AYDIN İLİ VE ÇEVRESİNDE BULUNAN SÜT TOPLAMA MERKEZLERİ VE ÇİFTLİKLERİNDEN ALINAN SÜT ÖRNEKLERİNİN BENTLEY MARKA IBCm CİHAZI KULLANILARAK TOPLAM CANLI (BAKTERİ YÜKÜ) VE SOMATİK SAYIMLARININ AKIM SİTOMETRİ METODU İLE İNCELENMESİ Hazırlayan:Melih Renkli 1
Bentley BactoCount IBCm CİHAZ TANITIMI Bakteri ve Somatik Sayımının En Kolay ve Hızlı Yolu Çiğ Sütte Bakteri ve Somatik Hücre Ölçümünün Hızlı,Hassas Kesin Değerlere Ulaşımı 2
BactoCount IBCm : Çiğ Sütte Hızlı Ve Hassas Bakteri ve Somatik Hücre Ölçümü IBCm Metodu Süt + Inkübasyon Solüsyonu viallere aktarılır Küvetleri inkübatöre yerleştirilir-süre Başlar Manuel sonikasyon işlemi ölçüme hazır olduğunda kullanıcıyı uyarma özelliği Küveti cihaza yerleştirilir Sonuç 1 dakika sonra ekranda belirir BAKTERİ ÖLÇÜMÜ METOD SUNUMU 1. Akış Sitometresi ne dayanmaktadır 2. Süt ve kimyasal içerik olarak 50 C lik inkübatör de reaksiyona girer, 3. Bakteri Kiti sayesinde süt içerisinde bulunan gruplar(somatik hücreler,yağ globulleri ve proteinler gibi)kaldırılır 4. Floresans işaretleyici bakterinin DNA/RNA sını işaretler, 5. Sonikasyon işlemi partiküllerin kimyasal yıkımını artırır,bakterinin hücre duvarını parçalar(permeabilize eder) ve işaretleme işlemini artırır 6. Karışım Akış Sitometresine transfer edilir 7. Boyanmış Bakteri DNA sı lazer ışığı altında ışıma yapar(flüoresans etkisi) 8. Bu ışımalar CFU cinsinden hesaplanır 9. Toplam inkübasyon süresi dahil 11 dakikada sonuç elde edilir. 3
BactoCount IBCm : Çiğ Sütte Hızlı Ve Hassas Bakteri ve Somatik Hücre Ölçümü BactoCount IBCm Avantajları SOMATİK HÜCRE ÖLÇÜMÜ METOD SUNUMU 1. Akış Sitometresi(Flow Cytometry) ne dayanmaktadır 2. Süt ve Somatik Hücre Sayım Kiti 50 C lik inkübatör de reaksiyona girer, 3. Somatik Hücre Sayım Kiti sayesinde süt içerisinde bulunan ve ölçümü etkileyecek gruplar kaldırılır 4. Floresans işaretleyici somatik hücreler içerisindeki DNA sını işaretler, 5. Sonikasyon işlemi bu bölümde uygulanmaz. 6. Karışım Akış Sitometrsine transfer edilir 7. Boyanmış Somatik Hücreler laser ışığından geçerken,ışık darbeleri yaratarak floresan ışıma haline dönüşürler 8. Bu ışımalar Somatik Hücre Değeri olarak hesaplanır Doğruluk ve tekrarlanabilirlikte yüksek preformansı ve tutarlı sonuçları ile bakteri ve somatik hücre sayımın gerçekleştirmesi, Güvenli ve donanım sadeliği için solid-sate Akım Sitometri kullanılması Emniyetli,uzun ömürlü ve düşük güç tüketimi olan laser bölümü (diodede-pumped solidstates laser) ömür> 10,000 saat. Kullanılan Sonikatör kimyasal reaksiyonu hızlandırır ve bileşenleri parçalayarak metod hassasiyetini arttırır. Sonikasyon güçlü kimyasallar ve sıcağa tutma işlemlerinin kombinasyonu yüksek hassasiyete ulaştırır (Signal/Noise) Oranı, Kompleks süt matrislerinde(keçi,koyun sütü) mükemmel sonuçlar elde edilir, Kullanılan web teknolojisi i l e cihazın görüntülenebilmesine izin vermesi 9. Toplam inkübasyon süresi dahil 3 dakikada sonuç elde edilir. uzaktan arızanın bulunması ve 4
BactoCount IBCm Avantajları IBCm Teknik Özellikleri Bakteri Ölçümü Ölçüm Aralığı: 1000-10,000,000 CFU/ml Uygulama: Çiğ Süt (inek,koyun,keçi) Doğruluk: Sy,x <0.25 log Tekrarlanabilirlik: Sr<0.06 log Çalışma Faktörü: 50 Analiz Süresi: 1 minute Hazırlık Süresi: ~ 30 Hız: 30 örnek/saat bakteri Yüksek doğruluk ve tekrarlanabilirlik: inek,keçi ve koyun sütünde (Sy,x<0.25 log, Sr<0.06 log) Fransa CECALAIT ve İtalya daki A.I.A referans laboratuarlarında onaylanmış olarak inek,koyun ve keçi sütlerinin hijyen kalitesinin ve somatik hücre tespiti Saatte 30 numune bakteri ve 60 numune somatik hücre ölçme imkanı, Ön hazırlık gerektirmeden soğuk/sıcak süt numunelerinin kullanılabilmesi İnek,Koyun ve Keçi Sütünde Mükemmel Analitik Çalışma 5
BactoCount Metod Avantajları BactoCount IBCm Servis Avantajları Ağ teknolojisinin cihazlar içerisine uygulanabilir olması ve böylelikle internet sayesinde sistemin uzaktan kontrolünün sağlanabilmesi, 1. Tamamıyla süt içerinde bulunan bileşenlerin dağılması, 2. Yüksek randımanlı Floresans Etkisi yaratan boya, Servis ve onarım kolaylığı için Moduler tasarım, 3. Floresans sinyalini artırmak için kullanılan kimyasal katkılar, Problemli parçaların otomatik teşhisi, 4. Sonikasyon işlemi- DNA nın serbest kalması,reaksiyon hızının artırılması Signal/Noise oranı, Otomatik yükleyicinin sıkıştırılmış havaya ihtiyaç duymaması, 5. Kimyasal işlemi arttırıcı ısıl işlem, Yedek parça ve servis desteğin kolay bulunması, Düşük bakım / Sorun giderme kolaylığı. 6. Tek İnkübasyon, 7. Farklı süt matrislerinde kullanılabilmesi,inek,koyun ve keçi sütü, 8. Düşük Çalışma Faktörü. Güçlü Kimya + Sonikasyon = Yüksek Signal/Noise Oranı 6
Numunelerin Toplanması ve Analize Alınması SÜT NUMUNE ÖLÇÜMLERİNİN DEĞERLENDİRİLMESİ Numuneler tespit edilen yerlerden yeterli hacimde steril kaplara alınıp buz blokları içerisinde korunarak Aydın/Nazilli Egetek Analiz Laboratuarına getirilmiştir. Numunelerin toplanması ile laboratuara ulaştırma zamanı 8 saati geçmemiştir. Numuneler laboratuara ulaşımından hemen sonra soğuk zincirin korunması amacı ile analize alınana kadar buzdolabında bekletilmiştir. Numuneler öncelikli olarak Bakteri Ölçümü için IBCm Bakteri ve Somatik Sayım Cihazı nda analize alınmıştır. Bakteri ölçümü tamamlanmış sütler somatik Hücre sayımına yapılana kadar buzdolabında bekletilmiştir. Toplanan süt numuneleri bakteri ölçümünden sonra aynı sistem kullanılarak somatik hücre sayımı tamamlanmıştır. 7
Yeri Yeri 1 Ayhan Bostancı Tank 1 Kapak 4.631.830 576.000 8 Beğerli Tank Üst Kapak 6.141.170 503.000 2 Ayhan Bostancı Tank 1 Vana 4.678.177 549.000 9 Beğerli Tank Vana 6.231.450 489.000 3 Ayhan Bostancı Tank 2 Kapak 4.700.314 612.000 10 Emre SavKoop Çiftlik 522.259 201.000 4 Ayhan Bostancı Tank 2 Vana 4.404.086 585.000 11 Savkoop Tank 1.156.058 472.000 12 Yaşar Altuntaş 226.481 755.000 5 Camdibi Tank 1 4.984.121 552.000 13 Geyre 1.534.780 154.000 6 Camdibi Tank 2 Üst 1.884.770 652.000 14 Ataeymir 213.947 588.000 7 Camdibi Tank 2 Vana 1.654.281 674.000 8
Yeri Yeri 15 15 NC 560 5.Tank 4.353.732 588.000 22 Guney 2 20 TON 3.339.851 354.000 16. 15 NC 560 1.Tank 3.661.960 924.000 23. Abdurrahman 893.657 757.000 17 Küçükalan 1.377.229 546.000 24 Yeşildere 4.080.102 680.000 18 Kumavşar 1.027.022 458.000 25 15 FD 299 4.TANK 2.356.576 910.000 19 Kelekçi 978.055 431.000 26 15 FD 299 1.TANK 2.997.454 544.000 20 Akalan 2.418.272 681.000 27 Gümüş 3.730.327 3.576.000 21 Güney 1.180.331 674.000 28 Kayacık Vana 589.289 480.000 9
Yeri Yeri 29 Kayacık 2 günlük 599.454 502.000 36 Ahmet Çelikalp 84.513 589.000 30 Acıpayam Yazır 1.126.145 773.000 37 Duacılı 2.494.193 685.000 31 Kumkısık 3.776.058 711.000 38 Hasköy Merkez 1.021.562 677.000 32 Veteriner Ayhan İlçe 286.995 632.000 39 Beylerbeyi 1.635.096 535.000 33 Sarayköy 3.775.169 618.000 40 Hamza hatipoğlu 3.775.169 618.000 34 İlter Bayram 970.984 350.000 41 Bozkırlar mrkz tank 4 2 gunluk 4.189.338 536.000 35 Gönül Işık 17.386 466.000 42 Bozkırlar mrkz tank 6 2 gunluk 3.679.414 552.000 10
Yeri Yeri 43 Hüseyin Urkay 228.234 261.000 50 Emine Ertuğrul 47.244 376.000 44 Necdet Çırak 932.487 1.149.000 51 Ergun Tavas 1.238.222 686.000 45 Yaşar Altuntaş 226.168 805.000 46 Kamışlar 808.133 457.000 47 Erkan Pirimoğlu 1.397.478 618.000 48 Doğan Gürbüz 140.762 520.000 49 Hüseyin Biçen 3.679.414 655.000 11
Değerlendirme Süt numunelerinin Bakteri değerleri IBC/ml(Individual Bacteria Count/ml) değerinde yazılmıştır.bakteri yükünün CFU/ml (kob/ml) bazında görülebilmesi için sistemin kalibrasyonun bölgesel olarak yapılması gerekmektedir. Sistemde Somatik Kalibrasyonu belirlenen standartlarda yapılmış olup elde edilen değerler reel değerlerdir. Sistemin elde ettiği değerlerin tekrarlanabilirliği ve doğrusallığı kontrol edilmek istenirse 11/09/07 tarihinde 12 numaralı örnekle 14/09/07 tarihinde 45 no. lu aynı süt örneğinin bakteri değerlerine bakılarak yapılabilir. Ayrıca bu kontrol aynı tankın üst ve vanalarından elde edilen sütlerin bakteri değerlerine bakılarak da yapılabilir. Toplanan süt numuneleri çiftlik bazına inildiğinde bakteri yükünün düştüğü ama toplama tanklarında ise değerlerin yükseldiği göze çarpmaktadır. Çalışmalarda elde edilen değerlerle süt kalitesinin toplama tanklarında düştüğü ve bu kontaminasyon un ve aynı anda sütün toplama tanklarına gelene kadar soğuk zincirin sağlanmadığı varsayılabilir. 12