B Directigen EZ RSV Respiratuvar Sinsitiyal Virüsün (RSV) doğrudan saptanması amaçlıdır

Transkript

1 B Directigen EZ RSV Respiratuvar Sinsitiyal Virüsün (RSV) doğrudan saptanması amaçlıdır L009004JAA 2008/12 U Türkçe KULLANIM AMACI Directigen EZ RSV testi, viral solunum yolu enfeksiyonundan şüphelenilen hastaların nazofarengeal yıkama sıvıları, nazofarengeal aspiratları, nazofarengeal swabları ve nazofarengeal swab/yıkama sıvılarındaki Respiratuvar Sinsitiyal Virüsün (RSV) doğrudan ve kalitatif saptanması amacıyla kullanılan hızlı bir kromatografik immün testidir. Bu test, 20 yaş altındaki neonatal ve pediyatrik hastalarda Respiratuvar Sinsitiyal Virüs (RSV) enfeksiyonlarının tanısına yardımcı olması için in vitro diyagnostik kullanım amaçlıdır. Negatif test sonuçlarının hücre kültürüyle doğrulanması tavsiye edilir. ÖZET VE AÇIKLAMA Viral solunum yolu enfeksiyonları, sık görülen hastalıklardır. Respiratuvar sinsitiyal virüs (RSV) soğuk mevsim boyunca ufak çocukların alt solunum yolu enfeksiyonlarının baş sebebidir. 1 RSV, yaşlılarda ve bağışıklık yetmezliği olan hastalarda şiddetli solunum yolu enfeksiyonlarına neden olur. 2,3 Yakın bir zamanda, RSV nin yaş hastalarda influenza benzeri hastalıkların %20 sine sebep olduğu belirlenmiştir. 4 Solunum yolu virüslerinin saptanmasında geleneksel yöntemler, hücre kültürü ve doğrudan floresan antikorunu (DFA) kapsar. 5-7 Yakın bir zamanda, PCR, RSV dahil olmak üzere solunum yolu virüslerinin saptanmasında klinik fayda göstermiştir. 8 Enzim immün testi (EIA) ve influenza A/B ve RSV gibi belirli virüsler için hızlı manuel sistemler mevcuttur. Hızlı testler hızlı tanı konulmasını sağlar, böylece hastalar enfeksiyonlarının, yetersiz kalp, solunum yolu veya immün fonksiyonları olan diğer hastalara nosokomiyal olarak yayılmasını önlemek için uygun şekilde izole edilebilir ve tedavi edilebilir. 9 Bununla birlikte, hızlı testler, uygun antiviral tedavinin seçilmesine de yardımcı olur. RSV testi için alınan en yaygın örnekler nazofarengeal yıkama sıvıları, nazofarengeal aspiratlar ve nazofarengeal swabları içermektedir. Nazofarengeal yıkama sıvıları ve aspiratların swablardan üstün oldukları gösterilmiştir ve bu örneklerin kullanımı önerilir. 10 Directigen EZ RSV antijen saptama testi, semptomatik hastalardan alınan çeşitli örneklerden ekstrakt edilen RSV antijenlerinin tespiti için kullanılan kromatografik bir testtir. Directigen EZ RSV nin hızı ve iş akışı, STAT RSV antijeni tespitinde kullanılmasını sağlar; antiviral müdahale ve diğer klinik ve destekleyici kararlarda kullanılabilen hızlı ve geçerli bilgiler sunar. PROSEDÜR İLKELERİ Directigen EZ RSV testi, solunum yolu örneklerinden ekstrakt edilen örneklerde RSV antijeninin kalitatif olarak tespitinde kullanılan kromatografik bir testtir. Ekstrakt edilen örnekler test cihazına eklendiğinde, RSV A ve/veya B antijenleri, bir antijenantikor kompleksi oluşturarak test stribindeki antikor-koloidal altın konjugatına bağlanır. Bu kompleks test stribi üzerinden reaksiyon alanına ilerler ve membran üzerindeki RSV antikoru çizgisine yakalanır. Fazla konjugat, fonksiyonel kontrol görevi gören aktif olmayan RSV antijenini içeren ikinci bir çizgiye bağlanır. Pozitif sonuç, okuma penceresinde iki kırmızımsı-mor çizginin oluşmasıyla belirtilir; bir çizgi Test T nin yanında, diğeri ise Kontrol C nin yanındadır. T nin yanında kırmızımsımor bir çizginin oluşmaması ve C nin yanında kırmızımsı-mor bir çizginin oluşması, negatif sonucun göstergesidir. C nin yanında kırmızımsı-mor bir çizgi oluşmazsa, test yorumlanamaz kabul edilir. REAKTİFLER Aşağıdakiler Directigen EZ RSV kitine eklenmiştir: BD RSV Cihazları 30 Membranda aktif olmayan antijenin bir kontrol çizgisini ve monoklonal RSV antikorunun bir test çizgisini içeren test cihazları. Ekstraksiyon Reaktifi E 4,0 ml Ekstraksiyon, %0,2 sodyum azitli (koruyucu) mukolitik ajan ve deterjan. Kontrol + 2,0 ml Pozitif Kontrol, deterjan işlenmiş RSV enfeksiyonlu hücreler, %0,1 sodyum azitli (koruyucu). Kontrol - 2,0 ml Negatif Kontrol, deterjan ile işlenmiş enfeksiyonsuz hücreler, %0,1 sodyum azitli (koruyucu). DispensTube Tüpleri 30 Örnek ekstraksiyon tüpleri ve cihazlara örnek nakli. DispensTube Uçları 30 Cihaza nakledilen örneğin filtreleme uçları. Gerekli fakat sağlanmamış malzemeler: Pipet (250 µl dağıtabilen pipet ucu), zamanlayıcı, vorteks ve Aktarım Besiyeri (bkz. Örnek Toplama ve Kullanma). Uyarılar ve Önlemler: In vitro Diyagnostik Kullanım içindir. 1. RSV Kontrol + reaktifi ve BD RSV cihazındaki kontrol çizgisi, deterjan işlemi ve sonikasyonla ve de ardından biyo test prosedürleriyle test edilerek etkisiz hale getirilmiş RSV enfeksiyonlu doku kültür hücrelerinden hazırlanmıştır. 2. Kontrol + ve Kontrol - uygun sonuçlar vermezse kiti kullanmayın. 3. Klinik örneklerde hepatit virüsü ve İnsan İmmün Yetmezlik Virüsü de dahil olmak üzere patojenik mikroorganizmalar bulunabilir. Kan veya diğer vücut sıvılarıyla kontamine olan tüm öğelerle çalışılırken, Standard Precautions (Standart Önlemler) ve kurumsal düzenlemeler takip edilmelidir. 4. Son kullanma tarihi geçen kit bileşenlerini kullanmayın. 5. Farklı kit lot numaralı reaktifleri KARIŞTIRMAYIN. Cihazı yeniden kullanmayın. 6. Sodyum azit içeren reaktifler solumayla, cilt temasıyla ve yutulduğu takdirde zararlıdır. Asitlerle temas etmesi çok zehirli gazların açığa çıkmasına neden olur. Ciltle teması halinde, derhal bol suyla yıkayın. Sodyum azit, kurşun ve bakırla

2 reaksiyona girerek yüksek oranda patlayıcı metal azit oluşturabilir. Atma işleminde, azit oluşumunu önlemek için yüksek hacimde suyla çalkalayın. Saklama ve Kullanma: Kitler 2 30 ºC de saklanabilir. DONDURMAYIN. Reaktifler ve BD RSV cihazları, test için kullanıldığında, oda sıcaklığında (15 30 C) olmalıdır. Örnek Toplama ve Hazırlama Örneklerin Nakledilmesi ve Saklanması: Yeni örnekleri, uygun bir sıvı aktarım sistemi içersinde mümkün olduğunca hızla laboratuvara nakledin. Toplama sonrası örnekleri olabildiğince kısa sürede işleyin. Gerekirse, örnekler, toplama sonrası, en fazla 72 s 2 8 C de veya en fazla yedi gün boyunca -20 C de saklanabilir. Doğru örnek toplama ve hazırlama yöntemlerinin izlenmiş olması önemlidir. Directigen EZ RSV Testiyle birlikte kullanmadan önce örneklere santrifüj uygulamayın, çünkü sellüler maddenin çıkarılması, testin duyarlılığını ters yönde etkileyebilir. Aktarım Besiyeri: Aşağıdaki aktarım besiyeri test edilmiş ve Directigen EZ RSV Testi ile uyumlu bulunmuştur: Normal Tuz Çözeltisi Trypticase Soy Broth + %0,5 jelatin* Fosfat Tamponlu Tuz Çözeltisi (PBS) Trypticase Soy Broth + %0,5 BSA PBS + %0,5 jelatin* Earle s Minimal Essential Medium (EMEM) PBS + %0,5 Bovin Serum Albumin (BSA) EMEM + %0,5 BSA Veal Infusion Broth (VIB) EMEM + %1 BSA VIB + %0,5 BSA EMEM + %0,5 laktalbumin hidrolizat Hank s Balanced Salt Solution (Dengeli Tuz Çözeltisi) EMEM + %1,0 laktalbumin hidrolizat M4 Besiyeri* Değiştirilmiş Stuart Besiyeri (sıvı) CultureSwab M4-RT Besiyeri* Amies (sıvı) CultureSwab M5 Besiyeri Starplex Multitrans* Bartels ViraTrans Besiyeri BD Evrensel Viral Aktarım Besiyeri* Sukroz Fosfat (2-SP) *Besiyeri, jelatin içerir. Örnek Toplama ve Hazırlama: Nazofarengeal yıkama sıvıları ve aspiratların, nazofarengeal swablardan üstün olduğu gösterilmiştir ve örnek olarak kullanımı önerilir. 9,10 Directigen EZ RSV testiyle test edilen kabul edilebilir örnekler nazofarengeal yıkama sıvıları, nazofarengeal aspiratlar, nazofarengeal swablar ve nazofarengeal swab/yıkama sıvılarını içerir. NOT: Nazofarengeal swablarda (NPS) alüminyum tel ile polyester veya suni ipek uçlu swablar tavsiye edilir. Toplanan swablar, analitik olarak test edilmiştir ve Directigen EZ RSV test ile uyumlu bulunmuştur. 15 Kalsiyum aljinat uçlu swab viral örneklerin toplanması açısından kabul edilmemiştir. 16 Nazofarengeal Yıkama Sıvıları ve Nazofarengeal Swab/Yıkama Sıvıları için Prosedür: ml lik örnek hacimleri tavsiye edilmektedir. 2. Aşırı miktarda yıkama veya lavaj hacimlerinden kaçınılmalıdır, aksi takdirde test duyarlılığında düşüşe sebep olabilir. 3. Test Prosedürü nde açıklandığı gibi örnekleri işleyin. Nazofarengeal Swablar için Prosedür: 1. Swab örnekleri, 350 µl 2 ml aktarım besiyerine eklenebilir. 2. Swabı ve aktarım besiyerini vorteksleyin. 3. Swabtan mümkün olduğunca fazla sıvıyı çıkarın. Not: Alternatif olarak swab tüpte bırakılabilir. 4. Swabı uygun bir kaba atın. 5. Test Prosedürü nde açıklandığı gibi örnekleri işleyin. Nazofarengeal Aspiratlar için Prosedür: 1. Örnekler, işleme öncesinde, 1 3 ml aktarım besiyerinde veya tuz çözeltisinde dağıtılabilir. 2. Test Prosedürü nde açıklandığı gibi örnekleri işleyin. PROSEDÜR Test Prosedürü NOTLAR: Reaktifler, örnekler ve BD RSV cihazları, test için kullanıldığında, oda sıcaklığında (15 30 C) olmalıdır. Ekstraksiyon amacıyla bir alikot almadan önce, tüm örnekleri tamamıyla karıştırın. Directigen EZ RSV testiyle birlikte kullanmadan önce örneklere santrifüj uygulamayın, çünkü sellüler maddenin çıkarılması, testin duyarlılığını olumsuz etkileyebilir. Uygun naklin sağlanması için, DispensTube tüpleri ve reaktif şişeleri dik tutulmalı (BD RSV cihazı kuyucuğundan veya DispensTube ten yaklaşık 2,54 cm), hızla ilerletilerek tek seferde bir damla damlatılarak uygulanmalıdır. 1. BD RSV cihazını, kullanmadan hemen önce, folyo torbasından çıkarın. 2. Bir BD RSV cihazını ve bir DispensTube tüpünü, test edilecek kontrol veya örnek için etiketleyin. 3. Etiketli DispensTube tüpünü, iş istasyonunun veya rafın belirlenen alanına yerleştirin. 2

3 4. Ekstraksiyon Reaktifi E yi yavaşça ters çevirerek karıştırın. DispensTube cihazına 3 damla damlatın. Damlaları dağıtırken reaktif şişesini dik tutun (DispensTube cihazından yaklaşık 2,54 cm). 5. Aşağıda yönlendirildiği gibi, örneği veya kontrolü ve işlemi tamamen karıştırın. a. Örnekler için: 1. Örnekleri vortekse tabi tutun veya tamamen karıştırın. Santrifüje tabi tutmayın µl örneği DispensTube cihazına pipetleyin. b. Kontroller için: 1. Kontrol + ve Kontrol - flakonlarını yavaşça karıştırın damla Kontrol + yı uygun DispensTube cihazına ekleyin damla Kontrol - yi uygun DispensTube cihazına ekleyin. 6. DispensTube cihazına DispensTube Ucu sokun. NOT: Directigen ürünleri dışındaki uçları kullanmayın. 7. Vorteksleyin veya tamamen karıştırın. 8. DispensTube cihazını ters çevirin ve tüpü ucundan uzak şekilde üst yarısından tutarak, ekstrakt edilen örnekten üç (3) damlayı yavaşça, uygun şekilde etiketlenmiş BD RSV örnek kuyucuğuna sıkın. NOT: Tüpü ucuna yakın sıkmak, ucun enjeksiyon kapmasına ve içerik maddelerinin tüpten sızmasına yol açabilir dakika veya en fazla 60 dakika içinde sonuçları okuyun. Test ve kontrol çizgisi görünür olduğu sürece 5 dakika içinde pozitif sonuçlar bildirilebilir. NOT: Jelatin içeren bir aktarım besiyeri kullanılıyorsa, sonuçlar 15 dakika içinde okunmalıdır. Bkz. Prosedürün Kısıtlı Olduğu Alanlar. 10. İyi ışıklandırılmış bir alanda okuyun ve test sonuçlarını kaydedin. Kalite Kontrolü: Gerekli kalite kontrolleri ilgili yerel, resmi ve/veya federal düzenlemeler veya akreditasyon gerekliliklerine veya laboratuvarınızın standart Kalite Kontrol prosedürlerine uygun olarak gerçekleştirilmelidir. Uygun Kalite Kontrolü uygulamalarında rehber olarak, kullanıcının CLSI (eski NCCLS) EP12-A 17 ve 42 CFR (c) ye 18 bakması tavsiye edilir. Her bir BD RSV cihazı yerleşik kontroller içerir. Yerleşik kontrol özellikleri aşağıdakileri kapsar: Dahili Kontrol: Kırmızımsı mor bir kontrol çizgisinin görülmesi, bileşik için bir reaktif kontrolü görevi gören, antikoru yakalayan ve yeterli oranda kapiler akışın olmasını sağlayan dahili bir antijen kontrolü (pozitif dahili kontrol) verir. Bu çizginin olmaması, testin yorumlanamaz olduğunu belirtir. Test Membran Kontrolü (negatif dahili kontrol): Pozitif dahili kontrolü ve test çizgilerini çevreleyen reaktif olmayan membran yüzeyi, pozitif bir reaksiyonla kontrast oluşturur ve böylelikle reaksiyon renginin yorumlanmasında arkaplan referansı görevi görür. Harici Pozitif ve Negatif Kontroller: Sıvı Pozitif (Kontrol +) ve Negatif (Kontrol -) kontrolleri her kitle birlikte verilir. Bu kontroller, pozitif veya negatif reaksiyonu göstermede ilave bir kalite kontrol aracı olarak sunulmuştur. Harici kontroller, alınan her yeni lot veya nakliye için kalite kontrol prosedürünün bir parçası olarak uygulanmalıdır. Kontrol + uygulanırken okuma penceresinde T yanında kırmızımsı-mor bir çizginin oluşması, RSV antijeninin membrana bağlanma özelliğinin çalışıyor olduğunu belirtir. Kontrol + veya Kontrol uygun sonuçlar vermezse, sonuçları bildirmeyin. 3

4 Sıvı kontrolleri, aynı zamanda, düşük pozitif bir reaksiyonu göstermek amacıyla da kullanılabilir. Her iki Kontrol + ve Kontrol - nin birlikte aynı DispensTube (3 damla Kontrol + ve 3 damla Kontrol -) içinde seyreltilmesiyle daha zayıf bir pozitif reaksiyon gösterilebilir. Beklenen kontrol sonuçları elde edilmezse, hasta sonuçlarını bildirmeyin. Daha fazla yardım için yerel BD temsilcilerinizle temasa geçin. SONUÇLARIN YORUMLANMASI Pozitif test (antijen mevcut) Gözle görünür kırmızımsı-mor bir çizgi Test T yanında okuma penceresinde ve kırmızımsı-mor bir çizgi Kontrol C yanında oluşur. Bu durum, RSV antijeninin örnekte saptanabildiğini belirtir. Arkaplan alanı beyaza açık pembe olmalıdır. Negatif Test (antijen saptanmaz) - Test T yanında kırmızımsı-mor bir çizgi görülmez. Bu durum, RSV antijeninin örnekte saptanmadığını belirtir. Kontrol C yanındaki kırmızımsı-mor bir çizgi, test prosedürü ve reaktiflerinin performansının uygun olduğunu gösterir. Arkaplan alanı beyaza açık pembe olmalıdır. Yorumlanamaz Test Kontrol C yanında kırmızımsı-mor bir çizgi görülmüyorsa veya arkaplandaki renk, testin ve kontrol çizgilerinin yorumlanmasını engelliyorsa, test yorumlanamaz. Yorumlanamaz test tekrarlanmalıdır, yeni bir örnek alınır ve yeniden test edilir veya örnek kültür izolasyonu için klinik laboratuvara gönderilir. yorumlanamaz SONUÇLARIN RAPORLANMASI Pozitif RSV antijeninin mevcudiyetinde pozitiftir. Pozitif sonuç, canlı virüsler bulunduğunda oluşabilir. Negatif RSV antijeninin mevcudiyetinde negatiftir. Örnekte bulunan antijen testin saptama sınırının altında olabileceğinden RSV kaynaklı enfeksiyon yok sayılamaz. Negatif örneklerin kültür doğrulaması tavsiye edilir. PROSEDÜRÜN KISITLI OLDUĞU ALANLAR 1. Directigen EZ RSV testi, canlı ve cansız RSV partiküllerini saptayabilir. Directigen EZ RSV test performansı, antijen yüküne bağlıdır ve aynı örnekte gerçekleştirilen doku kültürüyle ilişkilendirilmez. Respiratuvar Sinsitiyal Virüs dışında mikroorganizmaların sebep olduğu solunum yolları enfeksiyonu etiyolojisi bu testte oluşturulamaz. 2. Yetersiz örnek toplanması, uygunsuz numune kullanılması/aktarımı veya düşük seviyelerde virüs atlatması, hatalı negatif bir sonuç verebilir. Buna göre, negatif bir test sonucu, bir RSV enfeksiyonu olasılığını yok etmez. Tüm tanısal prosedürlerde olduğu gibi, Directigen EZ RSV testiyle elde edilen sonuçlar, doktora sunulan diğer klinik bilgilerle bağlantılı olarak kullanılmalıdır. 3. Kromatografik immün testlerde, belirsiz çizgilerin, belirgin çizgilere oranla hatalı pozitif olması daha olasıdır. Tüm tanısal prosedürlerde olduğu gibi, Directigen EZ RSV testiyle elde edilen sonuçlar da, doktora sunulan diğer klinik bilgilerle bağlantılı olarak kullanılmalıdır. 4. Directigen EZ RSV testinin doku kültürü izolatlarının tanınması/doğrulanması açısından doğruluğu kanıtlanmamıştır ve bu kapsamda kullanılmamalıdır. 5. Kullanılan aktarım besiyerinin içerikleri, jelatin içerip içermediği açısından dikkatlice gözden geçirilmelidir. Jelatin içeren bir aktarım besiyeri kullanılıyorsa, sonuçlar 15 dakika içinde okunmalıdır. 15 dakikayı aşan okuma süreleri, okuma penceresindeki test (T) konumunda soluk çizgilerin görülmesiyle sonuçlanabilir. 6. Amies Jeli CultureSwab Artı besiyeri, Directigen EZ RSV testiyle uyumlu değildir. Bu besiyerinde örneklerin saklanması zaman içinde potansiyel hatalı negatif bir sonuç doğurabilir. 7. Bu testin insan metapnömovirüsüyle çapraz reaktivitesi üzerinde çalışılmamıştır. 8. Monoklonal antikorlar, tüm antijenik varyantları veya RSV nin yeni suşlarını saptamayabilir. 9. Directigen EZ RSV testi, bu örnek tipleriyle performans karakteristiklerini hesaplamak için yeterli sayıda alt solunum yolları örnekleri, alt nazal swablar ve farengeal swablarla değerlendirilmemiştir. BEKLENEN DEĞERLER RSV testinde gözlenen pozitiflik oranı, örnek toplama, uygulanan kullanma/nakil sistemi, kullanılan saptama yöntemi, yılın belli zamanı, hastanın yaşı, coğrafi konum ve en önemlisi hastalığın yerel görülme sıklığına bağlı olarak değişkenlik gösterecektir. Klinik çalışma esnasında kültürle gözlenen görülme sıklığı %4,2 46,5 arasındadır. PERFORMANS ÖZELLİKLERİ Directigen EZ RSV testinin performans özellikleri, RSV mevsiminde yeni klinik merkezde yürütülen çok merkezli bir çalışmada belirlenmiştir. Klinik merkezler Kanada da ve Amerika Birleşik Devletleri nin çeşitli coğrafi bölgelerindedir. Tüm örnekler toplanmış ve her laboratuvarın prosedürüne göre laboratuvara gönderilmiştir. Her bir örnek Directigen EZ RSV testi, hücre kültürü ve laboratuvarın rutin yöntemiyle (örn, DFA, EIA) değerlendirilmiştir. Kalan örnek, -20 ºC de veya altında arşivlenmiştir. 4

5 Hücre kültüründe, bir parça örnek, her laboratuvarın prosedürüne göre solunum yolları viral kültürüne uygun hücre çizgilerine inoküle edilmiştir. Hücreler, sitopatik etkilerin (CPE) görünümü açısından incelenmiştir. Enfeksiyonlu hücreler, immünofloresan boyamayla RSV için doğrulanmıştır. On dört günde CPE de negatif olan örnekler, türlere özgü immünofloresan boyama işlemiyle negatif doğrulama için boyanmıştır. RSV li hastalardan alınan nazofarengeal yıkama sıvısı, nazofarengeal aspirat, nazofarengeal swab ve nazofarengeal swab/ yıkama sıvısı içeren toplam örnek, Directigen EZ RSV testiyle değerlendirilmiştir. Klinik Performans: Değerlendirilen tüm örneklerde, RSV için Directigen EZ RSV testinin genel duyarlılığı ve özgünlüğü, kültüre kıyasla, sırasıyla % 80 ve %91 dir. Genel yorumlanamaz oran %0 dır. Her örnek tipi için hücre kültürüne kıyasla Directigen EZ RSV nin performans özellikleri, Tablo 1 de gösterilmiştir. Hücre kültürüne kıyasla klinik tesise göre performans özellikleri Tablo 2 de gösterilmiştir. Tablo 1: Tüm Örnek Tiplerinde Kültüre Kıyasla Directigen EZ RSV (EZ) Testinin Performans Özeti Kültür/EZ Örnek Türü n +/+ /+ a +/ / Nazofarengeal Yıkama Sıvısı (NPW) Nazofarengeal Aspirat (NPA) Nazofarengeal Swab/ Yıkama Sıvısı (NPSW) Nazofarengeal Swab (NPS) (+) = RSV pozitif ( ) = RSV negatif Duyarlılık (%) (%95 G.A.) 87,2 (80,7 92,1) 76,9 (68,2 84,2) 71,8 (55,1 85,0) 66,7 (47,2 82,7) Özgünlük (%) (%95 G.A.) 85,5 (79,8 90,1) 91,6 (87,7 94,5) 95,0 (89,7 98,2) 91,6 (87,3 94,8) a Kültür negatif, Directigen EZ RSV pozitif örnekleri test etmede kullanılan PCR yöntemi, FDA tarafından tanınan bir yöntem değildir. Kültür negatif, Directigen EZ RSV test pozitif olan 79 örnek vardır. PCR testi, 79 örneğin 73 ünde yapılmıştır; 73 örnekten toplam 46 sı PCR ye göre pozitiftir. Tablo 2: Klinik Tesise Göre Kültüre Kýyasla Directigen EZ RSV (EZ) Testinin Performans Özeti Kültür/EZ Tesis Örnek Türü n +/+ /+ +/ / Duyarlılık (%) (%95 G.A.) Tesis 1 %50 NPW %45 NPA (71,5 100) %5 NPS Tesis 2 %100 NPW ,9 (67,6 87,7) Tesis 3 %59 NPA %37 NPW %4 NPS ,9 (77,1 92,3) Tesis 4 %100 NPS ,4 (13,7 78,8) Tesis 5 %73 NPSW %24 NPS (62,7 85,5) %2 NPW %1 NPA Tesis 6 %100 NPW ,2 (76,3 98,1) Tesis 7 %100 NPA ,4 (57,8 82,7) Özgünlük (%) (%95 G.A.) 92,6 (83,8 99,4) 82,4 (73,6 89,2) 76,7 (67,3 84,5) 91,4 (86,6 94,9) 94,9 (90,3 97,8) 100 (91,8 100) 95,3 (91,5 97,7) (+) = RSV pozitif ( ) = RSV negatif Directigen EZ RSV pozitif test sonuçları, bir dizi belirsiz ve belirgin çizgi arasında dağılım göstermektedir. Belirsiz çizgili 70 Directigen EZ RSV pozitif örneğin 39 u kültür pozitiftir ve toplam 58 i ise bir veya daha fazla yönteme göre (örn; kültür, DFA, EIA veya PRC a ) pozitiftir. Belirgin çizgili 170 Directigen EZ RSV pozitif örneðin 130 u kültür pozitiftir ve toplam 166 sý ise bir veya daha fazla yönteme göre (örn; kültür, DFA, EIA veya PRC a ) pozitiftir. Belirgin çizgili 106 Directigen EZ RSV pozitif örneðin 98 i kültür pozitiftir ve toplam 106 sý ise bir veya daha fazla yönteme göre (örn; kültür, DFA, EIA veya PRC a ) pozitiftir. a Kültür negatif, Directigen EZ RSV pozitif örnekleri test etmede kullanılan PCR yöntemi, FDA tarafından tanınan bir yöntem değildir. Tekrarlanabilirlik: Directigen EZ RSV testinin tekrarlanabilirliği, üç tesiste değerlendirilmiştir. Tekrarlanabilirlik paneli 12 simüle edilmiş RSV örneğinden oluşmaktadır ve negatif kontrol seyrelticisine inoküle edilen RSV antijeninin dört kopya düşük pozitif seviyesi (Saptama Sınırına yakın [LOD]) ve dört kopya orta pozitif seviyesini içermektedir. Panel aynı zamanda, inoküle edilmemiş negatif kontrol seyrelticisi olan simüle edilmiş RSV negatif örnekleri kapsamaktadır. Directigen EZ RSV testinin genel yeniden üretilebilirliği %99,1 dir. 5

6 Analitik Çalışmalar Analitik Duyarlýlýk (Saptama Sýnýrý) Directigen EZ RSV testi için saptama sınırı (LOD), ikisi RSV A ve üçü RSV B suşu olan toplam beş RSV suşu için oluşturulmuştur. Türü RSV Viral Suş LOD (TCID 50 )* A RSV (Uzun) 3,95 x 10 3 A RSV (A-2) 7,9 x 10 3 B RSV (9320) 4,05 x 10 2 B RSV (Washington) 7,03 x 10 3 B RSV (Yabanıl tip) 5,56 x 10 2 * TCID 50 = Hücrelerin %50 sinin lize edildiği Doku Kültürü Bulaşıcı Dozu. Analitik Özgünlük Directigen EZ RSV testi, toplam 99 mikroorganizma (58 bakteri, iki maya ve 39 virüs) kullanılarak değerlendirilmiştir. Bakteri ve mayalar, 10 8 CFU/mL konsantrasyonlarında test edilmiştir. Mycoplasma orale, > 10 7 CFU/mL de test edilmiştir. Mycoplasma pneumoniae, >10 6 CCU/mL de test edilmiştir (CCU renk değiştirme birimleri). Mycobacterium tuberculosis, 7,0 x 10 6 CFU/mL de test edilmiştir. Viral izolatlar 10 3,5 ila 10 9,5 TCID 50 /0,20 ml titrelerinde test edilmiştir. İnfluenza virüsleri 10 3,5 ila 10 9,5 CEID 50 **/0,20 ml titrelerinde test edilmiştir. Listelenen mikroorganizmaların hiçbiri Directigen EZ RSV testinde pozitif bir sonuç vermemiştir. ** CEID 50 = Enfeksiyonlu yavru embriyonun %50 sinde Yavru Embriyo Bulaşıcı Dozu Bakteri ve Maya Paneli Acinetobacter baumannii (calcoaceticus) Actinobacillus suis Bacteriodes fragilis Bordetella pertussis Candida albicans Candida glabrata Cardiobacterium hominis Chlamydia psittaci Chlamydia trachomatis LGVII Corynebacterium diphtheriae Eikenella corrodens Enterococcus faecalis Enterococcus gallinarum Escherichia coli Fusobacterium nucleatum Gardnerella vaginalis Haemophilus aphrophilus Haemophilus influenzae Haemophilus parainfluenzae Haemophilus paraphrophilus Kingella kingae Klebsiella pneumoniae Lactobacillus casei Lactobacillus fermentum Lactobacillus plantarum Legionella pneumophila Listeria monocytogenes Moraxella catarrhalis Mycobacterium avium Mycobacterium intracellulare Mycobacterium tuberculosis Mycoplasma orale Mycoplasma pneumoniae Neisseria gonorrhoeae Neisseria meningitidis Neisseria mucosa Neisseria sicca Neisseria subflava Peptostreptococcus anaerobius Porphyromonas asaccharolyticus Prevotella oralis Proteus mirabilis Proteus vulgaris Pseudomonas aeruginosa Salmonella choleraesuis subsp minnesota Serratia marcescens Staphylococcus aureus Staphylococcus aureus- Cowan Staphylococcus epidermidis Streptococcus bovis II Grup D Streptococcus mutans Streptococcus oralis Streptococcus pneumoniae Streptococcus pyogenes Grup A Streptococcus sanguis Streptococcus sp. Grup B Streptococcus sp. Grup C Streptococcus sp. Grup F Streptococcus sp. Grup G Veillonella parvula 6

7 Viral Panel Adenovirus, Tip 3 İnfluenza B/GL/1739/54 Adenovirus, Tip 5 İnfluenza B/Hong Kong/5/72 Adenovirus, Tip 7 İnfluenza B/Lee/40 Adenovirus, Tip 10 İnfluenza B/Allen/45 Adenovirus, Tip 18 İnfluenza B/Maryland/1/59 Coronavirus İnfluenza B/Taiwan/2/62 Coxsackievirus Tip A9 (Griggs) İnfluenza C/Taylor/1233/47 Coxsackievirus Tip A9 (P.B. Bozek) Kızamık virüsü Coxsackievirus Tip B5 Kabakulak virüsü Coxsackievirus Tip B6 Parainfluenza Tip 1 Coxsackievirus Tip A21 Parainfluenza Tip 2 Cytomegalovirus Parainfluenza Tip 3 Echovirus Tip 2 Rhinovirus Tip 1A Echovirus Tip 3 Rhinovirus Tip 2 Echovirus Tip 6 Rhinovirus Tip 13 Echovirus Tip 11 Rhinovirus Tip 15 Herpes Simplex Virus Tip 1 Rhinovirus Tip 16 Herpes Simplex Virus Tip 2 Rhinovirus Tip 37 İnfluenza A (H1N1) Varicella-Zoster Virus İnfluenza A (H3N2) İnterferant Maddeler %2 konsantrasyonda tam kan, reçetesiz (OTC) ilaçlar ve reçeteli ilaçlar dahil olmak üzere çeşitli maddeler Directigen EZ RSV testinde test edilmiştir. Maddelerin test edilen seviyeleriyle ilgili olarak bu testte herhangi bir interferans bildirilmemiştir. Reçetelendirilmemiş İlaçlar (OTC) %25 lik üç reçetesiz gargara 5 mg/ml difenhidramin HCl %25 te üç reçetesiz boğaz damlası 20 mg/ml psödoefedrin HCl %10 da üç reçetesiz burun spreyi 20 mg/ml Guaiacol Gliseril Eter 10 mg/ml 4-Asetamidofenol 10 mg/ml İbuprofen 20 mg/ml Asetilsalisilik asit 0,05 mg/ml Oksimetazolin 5 mg/ml Klorfeniramin maleat 1 mg/ml Fenilefrin 10 mg/ml Dekstrometorfan Reçeteli İlaçlar 1 mg/ml Zanamavir 500 ng/ml Ribavirin 500 ng/ml Amantadin 0,1 mg/ml Synagis 500 ng/ml Rimantadin 0,083 mg/ml Albuterol Sülfat TİCARİ TAKDİM ŞEKLİ Kat. No. Açýklama Directigen EZ RSV 30 Test Kiti BBL CultureSwab Sterile Single Swab (Steril Tekli Swab), 100 lü Paket BBL CultureSwab Liquid Amies (Sıvı Amies), Esnek Alüminyum Tel, 50 li Paket BBL CultureSwab Liquid Stuart (Sıvı Stuart), Esnek Alüminyum Tel, 50 li Paket BD Universal Viral Transport 3 ml Flakon, 50 li Kutu Regular Flocked Swab (Düzenli Toplanan Stab), Steril Tek Ambalajlı, 100 lü Kutu Minitip Flocked Swab (Minitip Toplanan Swab), Steril Tek Ambalajlı, 100 lü Kutu Flexible Minitip Flocked Swab (Esnek Minitip Toplanan Swab), Steril Tek Ambalajlı, 100 lü Kutu REFERANSLAR 1. CDC Update: respiratory syncytial virus activity United States, season. Morbid. Mortal. Weekly Rep. 48: Falsey, A.R. and E. E. Walsh Respiratory syncytial virus infection in adults. Clin. Microbiol. Rev. 13: Englund. J.A., P. A. Peidra, A. Jewell, K. Patel, B. B. Baxter and E. Whimbey Rapid diagnosis of respiratory syncytial virus infections in immunocompromised adults. J. Clin. Microbiol. 34: Crowcroft, N.S., F. Cutts and M.C. Zambon Respiratory syncytial virus: an underestimated cause of respiratory infection, with prospects for a vaccine. Commun Dis Public Health. 2: Hughes, J.D., D. A. Mann and V. V. Hamparian Detection of respiratory syncytial virus in clinical specimens by viral culture, direct and indirect immunofluorescence, and enzyme immunoassay. J.Clin. Microbiol. 226: Ahluwalia, G.J., J. Embree, P. McNicol, B. Law and G. W. Hammond Comparison of nasopharyngeal aspirate and nasopharyngeal swab specimens for respiratory syncytial virus diagnosis by cell culture, indirect immunofluorescence assay, and enzyme-linked immunosorbent assay. J. Clin. Microbiol. 25: Waner, J.L., N. J. Whitehurst, S. J. Todd, H. Shalaby and L. V. Wall Comparison of Directigen RSV with viral isolation and direct immunofluorescence for the identification of respiratory syncytial virus. J. Clin. Microbiol. 25:

8 8. Kehl, S.C., K. J. Henrickson, W. Hua and F. Jiang Evaluation of the hexaplex assay for detection of respiratory viruses in children. J. Clin. Microbiol. 39: Barenfanger, J., C. Drake, N. Leon, T. Mueller and T. Troutt Clinical and financial benefits of rapid detection of respiratory viruses: an outcomes study. J. Clin. Microbiol. 38: Heikkinen, T., J. Marttila, A. Salmi, and O. Ruuskanen Nasal Swab versus Nasopharyngeal Aspirate for Isolation of Respiratory Viruses. J. Clin. Microbiol. 40: Clinical and Laboratory Standards Institute Approved Guideline M29-A3. Protection of laboratory workers from occupationally acquired infections. CLSI, Wayne, PA. 12. Garner, J. S Hospital Infection Control Practices Advisory Committee, U. S. Department of Health and Human Services, Center for Disease Control and Prevention. Guideline for isolation precautions in hospitals. Infect. Control Hospital Epidemiol. 17: U.S. Department of Health and Human Services Biosafety in microbiological and biomedical laboratories, HHS Publication (CDC), 5th ed. U.S. Government Printing Office, Washington, D.C. 14. Directive 2000/54/EC of the European Parliament and of the Council of 18 September 2000 on the protection of workers from risks related to exposure to biological agents at work (seventh individual directive within the meaning of Article 16(1) of Directive 89/391/EEC). Official Journal L262, 17/10/2000, p Data on file, BD Diagnostics. 16 Smith, T.F Specimen requirements; selection, collection, transport, and processing In S. Spector, R.L. Hodinka, and S.A. Young (eds.), Clinical virology manual, 3rd ed., ASM Press, Washington, D.C. 17. Clinical and Laboratory Standards Institute (formerly NCCLS) Approved guideline: EP12-A. User protocol for evaluation of qualitative test performance, CLSI, Wayne, PA. 18. Federal Register Quality control for tests of moderate complexity (including the subcategory), high complexity, or any combination of these tests. Code of Federal Regulations 42(3):

9 9

10 m Becton, Dickinson and Company A BENEX Limited 7 Loveton Circle Bay K 1a/d, Shannon Industrial Estate Sparks, Maryland USA Shannon, County Clare, Ireland Tel: Fax: ViraTrans is a trademark of Trinity Biotech, PLC. Multitrans is a trademark of Starplex Scientific, Inc. BD, BD Logo and all other trademarks are property of Becton, Dickinson and Company BD Made in China by BD.