BD BBL CHROMagar O157

KULLANIM TALİMATLARI KULLANIMA HAZIR PLAK BESİYERİ PA25415.6 Rev.: April 2 BD BBL CHROMagar O157 ABD Patenti 6.165.743 KULLANIM AMACI BBL CHROMagar O157 insan klinik dışkı örneklerinden Escherichia coli O157:H7 nin izolasyonu, ayrıştırılması ve tahmini tanı için seçici bir besiyeridir. BBL CHROMagar O157 gıda, veteriner ve çevresel kaynaklardan elde edilmiş Escherichia coli O157:H7'nin izolasyonu, ayrıştırılması ve öngörülü tanımlanması için seçici bir besiyeridir ve FDA/BAM, USDA/ FSIS ve ISO yöntemleri kullanıldığında, işlenmemiş biftek ve pastorize edilmemiş elma suyu analizi için Performance Tested Methods Program ı altında AOAC Araştırma enstitüsü ile valide edilmiştir. PROSEDÜR İLKELERİ VE AÇIKLAMASI Mikrobiyolojik yöntem. E. coli O157:H7 kanlı dışkılardan en sık izole edilen patojendir. 46 Bununla birlikte, kanlı diyare olmaması E. coli O157:H7 varlığını yok saymaz. 7 Bu serotip hafif kansız diyareden şiddetli kanlı diyare (hemolitik kolit), hemolitik üremik sendrom ve ölüme kadar çeşitli hastalıklara neden olmaktadır. 46 E. coli O157:H7 izolasyonu birçok alanda ve yaş grubunda diğer bazı yaygın enterik patojenlerden, özellikle Shigella dan fazladır. Bulaşma sıklıkla çiğ veya az pişmiş etin sindirilmesi yoluyla gerçekleşir; ancak diğer gıdalardan da bulaşma gözlenmiştir. 46 Ayrıca, bulaşma kişiden kişiye, bunun yanı sıra rekreasyonel su kaynaklarından da gerçekleşebilir. 46 CHROMagar O157, E. coli O157:H7 nin izolasyonu, ayrıştırılması ve olası tanımlanması için kullanılır. Besiyerindeki kromojenik substratlar sebebiyle, E. coli O157:H7 kolonileri leylak rengi oluşturur, böylece birincil izolasyon plağından olası tanımlamaya ve diğer organizmalardan ayrıştırmaya olanak sağlar. Az sayıda E. coli O157:H7 bulunan örneklerde, besiyerini aşılamadan önce zenginleştirme yöntemleri kullanılabilir. CHROMagar O157 esas olarak A. Rambach (CHROMagar, Paris, Fransa) tarafından geliştirilmiştir. BD, bir lisans anlaşması altında, BBL CHROMagar O157 hazır plak besiyeri üretiminde kullanılan özel fikri mülkiyetten yararlanarak bu formülasyonu optimize etmiştir. Özel olarak seçilen Difco peptonları besinleri sağlar. Potasyum tellürit, sefiksim ve sefsulodin eklenmesi, bu besiyerinde gelişen E. coli O157:H7 dışındaki bakterilerin sayısını azaltır. Kromojen karışımı, spesifik enzimler ile hidrolize edildiğinde çözünmez renkli bir bileşik ortaya çıkaran yapay substratlar (kromojenler) içerir. E. coli O157:H7 leylak rengi koloniler oluşturan kromojenik substratlardan birini kullanır. Leylak rengi kolonilerin gelişmesi BBL CHROMagar O157 üzerinde E. coli O157:H7 için olası kabul edilmiştir. E. coli O157:H7 olmayan bakteriler mavi ila maviyeşil renkli kolonilere neden olan diğer kromojenik maddeleri kullanabilir veya, kromojenik maddelerin hiçbiri kullanılmamışsa, koloniler doğal renginde görünebilir. Bu, E. coli O157:H7 nin saptanmasını ve diğer organizmalardan ayrıştırılmasını kolaylaştırır. *BU TEST KİTİ MODELİNİN ÜRETİCİ TARAFINDAN SAĞLANAN ÖRNEKLERİ AOAC ARAŞTIRMA ENSTİTÜSÜ TARAFINDAN BAĞIMSIZ OLARAK DEĞERLENDİRİLMİŞTİR VE TEST KİTİNİN TANIMLAYICI EKİNDE BELİRTİLDİĞİ ŞEKİLDE ÜRETİCİ SPESİFİKASYONLARINI GERÇEKLEŞTİRDİĞİ BULUNMUŞTUR. ÜRETİCİ, BU KİTİN, Performans Testi Gerçekleştirilen Yöntemler sm SERTİFİKA NUMARASI 951 DE AYRINTILI OLARAK AÇIKLANAN, AOAC ARAŞTIRMA ENSTİTÜSÜ TARAFINDAN ORİJİNAL OLARAK DEĞERLENDİRİLEN SPESİFİKASYONLARA BÜTÜN YÖNLERDEN UYDUĞUNU TASDİK EDER. PA25415.6 Sayfa 1 / 5

REAKTİFLER BD CHROMagar O157 Medium 1 Litre Saf Su için Yaklaşık Formül* Kromopepton 16, g Sodyum Klorür 7, g Kromojen karışımı,65 g Potasyum Tellürit 2,5 mg Sefiksim,5 mg Sefsulodin 4, mg Agar 14, g ph: 7,1,2 *Performans kriterlerini karşılamak üzere gereken şekilde ayarlanmış ve/veya desteklenmiştir. ÖNLEMLER. Yalnızca profesyonel kullanım içindir. Aşırı nem gözlenirse, tabanı dengeli bir kapak üzerinde ters çevirin ve inkübasyon esnasında plağın altı ve üstü arasında bir engel oluşmasını önlemek için havayla kurumasını sağlayın. Kurutma sırasında ışıktan koruyun. Bkz SAKLAMA VE RAF ÖMRÜ. Mikrobiyal kontaminasyon belirtileri, renk değişimi, kuruma, çatlama veya diğer bozulma belirtileri görülen plakları kullanmayın. Klinik örneklerde hepatit virüsü ve İnsan İmmün Yetmezlik Virüsü de dahil olmak üzere patojenik mikroorganizmalar bulunabilir. Kan veya diğer vücut sıvılarıyla kontamine olan tüm öğelerle çalışılırken, Standart Önlemler 811 ve kurumsal düzenlemeler takip edilmelidir. E. coli O157 gibi patojenik mikroorganizmalar gıda örneklerinde bulunabilir. Tüm prosedürler boyunca mikrobiyolojik tehlikelere karşı uygun aseptik teknikleri ve belirlenen önlemleri uygulayın. Kullanımdan sonra, hazırlanan plaklar, örnek kapları ve diğer kontamine malzemeler atılmadan önce otoklavlanarak sterilize edilmelidir. Aseptik kullanma prosedürleri, biyolojik tehlikeler ve kullanılmış ürünün atılmasıyla ilgili olarak GENEL KULLANIM TALİMATLARI na bakın. SAKLAMA VE RAF ÖMRÜ Alındıktan sonra plakları kullanana kadar orijinal kaplı ambalajında karanlıkta 2 ila 8 C de saklayın. Dondurmaktan ve aşırı ısıtmaktan kaçının. Kullanıma hazır olana kadar açmayın. Plaklar son kullanma tarihine kadar (ambalaj etiketine bakın) ve önerilen inkübasyon sürelerinde inkübe edilebilir. Besiyerinin inokülasyon öncesinde oda sıcaklığına gelmesini bekleyin. 1 plaklık açılmış yığınlardan alınan plaklar temiz bir alanda, 2 ila 8 C de saklandığında bir hafta kullanılabilir. Işık kromojenleri parçalayabileceğinden, inkübasyon sırasında ve öncesinde ışığa maruziyeti en aza indirin. KULLANICI TARAFINDAN KALİTE KONTROLÜ Bilinen ve istenen reaksiyonlar üreten stabil kontrol organizmalarının saf kültürleriyle temsili plak örneklerini inoküle ederek, performansı kontrol edin (detaylar için, bkz GENEL KULLANIM TALİMATLARI belgesi). Aşağıdaki Tablo da bahsedilen test suşları önerilmektedir. 18 ila 24 saat boyunca 35 2 C de karanlıkta aerobik olarak inkübe edin. Suşlar Gelişim Sonuçları Escherichia coli O157:H7 Orta ila mükemmel gelişim. Koloniler grimor ila gül ATCC 7728 (=NCTC 129) rengimor (=leylak) Escherichia coli ATCC 25922 Kısmi ila tam inhibisyon; koloniler maviyeşil; maviyeşil haleler ile çevrili olabilir. Enterobacter cloacae ATCC 47 Gelişim: maviyeşil ila mavi koloniler İnoküle edilmemiş Renksiz ila açık bej, transparan Gerekli kalite kontrolleri ilgili yerel, resmi ve/veya federal düzenlemeler veya akreditasyon gerekliliklerine veya laboratuvarınızın standart Kalite Kontrol prosedürlerine uygun olarak gerçekleştirilmelidir. Klinik kullanıcının, uygun Kalite Kontrol uygulamaları için ilgili Klinik Ve Laboratuvar Standartları Enstitüsü (eski adı NCCLS) yönergelerine uyması önerilir. PA25415.6 Page 2 of 5

PROSEDÜR Sağlanan Malzemeler BD CHROMagar O157 Medium (9 mm Stacker plaklar). Mikrobiyolojik açıdan kontrol edilmiştir. Gerekli fakat sağlanmamış malzemeler: Yardımcı kültür besiyeri, reaktifler, kalite kontrol organizmaları ve gerekli diğer laboratuvar ekipmanı. Örnek Türleri Klinik kullanım için, örnek toplanması ve işlenmesi prosedürleri hakkında detaylar için laboratuvar prosedürlerine bakın. Bu besiyeri, bu ajan ile enfekte olduğundan şüphelenilen hastaların dışkı örneklerinden veya rektal swablarından Escherichia coli O157:H7 izolasyonu için kullanılır. Tarım ürünlerinin test edilmesi için, örnek tipi ve coğrafi bölgeye göre numune hazırlanması ve işlenmesi hakkında detaylar için uygun standart yöntemleri takip edin. Aynı zamanda, PERFORMANS ÖZELLİKLERİ VE PROSEDÜRÜN KISITLI OLDUĞU ALANLAR a bakın. Test Prosedürü Aseptik teknikleri uygulayın. Agar yüzeyi düz ve nemli olmalı, fakat aşırı nemli olmamalıdır. Klinik örnekler için, laboratuvara ulaşır ulaşmaz, bir BBL CHROMagar O157 plağını inoküle edin ve izolasyon için sürme yöntemi ile ekim yapın. Örnek swabdan geliştirilecekse, swabı kenarın yüzeyinde küçük bir alanın üzerinde döndürün; ardından bir öze kullanarak bu alandan sürme yöntemi ile ekim yapın. Alternatif olarak, plaklar ön zenginleştirmelerden inoküle edilebilir. Plakları aerobik olarak 35 ± 2 C de 18 24 saat ters konumda (agar kısmı üstte) inkübe edin. Diğer enterik patojenlerin saptanmasını sağlamak için BD MacConkey II Agar gibi diğer besiyerleri de inoküle edilebilir. Gıda örnekleri için, uygun referanslara başvurun ve geçerli standart yöntemleri takip edin. İnkübe edilmiş zenginleştirme broth u veya taranmış gıda örneği parçasını BBL CHROMagar O157 üzerine inoküle edin ve izolasyon için sürme yöntemi ile ekin. Plakları aerobik olarak 35 ± 2 C de 18 24 saat ters konumda (agar kısmı üstte) inkübe edin. Sonuçlar Uygun inkübasyondan sonra, plakları beyaz arkaplana karşı okuyun. E. coli O157:H7 BBL CHROMagar O157 besiyeri üzerinde leylak renginde koloniler oluşturacaktır. E. coli O157:H7 olarak bildirmeden önce bütün leylak rengi koloniler biyokimyasal olarak ve/veya serolojik olarak doğrulanmalıdır. 1,2,3,6 Grampozitif organizmalar tamamen inhibe edilmelidir. E. coli O157:H7 dışındaki Gramnegatif organizmalar inhibe olacak veya renksiz, mavi, yeşil, maviyeşil (su) veya doğal renkli koloniler oluşturacaktır. PERFORMANS ÖZELLİKLERİ VE PROSEDÜRÜN KISITLI OLDUĞU ALANLAR BBL CHROMagar O157 klinik, gıda, hayvansal ve çevresel kaynaklardan E. coli O157:H7 nin seçici izolasyonu ve olası tanımlanması için kromojenik bir besiyeridir. Performans Sonuçları 12 Klinik Test: Bir büyük şehir hastanesinde BBL CHROMagar O157, Sorbitol MacConkey (SMAC) ve Sorbitol MacConkey with Cefixime and Tellurite (SMACCT) kullanılarak toplam 11 dondurulmuş dışkı izolatı ve 16 dışkı kültürü (1 taze ve 6 saklanmış) değerlendirilmiştir. Donmuş dışkı izolatları, 5 E. coli O157:H7, 15 O157 olmayan E. coli, 8 Shigatoksin pozitif O157 olmayan E. coli ve 37 diğer Enterobacteriaceae ve fermente edici olmayan gramnegatif çubuk içermektedir. Test edilen 16 dışkıdan 7 sinin E. coli O157:H7 için pozitif olduğu bulunmuştur. Aşağıdaki duyarlılıklar ve özgünlükler gözlenmiştir. Duyarlılık (No.) Özgünlük (No.) BBL CHROMagar O157 %98 (56/57) %1 (69/69) SMAC %96 (55/57) %8 (55/69) SMACCT %1 (57/57) %93 (64/69) PA25415.6 Page 3 of 5

Tarım Ürünü Testi: BBL CHROMagar O157, AOACAraştırma Enstitüsü tarafından Performans Testi Gerçekleştirilen Yöntemler Programı altında valide edilmiştir. 12 BBL CHROMagar O157, çiğ öğütülmüş et ve pastörize edilmemiş elma şarabında E. coli O157:H7 saptanması için inoküle edilmiş örnekler kullanılarak değerlendirilmiştir. BBL CHROMagar O157 üzerinde E. coli O157:H7 geri kazanımı FDA BAM, USDA FSIS ve ISO referans plak besiyeri ile karşılaştırılmıştır. Referans besiyeri ve BBL CHROMagar O157 için önerilen referans zenginleştirme ve tarama prosedürleri takip edilmiştir. İmmünomanyetik ayırma (IMS) USDA ve ISO yöntemlerine göre gerçekleştirilmiştir. Test edilen 18 gıda örneğinden, 45 i FDA BAM ve USDA FSIS yöntemleri ve 9 ı ISO yöntemleri kullanılarak test edilmiştir. BBL CHROMagar O157, her iki gıda matrisi için referans yöntemlerle kıyaslandığında %1 duyarlılık ve %1 özgünlük göstermiştir. Gıda matrislerinin testinde hiçbir hatalı negatif bulunmamıştır. BBL CHROMagar O157 yöntemi kullanılan geri kazanımda referans plak besiyerine kıyasla Kikare analizi temelinde hiçbir istatistiksel farklılık bulunmamıştır. 54 E. coli O157:H7 suşunu (3 ü hareketsiz suşlar) ve 32 O157:H7 olmayan E. coli suşunu kapsayan, bilinen izolatlar, %1 duyarlılık ve özgünlükle BBL CHROMagar O157 üzerinde değerlendirilmiştir. Bu çalışmaların sonuçları BBL CHROMagar O157 nin çiğ öğütülmüş et ve pastörize edilmemiş elma şarabında FDA BAM, USDA FSIS ve ISO yöntemleri kullanılarak, E. coli O157:H7 geri kazanımı ve saptanması için etkili bir besiyeri olduğunu göstermektedir. Validasyon yöntemi karşılaştırma çalışma sonuçlarının özeti için Tablo 1 e bakın. Tablo 1: Validasyon Yöntemi Karşılaştırma Sonuçlarının Özeti Gıda Yöntem İnokülum Toplam Toplam Referans CHROMagar Yöntem KiKare 3 Matriksi Düzeyi Örnek Pozitif Pozitif O157 Pozitif Uyumu 1 Çiğ Öğütülmüş USDA Yüksek 2 15 12 15 %85 2 1,33 Et Et Düşük 2 1 %85 2 1,33 Çiğ Öğütülmüş ISO Et Yüksek 2 17 16 17 %95 2, Et Düşük 2 1 9 1 %95 2, Pastörize ISO Yüksek 2 19 19 19 %1, Edilmemiş Şarap Düşük 2 14 14 14 %1, Elma Şarabı Pastörize FDA Yüksek 2 %1, Edilmemiş Şarap Düşük 2 1 1 1 %1, Elma Şarabı 1 Referans ve BBL CHROMagar O157 yöntemleri arasýnda eþdeðer olan doðrulanmýþ pozitif ve negatif örneklerin birlikte yüzdesini temsil eder. 2 BBL CHROMagar O157 yöntemi ile saptanan ilave pozitif örnekler. Çið öðütülmüþ et USDA/FSIS yöntemi ile test edildiðinde 3 ilave pozitif ve çið öðütülmüþ et ISO yöntemi ile test edildiðinde 1 ilave pozitif 3 < 3,84 kikare deðerleri p<,5 de önemli hiçbir farklýlýk olmadýðýný gösterir. Prosedürün Kısıtlı Olduğu Alanlar BBL CHROMagar O157, E. coli nin O157:H7 dışındaki enterohemorajik veya enteropatojenik serotiplerini saptamaz, çünkü bunlar biyokimyasal olarak farklılık gösterebilir. E. coli O157:H7 nin ßglukuronidazpozitif suşları BBL CHROMagar O157 üzerinde saptanamayacaktır; bununla birlikte buna benzer suşlar nadirdir. BBL CHROMagar O157, E. coli O157:H7 nin toksin üreten ve toksin üretmeyen suşları arasında farklılık göstermez. Proteus spp. gibi E. coli O157:H7 dışındaki organizmalar bu besiyeri üzerinde gelişebilir; bununla birlikte, genellikle farklı renk oluştururlar. Eğer izole edilmemiş leylak rengi koloniler gözlenirse, izolasyon başka bir BBL CHROMagar O157 plağına alt kültür hazırlanması ile sağlanabilir. E. coli nin nadir suşlarının (biyokimyasal olarak Shigella ya benzeyen) BBL CHROMagar O157 üzerinde hatalı pozitif sonuçlar oluşturduğu bulunmuştur. Önerilenden daha düşük sıcaklıklarda inkübasyon pozitif reaksiyonların saptanmasını geciktirebilir. Eğer inkübasyon sıcaklığı 35 ± 2 C nin altında ise, plaklar negatif olarak bildirilmeden önce tam 24 saat inkübe edilmelidir. 12 Kesin tespit için teyit testleri gereklidir.,6 Bu besiyeri E. coli O157:H7 dışındaki enterik patojenlerin izolasyonu için kullanılmamalıdır. PA25415.6 Page 4 of 5

REFERANSLAR 1. U.S. Food and Drug Administration. 22. Bacteriological analytical manual (online), Chapter 4A: Diarrheagenic Escherichia coli. AOAC International, Gaithersburg, MD. http://www.cfsan.fda.gov/~ebam/bamtoc.html 2. U. S. Department of Agriculture. 22. Detection, isolation and identification of Escherichia coli O157:H7 and O157:NM (Nonmotile) from meat products. In Microbiology laboratory guidebook MLG 5.3. 3. International Organization for Standards (ISO) Microbiological Methods, ISO 16654: Microbiology of food and animal feeding stuffs horizontal method for the detection of Escherichia coli O157, First Edition, 2151. 4. Moe, C. 22. Waterborne transmission of infectious agents. In C. Hurst, R. Crawford, G. Knudsen, M. McInerney, and L. Stetzenbach (eds.), Manual of environmental microbiology, 2 nd ed. American Society for Microbiology, Washington, DC. 5. Doyle, M., T. Zhao, J. Meng, and S. Zhao. 1997. Escherichia O157:H7. In M. Doyle, L. Beuchat, and T. Montville (eds.), Food microbiology fundamentals and frontiers. American Society for Microbiology, Washington, DC. 6. Bopp, C.A., F.W. Brenner, P.I. Fields, J.G. Wells, and N.A. Strockbine. 23. Escherichia, Shigella and Salmonella. In P.R. Murray, E.J. Baron, M.A. Pfaller, F.C. Tenover, J.H. Jorgensen and R.H. Yolken (eds.), Manual of clinical microbiology. 8 th ed. American Society for Microbiology, Washington DC. 7. CDC MMWR Jan 26, 21/5 (RR2): 169. Diagnosis and management of foodborne illness. 8. National Committee for Clinical Laboratory Standards. 21. Approved Guideline M29A2. Protection of laboratory workers from occupationally acquired infections. 2 nd ed., NCCLS, Wayne, Pa. 9. Garner, J.S. 1996. Hospital Infection Control Practices Advisory Committee, U.S. Department of Health and Human Services, Centers for Disease Control and Prevention. Guideline for isolation precautions in hospitals. Infect. Control Hospital Epidemiol. 17:538. 1. U.S. Department of Health and Human Services. 1999. Biosafety in microbiological and biomedical laboratories, HIHS Publication (CDC), 4 th ed. U.S. Government Printing Office, Washington, D.C. 11. Directive 2/54/EC of the European Parliament and of the Council of 18 September 2 on the protection of workers from risks related to exposure to biological agents at work (seventh individual directive within the meaning of Article 16(1) of Directive 89/391/EEC). Official Journal L262, 17/1/2, p. 2145. 12. BD Diagnostic Systems dosyasındaki veriler. AMBALAJ/TİCARİ TAKDİM ŞEKLİ BD CHROMagar O157 Medium Kat. No. 25415 Kullanıma Hazır Plak Besiyeri, cpu 2 EK BİLGİ Daha fazla bilgi için lütfen yerel BD temsilcinizle temasa geçin. Becton Dickinson GmbH Tullastrasse 8 12 D69126 Heidelberg/Germany Phone: +4962 2 5 Fax: +4962 2 52 16 Reception_Germany@europe.bd.com http://www.bd.com http://www.bd.com/europe/regulatory/ AOAC is a trademark and Performance Tested Methods is a service mark of AOAC International. ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection. CHROMagar is a trademark of Dr. A. Rambach. Difco is a trademark of Difco Laboratories, subsidiary of Becton, Dickinson and Company. BD, BD Logo and BBL are trademarks of Becton, Dickinson and Company. 2 BD. PA25415.6 Page 5 of 5