3. Kozmetik Kongresi, Subat 2013, Antalya. Tez Danışmanı PROF. DR. GÜLGÜN YENER

Transkript

1 ELİF GÖZDE UTKU TÜRK Tez Danışmanı PROF. DR. GÜLGÜN YENER İstanbul Üniversitesi Eczacılık Fakültesi Farmasötik Teknoloji Anabilim Dalı Kozmetoloji Bilim Dalı

2 Alfa Glukosil Hesperidinin Farklı Topikal Formülasyonlarının Hazırlanması 3. Kozmetik Kimyası Üretimi ve Standardizasyonu Kongresi

3 1. Alfa Glukosil Hesperidin ANA KONU BAŞLIKLARI 2. Alfa Glukosil Hesperidin ile formülasyon çalışmaları 3. Deri Penetrasyonu ve Penetrasyon Arttırıcılar 4. Hazırlanan Formülasyonlarla Yapılan Testler

4 1. Alfa Glukosil Hesperidin Hesperidin ALT KONU BAŞLIKLARI Alfa Glukosil Hesperidinin İle Yapılan Çalışmalar Alfa Glukosil Hesperidin Alfa Glukosil Hesperidinin Fiziksel ve Kimyasal Özellikleri Alfa Glukosil Hesperidinin Toksistesi UV Spektrumu FTIR Spektrumu Spektrofotometrik Miktar Tayin Yöntemi ve Validasyonu Çözünürlük Testi Antioksidan Aktivite Tayini

5 2. Alfa Glukosil Hesperidinİle Formülasyon Çalışmaları ALT KONU BAŞLIKLARI Jeller Emülsiyonlar Emüljel Klasik Emülsiyon Sistemleri Çoklu Emülsiyon Sitemleri 4. Hazırlanan Formülasyonlarla Yapılan Testler 3. Deri Penetrasyonu ve Penetrasyon Arttırıcılar Stabilite Testleri Mikrobiyolojik Testler Penetrasyon Çalışmaları Etkinlik Testleri Deri Penetrasyonu ve Penetrasyon Arttırıcılar Seçilen Bir Penetrasyon Arttırıcı İle Hazırlanan Formülasyonlar

6 BÖLÜM 1 ALFA GLUKOSİL HESPERİDİN

7 ALFA GLUKOSİL HESPERİDİN Ürün adı Alfa Glukosil Hesperidin Alpha Glucosyl Hesperidin Kimyasal Formülü C 34 H 44 O 20 Yapısal formülü CAS Numarası INCI Adı Glucosyl Hesperidin REACH Kayıt Numarası ELINCS Numarası

8 HESPERİDİN Hesperidin, turunçgillerin kabuklarında (kabuk altındaki beyaz kısımlarında) bulunan bir bioflavonoiddir.

9 HESPERİDİN Hesperidinin faydaları; Antioksidan aktivite Antimikrobiyal aktivite Hipolipidamik aktivite Kılcal damar kırılganlığın düzeltilmesi Kılcal damar geçirgenliğin azaltılması

10 ALFA GLUKOSİL HESPERİDİN Hesperidin in sudaki çözünürlüğünün az olması sebebiyle Alfa Glukosil Hesperidin (α-gh) Japon Hayashibara Firması tarafından geliştirilmiştir. Hesperidin in sahip olduğu tüm faydalı özelliklere sahiptir. Alfa Glukosil Hesperidin Hesperidin

11 ALFA GLUKOSİL HESPERİDİN VE HESPERİDİN İN KARŞILAŞTIRILMASI Alfa Glukosil Hesperidin in sudaki çözünürlüğü görüldüğü gibi Hesperidin den kat daha fazladır. Sudaki çözünürlük (g/100 g su) Maximum UV Absorpsiyonu Sıcaklık Stabilizasyonu Hesperidin nm Test edilmedi Alfa Glukosil Hesperidin > nm Stabil (100 derecede 90 dakika, ph 3-8)

12 ALFA GLUKOSİL HESPERİDİN İN FİZİKSEL VE KİMYASAL ÖZELLİKLERİ Görünüş Açık sarı toz Koku Kendine özgü Erime Noktası > 160 C Kaynama Noktası > 400 C Yanıcılık Yüksek yanıcılık özelliği yok Çözünürlük > g/l su (oda sıcaklığında)

13 ALFA GLUKOSİL HESPERİDİN İN TOKSİSTESİ Akut oral toksiste LD 50 > 2 g/kg vücut ağırlığı 28 gün tekrarlanan oral toksisite 90 gün tekrarlanan oral toksisite Cilt korozyonu/ irritasyonu Ratların beslenmesinden 4 hafta sonra NOEL 15,000 ppm Farelerin beslenmesinden 13 hafta sonra toksik olmayan seviye 50,000 ppm olarak rapor edilmiştir (3.1 g/kg vücut ağırlığı/gün erkek fareler için ve 3.4 g/kg vücut ağırlığı /gün dişi fareler için) %91.4 oranında monoglukosil hesperidin içeren ürünün 0.5 g miktarının tavşan cildine topikal olarak uygulanmasıyla eritem veya ödeme rastlanmamıştır. Bu yüzden irritan değil dir.

14 ALFA GLUKOSİL HESPERİDİN Alfa Glukosil Hesperidinin UV Spektrumu Alfa Glukosil Hesperidinin Spektrofotometrik Miktar Tayin Yöntemi ve Validasyonu Alfa Glukosil Hesperidinİle Yapılan Çalışmalar Alfa Glukosil Hesperidinin Çözünürlük Testi Alfa Glukosil Hesperidinin FTIR Spektrumu Alfa Glukosil Hesperidinin Antioksidan Aktivite Tayini

15 ALFA GLUKOSİL HESPERİDİN UV SPEKTRUMU

16 ALFA GLUKOSİL HESPERİDİN STANDART EĞRİNİN HAZIRLANMASI Alfa Glukosil Hesperidin Standart Eğrisi 0,700 0,600 y = 0,1265x + 0,0121 R² = 0,9994 0,640 0,500 0,526 Absorbans 0,400 0,300 0,266 0,389 Alfa Glukosil Hesperidin Ortalama Absorbans Değerleri Linear (Alfa Glukosil Hesperidin Ortalama Absorbans Değerleri) 0,200 0,100 0,138 0, Konsantrasyon (µg/ml)

17 ALFA GLUKOSİL HESPERİDİN SPEKTROFOTOMETRİK MİKTAR TAYİNİ VALİDASYONU Metot Validasyonu; 1. Doğrusallık 2. Doğrusallık ve geri elde edilebilirlik 3. Kesinlik a) Gün içi kesinlik b) Günler arası kesinlik 4. Seçicilik

18 ALFA GLUKOSİL HESPERİDİN SPEKTROFOTOMETRİK MİKTAR TAYİNİ VALİDASYONU 1. Konsantrasyon (5 µg/ml) 2. Konsantrasyon (15 µg/ml) 3. Konsantrasyon (25 µg/ml) Örnek No A Bulunan C (µg/ml) %Geri kazanım A Bulunan C (µg/ml) %Geri kazanım A Bulunan C (µg/ml) %Geri kazanım 1 0,132 4, ,98 0,388 14,96 100,27 0,644 25,16 99,36 2 0, ,385 14,84 101,08 0,642 25,07 99,72 3 0,130 4,68 106,83 0,380 14,64 102,46 0, ,140 5,08 98,43 0,392 15,12 99,21 0,646 25,24 99,05 5 0,135 4,77 104,82 0,384 14,80 101,35 0,638 24,92 100,32 6 0,136 4,92 101,62 0, ,644 25,16 99,36 Ort. 0,135 4,87 102,78 0,386 14,89 100,73 0,642 25,09 99,64 SS. 0,0037 0,156 3,27 0,0042 0,169 1,14 0,0027 0,118 0,468

19 ALFA GLUKOSİL HESPERİDİN ÇÖZÜNÜRLÜK TESTİ Yapılan hesaplamalar sonucunda α-gh maddesinin sudaki çözünürlüğü; 30 C için 36,6 g/100 g su oda sıcaklığı için 34,93 g/100 g su

20 ALFA GLUKOSİL HESPERİDİN FTIR Alfa Glukosil Hesperidin in cm -1 dalga boyları arasında FTIR spekturumu alınmıştır.

21 ALFA GLUKOSİL HESPERİDİN FTIR

22 ALFA GLUKOSİL HESPERİDİN ANTİOKSİDAN AKTİVİTE OKSİDAN Oksidanlar; karbonhidrat, lipit,protein ve DNA başta olmak üzere biyomolekülleri doğrudan veya dolaylı olarak hasara uğratma yeteneği olan reaktif oksijen türleridir. Örnek olarak: Süperoksit anyonu (O 2- ), hidrojen peroksit (H 2 O 2 ) ve hidroksil radikali (OH. ) verilebilir. TAYİNİ ANTİOKSİDAN Antioksidanlar; oksidanların hücre ve dokularda oluşturduğu bu hasarı önlemek için reaktif oksijen türlerini süpürmeye ve yok etmeye çalışırlar.

23 ALFA GLUKOSİL HESPERİDİN ANTİOKSİDAN AKTİVİTE TAYİNİ Antioksidan aktiviteyi belirlemede birçok yöntem kullanılmaktadır. In vitro antioksidan aktivite deneyleri iki kategoride değerlendirilebilir: 1. Hidrojen atomu transfer reaksiyonlarını içeren aktivite testleri [ORAC (oksijen radikali absorbans kapasitesi), linoleik asit oksidasyonu inhibisyonu, TRAP (total radikal tutuklama antioksidan parametresi)] 2. Elektron transfer reaksiyonu temelli aktivite testleri [FRAP (demir iyonu indirgeyici antioksidan parametresi), DPPH (difenil-1-pikrilhidrazil)].

24 ALFA GLUKOSİL HESPERİDİN ANTİOKSİDAN AKTİVİTE TAYİNİ Bilinen tüm aktivite tayini protokollerinin taşıması gereken özellikler: biyolojik olarak bilinen bir substratı seçmeli çeşitli oksidasyon koşullarını test etmeli hem başlangıç, hem ikincil oksidasyon ürünlerini ölçmeli antioksidanları, aynı konsantrasyondaki aktif yapıtaşı ile karşılaştırmalı yüzde inhibisyonu veya IC 50 (%50 inhibisyona neden olan antioksidan konsantrasyonu) değerini belirlemeli

25 ALFA GLUKOSİL HESPERİDİN ANTİOKSİDAN AKTİVİTE TAYİNİ Alfa Glukosil Hesperidinin antioksidan aktivitesini tayin etmek için DPPH Metodu kullanıldı.

26 ALFA GLUKOSİL HESPERİDİN ANTİOKSİDAN AKTİVİTE Hesaplama TAYİNİ

27 ALFA GLUKOSİL HESPERİDİN ANTİOKSİDAN AKTİVİTE TAYİNİ Ölçülen absorbans değerleri ile yapılan hesaplamalara göre 1 gr α-gh maddesi 5000 TE/100 gr bulundu.

28 BÖLÜM 2 ALFA GLUKOSİL HESPERİDİN İLE FORMÜLASYON ÇALIŞMALARI

29 α-gh İLE FORMÜLASYON ÇALIŞMALARI JEL FORMÜLASYONLARI

30 α-gh İLE FORMÜLASYON ÇALIŞMALARI JEL FORMÜLASYONLARI Polimerler kozmetikte şu amaçlarla formülasyonlara katılırlar: Kıvam arttırıcı Film oluşturucu Nemlendirici Emülgatör Tozları birleştirmek için

31 α-gh İLE FORMÜLASYON ÇALIŞMALARI JEL FORMÜLASYONLARI α-gh ile jel formülasyonları hazırlanırken Carbapol 940 ve Hidroksi etil selüloz (HEC) polimerleri kullanıldı.

32 CARBAPOL JEL FORMÜLASYONU Ticari isim INCI İsmi CAS Numarası Hammadde Kullanım Amacı Carbapol 940 Carbomer Jelleştirici polimer Distile su Aqua Çözücü Alfa Glukosil Hesperidin 4 G -α-d- Glucopyranosyl hesperidin Aktif madde Propilen Glikol Propane-1,2-diol Hümektan ve viskozite kontrolü Trietanol amin Triethanolamine ph ayarlayıcı Metil Paraben Methylparaben Koruyucu

33 HEC JEL FORMÜLASYONU Ticari isim INCI İsmi CAS Numarası Hammadde Kullanım Amacı Hidroksi Etil Selüloz Hydroxyethylcellulose Jelleştirici polimer Distile su Aqua Çözücü Alfa Glukosil Hesperidin 4 G -α-d-glucopyranosyl hesperidin Aktif madde Propilen Glikol Propane-1,2-diol Hümektan ve viskozite kontrolü Metil Paraben Methylparaben Koruyucu

34 JEL HAZIRLAMA PROSESİ Jelleştirici polimer olarak seçilen polimer su içerisinde bir gece bekletilerek şişirilir. Jel mekanik karıştırıcıda düşük hızda karıştırılarak eğer suda çözünmemiş kısımları varsa çözündürülerek şişmesi sağlanır. Ardından formülasyona katılması istenen hümektan, emülsifiye edici vb maddeler jele eklenir. Jelin ph değerine bakılır. Eğer gerekiyorsa ph ayarlayıcı ile ph istenilen değere getirilir. Aktif madde ve ayarlanan ph değerinde etkili olan koruyucu formülasyona gerekli koşullarda katılır.

35 α-gh İLE FORMÜLASYON ÇALIŞMALARI JEL FORMÜLASYONLARI Selüloz türevi polimerler ısıtıldıklarında daha kolay şişmektedirler. Hidroksi etil selüloz (HEC), hidroksi propil metil selüloz (HPMC) gibi selüloz türevi polimerleri ısıtabilirsiniz. Parabenler tek halde max %0,4 oranında, kombine halde max %0,8 oranında kullanılabilirler. Metil parabenin mikrobiyal etkinliği, formülasyona propilen glikolün katılmasıyla artmaktadır.

36 α-gh İLE FORMÜLASYON ÇALIŞMALARI EMÜLSİYON FORMÜLASYONLARI

37 α-gh İLE FORMÜLASYON ÇALIŞMALARI EMÜLSİYON FORMÜLASYONLARI Emülsiyon Formülasyonları Klasik Emülsiyon Sistemleri Çoklu Emülsiyon Sistemleri Su içinde yağ tipi (Y/S) emülsiyonlar Yağ içinde su tipi (S/Y) emülsiyonlar

38 KLASİK EMÜLSİYON SİSTEMLERİ Y/S EMÜLSİYON Ticari isim INCI İsmi CAS Numarası Hammadde Kullanım Amacı Likit Parafin Paraffinum Liquidum Emoliyent, çözücü Setil Alkol Distile Su Cetyl Alcohol Aqua Emoliyent, sürfaktan, opaklaştırıcı, Çözücü Propilen Glikol Propylene Glycol Sodyum Lauril Sülfat Sodium Laureth Sulfat Hümektan, çözücü, viskozite ayarlayıcı Emülsifiye edici, sürfaktan, köpük oluşturucu Alfa Glukosil Hesperidin 4 G -α-d-glucopyranosyl hesperidin Aktif madde Metil Paraben Methylparaben Koruyucu Propil Paraben Propylparaben Koruyucu

39 Ticari isim INCIİsmi CAS Numarası Hammadde Kullanım Amacı Likit Parafin Paraffinum Liquidum Emoliyent, çözücü Setil Alkol Cetyl Alcohol Emoliyent, sürfaktan, opaklaştırıcı, Balmum Cera Alba Emoliyent, film oluşturucu Gliseril Monostearat Glyceryl Stearate Emoliyent, emülsifiye edici Distile Su Aqua Çözücü Propilen Glikol Alfa Glukosil Hesperidin KLASİK EMÜLSİYON SİSTEMLERİ S/Y EMÜLSİYON Propylene Glycol G -α-d-glucopyranosyl hesperidin Hümektan, çözücü, viskozite ayarlayıcı Aktif madde Metil Paraben Methylparaben Koruyucu Propil Paraben Propylparaben Koruyucu

40 EMÜLSİYON HAZIRLAMA PROSESİ Yağ fazı ve su fazı ayrı beherlerde aynı sıcaklık derecesine kadar ısıtılır. Y/S emülsiyonunda yağ fazı su fazının üzerine mekanik karıştırıcı ile RPM hızda karıştırılırken yavaş yavaş eklenir. S/Y emülsiyonunda su fazı yağ fazının üzerine eklenmektedir. Emülsiyon oluştuktan sonra, 40 C nin altında az bir miktar suda çözünmüş olan aktif madde katılır. Karıştırma işlemi bir müddet daha devam eder.

41 ÇOKLU EMÜLSİYON SİSTEMLERİ Çoklu Emülsiyon Sistemlerinin Avantajları: Hassas maddelerin korunması Birbiri ile geçimsiz maddelerin tek bir preparatta bir araya getirilebilmesi Etkin maddelerin sürekli ve uzatılmış salınımının sağlanması Çoklu Emülsiyon Sistemlerinin Dezavantajları: Termodinamik stabiliteleri zayıftır Salım mekanizmaları kesin olarak bilinmemektedir Hazırlama prosesleri zordur

42 ÇOKLU EMÜLSİYON SİSTEMLERİ Çoklu emülsiyonların formülasyonlarında yer alan maddeler; Yağ fazında kullanılan maddeler: likit parafin, badem yağı, susam yağı gibi sabit yağlar, mumlar, silikonlar Yüzey aktif maddeler: Çoklu emülsiyonun hazırlanabilmesi için, farklı HLB değerlerine sahip en az iki yüzey aktif madde kullanılmalıdır. Birinci yüzey aktif madde ile primer emülsiyon, ikinci yüzey aktif madde ile de çoklu emülsiyon elde edilir.

43 ÇOKLU EMÜLSİYON SİSTEMLERİ!!!! HLB değeri çok önemlidir. S/Y/S Primer emülsiyon HLB 2-7 arasında olan yüzey aktif madde kullanılır. Çoklu emülsiyon HLB değeri 6-16 arasında olan yüzey aktif madde kullanılır.

44 ÇOKLU EMÜLSİYON SİSTEMLERİ Çalışmada yüzey aktif madde olarak HLB değeri 5 olan Cety Dimethicon Copolyol Abil EM 90 ve HLB değeri 15 olan polioksietilen 20 sorbitanmonooleat Polisorbat 80 kullanıldı. Diğer maddeler: Genelde su fazına eklenen maddelerdir. Etkin maddeler genelde iç su fazına katılırlar. Böylece daha etkili ve uzun bir salım profili izlerler. Ayrıca iç su fazına NaCl, MgCl 2 gibi elektrolitler ilave edilir. Böylece çoklu emülsiyonun stabilitesi artmış olur. Stabiliteyi arttırmak için jel yapıcı maddeler de kullanılabilir. İç su fazına florasan özellikli maddeler, suda çözünen polimerik yapılı boya maddelerinin eklenmesi ile emülsiyon yapısı ve salım özellikleri incelenebilir.

45 ÇOKLU EMÜLSİYON Çoklu Emülsiyonun Hazırlanmasında Etkili Olan Parametreler 1-Kullanılan karıştırıcı önemlidir. Ultra-Turrax veya Ultrasonik karıştırıcılar yerine mikrovortex tipi karıştırıcılar tercih edilmelidir. 2-Sıcaklık: Primer emülsiyon için min 70 C, çoklu emülsiyon için de min 10 C sıcaklık önerilmektedir. 3-Yüzey aktif maddelerin HLB değerleri ve kullanım miktarları SİSTEMLERİ Çoklu emülsiyon tarzında ilk kozmetik ticari ürün Lancaster firmasına ait Unique Moisturizing dir 4-Karıştırma hızı ve süresi: Primer emülsiyon için karıştırma hızı yüksek ve süre kısa, çoklu emülsiyon için karıştırma hızı düşük süre ise uzun olmalıdır. 5-Faz hacmi: S/Y/S tipi emülsiyonlarda primer faz hacmi%70 in altına inmemelidir.

46 Primer Emülsiyon: S/Y Ticari isim INCI İsmi CAS Numarası Hammadde Kullanım Amacı Likit Parafin Paraffinum Liquidum Emoliyent, çözücü Abil EM90 Cetyl PEG/PPG-10/1 Dimethicone - S/Y tipi emülsiyonlar için emülsifiye edici (HLB ~5) Distile Su Aqua Çözücü MgSO 4.7H 2 O Magnesium sulphate heptahydrate Viskozite kontrolü Alfa Glukosil Hesperidin ÇOKLU EMÜLSİYON SİSTEMLERİ 4 G -α-d-glucopyranosyl hesperidin Aktif madde Metil Paraben Methylparaben Koruyucu Propil Paraben Propylparaben Koruyucu Çoklu emülsiyon için su fazı Ticari isim INCI İsmi CAS Numarası Hammadde Kullanım Amacı Distile Su Aqua Çözücü Tween 80 Polysorbate Emülsifiye edici (HLB ~ 15) Metil Paraben Methylparaben Koruyucu

47 ÇOKLU EMÜLSİYON HAZIRLAMA PROSESİ Primer emülsiyonun hazırlanması için su ve yağ fazı aynı sıcaklığa (min. 80 C) getirilir. Su fazı yağ fazına karıştırıcı ile önce 400 RPM gibi yavaş bir hızda karıştırılırken eklenir. Hız 1200 RPM gibi yüksek bir hıza çıkartılır. Emülsiyon oluştuktan sonra 40 C nin altında suda çözünen aktif madde katılır. Çoklu Emülsiyonun hazırlanması için ikinci su fazı ısıtılır. Sıcaklık C iken primer emülsiyon 400 RPM hızla karıştırılarak eklenir. Düşük hızda yaklaşık olarak 1-1,5 saat karıştırma işlemi devam eder.

48 ÇOKLU EMÜLSİYON SİSTEMLERİ Hazırlanan 4 değişik çoklu emülsiyon formülasyolarından bir çeşit formülasyon stabil olarak bulundu. Diğer formülasyonlarda kremalaşma, faz ayrımı, faz birleşmesi gözlendi.

49 α-gh İLE FORMÜLASYON ÇALIŞMALARI EMÜLJEL FORMÜLASYONLARI O/W Emülsiyon Ticari isim INCIİsmi CAS Numarası Hammadde Kullanım Amacı Likit Vazelin Petrolatum Emoliyent Distile Su Aqua Çözücü Span 60 Sorbitan Stearate Emülsifiye edici (HLB ~ 4,7) Tween 80 Polysorbate Emülsifiye edici (HLB ~ 15) Alfa Glukosil Hesperidin 4 G -α-d-glucopyranosyl hesperidin Aktif madde Metil Paraben Methylparaben Koruyucu Propil Paraben Propylparaben Koruyucu Jel Ticari isim INCIİsmi CAS Numarası Hammadde Kullanım Amacı Carbapol 940 Carbomer Jelleştirici polimer Distile Su Aqua Çözücü Trietanol amin Triethanolamine ph ayarlayıcı Metil Paraben Methylparaben Koruyucu

50 EMÜLJEL HAZIRLAMA PROSESİ Jel fazı hazırlanır. Y/S emülsiyon, emülsiyon hazırlama tekniğine göre hazırlanır. Emülsiyon oluşumundan sonra jel fazı mülsiyona eklenir. Mekanik karıştırıcı ile düşük hızda karıştırılarak emüljel formülasyonu hazırlanır.

51 BÖLÜM 3 DERİ PENETRASYONU VE PENETRASYON ARTTIRICILAR

52 DERİ PENETRASYONU Deri dıştan içe doğru ; epidermis, dermis hipodermis olmak üzere üç tabakadan oluşur.

53 DERİ PENETRASYONU Deriden penetrasyonda, stratum korneumun ana bariyer görevi görmektedir. Deriye topikal formülasyon uygulandığında, etkin maddenin deriden penetre olması istenir. Bu işlemin sınırlayıcı aşaması, derinin ölü boynuzsu tabakasından olan difüzyondur. Stratum korneum hidrofobik bir membran (zar) gibi davranır.

54 DERİ PENETRASYONU Deri bariyerini geçmek durumunda olan etkin maddeler başlıca üç yol izlerler. 1. Stratum korneumu delerek (Transepidermal yol) 2. Hücrelerarası geçiş 3. Yangeçit yolu

55 PENETRASYON ARTTIRICILAR Etkin maddelerin deriden daha rahat ve hızlı geçebilmeleri için penetrasyon artırıcılar kullanılır. Penetrasyon arttırıcıların çalışma mekanizmaları 1. Startum korneumdaki lipit tabakalarının yapısını bozmak 2. Etkin maddelerin stratum korneumdaki çözünürlüklerini artırmak

56 PENETRASYON ARTTIRICILAR Penetrasyon Arttırıcılar Alkil sülfoksitler Azonlar Yağ alkolleri Yağ asitleri Çalışmada, penetrasyon arttırıcı olarak bir yağ asidi olan Oleik Asit kullanıldı. Lizo ve kısa zincirli fosfolipitler Yüzey etkin maddeler

57 PENETRASYON ARTTIRICILAR Penetrasyon arttırıcıların sahip olması istenilen özellikler şunlardır Toksik olmamalıdır. İrritasyona sebep olmamalıdır. Alerjik olmamalıdır. Hızlı etki etmelidir, etkisi öngörülebilir ve tekrarlanabilir olmalıdır. Farmakolojik aktivitesi olmamalıdır. İndirekt olarak etki etmelidir. Ciltten uzaklaşırken cildin bariyer özelliği hızlıca ve tam olarak tekrar yerine gelmelidir. Formülasyondakiİlaç ve yardımcı maddeler için uygun olmalıdır. Kozmetik açıdan uygun cilt hissi ile kabul edilebilir olmalıdır.

58 OLEİK ASİT İLE HAZIRLANAN FORMÜLASYONLAR Oleik Asitli Carbomer Jel Ticari isim INCIİsmi CAS Numarası Hammadde Kullanım Amacı Carbapol 940 Carbomer Jelleştirici polimer Distile su Aqua Çözücü Alfa Glukosil Hesperidin 4 G -α-d-glucopyranosyl hesperidin Aktif madde Propilen Glikol Propane-1,2-diol Hümektan ve viskozite kontrolü Oleik asit Oleic acid Penetrasyon arttırıcı Trietanol amin Triethanolamine ph ayarlayıcı Metil Paraben Methylparaben Koruyucu

59 OLEİK ASİT İLE HAZIRLANAN FORMÜLASYONLAR Oleik Asitli HEC Jel Ticari isim INCI İsmi CAS Numarası Hammadde Kullanım Amacı Hidroksi Etil Selüloz Hydroxyethylcellulose Jelleştirici polimer Distile su Aqua Çözücü Alfa Glukosil Hesperidin 4 G -α-d-glucopyranosyl hesperidin Aktif madde Propilen Glikol Propane-1,2-diol Hümektan ve viskozite kontrolü Oleik Asit Oleic acid Penetrasyon arttırıcı Metil Paraben Methylparaben Koruyucu

60 OLEİK ASİT İLE HAZIRLANAN FORMÜLASYONLAR Oleik Asili Y/S Emülsiyon Krem Ticari isim INCI İsmi CAS Numarası Hammadde Kullanım Amacı Likit Parafin Paraffinum Liquidum Emoliyent, çözücü Setil Alkol Cetyl Alcohol Emoliyent, sürfaktan, opaklaştırıcı, Distile Su Aqua Çözücü Oleik asit Oleic acid Penetrasyon arttırıcı Propilen Glikol Propylene Glycol Hümektan, çözücü, viskozite ayarlayıcı Sodyum Lauril Sülfat Sodium Laureth Sulfat Emülsifiye edici, sürfaktan, köpük oluşturucu Alfa Glukosil Hesperidin 4 G -α-d-glucopyranosyl hesperidin Aktif madde Metil Paraben Methylparaben Koruyucu Propil Paraben Propylparaben Koruyucu

61 OLEİK ASİT İLE HAZIRLANAN FORMÜLASYONLAR Oleik Asili S/Y Emülsiyon Krem Ticari isim INCI İsmi CAS Numarası Hammadde Kullanım Amacı Likit Parafin Paraffinum Liquidum Emoliyent, çözücü Setil Alkol Cetyl Alcohol Emoliyent, sürfaktan, opaklaştırıcı, Balmumu Cera Alba Emoliyent, film oluşturucu Oleik Asit Oleic acid Penetrasyon arttırıcı Gliseril Monostearat Glyceryl Stearate Emoliyent, emülsifiye edici Distile Su Aqua Çözücü Propilen Glikol Propylene Glycol Alfa Glukosil Hesperidin 4 G -α-d-glucopyranosyl hesperidin Hümektan, çözücü, viskozite ayarlayıcı Aktif madde Metil Paraben Methylparaben Koruyucu Propil Paraben Propylparaben Koruyucu

62 OLEİK ASİT İLE HAZIRLANAN Primer Emülsiyon FORMÜLASYONLAR Oleik Asitli Çoklu Emülsiyon Ticari isim INCI İsmi CAS Numarası Hammadde Kullanım Amacı Likit Parafin Paraffinum Liquidum Emoliyent, çözücü Abil EM90 Cetyl PEG/PPG-10/1 S/Y tipi emülsiyonlar için - Dimethicone emülsifiye edici (HLB ~5) Oleik Asit Oleic acid Penetrasyon Arttırıcı Distile Su Aqua Çözücü MgSO 4.7H 2 O Magnesium sulphate heptahydrate Viskozite kontrolü Alfa Glukosil Hesperidin 4 G -α-d-glucopyranosyl hesperidin Aktif madde Metil Paraben Methylparaben Koruyucu Propil Paraben Propylparaben Koruyucu Çoklu Emülsiyon Ticari isim INCI İsmi CAS Numarası Hammadde Kullanım Amacı Distile Su Aqua Çözücü Tween 80 Polysorbate Emülsifiye edici (HLB ~ 15) Metil Paraben Methylparaben Koruyucu

63 OLEİK ASİT İLE HAZIRLANAN Y/S Emüliyon Krem FORMÜLASYONLAR Oleik Asitli Emüljel Ticari isim INCI İsmi CAS Numarası Hammadde Kullanım Amacı Likit Vazelin Petrolatum Emoliyent Distile Su Aqua Çözücü Span 60 Sorbitan Stearate Emülsifiye edici (HLB ~ 4,7) Tween 80 Polysorbate Emülsifiye edici (HLB ~ 15) Oleik Asit Oleic acid Penetrasyon Arttırıcı Alfa Glukosil Hesperidin 4 G -α-d-glucopyranosyl hesperidin Aktif madde Metil Paraben Methylparaben Koruyucu Propil Paraben Propylparaben Koruyucu Jel Ticari isim INCI İsmi CAS Numarası Hammadde Kullanım Amacı Carbapol 940 Carbomer Jelleştirici polimer Distile Su Aqua Çözücü Trietanol amin Triethanolamine ph ayarlayıcı Metil Paraben Methylparaben Koruyucu

64 BÖLÜM 5 HAZIRLANAN FORMÜLASYONLARLA YAPILAN TESTLER

65 HAZIRLANAN FORMÜLASYONLARLA YAPILAN TESTLER STABİLİTE TESTLERİ

66 STABİLİTE TESTLERİ Hazırlanan tüm formülasyonlar üç ay boyunca +4 C de, +25 C %55 nem ve +40 C %70 nem ortamlarında stabilite testleri için muhafaza edildi. Yapılan stabilite testleri ile organoleptik özellikler (görünüş, renk, koku), ph değişimi viskozite değişimleri gözlendi.

67 STABİLİTE TESTLERİ Başlangıç ph ve Viskozite Değerleri Formül adı Carbapol jel 7,38 Oleik asitli Carbapol Jel 6,48 HEC Jel 5,49 Oleik asitli HEC Jel 4,74 Y/S Emülsiyon Krem 4,95 Oleik asitli Y/S Emülsiyon Krem +25 C ph 4,27 S/Y Emülsiyon Krem 5,91 Oleik asitli S/Y Emülsiyon Krem 5,67 Emüljel 6,80 Oleik asitli emüljel 6,75 Çoklu emülsiyon 1 5,20 Formül adı Carbapol jel %44 Oleik asitli Carbapol Jel %36,4 +25 C 0,5 RPM (cp) 1 RPM (cp) 2 RPM (cp) %59, %45, %61, %57,6 HEC Jel %14, % %40 Oleik asitli HEC Jel %18, %30, %47,8 Y/S Emülsiyon Krem %64, %89,7 EEE Oleik asitli Y/S Emülsiyon Krem %43, %44 EEE S/Y Emülsiyon Krem % %70 EEE Oleik asitli S/Y Emülsiyon Krem Emüljel %34, %41,4 EEE %48,6 Oleik asitli emüljel %9, %12, %16,8 Çoklu emülsiyon %7, %9, %13,2

68 STABİLİTE TESTLERİ 3. AY ph ve Viskozite Değerleri Formül adı +4 C +25 C %55 nem +40 C %70 nem Carbapol jel 7,84 7,40 7,38 Oleik asitli Carbapol Jel 6,76 6,55 6,38 HEC Jel 5,82 5,49 5,15 Oleik asitli HEC Jel 4,86 4,61 4,04 Y/S Emülsiyon Krem 5,55 5,00 4,97 Oleik asitli Y/S Emülsiyon 4,86 4,69 4,12 Krem S/Y Emülsiyon Krem 5,80 5,72 5,34 Oleik asitli S/Y Emülsiyon Krem 5,78 5,64 5,02 Emüljel 6,95 6,88 6,85 Oleik asitli emüljel 7,22 6,70 6,58 Çoklu emülsiyon 1 5,57 5,49 6,40

69 3. AY ph ve Viskozite Değerleri Formül adı +4 C +25 C %55 nem +40 C %70 nem 0,5 RPM 1,0 RPM 2,0 RPM 0,5 RPM 1,0 RPM 2,0 RPM 0,5 RPM 1,0 RPM 2,0 RPM Carbapol jel %39,3 Oleik asitli Carbapol Jel %33,9 HEC Jel %15,8 Oleik asitli HEC Jel %12,8 Y/S Emülsiyon Krem %18,5 Oleik asitli Y/S Emülsiyon Krem S/Y Emülsiyon Krem Oleik asitli S/Y Emülsiyon Krem STABİLİTE TESTLERİ %46, %40, %24, %28, %26, %7, %11, %55, %49, %38, %44, %39, %19, %38, %33, %12, %20, %16, %17, %46, %38, %20, %32, %23, %25, %55, %24, %46, %27, %29, %32, %33, %6, %10, %49, %9, %15, %36, %48,2 %81, %42, %43, %69,5 EEE EEE EEE EEE EEE EEE EEE EEE EEE EEE EEE EEE EEE EEE EEE EEE EEE EEE Emüljel %38, %45, %53, %34, %40,1 Oleik asitli %5, %8, emüljel %11,4 %11,5 %14,7 Çoklu %4, %5, %7, %9, emülsiyon 1 %12, %36, %38, %18, %26,3 EEE EEE %47, %28, %35, %42, %18, %8, %10,4 %12, %16, %20, %27, %35,1

70 HAZIRLANAN FORMÜLASYONLARLA YAPILAN TESTLER PENETRASYON ÇALIŞMALARI

71 FRANZ DİFÜZYON HÜCRESİ In vitro deriden geçiş çalışmaları için Franz Difüzyon Hücresi cihazı kullanıldı.

72 FRANZ DİFÜZYON HÜCRESİ Franz Difüzyon Hücresi cihazında membran olarak 0,45 µm por çaplı selüloz asetat membran, reseptör faz olarak ph 7.4 tampon çözeltisi kullanılmıştır.

73 FRANZ DİFÜZYON HÜCRESİ Hazırlanan formülasyonların herbiri Franz Difüzyon Hücresi cihazı ile selüloz membrandan penetrasyonu in vitro olarak test edilmiştir. Bulgularşuşekildedir:

74 1,8 mg/cm 2 1,6 Penetrasyon Çalışmaları 1,4 1,2 1 0,8 0,6 0,4 0,2 0-0, Saat Carbapol Jel Çoklu Emülsiyon Emüljel HEC Jel Oleik Asitli Carbapol Jel Oleik Asitli Emüljel Oleik Asitli HEC Jel Oleik Asitli Y/S Emülsiyon Krem Oleik Asitli S/Y Krem Y/S Emülsiyon Krem S/Y Emülsiyon Krem

75 FRANZ DİFÜZYON HÜCRESİ Elde edilen bulgulara göre en iyi penetre olan jel formülasyonlarıdır. Oleik asit penetrasyonu arttırmıştır.

76 HAZIRLANAN FORMÜLASYONLARLA YAPILAN TESTLER MİKROBİYOLOJİK TESTLER

77 MİKROBİYOLOJİK TESTLER Yapılan her bir formülasyon için toplam aerobik mezofilik bakteri ve toplam mantar sayısına bakıldı. Hazırlanan tüm formülasyonlar mikrobiyolojik açıdan uygun bulundu. Kontrol Parametresi Toplam aerobik mezofilik bakteri Toplam mantar Metot Spesifikasyonlar Test Sonuçları Birim ISO 21149: 2006 <100 kob/g kob/g ISO 16212: 2008 <10 kob/g kob/g

78 MİKROBİYOLOJİK TESTLER

79 HAZIRLANAN FORMÜLASYONLARLA YAPILAN TESTLER ETKİNLİK TESTLERİ

80 ETKİNLİK TESTLERİ α-gh ile yapılan O/W emülsiyon krem formülasyonu yaşları arasında değişen 20 kadın gönüllü üzerinde 6 hafta boyunca denenecektir.

81 ETKİNLİK TESTLERİ Gönüllüler üzerinde yapılacak etkinlik testleri için Cerrahpaşa Tıp Fakültesi Klinik Araştırmalar Etik Kurulu ndan izin alınmıştır.

82 ETKİNLİK TESTLERİ α-gh maddesi içeren Y/S emülsiyon krem ile gönüllüler üzerinde yapılan etkinlik testlerinde maddenin yaşlanma karşıtı etkisi ve göz altı morluklarına olan etkisi incelenecektir. Bu etkilerin yanı sıra hazırlanan formülasyonun cilt üzerinde bazı parametrelerde değişiklik yapmaması da istenmektedir.

83 ETKİNLİK TESTLERİ Başlangıçta henüz ürünü kullanmadan, ürünü kullandıktan sonra üçüncü hafta ve ürünü kullandıktan sonra altıncı hafta gönüllülerde girişimsel olmayan aletli analiz yöntemleri ile şu testler yapılacaktır:

84 ETKİNLİK TESTLERİ 1. Transepidermal su kaybı (TEWL) : Tewametre kullanılır. Deri yüzeyi ile deri yüzeyinin hemen üzerinde, sabit yükseklikte oluşan buhar basıncı farkının saptanması esasına dayanır. TEWL değeri g/ m 2 / s olarak ifade edilir.

85 ETKİNLİK TESTLERİ 2. Deri elastikiyeti: Kütometre kullanılır. Kütometre ile deri yüzeyine dikey bir vakum uygulayarak, bu vakum sonucunda deride oluşan deformasyon test edilecektir.

86 ETKİNLİK TESTLERİ 3. Nem tutma kapasitesi: Korneometre kullanılır. Aletin probunda iki adet birbirine paralel metal levha vardır. Derinin nemi bu levhalar arasında dielektrik ortam oluşturur ve ölçülen değer derinin nem içeriğine göre kapasitansdaki değişikliği gösterir.

87 ETKİNLİK TESTLERİ 4. Derinin ph değeri: Deri ph metresi kullanılır. ph ın ölçülmesinde, metal veya cam ve çözeltiler arasındaki elektrokimyasal interfaz prosesleri kullanılır. Ölçüm elektrotunun potansiyelindeki değişim, bu elektrot ve sabit potansiyelli bir standart elektrot arasındaki potansiyel farkı belirlenerek ölçülebilmektedir.

88 ETKİNLİK TESTLERİ 5. Deri sebumu: Sebumetre kullanılır.. Yüzey lipitlerinin miktarını değerlendirmek için kullanılan sebumetrede, opak bir plastik şerit yüzey lipitleriyle temas ettiği zaman, bu lipitlerle kaplanması sonucunda yarı şeffaf hale geçmektedir. Bu yarı şeffaflığın derecesi, spektrofotometre ile ölçülerek lipit miktarı µg/ cm 2 olarak ifade edilir.

89 ETKİNLİK TESTLERİ 6. Cilt kırışıklığı ölçümü: Skin visiometer SV 600 kullanılır. Vizyometre ile cilt pürüzleri silikon replikadaki ışık transmisyonu ile saptanır.ek olarak yağ üretim oluşumu belirlenir.

90 ETKİNLİK TESTLERİ 7. Meksametre: Cilt rengi tayini için kullanılır. Göz altı morluklarının rengindeki değişiklikleri saptamak için kullanılacaktır.

91 ETKİNLİK TESTLERİ Etkinlik testlerinin, gönlülüler üzerinde yapılacak anket çalışması ile desteklenmesi amaçlanmaktadır.

92 TEŞEKKÜRLER Elif Gözde UTKU TÜRK Prof. Dr. Gülgün YENER