Songül ÇANAKÇI ve Ömer MUNZUROĞLU Fırat Üniversitesi Fen-Edebiyat Fakültesi Biyoloji Bölümü Elazığ

Transkript

1 Fırat Üniv. Fen ve Müh. Bil. Dergisi Science and Eng. J of Fırat Univ. 19 (3), , (3), , 2007 Asetilsalisilik Asit in Mısır (Zea mays L.) Fidelerinin Taze Ağırlık Değişimi, Pigment ve Protein Miktarları Üzerine Etkileri Songül ÇANAKÇI ve Ömer MUNZUROĞLU Fırat Üniversitesi Fen-Edebiyat Fakültesi Biyoloji Bölümü Elazığ scanakci@firat.edu.tr (Geliş/Received: ; Kabul/Accepted: ) Özet: Bu çalışmada, kontrollü şartlarda yetiştirilen 3 günlük mısır ( Zea mays L. cv. Luce ) fidelerinde farklı konsantrasyonlardaki (0, 20, 200 ve 2000 ppm) asetilsalisilik asit (ASA) in taze ağırlık değişimi, pigment ve protein miktarı üzerine etkileri araştırıldı. Çözeltiler, fidelerin köklerine dört gün süreyle kapalı bir sistem yoluyla uygulandı. Elde edilen sonuçlara göre: 20 ppm ASA in fidelerin taze ağırlık artışını, pigment ve protein miktarını etkilemediği tespit edildi; 200 ve 2000 ppm ASA uygulamasının fidelerde taze ağırlık artışını engellediği belirlendi; ayrıca bu iki konsantrasyonun fidelerin klorofil a, klorofil b, total klorofil ve protein miktarlarını önemli oranlarda azalttığı, fakat karotenoid miktarını etkilemediği belirlendi. Asetilsalisilik asit in yüksek konsantrasyonlarının mısır fidelerinde osmotik ve toksik stres yaratarak taze ağırlık artışını engellediği, pigment ve protein miktarını azalttığı sonucuna varıldı. Anahtar Kelimeler: Asetilsalisilik asit, Mısır, Taze ağırlık, Protein, Pigment. Effects of Acetylsalicylic Acid on Fresh Weight Alteration, Pigment and Protein Content of Corn (Zea mays L.) Seedlings Abstract: In this study, at 3 day old corn ( Zea mays L. cv. Luce ) seedlings, were grown under controlled conditions, effects of different concentrations ( 0, 20, 200 and 2000 ppm) of acetylsalicylic acid (ASA) on fresh weight alteration, pigment and protein amounts were studied. Solutions applied for 4 days to the seedlings roots via a closed set. According to the results obtained: 20 ppm ASA had no significant influence on the fresh weight increase, pigment and protein contents of seedlings; 200 and 2000 ppm ASA treatments caused a significant inhibition effect on fresh weight increase of seedlings; in addition, these two concentrations caused a significant decrease on chlorophyll a, chlorophyll b, total chlorophyll and protein contents, but had no significant influence on the carotenoid content. It is therefore concluded that the osmotic and the toxic stress that caused by high ASA concentrations used inhibit fresh weight increase, decrease pigment and protein contents of corn seedlings. Keywords: Acetylsalicylic acid, Corn, Fresh weight, Protein, Pigment. 1. Giriş Bitkiler metabolik faaliyetleri sırasında, hayati fonksiyonları için gerekli olmayan çok sayıda madde üretirler. Bu maddeler genel anlamda sekonder bitki ürünü olarak bilinir. Bu ürünler arasında aromatik bir fenolik olan salisilik asit de yer alır. Salisilik asit (SA) in ticari üretim şekli asetilsalisilik asit (ASA) tir. Bu maddenin sulu solüsyonlarda, hemen hemen tümüyle etkin maddesi olan SA e hidrolize olduğu bilinmektedir [1]. Salisilik asit, konsantrasyona bağlı olarak, bitkilerin büyüme ve gelişme süreçlerinde önemli davranışlar sergiler. Bu davranışlara termogenik etkide bulunmak [2], adventif köklenmeyi stimüle etmek [3], herbisitik etki yapmak [4], yaprak dökümünü azaltmak [5], patojenlere karşı direnç sağlamak [6], etilen biyosentezini inhibe etmek [7] ve proteinlerin nitelik ve niceliklerinin değiştirmek [8] gibi olaylar örnek verilebilir. Bu örnekler ve SA in sebep olduğu daha pek çok olay bazı araştırıcılarda, bu maddenin yeni bir bitki büyüme regülatörü olabileceği fikrini doğurmuştur [2, 9-11]. ASA in bitkilerin ağırlık değişimini nasıl etkilediği, pigment ve protein içeriklerinde konsantrasyona bağlı olarak ne gibi etkiler yaptığı konusunda yeterli düzeyde bilgi yoktur. Farklı konsantrasyonlardaki SA solüsyonlarında çimlendirilmiş arpa tohumlarından geliştirilen ve SA içeren ortamlarda büyütülen arpa bitkilerinde, SA in yaprak alanını (2. yaprak), kök büyümesini, protein ve klorofil (a+b) miktarını konsantrasyon artışına paralel bir şekilde azalttığı gözlenmiştir [12]. Wajahatullah ve diğ. [13] tarafından yapılan bir çalışmada, SA ve ASA in çok düşük

2 S. Çanakçı ve Ö. Munzuroğlu konsantrasyonlarda (10-5 mol/l) yapraklara püskürtülmesinin soya fasulyesi ve mısırda genel anlamda bir fotosentetik verim artışına yol açtığı belirlenmiştir. Aynı çalışmada, stomatal hareketliliğin ve transpirasyonun arttığı, korofil miktarının değişmediği rapor edilmiştir [13]. Bir haftalık mısır ve fasulye fideleriyle yapılan çalışmalarda, kök [14] veya yaprağa [15] ASA uygulamasının (50, 250 ve 1000 ppm), yüksek konsantrasyonlarda taze ağırlık kaybının artışına, kuru ağırlık artışına ve transpirasyonda azalmaya yol açtığı saptanmıştır. Bir aylık fasulye fidelerinin 1. yapraklarından alınan disklerde yapılan bir çalışmada, ASA in konsantrasyonundaki (100, 250, 500 ppm) artışa paralel olarak, klorofil a ve b miktarının azaldığı, karotenoid miktarının etkilenmediği, taze ağırlık kaybının ve protein yıkımının arttığı rapor edilmiştir [16]. ASA in yüksek konsantrasyonlarda stomaların kapanmasına neden olduğu belirlenmiştir [14,15,17,18]. Bu çalışmadaki amaç, bir C4 bitkisi olan mısırda ağırlık değişimi, pigment ve protein miktarı üzerine farklı konsantrasyonlardaki ASA in etkilerini araştırmaktır. Bilindiği gibi salisilik asit in bitkiler üzerindeki etkileri çok karmaşıktır. Özellikle konsantrasyona bağlı olarak farklı sonuçların elde edilmesi, bu karmaşıklığı daha da arttırmakta ve SA in fizyolojik etkilerinin izahını zorlaştırmaktadır. Bu durumun aydınlatılması ancak çok fazla sayıda araştırmayla mümkün olabilir. Diğer taraftan bitkilerin maruz kaldığı ortam şartlarının en ideal olduğu zamanlar çok azdır. Bitkiler çimlenmiş tohumdan fideye geçerken, çevresel faktörlere (kuraklık, tuzluluk, optimum dışındaki sıcaklık değişimleri vs.) karşı daha savunmasızdırlar. Dormansi, çimlenmemiş tohumu çimlenme için uygun şartlar oluşuncaya kadar korur. Ancak çimlenmeden sonra gelişmekte olan fide için böylesine koruyucu bir mekanizma yoktur. İşte bu durum, öncelikle büyüme ve gelişme sürecinde bitkiye direnç sağlayan yeni maddelerin ve bu maddelerin dozlarının araştırılmasını gerektirmektedir. 2. Materyal ve Metot Bu araştırmada, bitkisel materyal olarak mısır (Zea mays L. cv. Luce) tohumlarının çimlendirilmesiyle geliştirilen üç günlük fideler kullanıldı. Bu amaçla, ilk önce mısır tohumları 25 o C de 5 saat musluk suyunda şişmeye bırakıldı. Daha sonra bu tohumlar saf su ile ıslatılmış filtre kağıtları arasında 25 o C lik karanlık ortamda çimlendirildi. Islatma anından itibaren toplam 72 saat sonra, çimlenmiş olan tohumlardan, yaklaşık olarak radikula uzunluğu 0.3 cm, koleoptil uzunluğu 0.6 cm olanlar seçildi. Ve ilk ağırlıkları tek tek tespit edildi. Bu arada ASA in 20, 200 ve 2000 ppm konsantrasyonlarındaki çözeltileri hazırlandı. Kristal asetilsalisilik asit in çözülmesinde 1 ml % 95 lik etilalkol kullanıldı [4] ve çözeltilerin ph ları 4,5-5 e ayarlandı [17 ]. Bu işlemler kontrol grubu olarak kullanılacak olan saf su (0 ppm ASA) için de yapıldı. 250 ml lik 24 adet steril kavanoz altışarlı dört gruba ayrılarak; ilk gruptaki kavanozlara 200 ml saf su, ikinci gruptaki kavanozlara 200 ml 20 ppm ASA, üçüncü gruptaki kavanozlara 200 ml 200 ppm ASA ve dördüncü gruptaki kavanozlara 200 ml 2000 ppm ASA solüsyonları bırakıldı. Sonra her bir kavanozun ağzına birer sünger kapak yerleştirildi ve yukarıda belirtilen çimlenmiş tohumlardan beşer tane, bu sünger kapağın gözeneklerine transplante edildi. Böylece her grup için toplam 30 adet homojen görünümlü çimlenmiş tohum kullanıldı. Ölçümleri kolaylaştırıcı işaretlemeler yapıldıktan sonra kavanozlar, kontrollü şartlara (ışık yoğunluğu; 40 w/m 2, sıcaklık; 23 ± 2, fotoperiyot;16 /8 uzun gün) sahip olan büyüme kabinlerine alındı. Bu kabinlerde, fideler bir haftalık oluncaya kadar, kökten 4 gün süreyle ASA konsantrasyonlarına maruz bırakıldı. Bu zaman süresince, kavanozlar sürekli kontrol edilerek kendi çözeltilerinden eşit miktarlarda ilave edildi. ph ölçümleri JENWAY 3040 iyon analizi ve ph metre cihazı ile gerçekleştirildi. Tartımlarda Sartorius BL 120S marka hassas terazi kullanıldı. Absorbans ölçümlerinde CE-5502 Scaning Double Beam UV Spektrofotometre kullanıldı. Asetilsalisilik asit % 99,5 saflıkta kristal halde Sigma firmasından temin edildi. Protein analizi için kullanılan sığır serum albumini (0.1 g.ml -1 ) Sigma Diagnostics ten temin edildi. Araştırmamızda kullandığımız mısır tohumları PAN Tohum Islah ve Üretme A.Ş. den temin edilmiştir. Sertifikalı hibrit mısır tohumlarının çeşidi Luce (küçük yuvarlak) olup, hasat yılı 2003 tür Taze ağırlık belirlenmesi Taze ağırlık miktarını tespit etmek için, ilk ağırlıkları tek tek belirlendikten sonra, kökten 4 gün süreyle ASA uygulanmış bir haftalık fidelerin 260

3 Asetilsalisilik Asit (ASA) in Mısır (Zea mays L.) Fidelerinin Yaş Ağırlık değişimi, Pigment ve Protein İçerikleri Üzerine Etkileri bekletilmeden son ağırlıkları tespit edildi. İlk ve son ağırlık değerlerine ait farklardan taze ağırlık değişimi önce g/g cinsinden belirlendi. Daha sonra bu değerler % olarak hesaplandı. Tartımlarda 10 ar fide kullanıldı [19] Pigment miktarının belirlenmesi Klorofil a, klorofil b, karotenoid ve total klorofil miktarını tespit etmek için, kökten 4 gün süreyle ASA uygulanmış bir haftalık fidelerden her grup için, 1 g taze yaprak kullanıldı. Pigment analizi için yapraklar ekstrakte edildi [20] ve daha sonra bu ekstraktların 440, 645 ve 663 nm dalga boylarında ayrı ayrı absorbansları köre karşı okundu. Absorbans tayinlerinde 1 cm 3 hacmindeki kuarz tüpler kullanıldı. Elde edilen absorbans değerlerinden klorofil a, klorofil b, karotenoid ve total klorofil miktarları hesaplandı [20]. Protein miktarını belirlemek için, kökten 4 gün süreyle ASA uygulanmış bir haftalık fidelerin bekletilmeden taze ağırlıkları tespit edildi ve protein analizine geçildi. Protein ekstraksiyonu Ross [21] da anlatılan Larson ve Beevers [22] metoduna göre yapıldı. Bu amaçla her bir grup için 5 g bitki (10 fide) kullanıldı. Metodta anlatılan ekstraksiyon işlemlerinden sonra, ekstraktlar ayrı ayrı deney tüplerine konuldu. Total protein miktarının saptanmasında Lowry metodu [23] kullanıldı. Ekstraktları içeren tüpler, bu metodta [23] anlatılan işlemlerden geçirildikten sonra, yine metodta anlatıldığı şekilde spektrofotometrede 725 nm de köre karşı absorbansları okundu. Daha önceden sığır serum albumini stok proteinin 0.25, 0.50, 0.75, ve 1.00 mg.ml -1 lik konsantrasyonlardaki serum proteinleri ile hazırlanan standart eğriden yararlanarak, protein miktarı (mg.g -1.taze ağırlık) aşağıdaki formülden hesaplandı Protein ekstraksiyonu ve belirlenmesi Dok. Prot. Mik. (mg.g -1. taze ağırlık) = Grafikte Bulunan Tot. Protein Miktarı (mg) 5 x 150x(1) Fidelerin Toplam Ağırlığı (g ) x İstatistik analiz Bütün deneyler 3 defa tekrar edildi. Sonuçlar, ortalamanın standart sapması hesaplanarak ve varyans analizi yapılarak istatistik analize tabi tutuldu (SPSS 10.0 Windows, Duncan ve Kruskal- Wallis testi). 3. Sonuçlar Mısır fidelerine kökten dört gün süreyle ASA uygulamasının taze ağırlık değişimi üzerindeki etkilerine ait sonuçlar Tablo 1 de verildi. Bu tablodaki sonuçlardan da anlaşılacağı üzere, kontrol grubu fidelerine göre, 20 ppm ASA uygulaması taze ağırlık artışında önemli sayılabilecek bir farklılık yaratmadı (p>0,01). Fakat 200 ve 2000 ppm ASA uygulanan fidelerdeki taze ağırlık artışı, kontrol fidelerine göre sırasıyla, % 28,57 ve % 56,92 oranlarında daha az gerçekleşti ve bu değerler istatistik açıdan önemli bulundu (p<0,01). Mısır fidelerine kökten dört gün süreyle ASA uygulamasının pigment miktarı üzerindeki etkilerine ait sonuçlar Tablo 2 de verildi. Görüldüğü gibi 20 ppm ASA uygulanan mısır fidelerinin klorofil a, klorofil b, karotenoid, total klorofil düzeyleri kontrol fidelerine göre önemli 261 sayılabilecek bir farklılık göstermedi (p>0,05). Fakat 200 ve 2000 ppm ASA uygulanan mısır fidelerinin klorofil a düzeyleri kontrol fidelerine göre sırasıyla, % 25,42 ve % 35,05 oranlarında daha az ölçüldü ve bu durum istatistik olarak anlamlı bulundu (p<0,05). Yine 200 ve 2000 ppm ASA uygulanan fidelerin klorofil b düzeyleri kontrole göre sırasıyla, % 12,38 ve % 25,67 oranlarında düşük çıktı (p<0,05). Fakat 200 ve 2000 ppm ASA uygulanan fidelerin karotenoid düzeyleri kontrol fidelerine göre önemli sayılabilecek bir farklılık göstermedi (p>0,05) (Tablo 2). Fidelerin total klorofil miktarları karşılaştırıldığında, 200 ve 2000 ppm ASA uygulanan fideler kontrole göre sırasıyla, % 14,62 ve % 27,10 oranlarında azalma gösterdi (p<0,05) (Tablo 2). Mısır fidelerine kökten dört gün süreyle ASA uygulamasının protein miktarı üzerindeki etkilerine ait sonuçlar Tablo 3 de verildi. Görüldüğü gibi 20 ppm ASA uygulaması fidelerin protein düzeyinde önemli sayılabilecek bir fark yaratmazken (p>0,05), 200 ve 2000 ppm ASA uygulaması, kontrol fidelerine göre sırasıyla, % 24,36 ve % 42,85 oranlarında azalış (p<0,05) meydana getirdi.

4 S. Çanakçı ve Ö. Munzuroğlu 4. Tartışma Düşük konsantrasyonlu (20 ppm) ASA uygulamaları mısır fidelerinin taze ağırlık değişiminde, pigment ve protein miktarında önemli sayılabilecek bir değişiklik yaratmadı (p>0,05). Fakat yüksek ASA konsantrasyonları (200 ve 2000 ppm), düşük konsantrasyonlarının tam tersine, taze ağırlık artışında, klorofil a, klorofil b, total klorofil ve protein miktarında istatistik açıdan anlamlı (p<0.01, p<0.05) azalmalar meydana getirdi. Gerek taze ağırlık değişimi, gerekse pigment ve protein miktarları açısından yüksek ASA konsantrasyonlarının yarattığı bu sonuçlar iki nedene bağlanabilir. Bunlardan ilki, ASA in antitranspirant etkide bulunarak fidelerin pasif su alma yeteneklerini azaltması, yani osmotik etkidir [14,15,17]. Strese sokulmuş bitkilerde taze ağırlığın azaldığı [24,16], bunun da su içeriğindeki azalıştan kaynaklanmış olabileceği [14,15,25] ileri sürülmüştür. İkincisi ise yüksek ASA konsantrasyonlarının stres yaratarak büyümeyi engellemesi veya toksik etki yaparak doku yıkımını artırmasıdır. Nitekim 2000 ppm ASA, 200 ppm ASA e göre taze ağırlık artışı üzerinde daha fazla inhibitif etki meydana getirdi (Tablo 1). ASA in yüksek konsantrasyonlarda bitkide kök ve koleoptil büyümesini inhibe ettiği [17] bildirilmiştir. ASA in mısır fidelerinin pigment ve protein miktarı üzerinde oluşturduğu etkiler, daha önce farklı bitki türleriyle yapılan çalışmaların [12,16,25] sonuçlarıyla uyum içindedir. Bu durum ASA dışındaki diğer bazı fenolik bileşiklerle yapılan çalışmalar için de geçerlidir. p- kumarik, ferulik ve vanilik asitlerin kadife yaprağından izole edilmiş hücrelerde, fotosentezi ve protein sentezini kuvvetli bir şekilde inhibe ettiği rapor edilmiştir [26]. Yine benzoik ve sinnamik asitlerin soya fasulyesi yapraklarında klorofil miktarını azalttığı [27], o- hidroksifenilasetik, ferulik ve p- kumarik asitlerin pirinç fidelerinde klorofil miktarını farklı oranlarda azalttığı [28] bildirilmiştir. Sinnamik asit in salatalık fidelerine etkilerinin araştırıldığı bir çalışmada, çeşitli büyüme parametreleri (transpirasyon hızı, fotosentetik verim ve klorofil a, klorofil b miktarları) üzerindeki inhibitif etkinin şiddet ve kalıcılığının konsantrasyon artışına paralel olarak arttığı bildirilmiştir [29]. Yüksek konsantrasyondaki fenolik bileşiklerin klorofil miktarında yarattığı bu azalmanın, klorofil biyosentezinin engellenmesi veya klorofil yıkımının hızlanması ya da her ikisinin birden sonucu olabileceği ileri sürülmüştür [30]. Bilindiği gibi fotosentetik pigmentlerin ve proteinlerin düzeyi çevresel ve içsel kökenli çok sayıda faktörden etkilenir. İçsel faktörlerin başında bitki büyüme maddeleri gelir. Osmotik ve toksik stresin de içinde bulunduğu çok sayıda stres faktörünün bitkilerdeki ABA ve etilen düzeyini artırdığı, sitokinin düzeyini azalttığı iyi bilinen bir durumdur. Bu çalışma, konunun hormonal boyut da araştırılmasının gerekli olduğunu göstermektedir. Tablo 1. Tohumları ıslatmadan itibaren 72 saat sonra elde edilen ve 4 gün süreyle ASA uygulanan bir haftalık mısır (Zea mays L. cv. Luce) fidelerinde tespit edilen taze ağırlık artışları (%). (Taze ağırlık değişimi %) Asetilsalisilik asit Konsantrasyonu (ppm) 0 ppm (Kontrol) 20 ppm 200 ppm 2000 ppm P değeri 166,44 ± 0,34 a 154,60 ± 0,47 ab 118,88 ±0,37 b 71,70 ± 0,20 c 0,000 (**) ** : p< 0,01; a,b,c : Aynı satırda farklı harfleri içeren grup ortalamaları arası farklar önemlidir (p< 0,01), n:

5 Asetilsalisilik Asit (ASA) in Mısır (Zea mays L.) Fidelerinin Yaş Ağırlık değişimi, Pigment ve Protein İçerikleri Üzerine Etkileri Tablo 2. Tohumları ıslatmadan itibaren 72 saat sonra elde edilen ve 4 gün süreyle ASA uygulanan bir haftalık mısır (Zea mays L. cv. Luce) fidelerinin yapraklarında ölçülen pigment miktarları (mg.g -1. taze ağırlık). Pigment Çeşidi (mg.g -1. taze ağırlık) Asetilsalisilik asit Konsantrasyonu (ppm) 0 ppm (Kontrol ) 20 ppm 200 ppm 2000 ppm P değeri 0,975 0,877 0,744 0,031 (*) 0,281 0,217 0,189 0,027 (*) 0,153 0,145 0,138 0,098 ( ) Klorofil a 1,001 ± 0,03 a ± 0,04 ab ± 0,07 b ± 0,05 c Klorofil b 0,291 ± 0,006 a ± 0,01 a ± 0,03 b ± 0,008 b Karotenoidler 0,157 ± 0,01 a ± 0,01 a ± 0,01 a ± 0,003 a Tot. klorofil (kl.a + kl.b) 1,292 ± 0,04 a 1,259 ± 0,05 a 1,103 ± 0,12 b 0,934 ± 0,05 c 0,031 (*) * : p< 0,05; : p> 0,05; a,b,c : Aynı satırda farklı harfleri içeren grup ortalamaları arası farklar önemlidir (p< 0,05). Tablo 3. Tohumları ıslatmadan itibaren 72 saat sonra elde edilen ve 4 gün süreyle ASA uygulanan bir haftalık mısır (Zea mays L. cv. Luce) fidelerinde ölçülen protein miktarları (mg.g -1. taze ağırlık). (mg.g -1. taze ağırlık) Asetilsalisilik asit Konsantrasyonu (ppm) 0 ppm (Kontrol) 20 ppm 200 ppm 2000 ppm P değeri 2,023 ± 0,19 a 1,750 ± 0,22 ab 1,530 1,156 0,027 (*) ± 0,15 b ± 0,09 c * : p< 0,05; a,b,c : Aynı satırda farklı harfleri içeren grup ortalamaları arası farklar önemlidir (p< 0,05). 5. Kaynaklar: 1.Mitchell, A.G., Broadhead, J.F. (1967). Hydrolysis of solubilized Aspirin, J. Pharm. Sci., 56: Raskin, I., (1995). Salicylic acid. plant hormones physiology, Biochemistry and Molecular Biology, New York. USA. 3. Kling, G.J. and Meyer, J.M.M. (1983). Effects of phenolic compounds and IAA on adventitious root initiation in Cuttings of Phaseolus aureus, Acer saccharinum and Acer griseum, Hort Science, 18 (3): Shettel, N.L. and Balke, N.E. (1983). Plant growth response to several allelopathic chemicals, Weed Science, 31: Ferrarese, I., Moretto, P., Trainotti, L., Rascio, N. and Casadoro, G. (1996). Cellulase involvement in the abscission of peach and pepper leaves is affected by Salicylic acid, Journal of Experimental Botany, 47, Salisbury, F.B. and Ross, C.W. (1992). Plant Physiology, Editor Carey, J.C., Hormones and Growth Regulators, 18: Carswel, G.K., Johnson, C.M., Shillito R.D. and Harms, C.T. (1989). O-acetylsalicylic acid promotes colony formation from protoplast of an elite maize inbreed, Plant Cell rep., 8: Jung J.L., Friting, B., Hahne, G. (1993). Sunflower (Helianthus annus L.) pathogenesis - proteins. Induction by Aspirin (acetylsalicylic acid) and characterization, Plant Physiology, 1993, 101(3),

6 S. Çanakçı ve Ö. Munzuroğlu 9. Losanka, P., Pancheval, T., Uzunova, A. (1997). Salicylic acid, properties, biosynthesis and physiological role, Bulg. J. Plant Physiol., 23(1-2), Rajasekaran, L.R., Blake, T.J. (1999). New plant growth regulators protect photosynthesis and enhance growth under drought of jack pine seedlings, Journal of plant Growth Regulation. 18 ( 4), Rajasekaran, L.R., Blake, T.J. (1998). Early growth invigoration of jack pine seedlings by natural plant growth regulators, Trees- Structure and funktion, 12 (7), Pancheva, T.V., Popova, L.P. and Uzunova, A.N. (1996). Effects of Salicylic acid on growth and photosynthesis in barley plants, J. Plant Physiol., 149, Wajahatullah K., Balakrishnan P., Donald L.S. (2003). Photosynthetic responses of corn and soybean to foliar application of salicylates, J. Plant Physiol., Çanakçı, S. ve Munzuroğlu, Ö. (2002). Fasulye (Phaseolus vulgaris L.) ve mısır ( Zea mays L.) fidelerine kökten Asetilsalisilik asit uygulamasının transpirasyon hızı ve ağırlık değişimleri üzerine etkileri, Fırat Üniv. Fen ve Mühendislik Bilimleri Dergisi, 14(2), Çanakçı, S. ve Munzuroğlu, Ö. (2000). Fasulye (Phaseolus vulgaris L.) ve mısır ( Zea mays L.) fidelerine yapraktan püskürtme yoluyla Asetilsalisilik asit uygulamasının transpirasyon hızı ve ağırlık değişimleri üzerine etkileri, Yüzüncü Yıl Üniv. Fen Bilimleri Enstitüsü Dergisi. 7 (1), Çanakçı, S. (2003). Effects of Acetylsalicylic acid on fresh weight, pigment and protein content of bean leaf discs (Phaseolus vulgaris L. ), Acta Biologica Hungarica, 54 (3-4), Larque-Saavedra, A. (1978). The antitranspirant effect of Acetylsalicylic acid on Phaseolus vulgaris L, Physiol. Plant., 43, Larque-Saavedra, A. (1979). Stomatal closure in response to Acetylsalicylic acid treatments, Z. Pflanzen physiol., 93: Baltepe, Ş., Bilaloğlu, R. ve Yürekli, A.K. (1982). Bitki Fizyolojisi I (Bitki Metabolizması) Laboratuar Kılavuzu, E.Ü. Fen Fakültesi Yayınları, Ekim, No:29, Witham, F.H., Blaydes, D.F. and Dewlin, R.M. (1971). Experiments in Plant Physiology, New York, Von Nostrand Reinhold Company, Ross, W.C. (1974). Plant Physiology Laboratory Manual, Wadsworth Publishing Company Inc. Belmont, California, U.S.A.pp: Larson, L.A. and Beevers H. (1965). Amino acid metabolism in young pea seedlings, Plant Physiology, 40: Lowry, O.H., Rosebrough, N.J. and Randall, R.J. (1951). Protein measurement with Folin phenol reagent, Journal of Biological Chemistry, Itai, C., Ben-Zioni, A. and Ordin, L. (1973). Correlative changes in endogenous hormone levels and shoot growth induced by short heat treatments to the root, Physiol. Plant., 29: Çanakçı, S. ve Munzuroğlu, Ö. (2004). Fasulye (Phaseolus vulgaris L.) çeliklerinde ağırlık değişimleri, pigment ve protein miktarları üzerine Asetilsalisilik asit ve tuz (NaCI) uygulamasının karşılıklı etkileri, Gazi Üniv. Eğitim Fak. Dergisi. 24 (1), 25-40, Ph.D. Thesis, University of Turkey. 26. Mersie, W. and Singh.M. (1993). Phenolic acids affect photosynthesis and protein synthesis by isolated leaf cells of velvet-leaf, J. Chem. Ecol., 19: Baziramakenga, R., Simara, R.R. and Leroux, G.D. (1994). Effects of Benzoic and Cinnamic acids on growth, mineral composition, and chlorophyll content of soybean, J. Chem. Ecol., 20: Yang, C.M., Chang I.F., Lin, S.J. and Chou, C.H. (2004). Effects of three allelopathic phenolics on chlorophyll accumulation of rice (Oryza sativa) seedlings: II. Stimulation of consumption-orientation, Bot. Bull. Acad. Sin., 45: Wu, F., Pan, K. and Zhou X. (2005). Effects of Cinnamic acid on physiological characteristics of Cucumis sativus seedling, Ying Yong Sheng Tai Xue Bao: The journal of applied ecology, 16 (5): Yang, C.M., Lee, C.N. and Chou, C.H. (2002). Effects of three allelopathic phenolics on chlorophyll accumulation of rice (Oryza sativa) seedlings: I. Inhibition of supplyorientation, Bot. Bull. Acad. Sin., 43: