Revizyon çubuğu, önceki versiyonda yapılan güncellemeleri göstermektedir. Kullanım Amacı İnsan serumu ve plazmasındaki hepatit B yüzey antijenine (HBsAg) spesifik antikorların kalitatif deteksiyonu ve kantitatif determinasyonu için enzim immün testi. Enzim immün testleri, BEP III System, BEP 2000 System veya BEP 2000 Advance ELİSA işlemcileriyle işlenir. Testin otomatik olmayan şekilde çalışılması da mümkündür. Özet ve Açıklama Hepatit B yüzey antijeni (HBsAg) gibi, yüzey proteinine yönelik anti-hbs antikoru da hepatit B virüsü (HBV) ile gerçekleşen enfeksiyonun tanısı için önemli bir parametredir 1,2. Bir HBV enfeksiyonunun inkübasyon periyodu sırasında ve akut fazında HBsAg antikorları tespit edilemez. Vakaların %90'ında, bağışıklık sağlayan anti-hbs antikorları iyileşme döneminin geç aşamasına, hastalığın ortaya çıkmasından sonraki yaklaşık 3 ile 4 ay içerisinde, dolaşımdaki HBsAg antikorlarının artık tespit edilemediği zamanda ortaya çıkmaz 3,4. Bu serokonversiyon, yani anti-hbs negatiflikten pozitifliğe geçiş, özellikle erken evrede HBsAg tespit edilemeyen akut infeksiyonlu hastaların yaklaşık %10 unda daha sonra anti-hbs açısından pozitif hale geldiğinden, geçirilmiş bir HBV infeksiyonunun tanısı için çok güvenilir bir parametredir. Bu nedenle, anti-hbs testi subklinik HBV infeksiyonlarının tanısı için de uygundur 3,4. Anti-HBs konusunda pozitif bir sonuç alınması HBV infeksiyonu ya da aşı uygulaması yoluyla bu antijene daha önce maruz kalındığını gösterdiğinden, anti-hbs testine ilişkin en önemli uygulamalar şunlardır: a. HBV ile infekte olmuş hastalarda iyileşme döneminin değerlendirilmesi (iyileşme takibi). b. Aşılama programları bağlamındaki serolojik araştırmalar (tarama ve immünizasyon kontrolleri). c. Epidemiyolojik çalışmalar. Anti-HBs'lerin kalitatif tespitinin yanı sıra, anti-hbs'lerin kantitatif değerlendirmesi aktif bağışıklık bakımından hak ettiği anlamı kazanmıştır. WHO'nun bir tavsiyesine göre, serumda veya plazmada > 10 IU/L bir konsantrasyon tespit edilebildiği takdirde hepatit aşısıyla aşılanan bir kişinin enfeksiyona karşı korunduğu varsayılabilmektedir. Değerlerin bu limitin altında olmaması için destekleyici aşıların zamanında yapılması tavsiye edilmektedir 5,6. Temel aşı uygulamasının tamamlanmasının ardından < 100 IU/L lik anti-hbs değerlerine sahip olduğu saptanan hastalara bir yıl içinde rapel aşı uygulanması gereklidir (Almanya Robert Koch Enstitüsü İmmünizasyon Yürütme Komitesi Tavsiyeleri, Ekim 1995). Bağışıklığın süresinin aşı uygulamasının ardından elde edilen anti-hbs seviyeleriyle orantılı olması gerçeği, bir kalitatif değerlendirmenin gerekliliğinin altını ilave şekilde çizmektedir. Yöntem Prensibi Enzygnost Anti-HBs II, sandviç prensibini temel alan bir basamaklı bir testtir. Ad ve ay alt tiplerini içeren insan kaynaklı HBsAg inaktivasyonu takiben bir konjugat antijeni ve solid faz olarak kullanılır. Peroksidazla işaretlenmiş HBsAg, örnekte bulunan HBs ye spesifik antikorlara bağlanır. Bunlar mikrotitrasyon plağının yüzeyinde bağlı şekilde bulunan HBsAg ye bağlanır (antijen sandviçi). OQNEG15C48 Rev. 07 TR 2015-04 1/11
Reaktifler Bileşimi Konjugatın enzim kısmı, teşekkül eden Kromojen Çalışma Solüsyonunun mavi bir renk almasını sağlar. Bu reaksiyon rengi sarıya döndüren Durdurma Solüsyonu POD eklenmesiyle durdurulur. Ortaya çıkan sarı rengin yoğunluğu, örnek içerisindeki spesifik antikorlarının aktivitesi ile orantılıdır. Uluslararası Ünitelerin kantatifleştirilme hesapları α-method kullanılarak hesaplanır. Simgeler Sağlanan materyaller Enzygnost Anti-HBs II 1 x 96 10 x 96 MTP Anti-HBs II test plağı 1 adet 10 adet CONJUGATE Anti-HBs II Conj 1 x 6 ml 10 x 6 ml REFER P Anti-HBs II REF P 1 x 1,5 ml 3 x 1,5 ml REFER N Anti-HBs II Neg 2 x 14 ml 5 x 14 ml WASH POD Yıkama Solüsyonu POD * 1 x 100 ml 2 x 100 ml SUBSTRATE TMB Tampon/Substrat TMB * 1 x 30 ml 4 x 30 ml CHROMOGEN TMB Kromogen TMB * 1 x 3 ml 4 x 3 ml STOP POD Durdurma Solüsyonu POD * 1 x 100 ml 2 x 100 ml EMPTY VIAL CHROM SOL Kromojen Çalışma Solüsyonu 1 adet 1 adet için boş şişe * Yapışkan folyolar 6 adet 24 adet Polietilen torba 1 adet 1 adet Değerler barkod tablosu 1 adet 1 adet Kullanım Talimatları 1 adet 1 adet Diğer kitler: 100 x 96 * Bu komponentler aynı zamanda Enzygnost için Yardımcı Reaktifler kiti/tmb ( REF OUVP) içerisinde de mevcuttur. Test plağı, konjugat ve bunların yanı sıra Anti-HBs II REF P ve Anti-HBs II Neg ambalaj üzerinde yazılı olarak temin edilmiş ve de barkod değerler tablosunda belirtilmiş 6 haneli lot numarası kombinasyonunda kullanılmalıdır. Aynı kural Kromojen TMB ve Tampon/Substrat TMB reaktifleri için de geçerlidir. Enzygnost Anti-HBs II test plağı: İnsan kanından izole edilen inaktive edilmiş HBsAg kaplı mikrotitrasyon plağı (ad ve ay alt türler) Anti-HBs II Conj: İnsan kanından inaktive edilmiş HBsAg (ad ve ay alt türler), TRIS/HCl tamponu içinde sodyum klorürle konjuge edilmiş peroksidaz (POD), kullanıma hazır Koruyucu: fenol ( 1 g/l) Anti-HBs II REF P: Anti-HBs pozitif insan serumu, nominal absorbans: 0,7 Koruyucular: amphotericin (~ 5 mg/l) gentamicin (~ 100 mg/l) Anti-HBs II Neg: Anti-HBs negatif insan serumu, nominal absorbans: 0,120 Koruyucular: amphotericin (~ 5 mg/l) gentamicin (~ 100 mg/l) Yıkama Solüsyonu POD (konsantre): Tween içeren fosfat tamponu Koruyucu: fenol ( 1 g/l) Tampon/Substrat TMB: Asetat tampon içinde hidrojen peroksit Koruyucu: n-butanol (%< 1) Kromojen TMB: Tetrametilbenzidin dihidroklorür Durdurma Solüsyonu POD: Sülfirik asit (0,25 mol/l) 2/11 2015-04 OQNEG15C48 Rev. 07 TR
Uyarılar ve Önlemler Yalnız in-vitro tanı amaçlı kullanım içindir. Test, toplu örnekler için değil ayrı ayrı örneklerin test edilmesi için geliştirilmiştir. Uyarı! STOP POD H290, H314: Metaller için korozif olabilir. Ciddi cilt yanıkları ve göz hasarına neden olur. P280, P310, P301, P330, P331, P303, P361, P353, P305, P351, P338, P390, P501: Koruyucu eldiven/koruyucu giysi/gözlük/maske kullanın. Hemen bir ZEHİR DANIŞMA MERKEZİ'ni veya doktoru arayın. YUTULMASI HALİNDE: Ağızınızı çalkalayınız. Kusmaya ZORLAMAYIN. CİLT ÜZERİNDEYSE (ya da saç): Kontamine olmuş tüm giysiler acil olarak çıkarılmalıdır. Cildinizi suyla durulayınız. GÖZLE TEMAS ETMESİ HALİNDE: Suyla bir kaç kere dikkatlice çalkalayınız. Kontakt lens kullanıyorsanız, mümkünse çıkarınız ve gözlerinizi yıkamaya devam ediniz. Malzeme hasarını önlemek için dökülen sıvıyı emdirin. İçeriği ve kabı tüm yerel, bölgesel ve ulusal düzenlemelere uygun şekilde bertaraf edin. DİKKAT! POTANSİYEL BİYOLOJİK TEHLİKE In Vitro Tanı Amaçlı Tıbbi Cihazlara İlişkin AB Direktifi ile uyumlu veya ABD Gıda ve İlaç Dairesi (FDA) tarafından onaylanmış testler kullanılarak, insan immün yetmezlik virüsü (HIV) 1 ve 2, hepatit B virüsü (HBV) ve hepatit C virüsü (HCV) bakımından, her bir donör ya da donör birimi test edilmiş ve negatif olduğu bulunmuştur. Bilinen hiçbir test bulaşıcı etkenlerin var olmadığı konusunda tam güvence sunamayacağı için, insanlardan elde edilen tüm örneklerin gerekli dikkat ve özen gösterilerek kullanılması gerekmektedir. Güvenlik bilgi formları (MSDS/SDS) www.siemens.com/diagnostics adresinden edinilebilir. Test plaklarının ve POD konjugatın üretiminde kullanılan HBsAg, Anti-HCV, Anti-HIV1 ve Anti-HIV2 negatif olduğu saptanmış olan HBsAg-pozitif insan plazmalarından yüksek bir saflıkla izole edilmiş ve onaylanmış bir inaktivasyon işlemine tabi tutulmuştur. Test prosedürünün tamamı boyunca koruyucu gözlük takılması tavsiye edilir. Kullanılan eldivenlerin maruz kalınan materyallere karşı koruma sağlama yeterliliği bilgisi için lütfen üretici talimatlarına uyun. Atıklar açısından, katı infeksiyöz materyalin en az 1 saat süreyle 121 C de otoklavlanması önerilir. Tüm emilen solüsyonlar, birbirlerine seri olarak bağlantılı iki kapta toplanmalıdır Her iki kap içinde insan patojenlerini etkisizleştirebilecek dezenfektan bulunmalıdır. Üretici tarafından belirtilmiş olan konsantrasyonlara ve reaksiyon sürelerine uyulmalıdır. Tampon/Substrat TMB, Kromojen Çalışma Solüsyonu ve Durdurma Solüsyonu POD un ağır metal iyonları ya da oksidasyon maddeler ile temasından kaçınılmalıdır (sıvı ile doğrudan temasa geçen metal parçaları bulunan pipetler kullanmayın). Substrat reaksiyon aşamaları, hipoklorit içeren dezenfektanların yakınında gerçekleştirilmemelidir. Kromojen Çalışma Kromojen Solüsyonu test plağına aktarılmadan önce bir anda mavi renge dönerse solüsyon kontamine olmuş demektir; bu durumda temiz bir kap içerisinde yeni solüsyon hazırlanmalıdır. Yukarıda sözü edilen solüsyonların ciltle temas etmesinden kaçınılmalıdır. Reaktiflerin Hazırlanması Teste başlamadan önce tüm reaktiflerin ve test örneklerinin 15 ile 25 C ye gelmesini sağlayın. Bu adımda test plaklarından folyo torbayı çıkartmayın. Testi işlemeye başlamadan önce gerekmeyen stripleri yuvadan çıkartın ve bunları daha sonra kullanmak üzere ambalajdaki polietilen torbaya koyun (Bkz. Tablo 1). Reaktifler ile reaktif çalışma solüsyonlarının karıştırılması gerekiyorsa, köpük oluşmasını engelleyin. OQNEG15C48 Rev. 07 TR 2015-04 3/11
Her test plağı için 20 ml Yıkama Solüsyonu POD u distile ya da deiyonize suyla 400 ml ye seyreltin. Her test plağı için, 1 ml Kromojen TMB 'yi 10 ml Tampon/Sübstrat TMB (Kromojen Çalışma Solüsyonu) ile, temin edilen boş plastik şişe içinde seyreltin. Işıktan koruyarak saklayın. Kullanılmasının ardından şişeyi distile yada deiyonize su ile iyice durulayın. Teknik nedenlerden dolayı (taşma), Kromojen TMB flakonunun tüm içeriğinin, Tampon/Sustrat TMB flakonunun tüm içeriği ile birlikte dökülmesine izin verilmez. Örnek Hazırlığı Enzygnost Anti-HBs II, 10 IU/L ve 100 IU/L değerleri arasında minimum ölçüm aralığını kapsamaktadır. Anti-HBs konsantrasyonlarının 100 IU/L olması beklenen örnekler aşağıda gösterildiği gibi, test kitinde verilen Anti-HBs II Neg kullanılarak seyreltilebilir: 1,000 IU/L dilüsyona kadar dilüsyon 1+9 (Ör. 20 µl örnek + 180 µl Anti HBs II Neg). 10,000 IU/L dilüsyona kadar dilüsyon 1+99 (Ör. 20 µl örnek (1+9) + 180 µl Anti HBs II Neg). 100,000 IU/L dilüsyona kadar dilüsyon 1+999 (Ör. 20 µl örnek (1+99) + 180 µl Anti HBs II Neg). Saklama ve Stabilite Enzygnost Anti-HBs II kitinin tüm bileşenleri, açılmamış halde saklandığı takdirde, etiketlerde verilmiş olan son kullanma tarihlerine kadar kullanılabilir. Açılmış ve ardından seyreltilmiş reaktiflerle ilgili stabilite ve saklama verileri için, Ek te yer alan Tablo 1 e bakın. Gerekli Olan Donanım Örnekler BEP III: Örneklerin dağıtılmasından sonra testin otomatik olarak gerçekleştirilmesi ve yanı sıra değerlendirilmesi için BEP 2000/BEP 2000 Advance : Testin tam otomatik olarak gerçekleştirilmesi ve değerlendirilmesi için Pipetler: Sabit veya değişken hacimli piston tipi pipetler veya hacmi ayarlanabilir hacimli tek veya çok kanallı pipetler Testin otomatik olarak işlenmemesi durumunda ek olarak aşağıdakiler de gereklidir: İnkübatör: Kaplanan termostatik su banyosu (37 ±1 C) veya benzer inkübasyon yöntemi Yıkama cihazı: Mikrotitrasyon plak yıkayıcı Fotometre: Mikrotitrasyon plakları için uygun fotometre, ölçüm dalga boyu 450 nm, referans dalga boyu 650 nm (uygun olduğunda 615 nm ile 690 nm arası) Kantitatif test değerlendirmesi için: üstel ve logaritma fonksiyonlu hesap makinesi Testte kullanılan tüm ekipman onaylanmış olmalıdır. Uygun olan örnekler standart laboratuvar teknikleriyle elde edilmiş olan ayrı ayrı örneklerdir (insan serumları ya da EDTA lı/heparinize edilmiş/sitratlı plazma). Heparinize ve sitratlı plazma örnekleri en fazla 3 gün süreyle ve 2 ile 8 C arasında saklanmalıdır; serum ve EDTA plazmaları ise bu saklama koşullarında 8 güne kadar kullanılabilir. Örnekler daha uzun süre saklanacaklarsa dondurulmalıdır. 4/11 2015-04 OQNEG15C48 Rev. 07 TR
Prosedür Otomatik Çalışılmayan Test Prosedürü BEP III System 1. Test planı: Gereken test plağı hazne sayısı örnek sayısı alınarak ve buna Anti-HBs II Neg ve Anti-HBs II REF için determinasyon sayısı (n = 6) eklenerek belirlenir. 2. Konjugatın dağıtılması: Her hazneye 25 µl Anti-HBs II Conj ekleyin. Kontrolleri ve örnekleri konjugat dağıtma adımı tamamlandıktan hemen sonra pipetleyin. 3. Örneklerin dağıtılması: Dört haznenin her birine (A1-D1) 100 µl Anti-HBs II Neg, bir hazneye (E1) 100 µl Anti-HBs II REF P ve geri kalan haznelerin her birine 100 µl örnek dağıtın. Serinin sonunda test plağı sırasıyla bir adet hazneyi daha 100 µl Anti-HBs REF P ile doldurur. Önemli: Anti-HBs II REF P'nin, ilk olarak örnek serilerinin başında ve sonunda verilen her iki pozisyona pipetlenmesine ve sonra örneklerin araya koyulmasına izin verilmez. Her örnek kendi pipet ucunu kullanmalıdır. Pipetleme adımları test plağı başına 30 dakika içinde gerçekleştirilmelidir. Pipetleme işleminin tamamlanmasından sonra test plağını folyo ile kapatın ve derhal inkübatöre koyun. 4. İnkübasyon: İnkübasyonu 37 ±1 C ısıda 60 ±2 dakika süreyle yapın, ardından derhal yıkama adımına geçin. 5. Yıkama: Folyoyu çıkartın ve tüm hazneleri emdirin. Her hazneye yaklaşık 300 µl seyreltilmiş Yıkama Solüsyonu POD doldurun, plağı emdirin ve yıkamayı üç kez tekrarlayın. Yıkama işlemi tamamlandıktan sonra, bir sonraki reaktifin dağıtılması adımına geçin (aksi takdirde kuyucuklar kuruyabilir). 6. Sübstratın dağıtılması: Her hazneye 100 µl Kromojen Çalışma Solüsyonu pipetleyin ve mikrotitrasyon plağını yeni folyo ile kapatın. 7. Sübstratın inkübasyonu: Substrat ekleme adımından hemen sonra 15 ile 25 C arasında ışıktan koruyarak 30 ±2 dakika süreyle inkübe edin. 8. Reaksiyonun durdurulması: Folyoyu çıkartın. Substratın dağıtılması adımındaki ile aynı zamanlamayla haznelerin her birine 100 µl Durdurma Solüsyonu POD ilave edin. 9. Ölçüm: Test plağını bir saat içerisinde 450 nm de okuyun. Önerilen referans dalga boyu 650 nm, veya gerekli durumlarda 615 ve 690 nm arasıdır. BEP III Sistemi kullanılırken test plakları örnek dağıtma adımına kadar hazırlanmalıdır ( Otomatik Olmayan Test Prosedürü bölümünde adım 1 ile 3 arası). Kısmen dolu test plaklarının su şeritleri ile takviye edilmesiyle en az yarı seviyelerine kadar dolu (6 test şeridi) hale getirilmelidir. Hemen ardından açık test plaklarını, yani folyo ile kapatılmamış olanları BEP III içine yerleştirin. Takip eden tüm işlem adımları analiz cihazı tarafından otomatik olarak gerçekleştirilir (bakınız BEP III Kullanım kılavuzu). BEP III yazılımındaki inkübasyon süresi ayarları, Otomatik Olmayan Test Prosedürleri nde tarif edilen sürelerden teknik nedenlerden farklı olabilir (sistem hızı), ancak bunlar BEP III üzerinde Enzygnost için doğrulanmıştır. BEP 2000 Sistemi için Prosedür Örnek dağıtma adımları ve bunu takip eden işlemler analiz cihazı tarafından tamamen otomatik olarak yapılır (bakınız, BEP 2000 Kullanım Kılavuzu). Bunu yaparken, kısmen dolu test plaklarının su şeritleri ile takviye edilmesiyle en az yarı seviyelerine kadar dolu (6 test şeridi) hale getirilmesi gerektiğini unutmayınız. Örneklerin BEP 2000 System ile çalışılması "Otomatik Olmayan Test Prosedürleri altında verilen bilgiden farklı olsa da BEP 2000 Sistemi üzerinde Enzygnost için doğrulanmıştır. İç Kalite Kontrolü Doğrulama Kriterleri Testin değerlendirilmesi için aşağıdaki kriterler karşılanmış olmalıdır: OQNEG15C48 Rev. 07 TR 2015-04 5/11
1. Anti-HBs II Neg: -0,010 A 0,120 2. Anti-HBs II REF P: A 0,7 Anti-HBs II Neg'e ilişkin şart dışındaki Tek bir değer yok sayılabilir. Anti-HBs II REF P ye ait her iki absorbans değeri de şartı karşılamalıdır. Bu şartlar karşılanmadığı taktirde test değerlendirme için geçerli değildir. Bu durumda BEP III ve BEP 2000 yazılımı "Geçersiz Test" uyarısı verir. Geçersiz işleme yol açan nedenler araştırıldıktan sonra test tekrar edilmelidir. Kantitatif test için aşağıdaki validasyon kriterleri geçerlidir: Anti-HBs II REF P: Her bir abzorbans değeri bunlara karşılık gelen barkod değerler tablosunda verilen üst ve alt limitlerin arasında bulunmalıdır: alt sınır < A Anti-HBs II REF P < üst sınır Ayrıca, her bir değer (ölçüm serisinin veya test plağının başındaki ve sonundaki Anti-HBs II REF P), bu değerler kullanılarak hesaplanan ortalama değerden ± %20 den fazla sapamaz. Bu şartlar karşılanmadığı takdirde test yalnızca kalitatif değerlendirmeden geçirilebilir. Sonuçlar BEP 2000 Sistemi ve BEP III Sistemi kullanıldığı takdirde değerlendirmeler otomatik olarak gerçekleştirilir. Bu konudaki ilave ayrıntılar için lütfen Kullanım Kılavuzuna Başvurun. Yazılım desteği olmadan değerlendirme işlemi yapılmaktaysa, aşağıda belirtilen noktalar dikkate alınmalıdır. Kalitatif değerlendirme Kesme değerini hesaplamak için Anti-HBs II Neg geçerli abzorbans değerlerinin ortalamasını kullanın ve 0,08 değerini ekleyin: Ā Anti-HBs II Neg + 0,08 = kesme değeri Test kriterlerine dayanarak örnekler aşağıda belirtildiği gibi sınıflandırılmıştır: 1. Anti-HBs negatif A Örnek < kesme değeri 2. Anti-HBs pozitif A Örnek kesme değeri α-method Yardımıyla Kantitatif Değerlendirme Ölçümün Düzeltilmesi Sonucun optimal olarak yeniden üretilebilirliğini sağlamak için, ölçümler düzeltme gerektirir. Önce, Anti-HBs II REF P için ortalama absorbans değerini hesaplayın. Ardından barkod değerler tablosunda verilen nominal değeri, ortalama Anti-HBs II REF P absorbans değerine bölün: Nominal değer Düzeltme faktörü = Ortalama A değeri Anti-HBs II REF P Bundan sonra, test örneklerinde tespit edilen absorbans değerlerinin bu düzeltme faktörü ile çarpılması gerekir. Aynı anda birkaç test plağı işleniyorsa, her bir test plağı için düzeltme faktörü hesaplanmalı ve bu kullanılmalıdır. Sonuçların Hesaplanması Cut off değerinden daha yüksek antikor aktivitesi sergileyen örnekler α-method ile kantitatif olarak analiz edilebilir. Aşağıdakileri hesaplamada kullanmayın: Düzeltilmiş Okumalar (A) < Cut off değeri Düzeltilmemiş okumalar (A) 2,5 Hesaplama aşağıdaki formüle göre yapılır: log 10 miu/l = α x A β α ve β sabitleri için lota özel değerler, ekteki barkod değerler tablosundan alınabilir. IU/L'ye çevirmek için sonuç 1000'e bölünmelidir. 6/11 2015-04 OQNEG15C48 Rev. 07 TR
Absorbans değeri (düzeltilmemiş) 2,5 olan örnekler, geçerli bir değerlendirme için, örneğin 1+9 dilüsyonunda test edilmelidir. Ardından sonuç, (okunan değer değil) 10 ile çarpılmalıdır. Uluslararası Birimlerdeki antikor aktivite değerleri WHO İnsan Anti-Hepatit B İmmünoglobulin ile izlenebilir (2. Uluslararası Standart 2008, NIBSC kodu 07/164 7 ). Prosedürün Sınırlamaları 1. Heparin, EDTA ve sitrat gibi antikoagülanlar, test sonuçlarını etkilemez. 2. Lipemik, hemolitik, ikterik ya da romatoid faktörler içeren örnekler test sonuçlarında bozulmaya neden olmaz. 3. Hamile kadınlardan alınan örnekler söz konusu olduğunda, test sonuçları ile herhangi bir olumsuz etkileşim gözlemlenmemiştir. 4. Sonucu olumsuz şekilde etkileme potansiyeline sahip şu maddeleri içeren örnekler testle kontrol edilmiştir: ANA ve yanı sıra HCV, HAV, EBV ve CMV antikorları. Kullanılmış olan örneklerle test sonucu arasında hiçbir olumsuz etkileşim gözlemlenmemiştir. 5. Isıl işlem yapılmış örneklerde (30 dakika, 56 C) hiçbir enterferans gözlenmemiştir. 6. Sodyum azid veya mikrobiyal kontaminasyon içeren, tam olarak koagüle edilmemiş serumlar ve örnek materyali kullanılmamalıdır. Örneklerdeki tüm partiküller (örneğin fibrin pıhtıları) test öncesinde çıkarılmalıdır. 7. Eritilmiş örnekler kullanılırken materyalin iyice homojen hale geldiğinden emin olun. 8. Referanslar doğal insan serumlarından hazırlanmıştır. Bu nedenle bulanıklık meydana gelebilir, ancak bunun test sonucu üzerinde hiçbir etkisi yoktur. 9. Reaksiyonun durdurulması sırasında, yüksek düzeyde reaktif örneklerde boya çökelebilir. Bu durum fotometrik değerlendirmeyi etkilemez. 10. Test plağı inkübasyon sırasında sabit kalmalıdır (örn. sabitlenmiş bir yüzdürme yardımcısı üzerine ya da sirkülasyon halinde olmayan bir su banyosuna yerleştirilmelidir); plağın kuyucukları sıcaklığı kontrol edilen suya temas etmelidir. Suyun mikrobiyal kontaminasyonunu önlemek için stabilizörler kullanıldığı takdirde, bu gibi bir kontaminasyon spesifik olmayan reaksiyonlara neden olabileceğinden, test plağının yüzeyinin ya da yuvaların sıvıyla temas etmemesi için dikkat edilmelidir. 11. Ürün performansını optimize etmek ve ürün özelliklerini karşılamak amacıyla Siemens Healthcare Diagnostics çeşitli analizörlerde bu reaktiflerin kullanımını onaylamıştır. Kullanıcı tarafından belirlenen değişiklikler system performansını ve test sonuçlarını etkileyebileceği için Siemens tarafından desteklenmemektedir. Reaktiflerin Siemens Uygulama Kitapçıklarında veya prospektüslerde belirtilenler dışındaki analizörlerde kullanımı veya kullanım talimatlarında yapılan değişikliklerin geçerliliği kullanıcı tarafından onaylanmalıdır. 12. Bu testin sonuçları her zaman için hastanın tıbbi geçmişiyle, klinik bilgilerle ve diğer bulgularla birlikte değerlendirilmelidir. Spesifik Performans Özellikleri Duyarlılık ve Spesifiklik Diyagnostik duyarlılık 755 anti-hbs pozitif örneğin incelenmesiyle tespit edilmiştir ve duyarlılığın %99,1 olduğu bulunmuştur (bakınız Tablo 2). Bu test sonuçları Enzygnost Anti HBs II'nin duyarlılığının benzer testlerle eşit olduğunu göstermiştir. Analitik hassasiyet eşik değerinde 7 < 8 IU/L olarak WHO referans preparatının bir dizi dilüsyonu kullanılarak belirlenmiştir. Testin kesinliğinin tespit edilmesi amacıyla toplam 824 anti-hbs negatif kan bağışı örneği üzerinde inceleme gerçekleştirilmiştir ve elde edilen sonuç %99,8 olarak bulunmuştur. Örnek popülasyonu, test prosedürü ve diğer faktörlere göre farklı değerler elde edilebilir, ancak bunlar Ortak Teknik Spesifikasyonlara (CTS) uygun olmalıdır. OQNEG15C48 Rev. 07 TR 2015-04 7/11
Hassasiyet Not Sonuçlar 3. Tabloda özetlenmektedir. Testin performans özellikleri için belirtilen değerler tipik sonuçları gösterir ve Enzygnost Anti- HBs II özellikleri olarak düşünülmemelidir. Bibliyografya 1. Tiollais P, Pourcel C, Dejean A. The hepatitis B virus. Nature 1985;317:489-95. 2. Lau JY, Wright TL. Molecular virology and pathogenesis of hepatitis B. Lancet 1993;342:1335-40. 3. Frösner G. Viral hepatitis. In: Thomas L, ed. Clinical Laboratory Diagnostics, Frankfurt: TH Books Verlagsgesellschaft, 1998:1260-87. 4. Robson SC, Schoub B, Abdool Karim SS. Viral hepatitis B - an overview. SAMJ 1994;84:530-4. 5. Deinhardt F, Zuckerman AJ. Immunization against hepatitis B: Report on a WHO Meeting on Viral Hepatitis in Europe. J Med Virol 1985;17:209-17. 6. Jilg W, Schmidt M, Deinhardt F. Immune responses to late booster doses of Hepatitis B vaccine. J Med Virol 1985;17:249-54. 7. Ferguson M, Heath A. Report of the WHO collaborative study to calibrate a candidate replacement for the First International Standard for hepatitis B immunoglobulin. Geneva: World Health Organization. 2008;WHO/BS/08.2084:1-22. Simgelerin Tanımı Tekrar kullanmayınız YYYY-MM-DD Son kullanma tarihi LOT Lot Numarası REF Katalog Numarası Dikkat, ekteki dokümanlara başvurunuz Üretici EC REP Avrupa Birliği Yetkili Temsilcisi <n> sayıda test için yeterlidir Biyolojik Tehlikeler IVD In Vitro Diyagnostik Tıbbi Cihaz Saklama derecesi Kullanım talimatlarına başvurunuz Steril değil CE İşareti CONTENTS İçindekiler Sulandırma hacmi LEVEL Seviye Isı ve güneş ışığından uzak tutun 8/11 2015-04 OQNEG15C48 Rev. 07 TR
BEP, BEP 2000 Advance ve Enzygnost, Siemens Healthcare Diagnostics firmasının ticari markalarıdır. 2009 Siemens Healthcare Diagnostics Products GmbH. Tüm hakları saklıdır. 2015-04 Siemens Healthcare Diagnostics Products GmbH Emil-von-Behring-Str. 76 35041 Marburg/Germany www.siemens.com/diagnostics OQNEG15C48 Rev. 07 TR 2015-04 9/11
Tablo 1 Saklama ve Stabilite Materyal/Reaktif Durum Saklama Stabilite Anti-HBs II MTP test plağı, kalan stripler açıldıktan sonra 2 8 C arası, kurutucu madde işeren torbada 4 hafta Anti-HBs II Conj açıldıktan sonra 2 8 C 4 hafta Anti-HBs II REF P Anti-HBs II Neg açıldıktan sonra 2 8 C 20 C 4 hafta 3 ay Kromojen TMB açıldıktan sonra 2 8 C son kullanma tarihi Tampon/Sübstrat TMB açıldıktan sonra 2 8 C son kullanma tarihi Kromojen Çalışma Solüsyonu 1+10 seyreltilmiş 2 8 C 15 25 C kapalı kap içinde, ışıktan korunarak 5 gün 8 saat Yıkama Solüsyonu POD açıldıktan sonra 1+19 seyreltilmiş 2 8 C 2 8 C 18 25 C son kullanma tarihi 1 hafta 1 gün Durdurma Solüsyonu POD açıldıktan sonra 2 8 C son kullanma tarihi her komponenti en geç son kullanma tarihine kadar kullanın Tablo 2 Duyarlılık Anti-HBs positif durumdaki farklı örnek popülasyonları kullanılarak yapılan duyarlılık çalışmaların aşağıdaki verilere ulaşmıştır: Örnek popülasyonu Örnek sayısı Enzygnost Anti-HBs II reaktif Anti-HBs positif 216 215 HBV-vaccinated 539 533 Tablo 3 Hassasiyet Bu çalışmalarda örnekler 5 günde 8 kat eşleşmede test edilmiştir. Test içi ve arası varyasyon katsayılarının (CV) hesaplaması, varyans analiziyle gerçekleştirilmiştir. Örnek Ortalama Absorbans değeri (A) Test içi (%) Testler arası (%) P1 1,25 4,0 3,9 P2 1,65 3,2 3,2 P3 0,59 7,7 8,3 P4 0,28 3,7 12,7 10/11 2015-04 OQNEG15C48 Rev. 07 TR
Tablo 4 Test Prosedürü Reaktiflerin hazırlanması 25 μl Anti-HBs II Conj dağıtın 4 x 100 μl Anti-HBs II Neg 1 x 100 μl Anti-HBs II REF P 100 μl her örnekten 1 x 100 μl Anti-HBs II REF P İnkübasyon: 60 ±2 dakika (37 ±1 C) Yıkama 4 x: Plakların tamamı dolmamışsa, plağın yarısı dolu olacak şekilde su ile doldurulmuş stripler ekleyin 100 μl Kromojen Çalışma Solüsyonu İnkübasyon (ışıktan korunarak): 30 ±2 dakika (15-25 C) 100 μl Durdurma Solüsyonu (maksimum 60 dak. sonra) Ölçüm: 450 nm ye karşı 650 nm BEP III Otomatik test işlemi BEP 2000 Tam otomatik test işlemi Test sonucu OQNEG15C48 Rev. 07 TR 2015-04 11/11