B Directigen EZ Flu A+B İnfluenza A ve B Viral Antijenlerinin Ayırt Edici Olarak ve Doğrudan Saptanması Amacıyla Kullanılır

Transkript

1 A+ İnfluenza A ve Viral Antijenlerinin Ayırt Edici Olarak ve Doğrudan Saptanması Amacıyla Kullanılır /03 U Türkçe KULLANIM AMACI A+ testi, nazofarengeal yıkama sıvıları/aspiratlar, nazofarengeal swablar ve semptomatik hastaların boğaz swablarında influenza A ve viral antijenlerinin doğrudan ve nitel olarak saptanması açısından hızlı bir kromatografik immüno testtir. A+ testi influenza A viral antijenlerinin, tek bir cihaz kullanılarak işlenen tek bir örnekle influenza viral antijenlerinden ayrıştırılabildiğiayırt edici bir testtir. u test, influenza A ve viral enfeksiyonların tanısının konmasında yardımcı olarak kullanılır. Tüm negatif test sonuçları, hücre kültürüyle doğrulanmalıdır çünkü negatif sonuçlar influenza virüs enfeksiyonunu önlemez ve tedavi için ve diğer kararlarda tek dayanak olarak kullanılmamalıdır. Nazofarengeal swablar (NPS) kullanılarak İnfluenza nin performans özellikleri, öncelikli olarak retrospektif, donmuş örneklerle belirlenmiştir Kullanıcılar, isterlerse, yeni nazofarengeal swab örnekleri kullanarak İnfluenza için bu testin duyarlılığını belirleyebilirler. ÖZET VE AÇIKLAMA İnfluenza hastalığı klasik olarak ani ateş çıkması, titreme, baş ağrısı, miyalji ve kuru öksürük şeklinde kendini gösterir. İnfluenza epidemikleri tipik olarak kış aylarında görülür; AD de yılda tahmini olarak kişi hastaneye yatmakta 1 ve kişi hayatını kaybetmektedir. 2 İnfluenza virüsleri, influenzayla ilgili komplikasyonların hastalık ve ölüm oranlarının önemli oranda artabildiği salgın hastalıklara yol açabilir. İnfluenza olduğundan şüphelenilen hastalar, özellikle hastalık başlangıcından itibaren ilk 48 s içinde verilen antiviral ajanlarla tedavide edilebilir. Doktorların seçici bir antiviral müdahale seçebilmeleri için influenza A ile influenza yi hızla ayırt etmeleri önem teşkil etmektedir. Aynı zamanda, influenza A nın mı yoksa influenza nin mi belirli bir kurumda (örn; bakımevi) veya toplulukta semptomatik hastalığa yol açtığını belirlemek de önemlidir; böylelikle şüphelenilen bireyler üzerinde uygun koruyucu müdahaleler uygulanabilir. Dolayısıyla, influenzavarlığının hızla belirlenmesinin yanı sıra, hangi tip influenza virüsünün var olduğunun tespiti de önemlidir. İnfluenzanın tanı testleri immün testi, immünofloresan testi, polimeraz zinciri reaksiyonu (PCR), seroloji ve viral kültürü kapsar İmmünofloresan testleri, floresan mikroskopiyle gözlem yapmak için floresan etiketli antikorlar kullanılarak mikroskop slaytlarına sabitlenmiş örneklerin boyanmasını gerektirir. 5,11,12 Kültür yöntemleri, hücre kültüründe başlangıç viral izolasyonu uygular, bunu influenza virüsünün bulunduğunu doğrulamak için hemadsorpsiyon inhibisyonu, immünofloresan veya nötralizasyon testleri izler A+ testi, semptomatik hastaların solunum yolu örneklerinde 15 dakika içinde influenza A veya antijenlerini saptamak amacıyla kullanılan bir kromatografik immün testidir. A+ testinin hızlı ve basitleştirilmiş iş akışı, influenza tanısına yardımcı olarak ilgili bilgiler sunan bir STAT influenza A ve antijeni saptama testi olarak kullanılmasını sağlar. A+ testinin Flu A ile Flu enfeksiyonunu ayırt etmekte kullanılması, antiviral müdahalede daha geniş çapta seçim yapma şansı sunabilir. PROSEDÜR İLKELERİ A+ testi, solunum yolu örneklerinden işlenen örneklerde influenza A ve viral antijenlerinin nitel olarak saptanmasında kullanılan kromatografik bir testtir. Örnekler işlenip test cihazına eklendiğinde, influenza A veya viral antijenleri, ilgili A ve test striplerinde görünen partiküllere konjuge olmuş anti-influenza antikorlarına bağlanır. Antijenkonjugat kompleksi test stribi üzerinden reaksiyon alanına ilerler ve membran üzerindeki antikor çizgisinde yakalanır. Pozitif influenza A sonucu, A okuma penceresinde Test T konumunda ve Kontrol C konumunda kırmızımsı mor bir çizgi olarak görülür. Pozitif İnfluenza sonucu ise, okuma penceresinde Test T konumunda ve Kontrol C konumunda kırmızımsı mor bir çizgi olarak görülür. REAKTİFLER Aşağıdaki bileşikler A+ kitine eklenmiştir: D Flu A+ Cihazları 30 Cihaz İki reaktif stribi içeren folyo torbalı cihaz. Her bir stribin, Flu A veya Flu influenza viral antijenine özgü monoklonal antikor test çizgisi ve bir de anti-türler antikor kontrol çizgisi bulunmaktadır. Reaktif E 4,7 ml Deterjan, %0,2 sodyum azit ile (koruyucu). Kontrol A+/- 2,8 ml Flu A Pozitif ve Flu Negatif Kontrolü, influenza A antijeni (etkisiz rekombinant nükleoprotein), %0,1 sodyum azit ile (koruyucu). Kontrol +/A- 2,8 ml Flu Pozitif ve Flu A Negatif Kontrolü, influenza antijeni (etkisiz rekombinant nükleoprotein), %0,1 sodyum azit ile (koruyucu). DispensTube Tüpleri 30 Örnek işleme tüpleri ve cihazlara örnek nakli. DispensTube Uçları 30 Cihazlara nakledilen örneğin filtreleme uçları Gerekli fakat sağlanmamış malzemeler: Pipet (300 µl dağıtabilen pipet ucu), zamanlayıcı, vorteks karıştırıcı, aktarım besiyeri (bkz. Örnek Toplama ve Kullanma), normal tuz çözeltisi ve swablar. Uyarılar ve Önlemler: In vitro Diyagnostik Kullanım içindir. 1. Kamu sağlığı yetkililerince önerilen mevcut klinik ve epidemiyolojik tarama kriterleri temelinde yeni bir influenza A virüslü enfeksiyondan şüphelenilirse, yeni virülent influenza virüsleri için, örnekler, uygun enfeksiyon kontrolü önlemleriyle alınmalı ve test amacıyla ulusal veya yerel sağlık birimlerine gönderilmelidir. u vakalarda, SL 3+ işlemi örneklerin alınması ve kültürlenmesi için uygun hale gelene dek, viral kültürle çalışılmamalıdır.

2 2. Klinik örneklerde hepatit virüsü, İnsan İmmün Yetmezlik Virüsü ve yeni influenza virüsleri de dahil olmak üzere patojenik mikroorganizmalar bulunabilir. Kan veya diğer vücut sıvılarıyla kontamine olan tüm örnekler ve tüm öğelerle çalışılırken, tüm bunlar saklanırken ve atılırken, Standart Önlemler ve kurumsal düzenlemeler takip edilmelidir. 3. Reaktifler, solunması, yutulması veya cilde temas etmesi zararlı olan sodyum azit içerir. Asitlerle temas etmesi çok zehirli gazların açığa çıkmasına neden olur. Ciltle teması halinde, derhal bol suyla yıkayın. Sodyum azit, kurşun ve bakırla reaksiyona girerek yüksek oranda patlayıcı metal azit oluşturabilir. Atma işleminde, azit oluşumunu önlemek için yüksek hacimde suyla çalkalayın. 4. Son kullanma tarihi geçen kit bileşenlerini kullanmayın. 5. Farklı kit lot numaralı reaktifleri karıştırmayın. 6. Cihazı yeniden kullanmayın. 7. Kontrol A+/- ve Kontrol +/A- uygun sonuçlar vermezse kiti kullanmayın. Saklama ve Kullanma: Kitler 2 25 C de saklanabilir. DONDURMAYIN. Reaktifler ve cihazlar, test için kullanıldığında, oda sıcaklığında (15 25 C) olmalıdır. ÖRNEK TOPLAMA VE KULLANMA Örneklerin Nakledilmesi ve Saklanması: Yeni toplanan örnekler hemen işlenmelidir. Gerekirse, örnekler (boğaz swabları dışında) uygun bir aktarım besiyerinde saklanabilir ve en fazla 72 s 2 8 C de veya en fazla yedi gün boyunca -20 C de tutulabilir. Doğru örnek toplama ve hazırlama yöntemlerinin izlenmiş olması önemlidir. Kullanım öncesi örneklere santrifüj uygulamayın, aksi takdirde sellüler maddenin çıkarılması test duyarlılığını olumsuz etkileyebilir. Hastalık gidişatında erken alınan numuneler, en yüksek viral titrelerini içerecektir. Aktarım esiyeri: Aşağıdaki aktarım besiyeri test edilmiş ve A+ Testi ile uyumlu bulunmuştur: Amies esiyeri (sıvı) PS artı %0,5 SA artel ViraTrans esiyeri PS artı %0,5 jelatin Earle s Minimal Essential Medium (EMEM) Fosfat Tamponlu Tuz Çözeltisi (PS) EMEM artı %0,5 SA Starplex Multitrans EMEM artı %1 SA Sukroz Fosfat (2-SP) Hanks azal Tuz Çözeltisi Trypticase Soy roth M4 esiyeri Trypticase Soy roth + %0,5 jelatin M4 RT esiyeri Trypticase Soy roth + %0,5 SA M5 esiyeri D Evrensel Viral Aktarım esiyeri Değiştirilmiş Stuart esiyeri (sıvı) Veal Infusion roth (VI) Normal Tuz Çözeltisi* VI artı %0,5 SA * A+ testi ile kullanılacak normal tuz çözeltisinde toplanan örneklerin dondurularak saklanması önerilmemektedir. Uygun bir değerlendirme işlemi gerçekleştirilirse, diğer aktarım besiyeri kullanılabilir. NOT: Laktalbumin (%0,5 veya %1,0) içeren EMEM besiyeri veya laktalbumin içeren başka bir aktarım besiyeri, Directigen EZ Flu A+ testi ile uyumlu değildir. Örnek Toplama ve Hazırlama: A+ testi ile test edilecek kabul edilebilir örnekler, nazofarengeal yıkama sıvıları/aspiratlar, nazofarengeal swablar ve boğaz swablarını kapsar. Yetersiz miktarda örnek toplama, örneğin uygunsuz işlenmesi ve/veya nakli hatalı negatif bir sonuç verebilir; bu nedenle doğru test sonuçları elde etmek için örnek kalitesinin önemi dolayısıyla örnek toplama eğitimi tavsiye edilmektedir. Nazofarengeal Yıkama Sıvısı/Aspirat ve Nazofarengeal Swab Örnekleri Prosedürü: 1. NP yıkama sıvıları/aspiratlarda, 1 e 3 ml örnek hacmi tavsiye edilmektedir. Aktarım besiyeri kullanılırsa, örneğin minimum düzeyde seyreltilmesi tercih edilir. 2. Aşırı miktarda yıkama hacimlerinin kullanımından kaçınılmalıdır, aksi takdirde test duyarlılığında düşüşe sebep olabilir. 3. NP swablarında, toplama sonrası swabları 1 e 3 ml lik aktarım besiyerine yerleştirin. 4. Test Prosedürü nde açıklandığı gibi örnekleri işleyin. oğaz Swabı Örneklerinin Prosedürü (poliüretan [köpük] swabları tavsiye edilmektedir kz. Ticari Takdim Şekli ölümü): 1. oğaz swabı örnekleri, Test Prosedürü nde anlatıldığı üzere aktarım besiyeri olmadan işlenmelidir. PROSEDÜR Test Prosedürü NOTLAR: Reaktifler, örnekler ve cihazlar, test için kullanıldığında, oda sıcaklığında (15 25 C) olmalıdır. İşleme amacıyla bir alikot almadan önce, tüm örnekleri tamamıyla karıştırın. Örnekleri santrifüje tabi tutmayın. DispensTube tüpleri ve reaktif şişeleri dik tutulmalıdır ( A+ cihaz örneği kuyucuğu veya DispensTube tüpünden yaklaşık 2,54 cm yukarıda), tek seferde dikkatle bir damla dağıtılmalıdır. 1. A+ cihazını, test öncesinde hemen folyo torbasından çıkarın. 2. Test edilecek her bir kontrol ve örnek için bir cihazı ve bir DispensTube tüpünü etiketleyin. 3. Etiketli DispensTube tüpünü/tüplerini, iş istasyonunun veya rafın belirlenen alanına yerleştirin. 2

3 4. Reaktif E yi nazikçe karıştırın. DispensTube tüpüne 4 damla damlatın. Damlaları dağıtırken reaktif şişesini dik tutun (DispensTube tüpünün yaklaşık 2,54 cm yukarısı). E 5. Örneği veya kontrolü karıştırın ve aşağıda belirtilen şekilde işleyin. a. Aktarım besiyerinde nazofarengeal yıkama sıvısı/aspirat örnekleri ve nazofarengeal swab örnekleri: 1. Örnekleri vorteksleyin veya tamamen karıştırın. Santrifüje tabi tutmayın µl örneği DispensTube tüpüne (Reaktif E içerir) pipetleyin. b. oğaz swabı örnekleri için: µl normal tuz çözeltisini DispensTube tüpüne (Reaktif E içerir) ekleyin. 2. Swabı sokun ve tüpü sıkıştırırken, swabı 6 8 kez çevirerek ilerletin. 3. Swabı çıkarın (swab ucundan aşırı miktardaki sıvıyı almak için tüpü sıkın). c. Kit Kontrolleri için: 1. Kontrol A+/- ve Kontrol +/A- flakonlarını nazikçe karıştırın damla Kontrol A+/- yi uygun şekilde etiketlenmiş DispensTube tüpüne (Reaktif E içerir) ekleyin damla Kontrol +/A- yi uygun şekilde etiketlenmiş DispensTube tüpüne (Reaktif E içerir) ekleyin. A+/ - +/ A- 6. DispensTube Ucunu, işlenmiş örnek veya kontrol içeren DispensTube tüpüne koyun. Not: Directigen ürünleri dışındaki uçları kullanmayın. 3

4 7. Vorteksleyin veya tamamen karıştırın. 8. DispensTube tüpünü ters çevirin ve ucun üst yarısından tüpü tutarak, işlenmiş örnekten uygun şekilde etiketlenmiş A+ cihazının Flu A örnek kuyucuğuna üç (3) damla ve Flu örneği kuyucuğuna üç (3) damla sıkın. Not: Tüpü ucuna yakın sıkmak, ucun çıkmasına ve içerik maddelerinin tüpten sızmasına yol açabilir. A C T 9. Örnek eklendikten sonra, 15 dakikada sonuçları okuyun ve test sonucunu kaydedin. Kalite Kontrolü: Gerekli kalite kontrolleri ilgili yerel, resmi ve/veya federal düzenlemeler veya akreditasyon gerekliliklerine veya laboratuvarınızın standart Kalite Kontrol prosedürlerine uygun olarak gerçekleştirilmelidir. Her A+ cihazı, pozitif ve negatif dahili/prosedüre ilişkin kontroller içerir: Kontrol C konumunda Flu A ve/veya Flu okuma penceresinde kırmızımsı mor bir kontrol çizgisinin görülmesi, uygun reaktif işlevini doğrulayan ve doğru testin izlendiğini gösteren dahili bir pozitif kontrol sağlar. Flu A ve/veya Flu ve kontrol çizgilerini çevreleyen membran alanı, cihazın dahili negatif kontrolüdür. eyaza veya hafif pembe olan arkaplan alanı, testin doğru yürütüldüğünü gösterir. Her bir A+ kiti, sıvı Kontrol A+/- ve Kontrol +/A- kit kontrollerini içerir. u kontroller, hasta örnekleriyle aynı şekilde test edilir ve harici bir kalite kontrolü sağlar. Minimum seviyede, bu sıvı kontrolleri, alınan her yeni kit nakli veya lotunda kalite kontrol prosedürü olarak uygulanmalıdır. İstenirse, uygun reaktif performansı ve uygun test tekniği de influenza A veya virüsü için pozitif veya negatif olarak nitelendirilen örnekler kullanılarak belirlenebilir. Kontrol A+/- test edilirken, Test (T) konumu ve Kontrol (C) konumunda Flu A okuma penceresinde ve Kontrol +/A- test edilirken, Test (T) konumu ve Kontrol (C) konumunda Flu okuma penceresinde membran üzerinde kırmızımsı mor bir çizginin oluşması, test stribinin influenza antijeni bağlayıcı özelliğinin işlevsel olduğunu gösterir. Kontrol A+/- uygulanırken Flu okuma penceresinde Kontrol (C) konumunda kırmızımsı mor bir kontrol çizgisinin oluşması ve test (T) konumunda kırmızımsı mor bir çizginin oluşmaması, reaktif işlevinin uygun olduğunu ve uygun test prosedürünün izlendiğini belirten uygun bir Flu negatif kontrol sonucudur. enzer şekilde, Kontrol +/A- test edilirken Flu A okuma penceresinde Kontrol (C) konumunda kırmızımsı mor bir çizginin oluşması ve Test (T) konumunda kırmızımsı mor bir test çizgisinin oluşmaması, uygun bir Flu A negatif kontrol sonucunu gösterir. Kit kontrolleri beklenen sonucu vermezse hasta sonuçlarını raporlamayın. Daha fazla yardım için yerel D temsilcilerinizle temasa geçin. SONUÇLARIN YORUMLANMASI NOT: Kontrol çizgisinin yoğunluğu, Flu A ve Flu okuma pencereleri arasında değişkenlik gösterebilir. Kontrol çizgisi yoğunluğundaki değişkenlik kabul edilebilir niteliktedir. Arkaplan alanı beyaz veya açık pembe olmalıdır ve Flu A ve Flu okuma pencereleri arasında yoğunluk bakımından değişkenlik gösterebilir. Pozitif İnfluenza A Testi (influenza A antijen mevcut) - A okuma penceresinde Test T konumunda ve Kontrol C konumunda kırmızımsı mor bir çizgi görülür. u sonuç, herhangi bir belirli influenza A virus alt tipini belirlemez. Kırmızımsı mor bir çizgi okuma penceresinin Kontrol C konumunda da oluşmalıdır. u durum, influenza A antijeninin örnekte saptandığını belirtir. Arkaplan alanı beyaz veya açık pembe olmalıdır. Pozitif İnfluenza Testi (influenza antijen mevcut) - okuma penceresinde Test T konumunda ve Kontrol C konumunda kırmızımsı mor bir çizgi görülür. Kırmızımsı mor bir çizgi A okuma penceresinin Kontrol C konumunda da oluşmalıdır. u durum, influenza antijeninin örnekte saptandığını belirtir. Arkaplan alanı beyaz veya açık pembe olmalıdır. Negatif Flu A veya Flu Testi (antijen saptanmaz) - Test T konumunda veya Flu A ya da Flu okuma penceresinde kırmızımsı mor bir çizginin oluşmaması, influenza A antijeninin veya influenza antijeninin ya da her ikisinin de örnekte saptanmadığını gösterir. u sonuçlar influenza viral enfeksiyonunun var olmadığını göstermez. Flu A okuma penceresinde, Flu okuma penceresinde veya her iki okuma penceresinde Kontrol C konumunda görülen kırmızımsı mor bir çizgi, test prosedürü ve reaktiflerin performansının uygun olduğunu belirtir. Arkaplan alanı beyaz veya açık pembe olmalıdır. 4

5 Geçersiz Test - Test, Flu A veya Flu ya da her iki Flu A ve Flu için, ilgili okuma penceresi/pencerelerinde Kontrol C konumunun yanında kırmızımsı mor bir çizgi oluşmazsa geçersizdir. Test, aynı zamanda, aynı örnekte her iki Flu A ve Flu okuma penceresinin Test T konumunda kırmızımsı mor bir çizgi görülürse de geçersizdir. Test geçersizse, tekrarlanmalıdır. SONUÇLARIN RAPORLANMASI Pozitif Test İnfluenza A veya influenza antijenin olup olmadığına dair pozitif Pozitif sonuç, canlı virüsler bulunduğunda oluşabilir. Negatif Test İnfluenza A veya influenza antijenin olup olmadığına dair negatif Örnekte bulunan antijen testin saptama sınırının altında olabileceğinden influenza kaynaklı enfeksiyon yok sayılamaz. Negatif örneklerin kültür doğrulaması tavsiye edilir. Geçersiz Test Test sonucu sonuçsuzdur. Sonuçları raporlamayın. PROSEDÜRÜN KISITLI OLDUĞU ALANLAR İnfluenza A veya virüsü dışında mikroorganizmaların sebep olduğu solunum yolları enfeksiyonu etiyolojisi bu testte oluşturulmayacaktır. A+, canlı ve cansız influenza partiküllerini saptayabilir. A+ Test performansı, antijen yüküne bağlıdır ve aynı örnekte gerçekleştirilen hücre kültürüyle ilişkilendirilmez. Düşük seviyede virüs atlatması hatalı negatif bir sonuç verebilir; dolayısıyla negatif test sonucu, influenza A veya influenza ya da influenza A ve influenza enfeksiyonu olasılığını ortadan kaldırmaz. A+ nin hücre kültürü izolatlarının tanımlanması veya doğrulanması açısından etkinliği kanıtlanmamıştır. İnfluenza A/H3 ve A/H1 sirkülasyonda hakim influenza A virüsleri olduğu durum için, influenza A nın performans özellikleri belirlenmiştir. Diğer influenza A virüsleri için, performans özellikleri değişebilir. Çocuklar yetişkinlere oranla virüsleri daha fazla barındırma eğilimi gösterirler, bu da yetişkinler ve çocuklar arasındaki duyarlılık farklılıklarına neden olabilir. Pozitif ve negatif tahmini değerler, görülme sıklığına bağlıdır. Hatalı pozitif test sonuçları, görülme sıklığı orta ila düşük seviyedeyse daha çok düşük influenza etkisi dönemlerinde oluşur. EKLENEN DEĞERLER Solunum yolları testinde gözlenen pozitiflik oranı, örnek toplama, uygulanan kullanma/nakil sistemi, kullanılan saptama yöntemi, yılın belli zamanı, hastanın yaşı, coğrafi konum ve en önemlisi hastalığın yerel görülme sıklığına bağlı olarak değişkenlik gösterir klinik çalışmasında kültürle birlikte gözlenen genel görülme sıklığı influenza A için %24,3 ve influenza için %3,8 dir klinik çalışmasında ise, kültürle birlikte gözlenen genel görülme sıklığı influenza A için %26,0 ve influenza için %31,2 dir klinik çalışmasında, kültürle birlikte gözlenen genel görülme sıklığı influenza A için %33,9 ve influenza için %0,2 dir. PERFORMANS ÖZELLİKLERİ A+ testinin performans özellikleri, solunum döneminde beş deneme tesisinde, solunum döneminde 13 deneme tesisinde ve 2006 solunum döneminde 2 deneme tesisinde yürütülen çok merkezli çalışmalarla belirlenmiştir. Klinik merkezler Amerika irleşik Devletleri, Japonya, Hong Kong ve Yeni Zelanda nın çeşitli coğrafi alanlarında bulunmaktadır. A+ testi ve hücre kültüründe toplam prospektif örnek ve 59 retrospektif örnek değerlendirilmiştir. u örnekler, influenzadan şüphelenilen hastaların nazofarengeal yıkama sıvıları, nazofarengeal aspiratları, nazofarengeal swabları ve boğaz swablarını kapsar. Klinik Performans: Her örnek tipi için hücre kültürüne kıyasla A+ testinin performans özellikleri Tablo 1 ila Tablo 6 da gösterilmiştir. Tablo 1: Tüm Örnek Tipleri için Kültüre Kıyasla A+ Testinin Performans Özeti - İnfluenza A irleşik , ve 2006 Solunum Dönemleri Hücre Kültürü Örnek Türü A+ Testi P N Nazofarengeal yıkama sıvıları/aspiratlar Duyarlılık: %86 (%95 CI: %79 - %91) Özgünlük: %99 (%95 CI: %98 - %100) oğaz swabları Duyarlılık: %77 (%95 CI: %64 - %87) Özgünlük: %86 (%95 CI: %81 - %91) Nazofarengeal swablar Duyarlılık: %91 (%95 CI: %85 - %95) Özgünlük: %93 (%95 CI: %90 - %96) P N P N P N

6 Tablo 2: Tüm Örnek Tipleri için Kültüre Kıyasla A+ Testinin Performans Özeti - İnfluenza irleşik , ve 2006 Solunum Dönemleri Örnek Türü Nazofarengeal yıkama sıvıları/aspiratlar Duyarlılık: %80 (%95 CI: %69 - %89) Özgünlük: %100 (%95 CI: %99 - %100) oğaz swabları Duyarlılık: %69 (%95 CI: 55% - 81%) Özgünlük: %99 (%95 CI: %96 - %100) Nazofarengeal swablar Duyarlılık: %100 (%95 CI: %3 - %100) Özgünlük: %100 (%95 CI: %99 - %100) Hücre Kültürü A+ Testi P N P 57 1 N P 38 3 N P 1 0 N Tablo 3: Retrospektif Nazofarengeal Swablarda Kültüre Kıyasla A+ Testinin Performans Özeti Solunum Döneminden İnfluenza Örnek Türü Nazofarengeal yıkama sıvıları/aspiratlar Pozitif benzerlik: %74 (%95 CI: %59 - %87) Negatif benzerlik: %100 (%95 CI: %79 - %100) Hücre Kültürü A+ Testi P N P 32 0 N Tablo 4: Popülasyona Göre Tüm Örnek Tipleri için Kültüre Kıyasla A+ Testinin Performans Özeti - İnfluenza A irleşik , ve 2006 Solunum Dönemleri Hücre Kültürü Örnek Türü ( 21 yaş) A+ Testi P N P N Nazofarengeal yıkama P sıvıları/aspiratlar N Duyarlılık: : %90 (%95 CI: %82 - %95); : %72 (%95 CI: %53 - %87) Özgünlük: : %99 (%95 CI: %98 - %100); : %100 (%95 CI: %90 - %100) ( 21 yaş) A+ Testi P N P N oğaz swabları P N Duyarlılık: : %79 (%95 CI: %65 - %90); : %63 (%95 CI: %24 - %91) Özgünlük: : %87 (%95 CI: %81 - %91); : %85 (%95 CI: %69 - %94) ( 21 yaş) A+ Testi P N P N Nazofarengeal swablar P N Duyarlılık: : %91 (%95 CI: %82 - %97); : %90 (%95 CI: %82 - %96) Özgünlük: : %88 (%95 CI: %80 - %94); : %96 (%95 CI: %92 - %98)

7 Tablo 5: Popülasyona Göre Tüm Örnek Tipleri için Kültüre Kıyasla A+ Testinin Performans Özeti - İnfluenza irleşik , ve 2006 Solunum Dönemleri Hücre Kültürü ( 21 yaş) A+ Testi Örnek Türü P N P N Nazofarengeal yıkama P sıvıları/aspiratlar N Duyarlılık: : %79 (%95 CI: %67 - %88); : %89 (%95 CI: %52 - %100) Özgünlük: : %100 (%95 CI: %98 - %100); : %100 (%95 CI: %94 - %100) ( 21 yaş) A+ Testi P N P N oğaz swabları P N Duyarlılık: : %61 (%95 CI: %42 - %78); : %79 (%95 CI: %58 - %93) Özgünlük: : %99 (%95 CI: %97 - %100); : %91 (%95 CI: %72 - %99) ( 21 yaş) A+ Testi P N P N Nazofarengeal swablar P N Duyarlılık: : Duyarlılık Hesaplaması Yapılmamıştır; : %100 (%95 CI: %3 - %100) Özgünlük: : %100 (%95 CI: %98 - %100); : %100 (%95 CI: %99 - %100) Tablo 6: Popülasyona Göre Retrospektif Nazofarengeal Swablarda Kültüre Kıyasla A+ Testinin Performans Özeti Solunum Döneminden İnfluenza Hücre Kültürü Örnek Türü ( 21 yaş) A+ Testi P N P N Nazofarengeal swablar P N Pozitif benzerlik: : %77 (%95 CI: %56 - %91); : %71 (%95 CI: %44 - %90) Negatif benzerlik: : %100 (%95 CI: %69 - %100); : %100 (%95 CI: %54 - %100) Tekrarlanabilirlik: A+ testinin tekrarlanabilirliği, dört tesiste değerlendirilmiştir. Tekrarlanabilirlik paneli, 20 simüle edilmiş influenza örneğinden oluşmaktadır. u örnekler, düşük Flu A veya Flu pozitif örnekleri (tespit aralığı sınırına yakın), orta seviye Flu A veya Flu pozitif örnekleri ve negatif örneklerini kapsar. A+ testinin genel yeniden üretilebilirliği %99,6 dır. Analitik Çalışmalar Analitik Duyarlılık (Saptama Sınırı) A+ testinin saptama sınırı (LOD), 15 influenza suşu, dokuz influenza A ve altı influenza için belirlenmiştir. Türü İnfluenza Viral Suş LOD (CEID 50 /ml*) A A/PR/8/34 (H1N1) 1,75 X 10 4 A A/FM/1/47 (H1N1) 1,98 X 10 3 A A/NWS/33 (H1N1) 1,00 X 10 4 A A1/Denver/1/57 (H1N1) 5,56 X 10 3 A A/New Jersey/8/76 (H1N1) 4,45 X 10 3 A A/Port Chalmers/1/73 (H3N2) 1,00 X 10 3 A A/Hong Kong/8/68 (H3N2) 2,78 X 10 2 A A2/Aichi2/68 (H3N2) 3,50 X 10 3 A A/Victoria/3/75 (H3N2) 2,78 X 10 4 /Lee/40 6,95 X 10 5 /Allen/45 2,00 X 10 3 /GL/1739/54 5,56 X 10 3 /Taiwan/2/62 3,50 X 10 2 /Maryland/1/59 2,23 X 10 4 /Hong Kong/5/72 2,23 X 10 4 * CEID 50 /ml = Embriyoların %50 sinin öldüğü Yavru Embriyo ulaşıcı Dozu 7

8 Analitik Özgünlük (Çapraz Reaktivite) A+ testi, toplam 98 mikroorganizmayla değerlendirilmiştir. 51 bakteri ve iki maya ~10 8 CFU/mL (CFU - Koloni Oluşturan irimler) konsantrasyonunda test edilmiştir. Mycoplasma pneumoniae ve Mycoplasma orale sırasıyla > 10 6 ve >10 7 CCU/mL (CCU - Renk Değiştirme irimleri) konsantrasyonlarında test edilmiştir. Üç mycobacteria suşu 10 7 CFU/mL de inoküle edilmiş ve Chlamydia trachomatis LGVII 2,5 X 10 8 E/mL de (E = Temel Yapı) test edilmiştir. Test edilen 39 virüs, 10 4 ila 10 9 TCID 50 /ml (TCID 50 - Hücrelerin %50 sinin lize edildiği Doku Kültürü ulaşıcı Dozu) veya 10 4 ila 10 8 CEID 50 /ml (CEID 50 - Yavru embriyoların %50 sinin enfeksiyon kaptığı Yavru Embriyo ulaşıcı Dozu) konsantrasyonlarında değerlendirilmiştir. Tüm mikroorganizmalar (influenza virüsleri dışında) negatif Flu A ve Flu test sonucuyla sonuçlanmıştır. Test edilen influenza A virüsleri (n = 2) Flu A pozitif ve Flu negatif test sonuçlarıyla sonuçlanmıştır. Test edilen influenza virüsleri (n = 6) Flu pozitif ve Flu A negatif test sonuçlarıyla sonuçlanmıştır. Acinetobacter baumannii (calcoaceticus) Neisseria meningitidis Coxsackievirus Tip A9 (Griggs) Actinobacillus suis Neisseria mucosa Coxsackievirus Tip A9 (P.. ozek) acteroides fragilis Neisseria sicca Coxsackievirus Tip 5 (Faulkner) ordetella pertussis Neisseria subflava Coxsackievirus Tip 6 (Schmitt) Candida albicans Peptostreptococcus anaerobius Coxsackievirus Tip A21 (Kuykendall) Candida glabrata Porphyromonas asaccharolyticus Cytomegalovirus (AD-169) Cardiobacterium hominis Prevotella oralis Echovirus Tip 2 (Cornelis) Chlamydia trachomatis LGVII Proteus mirabilis Echovirus Tip 3 (Morrisey) Corynebacterium diphtheriae Proteus vulgaris Echovirus Tip 6 (D Amori) Eikenella corrodens Pseudomonas aeruginosa HSV Tip 1 (HF) Enterococcus faecalis Salmonella choleraesuis HSV Tip 2 (MS) Enterococcus gallinarum alt minnesota Influenza A/PR/8/34 (H1N1) Escherichia coli Serratia marcescens Influenza A/Victoria/3/75 (H3N2) Fusobacterium nucleatum Staphylococcus aureus Influenza /Hong Kong/5/72 Gardnerella vaginalis Staphylococcus aureus-cowan 1 Influenza /Lee/40 Haemophilus aphrophilus Streptococcus bovis II grup D Influenza /Allen/45 Haemophilus influenzae Staphylococcus epidermidis Influenza /GL/1739/54 Haemophilus parainfluenzae Streptococcus mutans Influenza /Maryland/1/59 Haemophilus paraphrophilus Streptococcus oralis Influenza /Taiwan/2/62 Kingella kingae Streptococcus pneumoniae Measles virüsü (Edmonston) Klebsiella pneumoniae Streptococcus pyogenes grup A Mumps virüsü (Enders) Lactobacillus casei Streptococcus sanguis Parainfluenza Tip 1 (Sendia/52) Lactobacillus fermentum Streptococcus sp. grup Parainfluenza Tip 2 (Greer) Lactobacillus plantarum Streptococcus sp. grup C Parainfluenza Tip 3 (C243) Legionella pneumophila Streptococcus sp. grup F Rhinovirus Tip 1A (2060) Listeria monocytogenes Streptococcus sp. grup G Rhinovirus Tip 2 (HGP) Moraxella catarrhalis Veillonella parvula Rhinovirus Tip 13 (353) Mycobacterium avium Adenovirus, Tip 3 (G) Rhinovirus Tip 15 (1734) Mycobacterium intracellulare Adenovirus, Tip 5 (Adenoid 75) Rhinovirus Tip 16 (11757) Mycobacterium tuberculosis Adenovirus, Tip 7 (Gomen) Rhinovirus Tip 37 (151-1) Mycoplasma orale Adenovirus, Tip 10 (J.J.) RSV Tip A (Uzun) Mycoplasma pneumoniae Adenovirus, Tip 18 (D.C.) RSV Tip (Yıkama/18537/62) Neisseria gonorrhoeae Coronavirus (229E) VZV (Ellen) 8

9 İnfluenza A ve virüsleriyle Suş Reaktivitesi A+ testi, 37 influenza suş paneli kullanılarak değerlendirilmiştir. İnfluenza A nın bilinen tüm hemagglutinin (15) ve neuraminidase (9) alt tipleri bu panelde temsil edilmiştir. Tüm insan ve hayvan influenza A suşları, pozitif Flu A test sonuçları ve negatif Flu test sonuçları göstermiştir. una karşın, tüm influenza suşları, pozitif Flu test sonuçları ile negatif Flu A test sonuçları göstermiştir. İnfluenza Virüsü (İnsan Suşu) Viral Tip İnfluenza Virüsü (Hayvan Suşu) Viral Tip A/NWS/33 A (H1N1) A/Turkey/Kansas/4880/80 A (H1N1) A/PR/8/34 A (H1N1) A/Mallard/New York/6750/78 A (H2N2) A1/FM/1/47 A (H1N1) A/Turkey/England/69 A (H3N2) A1/Denver/1/57 A (H1N1) A/Chicken/Alabama/75 A (H4N8) A/New Jersey/8/76 (Hsw N1) A (H1N1) A/Turkey/Wisconsin/68 A (H5N9) A/Port Chalmers/1/73 A (H3N2) A/Turkey/Canada/63 A (H6N8) A/Victoria/3/75 A (H3N2) A/Turkey/Oregon/71 A (H7N3) A/Vietnam/3028/04 A (H5N1) A/Turkey/Ontario/6118/67 A (H8N4) A/Thailand/MK2/04 A (H5N1) A/Turkey/Wisconsin/66 A (H9N2) A/Hong Kong/486/97 A (H5N1) A/Chicken/Germany/N/49 A (H10N7) A/California/07/2004 A (H3N2) A/Duck/Memphis/546/74 A (H11N9) /Lee/40 A/Duck/Alberta/60/76 A (H12N5) /Allen/45 A/Gull/MD/704/77 A (H13N6) /GL/1739/54 A/Mallard/Gurjev/263/82 A (H14N5) /Maryland/1/59 A/Shearwater/WA/2576/79 A (H15N6) /Taiwan/2/62 /Mass/3/66 /Hong Kong/5/72 /Victoria/504/00 /Tokyo/53/99 /Quingdao/102/91 /Leningrad/86/93 NOT: A/H3 olmayan ve A/H1 olmayan influenza A virus alt tipleri, insan patojenleri olarak belirirken, insan örneklerinde influenza A virüsünün saptanmasında performans özellikleri belirlenmemiştir. İnterferant Maddeler Çeşitli maddeler A+ testiyle değerlendirilmiştir. u maddeler tam kan (%2) ve çeşitli ilaçları içermektedir. Test edilen maddelerle ilgili olarak bu testte herhangi bir interferans bildirilmemiştir. Değerlendirilen İlaçlar %25 te üç reçetesiz gargara %25 te üç reçetesiz boğaz damlası %10 da üç reçetesiz burun spreyi 4-Asetamidofenol (10 mg/ml) Asetilsalisilik asit (20 mg/ml) Klorfeniramin maleat (5 mg/ml) Dekstrometorafan (10 mg/ml) Feksofenadin (500 ng/ml) Amantadin (500 ng/ml) Albuterol (0,083 mg/ml) Ribavirin (500 ng/ml) Psödoefedrin HCl (20 mg/ml) Guaiacol Gliseril Eter (20 mg/ml) İbuprofen (10 mg/ml) Oksimetazolin (0,05 mg/ml) Fenilefrin (1 mg/ml) Loratidin (100 ng/ml) Difenhidramin HCl (5 mg/ml) Zanamivir (1 mg/ml) Rimantadin (500 ng/ml) Oseltamivir (500 ng/ml) Synagis (0,1 mg/ml) TİCARİ TAKDİM ŞEKLİ Kat. No. Açıklama A+ 30 Test Kiti L CultureSwab EZ 100 (tek swab) boğaz swab örneklerinde L CultureSwab Steril Tekli Swab, 100 lü paket L CultureSwab Sıvı Amies, Esnek Alüminyum Tel, 50 li Paket L CultureSwab Sıvı Stuart, Esnek Alüminyum Tel, 50 li Paket Normal tuz çözeltisi, 5 ml, 100 lük kutu D Universal Viral Transport 3 ml Flakon, 50 li kutu Düzenli Toplanan Swab, Steril Tek Ambalajlı, 100 lü kutu Minitip Toplanan Swab, Steril Tek Ambalajlı, 100 lü kutu Esnek Toplanan Swab, Steril Tek Ambalajlı, 100 lü kutu 9

10 Referanslar 1. Simonsen L., Fukuda K, Schonberger L, Cox NJ. Impact of influenza epidemics on hospitalizations. J. Infect. Dis. 2000; 181: Thompson WW, Shay DK, Weintraub E, et al. Mortality associated with influenza and respiratory syncytial virus in the United States. JAMA 2003: 289: Kaiser, L., Couch, R.., Galasso, G.J., Glezen, W.P., Webster, R.G., Wright, P.F., and Hayden, F.G First international symposium on influenza and other respiratory viruses: summary and overview Kapalua, Maui, Hawaii, December 4-6, Antiviral Res., 42: Cox, N.J., and ender, C.A The molecular epidemiology of influenza viruses. Virology, 6: Todd, S.J., Minnich, L., and Waner, J.L Comparison of rapid immunofluorescence procedure with TestPack RSV and Directigen Flu A for diagnosis of respiratory syncytial virus and influenza A virus. J. Clin. Microbiol. 33: Harris, P.O Clinical relevance and efficient detection of seven major respiratory viruses. ACL. p McElhaney, J.E., Gravenstein, S., Krause, P., Hooton, J.W., Upshaw, C.M., and Drinka, P Assessment of markers of the cell-mediated immune response after influenza virus infection in frail older adults. Clin. Diag. Lab. Immunol. 5: Fan, J., Henrickson, K.J., and Savatski, L.L Rapid simultaneous diagnosis of infections with respiratory syncytial viruses A and, influenza viruses A and, and human parainfluenza virus types 1,2, and 3 by multiplex quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction-hybridization assay (hexaplex). Clin. Infect. Disease 26: Wright, K.E., Wilson, G.A.R., Novosad, D., Dimock, C., Tan, D., and Weber, J.M Typing and subtyping of influenza viruses in clinical samples by PCR. J. Clin. Microbiol. 33: Kendal, A.P Influenza Viruses. p Laboratory Diagnosis of Viral Infections, In H. Lennette, (ed.) Marcel Dekker, Inc., New York. 11. McQuillen, J., Madeley, C.R., and Kendal, A.P Monoclonal antibodies for the rapid diagnosis of influenza A and virus infections by immunofluorescence. Lancet. ii: Guenthner, S.H., and Linnemann, C.C., Jr Indirect immunofluorescence assay for rapid diagnosis of influenza virus. Laboratory Medicine. 19: Minnick, L.L., and Ray, C.G Early testing of cell cultures for detection of hemadsorbing viruses. J. Clin. Microbiol. 25: Schmidt, N.J., Ota, M., Gallo, D., and Fox, V.L Monoclonal antibodies for rapid, strain specific identification of influenza virus isolates. J. Clin. Microbiol. 16: Clinical and Laboratory Standards Institute Approved Guideline M29-A3. Protection of laboratory workers from occupationally acquired infections, 3rd ed. CLSI, Wayne, Pa. 16. Garner, J.S Hospital Infection Control Practices Advisory Committee, U.S. Department of Health and Human Services, Centers for Disease Control and Prevention. Guideline for isolation precautions in hospitals. Infect. Control Hospital Epidemiol. 17: U.S. Department of Health and Human Services iosafety in microbiological and biomedical laboratories, HHS Publication (CDC), 4th ed. U.S Government Printing Office, Washington, D.C. 18. Directive 2000/54/EC of the European Parliament and of the Council of 18 September 2000 on the protection of workers from risks related to exposure to biological agents at work (seventh individual directive within the meaning of Article 16(1) of Directive 89/391/EECP). Office Journal L262, 17/10/2000, p

11 11

12 m ecton, Dickinson and Company A ENEX Limited 7 Loveton Circle ay K 1a/d, Shannon Industrial Estate Sparks, Maryland USA Shannon, County Clare, Ireland Tel: Fax: Synagis is a trademark of MedImmune, Inc. ViraTrans is a trademark of Trinity iotech, PLC. Multitrans is a trademark of Starplex Scientific, Inc. D, D Logo, CultureSwab, Directigen, DispensTube and Trypticase are trademarks of ecton, Dickinson and Company D Made in China by D.