BD Mueller Hinton Agar with 5% Sheep Blood BD Mueller Hinton Agar with 5% Sheep Blood (150 mm) BD Mueller Hinton Agar with 5% Sheep blood, Square

Transkript

1 KULLANIM TALİMATLARI KULLANIMA HAZIR PLAK BESİYERİ PA Rev.: April 2013 BD Mueller Hinton Agar with 5% Sheep Blood BD Mueller Hinton Agar with 5% Sheep Blood (150 mm) BD Mueller Hinton Agar with 5% Sheep blood, Square KULLANIM AMACI Çeşitli formatlarda mevcut olan BD Mueller Hinton Agar with 5% Sheep Blood, klinik Streptococcus pneumoniae izolatlarında ve Klinik ve Laboratuvar Standartları Enstitüsü (Clinical and Laboratory Standards Institute, CLSI) tarafından standartlaştırılmış diğer streptococci'nin klinik disk difüzyon hassasiyet testinde kullanılır. 1 PROSEDÜR İLKELERİ VE AÇIKLAMASI Mikrobiyolojik yöntem. Bauer-Kirby prosedürü, kağıt disklere aşılanan antimikrobiyal maddelerin agar jeli içerisinde difüzyonunu temel alır. 2 Test prosedürüne göre, organizmanın standardize edilmiş bir süspansiyonu besiyerinin tüm yüzeyine sürülür. Ardından, belirli miktarda antibiyotik veya diğer antimikrobiyal ajanlar ile aşılanmış kağıt diskler besiyeri yüzeyine yerleştirilir, plak inkübe edilir ve her bir disk etrafındaki inhibisyon zonları ölçülür. CLSI Bauer-Kirby prosedürü için bir performans standardı yazmıştır ve ayrıntılar için bu belgeye başvurulmalıdır. 1 Antimikrobiyal duyarlılık testi için diğer ulusal standartlar Bauer-Kirby prosedürüne göre test edilmek üzere geliştirilmiştir. Bu standartlarda, inokülum yoğunlukları, inokülasyon yöntemi, oluşan zon boyutları ve yorumlama modu CLSI Standardına göre değişebilir. Duyarlılık testi için ortak Avrupa Standartları bulunmazken, CLSI Rehberleri geçerli olmadığında yerel ulusal standartlara başvurulmalıdır. Hızlı gelişen aerobik patojenlerin duyarlılık testi için yeterli olmasına rağmen, desteklenmemiş Mueller Hinton agar Streptococcus pneumoniae gibi daha güç üreyen organizmalar için yeterli değildir. CLSI Belge M2 %5 defibrinleştirilmiş koyun kanı ile desteklenmiş Mueller Hinton Agar ı önermektedir ve S. pneumoniae ve diğer streptokoklar ile kullanıma ilişkin kalite kontrol prosedürlerini ve yorumlama kriterlerinin ayrıntılarını verir. REAKTİFLER BD Mueller Hinton Agar with 5% Sheep Blood 1 Litre Saf Su için Formül* Sığır Eti Ekstraktı 2,0 g Kazein Asit Hidrolizatı 17,5 Nişasta 1,5 Agar 17,0 g Koyun Kanı, defibrinleştirilmiş %5 ph 7,3 +/- 0,2 *Performans kriterlerini karşılamak üzere gereken şekilde ayarlanmış ve/veya desteklenmiştir. ÖNLEMLER In vitro Diyagnostik Kullanım içindir. Yalnızca profesyonel kullanım içindir. Mikrobiyal kontaminasyon belirtileri, renk değişimi, kuruma, çatlama veya diğer bozulma belirtileri görülen plakları kullanmayın. Kuruma sebebiyle bu besiyerinin aşırı büzülmesi hatalı duyarlılık sonuçlarına yol açabilir. Aseptik kullanma prosedürleri, biyolojik tehlikeler ve kullanılmış ürünün atılmasıyla ilgili olarak GENEL KULLANIM TALİMATLARI na bakın. PA

2 SAKLAMA VE RAF ÖMRÜ Alındıktan sonra plakları kullanana kadar orijinal kaplı ambalajında karanlıkta 2 ila 8 C de saklayın. Dondurmaktan ve aşırı ısıtmaktan kaçının. Plaklar son kullanma tarihine kadar (ambalaj etiketine bakın) ve önerilen inkübasyon sürelerinde inkübe edilebilir. 10 plaklık açılmış yığınlardan alınan plaklar temiz bir alanda, 2 ila 8 C de saklandığında bir hafta kullanılabilir. KULLANICI TARAFINDAN KALİTE KONTROLÜ Kullanıcı tarafından kalite kontrolü için, uygun CLSI ye 1 veya geçerli ise, ulusal standartlara başvurulmalıdır. Genellikle, kontrol suşu, S. pneumoniae ATCC dahil edilerek Test Prosedürü altında tanımlanan prosedürler takip edilmelidir ve laboratuvar tarafından normalde kullanılan antimikrobiyal diskler uygun performans açısından haftada en az iki defa test edilmelidir. Doğru zon çapları CLSI Belge M2 ye dahil edilen CLSI Belge M100 da Tablo 3A da bulunabilir. 1 İnoküle edilmiş besiyerinin görünüşü: kırmızı (kan rengi), opak. PROSEDÜR Sağlanan Malzemeler BD Mueller Hinton Agar with 5% Sheep Blood (birkaç farklı plak formatında sağlanmıştır; bkz. Ambalaj/Ticari Takdim Şekli). Mikrobiyolojik açıdan kontrol edilmiştir. Sağlanmayan Malzemeler 1. Standart inokülum hazırlanması için 5 ml Mueller Hinton II Broth (BBL Kat. No , 16 x 102 mm tüp) inokülum broth veya %0,9 tuz çözeltisi. 2. Baryum sülfat karşılaştırma standardı (0,5 ml 0,048 M BaCl 2 [%1,175 a/h BaCl 2 2H 2 O] ila 99,5 ml 0,18 M [0,36 N] H 2 SO 4 [%1 h/h]). 3. İnokülumun süspansiyonunun türbiditesini 0,5 McFarland standardına eşdeğer olacak şekilde ayarlamak için fotometrik bir cihaz. 4. Yukarıdaki materyallere (1-3) alternatif olarak, BD Prompt Inoculation System (volümetrik inokülum hazırlama aracı) kullanılabilir. 1,3 5. Kontrol kültürü - Streptococcus pneumoniae ATCC BD Sensi-Disc duyarlılık test diskleri gibi, belirli miktarda antimikrobiyal ajan aşılanmış kağıt diskler. 7. BD Sensi-Disc Self-Tamping 6-, 8- veya 12-Place Dispenser gibi bir disk dağıtma cihazı. 8. Kumpas veya cetvel gibi zon çaplarını ölçme veya yorumlamaya yarayan araç. 9. %5 CO 2 içeren bir atmosfer oluşturan bir inkübatör veya CO 2 açısından zengin benzer atmosfer oluşturan başka bir cihaz. 10. Yardımcı kültür ortamı, reaktifler ve gerekli laboratuvar ekipmanı. Örnek Türleri Bu ürün klinik türlerden izole edilmiş saf kültürlerin duyarlılık testi için kullanılır (aynı zamanda bkz. PERFORMANS ÖZELLİKLERİ VE PROSEDÜRÜN KISITLI OLDUĞU ALANLAR). Test Prosedürü S. pneumoniae test edilirken doğrudan koloni süspansiyonu yöntemi kullanılmalıdır. 1 Aseptik teknikleri uygulayın. 1. Seçici olmayan kan agar besiyerinden saf, taze (=gece boyu) bir kültürün mevcut olduğundan emin olun. 2. Gelişimi Mueller Hinton II Broth gibi bir broth da veya steril %0,9 tuz çözeltisinde süspanse edin. Türbiditeyi baryum sülfat standardına (0,5 McFarland standardı) eşit olacak şekilde ayarlayın. Standart ve test inokülumunun türbiditesi her iki tüpü ince siyah çizgiler bulunan beyaz zemin önünde tutarak karşılaştırılmalıdır veya fotometrik bir cihaz kullanılabilir. 3. Rutin test amaçlı olarak BD Prompt Inoculation System gibi, türbidite ayarlanması olmaksızın doğrudan standardizasyona izin veren araçları içeren alternatif inokülum hazırlama yöntemleri kabul edilebilir bulunmuştur. 1,3 PA

3 4. İnokülum bulanıklığının ayarlanmasını takiben 15 dakika içinde uygun şekilde seyreltilen inoküluma steril bir swab batırın ve kalan sıvıyı tüpe akıtmak için tüpün iç kenarı boyunca birkaç kez kuvvetlice çevirin. 5. İnokülasyonun eşit dağılması için her sürme işleminden sonra plağı 60 çevirerek tüm agar yüzeyini üç kez sürerek BD Mueller Hinton Agar with 5% Sheep Blood üzerine inokülasyon yapın. 6. Plağın kapağını çıkarın ve yüzey neminin ilaç emdirilmiş diskleri uygulamadan önce absorbe edilmesini sağlamak için plağı oda sıcaklığında en az 3 en fazla 15 dakika tutun. 150 mm plak başına en fazla dokuz disk veya 90 ve 100 mm plak başına dört disk kullanın. S. pneumoniae nin penislin testi için 1 µg oksasilin disk kullanın %5 CO 2 içeren atmosferde 20 ila 24 saat 35 C de inkübe edin. Sonuçlar İnkübasyondan sonra, birleşik gelişim görülmelidir. Yalnızca izole koloniler gelişirse, inokülum çok zayıftır ve test tekrar edilmelidir. Kumpas veya cetvel kullanarak, kapağı açılmış plağın üst kısmından en yakın milimetreye yuvarlayarak, disk çapını da dahil etmek suretiyle tam inhibisyon zonlarının (çıplak gözle karar vererek) çapını ölçün. 5 Son nokta çıplak gözle saptanabilen, hiçbir görünür gelişim göstermeyen alan olarak alınmalıdır. Belirgin inhibisyon zonunun kenarına yakın, güçlükle saptanabilen küçük kolonilerin zayıf gelişimlerini göz ardı edin. BD Mueller Hinton Agar with 5% Sheep Blood ile, hemoliz inhibisyon zonu değil, gelişim inhibisyon zonu ölçülmelidir.. Sonuçların Hesaplanması ve Yorumlanması Zon çapları S. pneumoniae için, yorumlayıcı kriterler sağlayan CLSI Belge M100 (M2) de Tablo 2G dekilerle ve diğer streptokoklar için 2H dekilerle karşılaştırılmalıdır. 1 Elde edilen sonuçlar ardından dirençli, orta düzey veya duyarlı olarak bildirilebilir. Bu standartta bahsedilen 19 mm oksasilin zon çapları bulunan S. pneumoniae izolatları için özel yorumlayıcı kriterleri kullanın (aynı zamanda bkz. PERFORMANS ÖZELLİKLERİ VE PROSEDÜRÜN KISITLI OLDUĞU ALANLAR). Not: Antimikrobiyal disklerin revize edilmiş tablolarını ve yorumlayıcı standartları içeren, CLSI Belge M2 ya ek bilgiler veya revize edilmiş versiyonlar periyodik olarak yayınlanmaktadır. Güncel öneriler için son tablolara bakılmalıdır. Standardın tamamı veya ek bilgiler 940 West Valley Road, Suite 1400, Wayne, PA ABD adresindeki National Committee for Clinical Laboratory Standards tan (CLSI) (Klinik Laboratuvar Standartları Ulusal Komitesi) sipariş edilebilir. Telefon: PERFORMANS ÖZELLİKLERİ VE PROSEDÜRÜN KISITLI OLDUĞU ALANLAR Disk difüzyonu duyarlılık testi yalnızca saf kültürlerle kullanım için tasarlanmıştır. Duyarlılık testi hazırlanmadan önce izolatın Gram boyaması ve olası tanımlamasının yapılması önerilmektedir. 1 Bu besiyeri S. pneumoniae ve diğer streptokokların seçilen antimikrobiyallere karşı duyarlılık testi için kullanılır. 1,2,5 Amoksisilin, ampisilin, sefepim, sefotaksim, seftriakson, sefuroksim, imipenem ve meropenem için S. pneumoniae için güvenilir disk difüzyonu test kriterlerinin bulunmadığını göz önünde bulundurun. Bu antimikrobiyallerin in vitro aktifliği en iyi MIC yöntemi kullanılarak belirlenir. 1 S. pneumoniae nin penisiline duyarlılığının belirlenmesi için, oksasilik disk kullanılmalıdır. Oksasilin zon çapları 20 mm olan S. pneumoniae izolatları (MIC 0,06 mg/ml) penisiline duyarlıdır. Oksasilin tarama diski ile 19 mm zonlar penisiline dirençli, ara ve belirli duyarlı suşlar ile oluştuğundan, oksasilin zonları 19 mm olan bütün S. pneumoniae izolatları üzerinde bir penisilin, meropenem ve sefotaksim veya seftriakson MIC belirlenmelidir. 1 S. pneumoniae dışındaki streptokoklar için, penisilin duyarlılığının belirlenmesi amacıyla oksasilin testi önerilmemektedir. Beta-hemolitik streptokoklar için, penisilin veya ampisilin disk kullanın. Viridans grubu streptokoklar için penisilin ve oksasilin disk difüzyon testi güvenilir değildir; bunların duyarlılıkları MIC testi ile belirlenmelidir. 1 PA

4 Streptococcus pneumoniae ATCC kullanılan antimikrobiyal disk difüzyon duyarlılık testi, sefaklor, sefprozil, kloramfenikol, eritromisin, ofloksasin, tetrasiklin, trimetoprim/sülfametoksazol ve vankomisin ile dahili olarak gerçekleştirilmiştir. M2-A5 de tanımlanan test prosedürlerini takiben, 10 test gününden oluşan bir dönemde kalite kontrol suşları ve sekiz antimikrobiyal disk ile yirmi test gerçekleştirilmiştir. Sekiz antimikrobiyal maddenin tamamı için, zon boyutlarının %100 ü (160/160) NCCLS Belge M100-S6 da Tablo 3C ve M2-A5 te yayınlanan beklenen zon boyutu aralıkları dahilindedir. 6,7 Tetrasiklin için standart sapma 1 mm den az; diğer tüm antimikrobiyal maddeler için ise 2 mm den azdır. 8 Yukarıda listelenen antimikrobiyal maddelerle iki saha tesisinde S. pneumoniae ATCC ve dokuz ilave iyi karakterize edilmiş S. pneumoniae suşuna karşı yeniden üretilebilirlik çalışmaları (3 gün için günde 3 defa) gerçekleştirilmiştir. NCCLS Belge M2-A5 te Tablo 2C ve Ek M100-S6 dan zon çapı yorumlama standartları her antimikrobiyal madde için takip edilmiştir. 6,7 Kloramfenikol, eritromisin, ofloksasin, tetrasiklin ve vankomisin ile test NCCLS referans yöntemi ile %95 Kategori Benzerliği ile sonuçlanmıştır. Trimetoprim/sülfametoksazol ile test etme NCCLS referans yöntemi ile %90 Kategori Benzerliği ile sonuçlanmıştır. Sefaklor ve sefprozil için tekrarlanabilirlik, bu iki antimikrobik için yorumlayıcı standartlar bulunmadığından tanımlanamamıştır. Yukarıda özetlenen çalışmalar temelinde, bu besiyeri üzerinde S. pneumoniae test edilirken sefaklor, seprozil veya trimetoprim/sülfametoksazol kullanılması önerilmemektedir. Ayrıca, literatürdeki referanslar Mueller Hinton koyun kanı agar plaklarında trimetoprim/sülfametoksazol ile disk difüzyon testinde aşırı yorumlama hataları bildirmektedir. 9 Bazı organizma-antimikrobiyal ajan kombinasyonlarında, inhibisyon zonu keskin sınırlı kenarlara sahip değildir ve hatalı yorumlamaya neden olabilir. Disk difüzyon duyarlılık testlerini etkileyen çeşitli faktörler tanımlanmıştır. Bunlar besiyeri, agar derinliği, disk potensi, inokülum konsantrasyonu, inokülum yaşı ve ph ı kapsar. 2 Hatalı inokülum konsantrasyonu doğru olmayan sonuçlar verebilir. İnokülum çok yoğun ise inhibisyon zonu çok küçük olabilir ve inokülum çok zayıfsa çok geniş ve ölçümü zor olabilir. Antimikrobiyal disklerin uygun olmayan şekilde saklanması potens kaybına veya hatalı dirençli sonuçlara neden olabilir. Bir organizmanın spesifik bir antimikrobiyal ajana in vitro duyarlılığı ajanın in vivo olarak etkili olacağı anlamına gelmez. Sonuçların yorumlanmasında yol gösterici olması açısından ilgili referanslara bakın. 2,10 Bu besiyerini S. pneumoniae ve beta-hemolitik streptokoklar dışında bakterilerin duyarlılık testi için kullanmayın. REFERANSLAR 1. Clinical and Laboratory Standards Institute. Approved Standard: M2. Performance standards for antimicrobial disk susceptibility tests. CLSI, Wayne, PA, USA.Search for latest version at 2. Washington, J.A., and G.L. Woods Antibacterial susceptibility tests: dilution and disk diffusion methods, p In P.R. Murray, E.J. Baron, M.A. Pfaller, F.C. Tenover, and R.H. Yolken (ed.), Manual of clinical microbiology, 6th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 3. Baker, C.N., C. Thornsberry, and R.W. Hawkinson Inoculum standardization in antimicrobial susceptibility testing: evaluation of overnight agar cultures and the rapid inoculum standardization system. J. Clin. Microbiol. 17: Swenson, J.M., B.C. Hill, and C. Thornsberry Screening pneumococci for penicillin resistance. J. Clin. Microbiol. 24: Hindler, J.F., and J.M. Swenson Susceptibility test methods: fastidious bacteria. In: In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8 th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 6. National Committee for Clinical Laboratory Standards Approved Standard: M2-A5. Performance standards for antimicrobial disk susceptibility tests, 5th ed. National Committee for Clinical Laboratory Standards, Villanova, Pa. 7. National Committee for Clinical Laboratory Standards Sixth informational supplement: M100-S6. Performance standards for antimicrobial susceptibility testing. National Committee for Clinical Laboratory Standards, Wayne, Pa. PA

5 8. Becton Dickinson Microbiology Systems dosyasındaki veriler. 9. Jorgensen, J.J Detection of antimicrobial resistance in Streptococcus pneumoniae by use of standardized susceptibility testing methods and recently developed interpretive criteria. Clin. Microbiol. Newsl. 16(13) Neumann, M.A., D.F. Sahm, C. Thornsberry, J.E. McGowan, Jr Cumitech 6A, New developments in antimicrobial agent susceptibility testing: a practical guide. Coordinating ed., J.E. McGowan, Jr. American Society of Microbiology, Washington, D.C. AMBALAJ/TİCARİ TAKDİM ŞEKLİ BD Mueller Hinton Agar with 5% Sheep Blood (90 mm Stacker plaklar) Kat. No Kullanıma Hazır Plak Besiyeri, cpu 20 Kat. No Kullanıma Hazır Plak Besiyeri, cpu 120 BD Mueller Hinton Agar with 5% Sheep Blood (150 mm) Kat. No Kullanıma Hazır Plak Besiyeri, cpu 20 BD Mueller Hinton Agar with 5% Sheep blood, Kare (120 x 120 mm) Kat. No Kullanıma Hazır Plak Besiyeri, cpu 20 EK BİLGİ Daha fazla bilgi için lütfen yerel BD temsilcinizle temasa geçin. Becton Dickinson GmbH Tullastrasse 8 12 D Heidelberg/Germany Phone: Fax: Reception_Germany@europe.bd.com Prompt is a trademark of 3M. ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection BD, BD Logo and all other trademarks are the property of Becton, Dickinson and Company BD PA