,49 Pentacyclo[12.3.0.0(1,13).0(2,10).0(5,9)]heptadecan-6-ol-15-one, 5-methyl-13-methoxycarbonyl- 34,444 2,13 Ethanone, 1-(5,6,7,8-tetrahydro-2,8,8-trimethyl-4H-cyclohepta[b]furan-5-yl)- 34,771 3,61 14-Cedrandiol 34,930 0,26 Tetracosane 34,947 1,86 Hexadecanoic acid, ethyl ester 35,132 0,42 Betulin 35,271 0,18 Heneicosanoic acid, methyl ester 35,350 2,66 Isolongifolene, 7,8-dehydro-8a-hydroxy 35,467 10,89 Ethanone, 1-(5,6,7,8-tetrahydro-2,8,8-trimethyl-4H-cyclohepta[b]furan-5-yl)- 35,711 2,05 Phenol, 4,4'-butylidenebis[2-(1,1-dimethylethyl)-5-methyl- 35,778 0,26 12-Pentacosene 35,828 1,13 2,4-Di-t-butyladamantane-2,4-diol 35,895 1,03 3,3a-Epoxydicyclopenta[a,d]cyclooctan-4β-ol, 9,10a-dimethyl-6-methylene-3β-isopropyl- 36,155 8,18 3,94 tetracosane 36,315 0,98 3,3a-Epoxydicyclopenta[a,d]cyclooctan-4β-ol, 9,10a-dimethyl-6-methylene-3β-isopropyl- 36,432 0,43 Behenic acid, methyl ester 36,558 0,82 9-trans-Methyltrisporate C 37,221 4,21 Agatholic acid 37,279 0,59 Hexacosane 37,355 1,23 Cholest-22-ene-21-ol, 3,5-dehydro-6-methoxy-, pivalate 37,422 1,65 Agatholic acid 37,607 0,87 Pimaric acid 37,858 0,30 9-Desoxo-9-x-acetoxy-3,8,12-tri-O-acetylingol 38,479 0,44 Olean-12-ene-3,28-diol 39,007 21,36 12,86 Heptacosane 39,150 0,79? 39,284 0,72 Lignoceric acid methyl ester 39,377 0,29??? 36,432 0,43 Behenic acid, methyl ester

3 40,585 0,59 0,41 Octacosane 42,959 11,59 6,99 Nonacosane 45,425 0,25 Dotriacontane 48,008 1,35 0,81 17-Pentatriacontene 48,269 1,04 0,68??? 49,007 4,99 Hexatriacontane 56,850 3,21??? Yukarıdaki GC-MS analizleri incelendiğinde direk enjeksiyonanalizinde; ana bileşenlerin Heptacosane (%21,36), Nonacosane (%11,59), Ethanone, 1-(5,6,7,8-tetrahydro-2,8,8-trimethyl-4H-cyclohepta[b]furan-5- yl) (%10,89) ve tetracosane (%8,18), esterleştirme uygulanmış propolis örneğinde ise ana bileşenlerin Palmitic acid, methyl ester (%36,79), Oleic acid, methyl ester (%18,23), Heptacosane (%12,86) ve Nonacosane (%6,99) olduğu tespit edilmiştir. Propolis örneklerinin GC-MS analizleri sonuçları; propolis örneklerinin ana bileşenlerinin hidrokarbon (Heptacosane, Tetracosane, Nonacosane vb.)ve yağ asidi (oleic acid, palmitik asit vb.) olduğu görülmektedir. HPLC-TOF/MS Metodu: Propolis örneğindeki nispeten polar özellikteki kimyasal bileşenlerin analizi ise HPLC-TOF/MS cihazı ile analiz edildi. Örneklerden belirli bir miktar alındı ve derişimi 200 ppm olacak şekilde çözeltileri hazırlandı. Çözeltiler 0,45µm lik PVDF filtresinden süzülerek HPLC-TOF/MS (Agilent Technologies marka 1260 Infinity model HPLC, 6210 model TOF)cihazına verildi. Kantitatif miktarlar 1 kg propolis örneğindeki mg fenolik olarak aşağıda verilmiştir. Tablo 2: HPLC-TOF/MS Analiz Sonuçları: (mg fenolik/kg propolis) Madeva Su Bazlı Propolis Madeva Etanol Bazlı Propolis Diğer Ticari Su Bazlı Propolis Gallic acid tr tr tr Fumaric acid 6176,31 670,48 303,29 Gentisic acid 441,12 55,41 35,49 Chlorogenic acid 250,21 22,38 22,11 Catechin 1877,29 241,14 42,67 4-hydroxybenzoic acid 6725,93 1261,95 tr protocatechuic acid 83,11 86,97 78,02 caffeic acid 27998,53 1867,78 tr Vanillic acid 949,92 68,35 31,25 Syringic acid 85,30 nd 85,42 Rutin 103,30 4,57 nd 4-hydroxybenzaldehyde 46,49 tr tr Polydatine tr tr tr Ellagic acid tr tr tr Scutellarin 8,24 tr tr Quercetin-3-β-D-glucoside 66,99 tr tr sinapic acid tr tr tr naringin 8,25 tr nd Ferulic acid 2267,50 1445,76 nd

4 diosmin 616,08 157,64 nd Taxifolin 680,49 25,61 tr hesperidin 2,46 tr tr Apigetrin tr tr tr Neohesperidin 0,73 tr nd Myricetine tr tr nd Baicalin tr tr nd p-coumaric acid tr tr tr Fisetin tr tr tr Protocatechuic acid ethyl ester tr tr tr Morin 800,04 669,53 87,02 Resveratrol tr tr nd Salicylic acid tr tr tr quercetin 700,92 555,13 tr Silibinin tr tr tr Cinnamic acid 604,03 190,08 38,48 Apigenin 638,65 1465,12 14,02 Naringenin 490,97 716,90 783,47 kaempferol 976,91 1915,02 tr diosmetin tr 722,53 nd Neochanin tr tr tr eupatorin tr tr tr Wogonin 267,97 1528,68 48,32 Galangin 652,86 1349,19 tr Biochanin A tr tr tr *tr: eser miktarda olanlar. nd ise belirlenemeyenleri ifade etmektedir. Yukarıda tablodaki miktarlar incelendiğinde Madeva marka su bazlı propolis örneğindeki fenolik miktarının (caffeic acid, 4-hydroxybenzoic acid, Vanillic acid, Fumaric acid, Ferulic acid, Catechin, Taxifolin, diosmin, Cinnamic acid, Gentisic acid,chlorogenic acid ve Rutin) özellikle, diğer 2 örnekten çok daha fazla olduğu görülmektedir. Madeva firmasının propolis örnekleri karşılaştırıldığında; nispeten apolar özellikte olan apigenin, naringenin kaempferol, diosmetin, wogonin ve galangin bileşiklerinin etanol bazlı örnekte daha fazla olduğu, ayrıca naringenin hariç aynı bileşiklerin diğer ticari su bazlı propolis örnektekinden daha fazla olduğu tespit edilmiştir. Syringic acid bileşiği ise su bazlı propolis örneklerine eşit miktarda olduğu etanol bazlı örnekte ise olmadığı belirlenmiştir. Propolislerin markalara incelendiğinde ise naringenin bileşiği hariç diğer bileşiklerin Madeva firmasının propolis örneklerinde daha fazla tespit edilmiştir.

5 Laboratuvar Uzmanı Fatih GÜL Laboratuvar Sorumlusu Prof. Dr. İbrahim DEMİRTAŞ Her hakkı saklıdır.