RIDA QUICK Cryptosporidium/Giardia/Entamoeba Combi

RIDA QUICK Cryptosporidium/Giardia/Entamoeba Combi Article no: N 1722 R-Biopharm AG, Landwehrstr. 54, D-64293 Darmstadt, Germany Tel: +49 (0) 61 51 81 02-0 / Fax: +49 (0) 61 51 81 02-20

1. Kullanım amacı Laboratuvar içi kullanım içindir. RIDA QUICK Cryptosporidium/Giardia/Entamoeba Combi testi gaita örneklerinde Cryptosporidium parvum ve/ veya Giardia lamblia ve / veya Entamoeba histolytica (sensu lato) nun kalitatif belirlenmesi için immünokromatografik hızlı bir testtir. 2. Özet ve testin açıklaması Giardia lamblia flagellata sınıfından bir barsak parazitidir. Morfolojik karakteristiği Tropozoitler konakçı organizma dışında kısa bir süre için hayatta kalabilir. Bulaşması yüksek derecede bulaşıcı kistler yoluyla meydana gelmektedir. Çünkü dünya çapında yayılmıştır, Giardia lamblia kronik diyarelerin önemli bir nedeni haline gelmiştir, özellikle emporiatrik problemler durumunda. Kontamine gıda ve sudaki kistlerin alınımından sonra enfeksiyon ortaya çıkmaktadır. Halka açık yerlerde yetersiz hijyen sonucu genellikle fekal-oral yolla kişiden kişiye enfeksiyon geçişi olmaktadır. Bulaşmanın bu şekli özellikle çocuklar arasında ve anaokulunda yaygındır, ve de erkek homoseksüeller ve hapishanedeki kişiler arasında. Aynı zamanda enfeksiyon çocuktan ailesine geçebilir. Bebeklerden farklı olarak, büyük çocuklar semptomsuz enfekte olabilir. Bununla birlikte, kistlerini çıkarıp diğer insanları enfekte edebilirler. Giardiasis (Lambliasis) in semptomları akut veya kronik diyaredir. İnkübasyon süresi 3 ila 42 gün arasındadır. Giardiasis tanısında geçmişte en sık kullanılan metod sadece deneyimli personel tarafından gerçekleştirilebilen mikroskopi ile gaitadaki kistlerin saptanmasıydı. Aynı zamanda araştırmalar uzun bir zaman periyodundan sonra gerçekleştirilmekteydi çünkü kistlerin boşaltımı çok değişiklik gösteriyordu. Cryptosporidium parvum hayvanlarda çok yaygın olan ve önemli patojenik organizma olarak yerel hayvanlarda ve özellikle danalarda ortaya çıkan bir parazittir. Ancak insanlardaki enfeksiyonlar önceden sanıldığından daha sık olarak birçok ülkede gözlenmektedir. Gelişmekte olan tropikal ülkelerde, parazit sık sık endemik ve çocuklar arasında diyare salgınlarına neden olmaktadır. İmmünolojik yeterliliği olan hastalarda, hastalık kendi kendini iyileştiren gastroenterit olarak ortaya çıkmaktadır. Diyare 3 ila 10 gün arasında sürmektedir ve ateş, bulantı ve ağrı gibi giardiasis (lambliasis)'in benzeri gastrointestinal semptomlar eşlik edebilir. Semptomlar ve etkiler, sürekli ve çok ağır diyarenin olduğu immünolojik yetersizliği olan hastalarda büyük ölçüde daha ciddidir. Enfeksiyon kontamine su yoluyla hayvandan insana ve insandan insana bulaşabilir. Özellikle halka açık yerlerdeki kişiler, anaokulundaki çocuklar ve yüksek risk grupları, homoseksüel erkekler ve HIV ile enfekte hastalar risk altındadır. Geçmişte cryptosporidiosis'in teşhisi için çok sık kullanılan metodlar gaitadaki Oocyst lerin mikroskobik belirlenmesi veya ince bağırsak biyopsi örneklerinin mikroskobik incelemesi sadece deneyimli personel tarafından gerçekleştirilebilmekteydi. RIDA QUICK Cryptosporidium/Giardia/Entamoeba Combi 08-05-09 2

Dünyada toplam her yıl 500 milyon kadar insan Entamoeba histolytica (sensu lato) ile enfekte olmaktadır. Moleküler genetik araştırmaları protozoa yı göstermiştir, Entamoeba histolytica adı verilmiş olan ve klasik tanı metodlarının kullanımıyla belirlenen, morfolojik olarak seçilemeyen iki türden oluşmaktadır: patojenik türler, Entamoeba histolytica sensu stricto ve patolojik olmayan türler (şu anki bilgiye göre), Entamoeba dispar. Yaklaşık olarak her yıl E. histolytica nın neden olduğu 40-50 milyon amibik kolit veya hepatik abse vakası 80,000 ölümle sonuçlanmaktadır. Entamoeba nın yaşam süreci nispeten bellidir. Dört çekirdekli kistlerin oral yolla alınımı enfeksiyona neden olmaktadır. Bunlar ince barsakta parazitin tek çekirdekli formunu oluşturmaktadır, kalınbarsakta ağırlıklı olarak çoğalan ve farklılaşan tropozoit (forma minuta) oluşturmaktadır. Muhtemelen kalınbarsağın alt bölgesindeki ortam ile kapsüllenme tetiklenmektedir. Ayrıca barsaklardan hızlandırılmış geçiş ile kistler, tropozoitler gaitada bulunur. Amoebiasis in semptomları, parazitin barsak lümeninden kolonun mukoz membranına akını ile tetiklenmektedir. Aynı zamanda ekseriyetle tropozoitler ile birlikte fagozitoza uğramış eritrositler de bulunmaktadır. Bu tropozoitler boyutlarından dolayı forma magna olarak bilinmektedir. Barsağın mukoz membranına akının semptomları diyare, dizanteri veya amebomlar. Dispersiyon yayılımından sonra ortaya çıkabilecek komplikasyonlar hepatik apseler, pulmoner apseler veya çok nadir vakalarda eğer tedavi edilmezse genellikle ölümle sonuçlanan beyne ait apseler. Amoebiasis in akut barsak formunun klinik semptomları mide bulantısıyla beraber kramp benzeri karın ağrıları ve kanlı, sulu yapışkan gaitalı ağır diyare. Akut durum ara sıra meydana gelen diyare, kabızlık, karın ağrısı, mide bulantısı ve kusmayla kronik duruma dönüşebilir. Aynı zamanda tamamen semptomsuz kist eliminasyonu da tanımlanmıştır. Akut amibik dizanteri vakalarının yaklaşık olarak %10 u hepatik apse veya diğer organlara yayılması gibi ekstra-intestinal komplikasyonlar ile sonuçlanır. Ekstra-intestinal amoebiasis ile beraber serolojik olarak antikorların belirlenmesi gösterilmiştir. Intestinal amoebiasis gaitada kistlerin ve tropozoitlerin belirlenmesi için karmaşık mikroskobik prosedürlerin kullanımıyla teşhis edilebilir. Ancak parazit yoğunluğu çok küçük olabileceği için, tek gaita araştırması için bu metodun duyarlılığı deneyimli personel ile bile %75 farzedilebilir. Metod aynı zamanda Entamoeba nın barsak epitel hücreleriyle, granülositler, makrofajlar ve fungi ile karıştırılması riskini taşımaktadır. Entamoeba nın antijenlerine karşı spesifik antikorları olan bu hızlı test gibi hassas immünolojik test prosedürleri büyük avantajlara sahiptir. Teşhis metodu subjektif değerlendirmeye bağımlı değildir ve artık morfolojileriyle tanımlanabilen aynı zamanda belirlemede kullanılan bileşenler için çok duyarlıdır. RIDA QUICK Cryptosporidium/Giardia/Entamoeba Combi 08-05-09 3

Entamoeba nın sadece yayılma gösteren formu antikor oluşumuna neden olmaktadır. Çünkü antikor titreleri genellikle klinik semptomların başlangıcında saptanabilir, spesifik antikor belirlemesi E. Histolytica nın teşhisi için kullanılabilir. Aynı zamanda tedavi seçiminde karar vermek için çok önemli olan intestinal ve ekstra-intestinal amoebiasis titrelerinin büyüklüğü arasındaki farklılıkların olasılığını verir. Aşağıda tanımlanan hızlı immünokromatografik test, Giardia lamblia ve Cryptosporidium parvum un belirlenmesi için önemli mikroskopi metoduna alternatiftir, çünkü monoklonal antikorları kullanır, duyarlılık ve spesifiklik açısından mikroskopi araştırma prosedürlerine eşdeğerdir. Test hızlı ve uygulaması basittir, testin gerçekleştirilmesi için özel olarak eğitilmiş mikrobiyologlara gereksinim yoktur. 3. Testin prensibi Hızlı test tek adımlı immünokromatografik yana doğru akış testidir, herbir parazite karşı yönelen spesifik antikorların kendileri yeşil (Entamoeba spesifik), kırmızı (Giardia spesifik) veya mavi (Cryptosporidia spesifik) lateks partiküllere bağlanır. Üç patojene karşı spesifik diğer antikorlar membrana sıkıca bağlanır. Gaita örneği önce ekstraksiyon tamponunda asılıdır ve sonra çökelir. Test stribi örneğin berrak üst fazına daldırılır. Bu esnada, örnek renkli lateks partikülleri içine alır, eğer varsa antijen kendisi bağlanır, test pozitif ise membrandan geçer ve spesifik toplama şeritine bağlanır. Yeşil ve/veya kırmızı ve/veya mavi şerit örnekte bulunan antijene bağlı olarak ortaya çıkar. 4. Temin edilen reaktifler 25 belirleme için yeterli reaktif pakettedir. Strip 25 Bel. 25 test stribi içeren tüp Diluent 26 ml Ekstraksiyon tamponu, kullanıma hazır; % 0.1 sodyum azit içerir. Pipet 25 adet Torba 25 tek kullanımlık pipet içerir. RIDA QUICK Cryptosporidium/Giardia/Entamoeba Combi 08-05-09 4

5. Saklama talimatları Paket 2-30 C de saklanabilir ve yazılan son kullanma tarihine kadar kullanılabilir. Son kullanma tarihinden sonra, kalite garantisi geçerli değildir. Test striplerinin tüpü kurutma maddesi içermektedir ve stripleri nemden korumak için açık bırakılmamalıdır. Test stribi çıkarıldığında her seferinde tekrar dikkatlice kapatılmalıdır. 6. Gerekli materyal (temin edilmemiştir) Gaita süspansiyonu için test tüpleri Süpernatant süspansiyonu için tüpler (opsiyonel: kaplanmamış mikrotitre çukurları) Vorteks (opsiyonel) Mikropipet (200 μl - 1000 μl) % 0.5 sodyum hipoklorit çözeltisi içeren atık kabı 7. Kullanıcılar için önlemler Sadece laboratuvar içi kullanım içindir. Test sadece eğitimli laboratuvar personeli tarafından gerçekleştirilmelidir. Tıbbi laboratuvarlarda çalışma yönergesi takip edilmeli ve testin uygulama talimatlarına kesinlikle bağlı kalınmalıdır. Örnek dilüsyon tamponu koruyucu olarak sodyum azit içermektedir. Bu maddelerin deri veya mukoz membran ile temasına izin verilmemelidir. Örnekler veya reaktifler ağız ile pipetlenmemelidir ve yaralı deri veya mukoz membranlar ile teması önlenmelidir. Örnekler ile çalışırken tek kullanımlık eldivenler kullanın ve test tamamlandığında ellerinizi yıkayın. Örneklerin kullanıldığı alanlarda sigara kullanmayın, birşey yiyip içmeyin. Bulaşıcı olabilecek örnekler ile temas eden tüm reaktif ve malzemeler uygun dezenfektan (örneğin sodyum hipoklorit) ile örneklerin kendileri gibi aynı yöntemle tamamen işlemden geçirilmelidir veya en az bir saat 121 C de otoklavda tutulmalıdır. 8. Örnek toplama ve saklama Gaita örnekleri herhangi bir katkı maddesi içermeyen temiz kaplarda toplanmalıdır ve teste başlamadan önce 2-8 C de saklanmalıdır. Eğer 3 günden fazla saklanırsa örnek -20 C de dondurulmalıdır. Bu durumda örnek tamamen çözünmelidir ve teste başlamadan önce oda sıcaklığında bırakılmalıdır. Örneği tekrar dondurup çözme işleminden kaçının. RIDA QUICK Cryptosporidium/Giardia/Entamoeba Combi 08-05-09 5

Eğer rektal çubuk kullanılması gerekiyorsa, testi uygulamak için yeterli gaita materyali (yaklaşık olarak 50 mg) toplandığından emin olun. 9. Testin prosedürü 9.1. Genel bilgi Örnekler, ekstraksiyon tamponu ve test stripleri kullanımdan önce oda sıcaklığında (20-25 C) bırakılmalıdır. Test striplerinin tüpü oda sıcaklığına erişene kadar açılmamalıdır ve gerekli test stripleri alındıktan sonra tekrar kapatılmalıdır. Kullanılan test stribi tekrar kullanılmamalıdır. Test direk güneş ışığında gerçekleştirilmemelidir. Reaktifleri şişelerin içine tekrar dökmeyin çünkü bu reaktif kontaminasyonuna neden olabilir. 9.2. Örneklerin hazırlanması 1 ml Extraction Buffer Diluent i etiketlenmiş test tübüne koyun. Sıvı gaita örneğiyle, 100 μl lik pipet ile (ikinci koyuluğun tam üstüne kadar) örnekten pipetleyin ve önceden tübe konulmuş olan tamponda süspanse edin. Katı gaita örneğiyle, tamponda 50 mg örnek süspanse edin. Örnek daha sonra iyi bir şekilde homojenize olmalıdır. Bu tek kullanımlık pipet kullanarak süspansiyona tekrarlayan emme ve boşaltma yapılarak veya alternatif olarak vorteks ile karıştırarak elde edilebilir. Bundan sonra homojenize süspansiyonu berrak süpernatant oluşana kadar en az 3 dakika bekletin, sonra en az 200 μl en fazla 500 μl başka bir temiz tübe (veya kapatılmamış mikrotitre çukuruna) aktarın. 9.3. Örneğin test edilmesi Tüpten test stribi alın ve hazırlanan örneğe daldırın. Test stribi ok ile gösterilen çizgiden daha fazla daldırılmamalıdır. Test sonucu 10 dakika sonra okunabilir. 10. Kalite kontrol reaktif süresinin dolduğunun belirtileri Eğer test stribi bozulmamış ve renk değişimi yoksa veya hazırlanan örnek süspansiyonuna daldırmadan önce üstündeki çizgiler görülebiliyorsa test değerlendirilmelidir. Ayrıca, test inkübasyonundan sonra en azından koyu kırmızı kontrol çizgisi görülmelidir. Eğer görülmezse, test tekrarlanmadan önce aşağıdakiler kontrol edilmelidir: - Test striplerinin ve kullanılan ekstraksiyon tamponunun son kullanma tarihi - Doğru test prosedürü - Ekstraksiyon tamponunun kontaminasyonu Eğer yeni test stribi test tekrarlandıktan sonra kontrol çizgisi hala görünmüyorsa, lütfen imalatçı veya yerel R-Biopharm dağıtıcınız ile temasa geçin. RIDA QUICK Cryptosporidium/Giardia/Entamoeba Combi 08-05-09 6

11. Değerlendirme ve yorum Örnek absorbsiyon bölgesinde izleyen sırada maksimum dört çizgi görülmelidir: Bir mavi, bir kırmızı, bir yeşil ve bir koyu kırmızı (kontrol) çizgisi. Eğer koyu kırmızı kontrol çizgisi eksikse, test geçersizdir ve değerlendirilemez! Aşağıdaki yorumlar mümkündür: - Cryptosporidia pozitif: mavi ve koyu kırmızı çizgi görünür. - Giardia pozitif: kırmızı ve koyu kırmızı çizgi görünür. - Entamoeba pozitif: yeşil ve koyu kırmızı çizgi görünür. Örnekte bulunan üç patojene bağlı olarak üç spesifik test çizgisi koyu kırmızı kontrol çizgisi ile kombinasyonlar şeklinde ortaya çıkabilir. - Negatif: sadece koyu kırmızı kontrol çizgisi ortaya çıkar. - Geçersiz: görünür çizgi yok veya üstte tanımlanandan başka bir birleşim veya çizgi renginde diğer değişiklikler. Benzer şekilde, 10 dakika sonra veya daha sonrasında ortaya çıkan çizgi rengindeki değişikliklerin herhangi bir tanı değeri yoktur ve değerlendirme için kullanılamaz. 12. Metoda dair sınırlamalar RIDA QUICK Cryptosporidium/Giardia/Entamoeba Combi gaita örneklerinde Cryptosporidium parvum ve/ veya Giardia lamblia ve / veya Entamoeba histolytica (sensu lato) yu saptar. Test spesifik görünür çizginin yoğunluğu ve klinik semptomların meydana gelmesi veya şiddeti arasında bir ilişki türetmek için kullanılamaz. Elde edilen sonuçlar her zaman klinik düşünceyle birleştirilerek yorumlanmalıdır. Pozitif sonuç başka bir bulaşıcı patojen varlığında bertaraf edilemez. Negatif sonuç muhakkak Cryptosporidiae, Lambliae veya Entamoebae enfeksiyonu yok anlamına gelmez. Patojenin aralıklarla olan boşaltımından dolayı veya örnekteki antijen miktarının çok az olmasından dolayı bu olabilir. Eğer hasta anemili veya patojenle enfekte olduğundan şüphe ediliyorsa, dört hafta sonra başka bir gaita örneği test edilmelidir. Gaita örneğinin fazlası kahverengimsi şeritlerin, belirli bir biçimde renklendirilmiş şeritlerin yerine görünmesine neden olabilir. Bu kahverengimsi şeritler herhangi bir tanı değerine sahip değildir. Böyle durumlarda, örnekte olan ve çok fazla gaita matriksiyle maskelenmiş olan patojenin aranmasını açıklığa kavuşturmak için daha az gaita miktarıyla veya hazırlanmış olan süspansiyonu (sedimentasyondan sonraki berrak süpernatant) daha fazla dilüe ederek testin tekrarlanması gerekli olacaktır.

RIDA QUICK Cryptosporidium/Giardia/Entamoeba Combi 08-05-09 7

13. Performans karakteristikleri 13.1. Klinik karşılaştırma çalışması 13.2. Çapraz reaktivite Aşağıda belirtilen barsak parazitlerinin hiçbiri RIDA QUICK Cryptosporidium/Giardia/ Entamoeba Combi de çapraz reaksiyona yol açmaz: Entamoeba coli Blastocystis hominis Chilomastix mesnili Endolimax nana Entamoeba nana Entamoeba hartmannii Hymenolepsis nana Isospora belli Isospora felis Jodamoeba buetschlii RIDA QUICK Cryptosporidium/Giardia/Entamoeba Combi 08-05-09 8

Kaynakça 1. Black, R. E. et al.: Giardiasis in day-care centers: Evidence of person-to-person transmission. Pediatrics 60 (No. 4), 486-491 (1977). 2. Craun, G. F.: Waterborne Giardiasis in the United States: A review. Am. J. Pub. Health 69 (No. 8), 817-819 (1979). 3. Nask, T. E. et al.: Experimental human infections with Giardia lamblia. J. Infect. Dis. 156 (No. 6), 974-984 (1987). 4. Smith, H. V. et al.: Giardia and Giardiasis: What's in a name? Microbiol. Eur. 3 (No. 1), 22-29 (1995). 5. Thompson, R. C. A., Reynoldson, J. A.: Giardia and Giardiasis. Adv. Parasitol. 32, 71 160 (1993) 6. Xiao, L.: Giardia infection in farm animals. Parasitology today 10 (No. 11), 436-438 (1994). 7. Schunk, M. et al.: Detection of Giardia lamblia and Entamoeba histolytica in stool samples by two enzyme immunoassays. Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. 20, 389 391 (2001) 8. Clavel, A.: Evaluation of the optimal number of fecal specimens in the diagnosis of cryptosporidiosis in AIDS and immunocompetent patients. Eur. Journal Clin. Microbiol. Infect. Dis. 14, 46-49 (1995). 9. Current, W. L., Garcia, L. S.: Cryptosporidiosis. Clinics in Laboratory Medicine 11 (No. 4), 873-895 (1991). 10. Current, W. L., Garcia, L. S.: Cryptosporidiosis. Clin. Microbiol. Rev. 4 (No. 3), 325-358 (1991). 11. Flanigan, T. P.: Human immunodeficiency virus infection and cryptosporidiosis: Protective immune responses. Am. J. Trop. Med. Hyg. 50 (5) Suppl., 29-35 (1994). 12. Guarino, A. et al.: Human intestinal cryptosporidiosis: secretory diarrhea and enterotoxic activity in Caco-2 cells. J. Infect. Dis. 171, 976-983 (1995). 13. Hayes, E. B. et al.: Large community outbreak of cryptosporidiosis due to contamination of a filtered public water supply. New. Engl. J. Med. 320 (No. 21), 1372-1376 (1989). 14. Le Chevallier, M. W. et al.: Giardia and Cryptosporidium spp. in filtered drinking water supplies. Appl. Environ. Microbiol. 57 (No. 9), 2617-2621 (1991). 15. Mc. Anulty, J. M. et al.: A community wide outbreak of cryptosporidiosis associated with swimming at a wave pool. Jama 272 (No. 20), 1597-1600 (1994). 16. Bracha, R. et al.: Differentiation of clinical isolates of Entamoeba histolytica by using specific DNA probes. Clin. Microbiol. 28 (No. 4), 680-684 (1990). 17. Citronberg, R. J., Semel, J. D.: Severe vaginal infection with Entamoeba histolytica in a woman who recently returned from Mexico: Case report and review. Clin. Infect. Dis. 20, 700-702 (1995). 18. Espinosa-Cantellano, M., Martinez-Palomo, A.: Entamoeba histolytica: Mechanism of surface receptor capping. Exp. Parasitol. 79, 424-435 (1994). RIDA QUICK Cryptosporidium/Giardia/Entamoeba Combi 08-05-09 9

19. Katzwinkel-Wladarsch, S. et al.: Direct amplification and differentiation of pathogenic and nonpathogenic Entamoeba histolytica DNA from stool specimen. Am. J. Trop. Med.-Hyg. 51 (1), 115-118 (1994). 20. Kean, B. H. et al.: Epidemic of amoebiasis and giardiasis in a biased population. Brit. J. Ven. Dis. 55, 375-378 (1979). 21. Mannweiler, E.: Immundiagnostik der Amöbiasis. Der Mikrobiologe 5. Jg., Heft 6, 194-200 (1995). 22. Ohnishi, K. et al.: Brain abscess due to infection with Entamoeba histolytica. Am. J. Trop. Med. Hyg. 51 (2), 180-182 (1994). 23. Petter, R. et al.: Characterization of two distinct gene transcripts for ribosomal protein L 21 from pathogenic and nonpathogenic strains of Entamoeba histolytica. Gene 150, 181-186 (1994). 24. Reed, Sh. L.: New Concepts regarding the pathogenesis of amebiasis. Clin. Infect. Dis. 21 (Suppl. 2), 182-185 (1995). 25. Strachan, W. D. et al.: Immunological differentiation of pathogenic and non-pathogenic isolates of Entamoeba histolytica. Lancet 12, 561-563 (1988). 26. van Lunzen, J., Tannich, E., Burchard, G.-D.: Amöbenruhr und Amöbenleberabszeß. Deutsches Ärzteblatt 93, Heft 2, 2659-2665 (1996). RIDA QUICK Cryptosporidium/Giardia/Entamoeba Combi 08-05-09 10