LCMSMS ile Gıdalarda Multitoksin Analizi

Ebat: px

Şu sayfadan göstermeyi başlat:

Download "LCMSMS ile Gıdalarda Multitoksin Analizi"

Ebru Vural
7 yıl önce
İzleme sayısı:

1 UYGULAMA NOTU Sıvı Kromatografi Kütle Spektrometre M016 LCMSMS ile Gıdalarda Multitoksin Analizi HAZIRLAYAN Dr. Engin BAYRAM Ant Teknik Cihazlar Ltd. Şti.

2 KONU: İnsanlar ve hayvanlar için yüksek toksisiteye sahip olabilen mikotoksinler, gıda üretiminin bütün basamaklarında, üretim sonrası depolama aşamasında ortaya çıkabilir ve bunun da ekonomi, gıda güvenliği ve insan sağlığı açısından oldukça kritik sonuçları olabilir. Mikotoksinleri üreten küf mantarlarının, çoğunlukla ilgili gıdaya özel olması, immünoafinite kromatografisi (numune hazırlık) - HPLC metodlarının, mikotoksinlerin birçoğunun (özellikle de aflatoksinlerin) analizlerinde, halihazırda en yaygın olarak kullanılan teknikler olması sonucunu doğurmuştur. Eğer analizde, tekil bir gıda gurubu hedefleniyorsa (sadece fındık, buğday, bebek devam sütü vb.) bahsedilen teknikler rahatlıkla tercih edilebilirler ancak konu kompleks gıdalara geldiğinde (bebek maması, tıbbi amaçlı bebek diyet ürünleri, kakaolu fındık kreması vb.) durum karmaşık bir hal alacaktır. Bu tür gıdalar, birer karışım olduğundan ve içerdikleri bitkisel/hayvansal gıdaların kaynakları da farklı olduğundan birer mikotoksin kokteyli olabilirler ve her bir mikotoksin grubunun analizi de ayrı bir numune hazırlık aşaması demektir. Özetle kompleks gıda maddesi ile karşılaşıldığında analiz süresi uzayacak ve analiz maliyeti artacaktır. LC-MSMS yöntemi kullanılarak multi-bileşen içeren kompleks bir gıda maddesinin analizini, numune hazırlığı tek metoda indirgeyerek, tek enjeksiyon ile gerçekleştirmek mümkündür. ÇALIŞMANIN AMACI: LC-MSMS yöntemi kullanılarak multi-bileşen içeren kompleks bir gıda maddesinin analizini, numune hazırlığı tek metoda indirgeyerek, tek enjeksiyon ile gerçekleştirmek mümkündür. METOD ve MATERYALLER: Numune hazırlık: Sertifikalı analit standardları, metanol ile seyreltilerek korelasyon eğrisi için gerekli standard karışımlar hazırlanmıştır. Gerçek numuneler: 5g numune tartılarak üzerine 40mL asetonitril (0.2%(v/v) asetik asit içeren) eklenir, 25 dakika çalkalanır, santrifüj edilir ve 0,22um lik şırınga ucu filtreden süzülerek sisteme enjekte edilir.

3 ANALİTİK KOŞULLAR: MS Koşulları; Cihaz : Shimadzu Model :LCMS-8040 TQ Block Heater Temp : 500 C DL Temp : 250 C Nebulizing Gas : 3.0 L/min Drying Gas : 15L/min Source/Polarity : ESI(+) MRM Transitions ID# Name m/z Ref. Ions 1 DON 297,10>249,10 297,10>231,10 2 AFG2 330> >284,90 3 AFG1 329,00> ,00>20 4 AFB2 315,20>258,90 315,20>287,00 5 AFB1 313,20> ,20>240 6 FB1 722,40>334,20 722,40>352,30 7 HT2Toxin 442,20> ,20>210 8 FB2 706,40>336,20 706,40>318,30 9 T2Toxin 484,20> ,20> Citrinin 251,20> ,20> ZON 317,00>130,70 317,00>174,50 12 OTA 404,20>238,90 404,20>358,10 LC Koşulları; Cihaz :UPLC Model :Shimadzu Nexera X-II Kolon :Shimpack XR-ODS-II (2.2um, 75x3.0mm) Mobil Phase A :Water (2mM Ammonium Formate, 0.2% Formic Acid) Mobil Phase B :Methanol (2mM Ammonium Formate, 0.2% Formic Acid) Akış :0.4 ml/min (Gradient Program) Enjeksiyon Hacmi 10 ul

4 AFB2 AFB1 FB1 DON AFG2 AFG1 Değerlendirmeler : 13 adet mikotoksin simultane olarak tayin edilmiştir. LOQ seviyesinde hazırlanan kalibrasyon standardlarına ait derişim ve S/N değerleri aşağıda özetlenmiştir. Mikotoksin Conc.(ug/L) S/N Deoxynivalenol (DON) 2 15,36 Aflatoxin G2 (AFG2) 2 13,76 Aflatoxin G1 (AFG1) 2 197,77 Aflatoxin B2 (AFB2) 2 12,9 Aflatoxin B1 (AFB1) 2 33,31 FumonisinB1 (FB1) 3 12,24 HT2 Toxin 1 58,59 FumonisinB2 (FB2) 3 12,79 T2 Toxin 0,1 14,31 Citrinin 1 24,33 Zearalenon (ZON) 1 21,8 Ochratoxin A (OTA) 2 11,2 Aflatoxin M1 (AFM1) 2 10,48 Kromatogramlar Kalibrasyon Çözeltisi (Kantitatif Kromatogramlar) (x00) 1:297,10>249,10(+) 0 1:297,10>231,10(+) (x00) 0 2:330>240(+) 2:330>284,90(+) (x00) 3:329,00>240(+) 3:329,00>20(+) 2, ,75 0 2,75 0 2,25 (x00) 4:315,20>258,90(+) 4:315,20>287,00(+) 0 (x00) 5:313,20>280(+) 5:313,20>240(+) (x00) 6:722,40>334,20(+) 6:722,40>352,30(+) ,25 3,25 3,50 3,50 3,75

5 AFM1 Citrinin ZON OTA HT2Toxin FB2 T2Toxin (x00) 7:442,20>260(+) 7:442,20>210(+) (x00) 8:706,40>336,20(+) 8:706,40>318,30(+) (x100) 9,0 9:484,20>180(+) 9:484,20>210(+) 8,0 7,0 6,0 0 4,25 4,50 4,75 0 4,75 0 5,25 (x10) (x00) 10:251,20>230(+) 12:317,00>130,70(-) 10:251,20>200(+) 12:317,00>174,50(-) (x100) 11:404,20>238,90(+) 11:404,20>358,10(+) 7,0 6,0 0 5,50 5,75 5,25 5,50 5,50 5,75 6,00 MT DON AFG2 AFG1 AFB2 AFB1 FB1 HT2Toxin FB2 T2Toxin Citrinin ZON OTA Conc.(ug/L) 4 0,1 0,1 0,1 0, , ,1 Kalibrasyon Çözeltisi (Kantitatif Kromatogramlar-Devam) 6,0 (x100) 3:329,10>273,20(+) 3:329,10>229,00(+) 5,5 4,5 3,5 5,25 5,50 5,75 MT AFM1 Conc.(ug/L) 5

6 FB2 FB1 ZON DON AFB1 ZON Kakaolu Fındık Ezmesi Numunesi Kromatogramı (TIC-Scheduled MRM ) (x100) 9,0 6:AFB1 TIC(+) 6:AFB1 313,10>285,10(+) CE: -2 6:AFB1 313,10>241,10(+) CE: -39,0 10:ZON TIC(-) 10:ZON 316,90>170(-) CE: 2 10:ZON 316,80>131,10(-) CE: 28,0 8,0 7,0 6,0 6,25 6,50 6,75 7,00 7,25 7,50 7,75 8,00 8,25 8,50 8,75 9,00 min Name AFB1 ZON Conc.(ug/kg) 0,155 1,352 Mısır Numunesi Kromatogramı (TIC-Scheduled MRM) (x10) 1:DON TIC(+) 1:DON 297,20>249,10(+) CE: -1 1:DON 297,20>231,20(+) CE: -1 7:FB1 TIC(+) 8:FB2 TIC(+) 10:ZON TIC(-) 7:FB1 722,40>334,30(+) CE: -4 8:FB2 706,40>318,40(+) CE: -4 10:ZON 316,90>170(-) CE: 2 7:FB1 722,40>352,40(+) CE: -39,0 8:FB2 706,40>336,40(+) CE: -4 10:ZON 316,80>131,10(-) CE: 28,0 4,5 3,5 3,5 4,5 5,5 6,0 6,5 7,0 7,5 8,0 8,5 9,0 min Name DON FB1 FB2 ZON Conc. (ug/kg) 735,185 41,137 14,46 53,578

7 AFG1 ZON AFB1 AFG2 AFB2 DON SONUÇLAR ve GÖRÜŞLER Ekstraksiyon çözeltisi olarak metanol ve asetonitril denenmiş asetonitrilde geri kazanımın daha iyi olduğu tespit edilmiştir. Ekstraksiyon amacıyla orbital shaker yerine programlanabilir rotator kullanılmasının yine geri kazanım sonuçlarını iyileştirdiği gözlenmiştir. Metod optimizasyonu ardından, dış kalite kontrol numuneleri analiz edilerek bulunan sonuçlar, gerçek sonuçlar ile karşılaştırılmış ve analizlerin oldukça yüksek doğrulukta sonuçlandığı gözlenmiştir. Dış Kalite Kontrol/FAPAS (Yem Numunesi-TIC-Scheduled MRM ) (x10) 2, ,5 4,5 5,5 6,0 6,5 7,0 7,5 8,0 8,5 9,0 min Name DON AFG2 AFG1 AFB2 AFB1 ZON Conc ,197 1,814 3,232 3,877 11,854

8 OTA Dış Kalite Kontrol/FAPAS (Un Numunesi-TIC-Scheduled MRM ) (x10) 9:OTA TIC(+)() 9:OTA 404,10>239,10(+) CE: -2(0,20) 1,1 9:OTA 404,10>358,10(+) CE: -1 0,9 0,8 0,7 0,6 0,4 0,3 0,2 0,1 8,5 8,6 8,7 8,8 8,9 9,0 9,1 9,2 min Name OTA Conc.(ug/kg) 7,713 Bu Aplikasyon Notu uygulamanın gerçekleştirildiği tarihe ait bilgiler ışığında oluşturulmuştur. Bu yayında yer alan bilgilerin referans gösterilerek başka bir yerde kullanılması Ant Teknik in iznine tabidir. Aplikasyon Notu Ant Teknik tarafından önceden bildirilmeksizin değiştirilebilir. antteknik.com

Benzer belgeler

UYGULAMA NOTU. LCMSMS ile Bebek Mamasında Multitoksin Analizi - 2. Sıvı Kromatografi Kütle Spektrometre HAZIRLAYAN

UYGULAMA NOTU. LCMSMS ile Bebek Mamasında Multitoksin Analizi - 2. Sıvı Kromatografi Kütle Spektrometre HAZIRLAYAN UYGULAMA NOTU Sıvı Kromatografi Kütle Spektrometre M031 LCMSMS ile Bebek Mamasında Multitoksin Analizi - 2 HAZIRLAYAN Dr. Engin Bayram Ant Teknik Cihazlar Ltd. Şti. KONU: Bebek mamasında multitoksinlerin