Cisplatin AML Hücrelerinde URG4/URGCP Üzerinden DNA Tamir Mekanizmasını Düzenler Mi?

Ebat: px

Şu sayfadan göstermeyi başlat:

Download "Cisplatin AML Hücrelerinde URG4/URGCP Üzerinden DNA Tamir Mekanizmasını Düzenler Mi?"

Tunç İncesu
8 yıl önce
İzleme sayısı:

1 Cisplatin AML Hücrelerinde URG4/URGCP Üzerinden DNA Tamir Mekanizmasını Düzenler Mi? Doç. Dr. Yavuz Dodurga Yavuz Dodurga 1, Mücahit Seçme 1, Levent Elmas 1, Nazlı Şirin 1, Yasemin Işık Balcı 2 1 Pamukkale Üniversitesi, Tıp Fakültesi, Tıbbi Biyoloji ve Genetik AD., Denizli, Türkiye 2 Pamukkale Üniversitesi, Tıp Fakültesi, Pediatrik Hematoloji BD., Denizli, Türkiye

Işık Balcı 2 1 Pamukkale Üniversitesi, Tıp Fakültesi, Tıbbi Biyoloji ve Genetik AD.

2 Lökomogenez; Tüm kanserlerde olduğu gibi lösemilerde tek bir mutant hücreden köken alan kemik iliği öncül hücrelerinin klonal bir bozukluğuolaraktanımlanır. Lösemiye EğilimYaratanDurumlar Çevresel Faktörler Hastalıklar Genetik İyonize Radyasyon Kimyasal etmenler (pestisid, herbisid, petrol ürünleri, benzen, hidrokinon...) Hamilelikte alkol kullanımı Hamilelikte sigara, mariuana kullanımı Beslenme Enfeksiyonlar (Onkogenik retrovirüsler) Primer Trombositopeni Klonal Sitopeniler Aplastik Anemi MDS/Refrakter sitopeni Akkiz AA Bloom Sendromu Ataksi pansitopeni Down Sendromu Kostmann Sendromu Diskeratozis konjenita Fankomi anemisi Naksoz Sendromu Nörofibromatöz Noonan Sendromu Poland Sendromu Rothmund Thomson Sendromu Seckel Sendromu Shwachman Sendromu Werner Sendromu

..) Hamilelikte alkol kullanımı Hamilelikte sigara, mariuana kullanımı Beslenme Enfeksiyonlar (Onkogenik retrovirüsler) Primer Trombositopeni Klonal Sitopeniler Aplastik Anemi MDS/Refrakter

3 Akut myeloblastik lösemi (AML), hematopoetik malignitelerin heterojen bir grubu olup anormal lösemik blastların ve normal kan hücrelerinin bozulmuş üretimi ile karakterizedir.

4 Cisplatin, kemoterapide kanseri tedavi etmek için kullanılan bir ilaçtır (solid tümörlerde). Cisplatin, genomik DNA'ya bağlanarak yapısını bozan böylece DNA'da hasar oluşturarak DNA replikasyonunu veya transkripsiyonu engelleyerek kanser hücresinin ölümüne neden olan, sitotoksik süreçleri tetikleyen bir bileşiktir.

Cisplatin, genomik DNA'ya bağlanarak yapısını bozan böylece DNA'da hasar

5 Up-regulated Gene 4 (URG4)/ Upregulator of cell proliferation (URGCP) Şatıroğlu-Tufan ve arkadaşları tarafından, Hepatit B Virus aracılı Hepatosellüler kanser gelişiminde rol alan bir gen olarak tanımlanmış, Up-Regulated-Gene-4 (URG4) olarak isimlendirilmiş Amerika daki National Center for Biotechnology Information-Gen Bankasına (NCBI-GenBank, Entrez GeneID: ve Entrez Nükleotid ID NM_017920) kayıt edilmiştir.

tanımlanmış, Up-Regulated-Gene-4 (URG4) olarak isimlendirilmiş Amerika daki National Center for

7 URG4/URGCP ATP / GTP bağlanma bölgesi ( aa) ~3600 bç 8 ekzon 922 aa 104 kd 7. kromozomun kısa kolunda lokalizedir (7p13) ve daha önce tanımlanan genler ile herhangi bir homoloji Ø. Özgün Yeni bir gen

11 Feitelson ve arkadaşları, URG4 ün hepatoselüler karsinoma olgularının ön taramasında kullanılabilecek güçlü bir preneoplastik marker olabileceğini göstermiştir.

12 Ekibimiz ve diğer araştırmacılar tarafından, Lösemi, Mide kanseri, Osteosarkom, Prostat kanseri, Nöroblastom, Akciğer kanseri, Gliom, Medullar tiroid kanseri Bu yeni çalışmalar ışığında URG4 ün lökomogenezde rol alabileceğini ve aynı zamanda kanser tedavisinde de umut verici bir terapötik hedef olabileceğini düşündürmüştür.

yeni çalışmalar ışığında URG4 ün lökomogenezde rol alabileceğini ve aynı zamanda

13 Amaç Bu çalışmamızda amaç, cisplatinin Kasumi 1 (AML hücre hattı) hücre hatlarında, hücre proliferasyonuna etkisi, DNA tamiri ve hücre döngüsü ile ilişki genlerin ve özgün bir onkogen olan URG4/URGCP geninin ekspresyon değişimlerine etkisini DNA hasarı oluşumuna etkisini belirlemektir. Leukemogenesis as a new approach to investigate the correlation between up regulated gene 4/upregulator of cell proliferation (URG4/URGCP) and signal transduction genes in leukemia. Dodurga Y, Oymak Y, Gündüz C, Satıroglu Tufan NL, Vergin C, Cetingül N, Biray Avci C, Topçuoğlu N. Mol Biol Rep Apr;40(4): doi: /s Epub 2012 Dec 25. Higher expression of the novel gene upregulated gene 4 in two acute lymphoblastic leukemia patients with poor prednisolone response. Oymak Y, Dodurga Y, Turedi A, Yaman Y, Ozek G, Carti O, Gunes BT, Erbudak E, Berber E, Avci CB, Vergin C. Acta Haematol. 2012;128(2):73 6. doi: / Epub 2012 Jun 6.

Leukemogenesis as a new approach to investigate the correlation between up regulated gene 4/upregulator of cell proliferation (URG4/URGCP) and signal transduction genes in leukemia.

14 Materyal-Metod Kasumi 1 hücre hattı çoğaltılması Sitotoksisite testleri Total RNA eldesi ve cdna sentesi Real Time PCR ile analiz Komet assay yöntemi İstatistiksel analiz

15 Materyal-Metod Kasumi 1 hücre hattı RPMI1640 besi ortamında üretildi. (% 10 fötal sığırserumu 100IU/ml penisilin ve 100mg/ml streptomisin 25 mm L glutamin) (37 0 C de, %95 nemli ortamda % 5 CO 2 li etüvde inkübasyon)

16 Cisplatinin 2,5 160 µm aralığındaki dozları Kasumi 1 lösemi hücre hattına uygulanmış ve hücre canlılığına olan etkisi, doz ve zamana bağlı olarak, canlı hücrelerden ATP ölçümüne dayalı hassas bir lüminometrik bir yöntem olan Celltiter Glo yöntemi ile belirlenmiş (24, 48, 72 saat). Sitotoksisite Testleri

canlı hücrelerden ATP ölçümüne dayalı hassas bir lüminometrik bir yöntem

17 Total RNA İzolasyonu/cDNA Sentezi Genlerin ekspresyon düzeylerinin tespiti için kontrol ve doz olmak üzere her bir hücre gurubu süspansiyonundan total RNA izolasyonu Trizol ile gerçekleştirilmiştir. cdna sentezi için revers transkripsiyon prosedürü, Transcriptor First Strand cdna Synthesis Kit kullanılarak gerçekleştirilmiştir.

izolasyonu Trizol ile gerçekleştirilmiştir.

18 Real Time PCR ile mrna Ekspresyon Değişimlerinin Belirlenmesi p53, ATM, ATR, CHECK1, CHECK2, CDC25A, CDC25C, ERCC1, GADD45A, GADD45G, CCND1, CDK6, BAX, BCL 2 ve URG4/URGCP genlerinin mrna düzeyindeki ekspresyon değişimleri RT PCR yöntemiyle belirlenmiştir.

GADD45G, CCND1, CDK6, BAX, BCL 2 ve URG4/URGCP genlerinin mrna

19 Komet Assay Analizi ile DNA Hasarının Belirlenmesi Cisplatinin Kasumi 1 hücrelerinde DNA hasarına olan etkisi belirlenmiştir.

20 İstatiksel Analiz Verilerin analizi CT metodu kullanılarak bilgisayar programı ile kantitasyonu yapıldı. Webtabanlı RT² Profiler PCR Array Data Analysis programında bulunan, Volcano Plot analizleri kullanıldı. Metodun amacı, iki ekspresyon sonucunun ±3SD karşılaştırılması esasına dayanmaktadır. Böylelikle, gen ekspresyonunun karşılaştırılması yapılan durumlarda kontrol ve doz grubu ilgili genlerin ekspresyon değerleri rölatif olarak belirlendi. Grupların karşılaştırılması RT² Profiler PCR Array Data Analysis programında bulunan Student t testi analizi ile istatistiksel olarak değerlendirildi.

Metodun amacı, iki ekspresyon sonucunun ±3SD karşılaştırılması esasına dayanmaktadır.

21 Bulgular/Sonuçlar Sitotoksisite Testleri Cisplatinin IC 50 dozu; Kasumi 1 lösemihücrehattı için 48. saatte 160 µm olarak hesaplanmıştır.

22 Bulgular/Sonuçlar RT PCR Kontrol grubu ile karşılaştırıldığında, cisplatin uygulanan Kasumi 1 hücrelerinde Kontrol grubuna göre KASUMİ-1 hücrelerindeki ekspresyon değişimleri ATM, CHECK 1, CDC25C, GADD45A, GADD45G, CCND1, CDK 6, BCL 2 ve URG4/URGCP genlerinin ekspresyonları istatistiksel olarak anlamlı şekilde azalmışken, p53 geninin ekspresyonunda ise istatistiksel olarak anlamlı şekilde artış gözlenmiştir (p<0,05).

23 Bulgular/Sonuçlar Komet Assay Kuyruk uzunluğu ve kuyruktaki DNA yüzdesi doz grubunda anlamlı olarak arttığı analiz edildi (p<0,05)

24 Sonuç olarak; Yeni tanı AML hastaları (farklı kurumlarla işbirliğiile)vefarklı gen profilleri değerlendirmek böylelikle ALL/AML olguların ayırıcı tanısındayadaolgularıntanı alabilmesinde kullanılabilecek aday moleküler genetik belirteç olabileceğini düşünmekteyiz Yeni onkogen olan URG4 ün lökomogenez deki olası etki mekanizmasını aydınlatması ile yeni gen profil modelleri ile tedavinin takibi ve yeni tedavi protokollerinin etkinliğinin erken dönemlerde anlaşılabilmesine katkıda bulunulabilecektir ve kesin tanı almamış olgularda da tanıya moleküler genetik bir yaklaşım getirilebilecektir

25 Çocukluk çağı lösemilerde hücre sinyal ileti yolaklarında görülen gen etkileşimlerindeki bozuklukların tanımlanması için yapılan genetik çalışmalar; Lökomogenezeışık tutabilmesi ve prognoza yönelik yeni hedef sağaltım modellerinin geliştirilmesi için gerekmektedir.

Benzer belgeler

MEME KANSERİ KÖK HÜCRELERİNİN GEN EKSPRESYON PROFİLİ

MEME KANSERİ KÖK HÜCRELERİNİN GEN EKSPRESYON PROFİLİ Sait Murat Doğan, A. Pınar Erçetin, Zekiye Altun, Duygu Dursun, Safiye Aktaş Dokuz Eylül Üniversitesi Onkoloji Enstitüsü, İzmir Slayt 1 / 14 Meme Kanseri