KULLANIM TALİMATLARI KISMEN TAMAMLANMIŞ ŞİŞELENMİŞ ARAÇLAR BA-256665.03 Rev.: Nov 2012 BD Tryptic Soy Agar KULLANIM AMACI Şişeler içinde bulunan BD Tryptic Soy Agar (Tryptic Soya Agarı), Petri kutusuna veya tüplere döküldükten sonra güç üremeyen ve orta düzey güç üreyen mikroorganizmaların gelişimini destekleyen kısmen tamamlanmış genel amaçlı bir besiyeridir. Klinik mikrobiyolojide klinik örneklerden elde edilen patojenlerin izolasyonunda kullanılmaz fakat bakteri suşlarının kültivasyonu için kullanılabilir. Kan ilave ettikten sonra, klinik mikrobiyolojide birincil izolasyon besiyeri olarak kullanılabilir. PROSEDÜR İLKELERİ VE AÇIKLAMASI Mikrobiyolojik yöntem. Tryptic Soy Agar ın besin bileşimi bu besiyerini uzun yıllar popüler bir besiyeri yapmıştır. United States Pharmacopeia (Birleşik Devletler Farmakopesi) ve European Pharmacopeia (Avrupa Farmakopesi) mikrop sınırları testi prosedürlerinin toplam aerobik mikrop sayımı kısmında Soybean-Casein Digest Agar Medium olarak belirtilen besiyeridir. 1,2 Hazır besiyeri, stok kültürlerin idamesi, plak sayımı, çeşitli maddelerden mikroorganizma izolasyonu gibi çeşitli amaçlarla kullanılır. 3-5 Su, atık su ve gıdaların incelenmesi için farmakope yöntemlerine dahil edilmiştir. 6,7 Bu besiyerinin klinik mikrobiyolojide kullanımı sınırlıdır çünkü güç üreyen çeşitli bakterilerin gelişimini desteklemez. Bununla birlikte, Tryptic Soy Agar X ve V gelişme faktörleri içermediğinden, inoküle edilmiş plaklara X, V ve XV faktörü striplerinin eklenmesi ile Haemophilus türlerinin izolatları ile bu gelişme faktörleri için gereklilikleri belirlemede kullanılabilir. 8 BD Tryptic Soy Agar referans suşların, örn., Enterobacteriaceae ve staphylococci, idamesi veya alt kültürünün hazırlanmasında besiyeri olarak da kullanılabilir. Zenginleştirilmemiş besiyeri klinik uygulamalar için birincil izolasyon besiyeri olarak kullanılmaz. Kanın (örn., %5 koyun kanı) eklenmesinden sonra, bakterilerin klinik örneklerden izole edilmesi için kullanılabilir. 9,10 BD Tryptic Soy Agar daki kazein ve soya peptonları, organik nitrojen, özellikle amino asitler ve daha uzun zincirli peptidler sağlayarak besiyerini besleyici kılar. Sodyum klorür ozmotik dengeyi korur. BD Tryptic Soy Agar (Şişe Besiyeri) kullanıcının plak veya tüp besiyeri hazırlayabileceği, şişelerde tedarik edilmiş kısmen tamamlanmış (=yarı-bitmiş) bir besiyeridir. Bu besiyerleri Difco susuz besiyerinden üretilmektedir. REAKTİFLER BD Tryptic Soy Agar 1 Litre Saf Su için Formül* Kazeinin Pankreatik Dijesti 15,0 g Soya Fasulyesi Küspesi Papaik Dijesti 5,0 Sodyum Klorür 5,0 Agar 15,0 ph 7,3 ± 0,2 *Performans kriterlerini karşılamak üzere gerektiği gibi ayarlanmış ve/veya ilaveler yapılmıştır. ÖNLEMLER. Yalnızca profesyonel kullanım içindir. Mikrobiyal kontaminasyon belirtileri, renk değişimi, kuruma, çatlama veya diğer bozulma belirtileri görülen şişeleri kullanmayın. Bu kısmen tamamlanmış şişe besiyerinin tamamlanması için, PROSEDÜR Reaktifin Hazırlanması nda açıklanan yöntemleri uygulayın ve uyarılara BA-256665.03-1 -
dikkat edin. Aseptik kullanım prosedürleri, biyolojik tehlikeler ve kullanılmış ürünün atılmasıyla ilgili olarak GENEL KULLANIM TALİMATLARI belgesine bakın. SAKLAMA VE RAF ÖMRÜ Alındıktan sonra, şişeleri karanlıkta 5 ila 25 C de saklayın. Dondurmaktan ve fazla ısıtmaktan kaçının. Besiyeri son kullanma tarihine kadar kullanılabilir ve önerilen inkübasyon sürelerinde inkübe edilebilir. Açık ambalajlardaki şişeler son kullanma tarihine kadar kullanılabilir. Açılmış şişeler ise hemen kullanılmalıdır. Şişe besiyerinden plaklar veya tüpler hazırlamak için, ilk olarak besiyeri sıvılaştırılmalıdır (bkz. PROSEDÜR-Reaktifin Hazırlanması). Katılaştırdıktan sonra besiyerini bir defadan fazla sıvılaştırmayın. KULLANICI TARAFINDAN KALİTE KONTROLÜ Zenginleştirilmemiş besiyeri: Kısmen tamamlanmış besiyerinden kan gibi destekleri eklemeden plaklar veya tüpler hazırlayın (bkz. PROSEDÜR-Reaktifin Hazırlanması). Plakları veya tüpleri aşağıda bulunan Tablo da belirtilen test suşları ile inoküle edin. Daha fazla bilgi için, GENEL KULLANIM TALİMATLARI belgesine başvurun. Bakterileri 1 ila 3 gün boyunca aerobik olarak 30-35 C de inkübe edin. Aspergillus niger i 2 ila 5 gün boyunca aerobik olarak 30-35 C de inkübe edin. Suşlar Aspergillus brasiliensis ATCC 16404 Candida albicans ATCC 10231 Staphylococcus aureus ATCC 6538 Staphylococcus epidermidis ATCC 12228 Bacillus subtilis ATCC 6633 Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027 Escherichia coli ATCC 8739 Salmonella Typhimurium ATCC 14028 İnoküle edilmemiş Açık kehribar ila kehribar arası, hafif opalesen %5 defibrine koyun kanı ile zenginleştirilmiş besiyeri: Kısmen tamamlanmış besiyerinden plaklar hazırlayın (bkz. PROSEDÜR Reaktifin Hazırlanması) ve 48 ila 50 C ye soğuttuktan sonra %5 koyun kanı ile zenginleştirin. Zenginleştirilmiş besiyerinin CLSI Standard M22 uyarınca test edilmesi önerilmektedir. 11 Suşları 20 ila 24 saat boyunca karbondioksit ile zenginleştirilmiş aerobik bir atmosferde inkübe edin. Suşlar Streptococcus pyogenes ATCC 19615 ; beta hemoliz Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 ; alfa hemoliz Staphylococcus aureus ATCC 25923 ; beta-hemolitik olabilir veya olmayabilir İnoküle edilmemiş Kırmızı (kan rengi) PROSEDÜR Sağlanan malzemeler BD Tryptic Soy Agar (kısmen tamamlanmış şişe besiyeri). Dolum hacimleri ve ambalaj için TİCARİ TAKDİM ŞEKLİ kısmına bakın. Sağlanmayan Malzemeler Otoklav (100 ± 2 C ye ayarlı), gaz ocağı veya elektrikli ocak; su banyosu (48 50 C); defibrine kan (yalnızca kan plaklarının hazırlığı için) steril cam malzemeler ve steril plastik Petri kutuları veya tüpler. Yardımcı reaktifler ve gerekli laboratuvar ekipmanı. BA-256665.03-2 -
Reaktif Hazırlanması BD Tryptic Soy Agar ı (Şişe Besiyeri) bir otoklav veya gaz ocağında ısıtarak sıvılaştırın. Alternatif olarak, şişe sıcak bir plağa yerleştirilen su içeren kavanoza koyulup kaynama sıcaklığına getirilebilir. Basınç değişimini sağlamak için ısıtmadan önce kapağı hafifçe gevşetin. Uyarı: Besiyerinin sıvılaştırılması için mikrodalga fırınların kullanılması önerilmemektedir. Besiyeri şişelerini mikrodalga fırına metal kapaklar ile koymayın. Aşırı ısıtma içeriği bozabileceğinden ve muhtemelen yetersiz mikrobiyal performansa yol açabileceğinden, otoklav kullanırken sıcaklığı en fazla 100 +/- 2 C ye ayarlayın. Sıcak plak ve/veya su banyosu kullanırken, tüm besiyerini çözmeye yetecek kadar uzun süre kaynatın. Besiyerinin tamamen sıvılaşması için ihtiyaç duyulan süre önemli ölçüde değişebilir ve ısıtma cihazının kullanımdan önceki gerçek sıcaklığına, vat gücüne, boyutuna ve kaptaki besiyerinin hacim ve sıcaklığına bağlıdır. İlk kullanımdan sonra sıvılaştırma için ihtiyaç duyulan sürenin test edilmesi ve kaydedilmesi önerilir. Tamamen sıvılaştıktan sonra, kabı ısıtma cihazından çıkarın ve 48 ila 50 C ye ayarlanmış su banyosuna yerleştirin. Uyarı: Isıya karşı koruyucu eldivenler giyin! Camın çatlamasına neden olabileceğinden, soğutmayı hızlandırmak için sıcak kabı buz banyosuna veya soğuk suya koymayın. Ciddi yanma riski! Kabı su banyosunda tüm besiyerinin ayarlanan sıcaklığa soğuması için yeterli süre bekletin. Defibrine kan (örn., %5 koyun kanı) veya (kullanmadan önce oda sıcaklığına getirilmesi gereken) ısıya duyarlı diğer destekler eklenirse, besiyerinin sıcaklığı 50 C den daha yüksek olmamalıdır. Desteğin eklenmesi ve plaklara dökme sırasında aseptik koşullar uygulayın! Steril kaplar veya tüpler kullanın. Desteğin eklenmesinden sonra besiyerini hafifçe karıştırın, fakat köpük ve kabarcık oluşmasından kaçının. Yüzey inokülasyonu isteniyorsa besiyerini kaplara dökün. 90 ila 100 mm normal bir kap için, 19 ila 21 ml uygun bir hacimdir. Tamamlanmış besiyerini katılaşmaya bırakın, plakları ters çevirin ve yeterli süre oda sıcaklığında kurumaya bırakın (tamamen katılaşma için, gece boyunca 18 ila 23 C de saklayın). Yeni plastik torbalara sarın ve 2 ila 8 C de saklayın. Bu besiyerinin hazır plakları 5 ila 7 gün kullanılabilir. Plağa dökme yöntemi uygulanacaksa, test edilecek maddeyi veya seyreltimini boş kaba ekleyin, üzerini besiyeri ile kaplayın, karıştırmak için kabı hafifçe çevirin ve tamamen katılaşmasını bekleyin. Tüplerde yatık agar hazırlanması için tüplere 48 ila 50 C ye soğutulmuş uygun miktarda sıvılaştırılmış besiyeri ekleyin ve istenen yatık pozisyonda katılaşmaya bırakın. Tüpler vida kapakları ile sıkıca kapatıldığında, karanlıkta oda sıcaklığında veya 2 ila 8 C de saklandığında 2 ila 3 hafta kullanılabilir. Kullanımdan önce, besiyeri yüzeyi aşırı ıslak olmamalıdır. Şişe besiyerini yalnızca bir defa sıvılaştırın. Tekrarlanan ısıtma besiyerinin içeriğine zarar vererek yetersiz mikrobiyal performansa yol açacağından, sonrasında hiçbir artığın ikinci defa katılaşma ve sıvılaşmasına izin vermeyin. Örnek Türleri Petri kutularına dökülen zenginleştirilmemiş besiyeri çeşitli prosedürlerde, örn. farmasötik testler için, kullanılabilir. Kan ile zenginleştirilmedikçe (örn., %5 koyun kanı), klinik mikrobiyolojide klinik örneklerden elde edilen patojenler için izolasyon besiyeri olarak kullanılmamalıdır. %5 kan ile zenginleştirilse, plaka besiyeri tüm örneklerden elde edilen patojenlerin birincil izolasyonu için evrensel olarak kullanılabilir. Örneklerin alınması ve işlenmesi için referanslara bakın. 4,10 Tüplere doldurulan yatık besiyeri doğrudan klinik örneklerle kullanılmamalı yalnızca bakteri kültürlerinin gelişimi ve idamesi için kullanılmalıdır. BA-256665.03-3 -
Test Prosedürü Petri kutusu veya tüp içerisinde bulunan tamamlanmış besiyerinin agar yüzeyleri kullanım öncesi düz ve nemli olmalı fakat aşırı nemli olmamalıdır çünkü bu durum birleşik gelişime neden olabilir. Spesifik yöntemler için ilgili referanslara bakın. 2,6,7 Kan ile zenginleştirilmiş plaklar Örnek laboratuvara ulaştığında olabildiğince kısa sürede örneği sürme yöntemi ile ekin. Sürme plak, temel olarak karışık flora içeren örneklerden saf kültürleri izole etmek için kullanılır. Alternatif olarak, eğer materyal doğrudan swabdan geliştirilecekse, swabı kenarın yüzeyinde küçük bir alanın üzerinde döndürün; ardından bu inoküle edilmiş alandan sürme yöntemi ile ekim yapın. Tüpleri veya plakları seçilen koşullarda inkübe edin. Klinik örnekler için kullanılacaksa, 18 ila 48 saat boyunca (ya da gerekli ise daha uzun bir süre) 35 +/- 2 C de ya da organizmalar için uygun bir şekilde inkübe edin. Hijyen izlenmesi için kullanılacaksa, 5 güne kadar 30 ila 35 C de inkübe edin. Farmasötik malzemeler için kullanılacaksa referanslara bakın. 1,2 Tüplerdeki yatık besiyeri bakteri kültürlerinin kültivasyonu ve idamesi için kullanılır. Suşu doğrudan steril su veya tuz çözeltisinde süspansiyondan sonra tüm yatık yüzeye sürme yöntemiyle ekin. İzolat için gerektiği şekilde inkübe edin. İnkübasyon sırasında, havalanmaya izin vermek için kapaklar hafifçe gevşetilebilir. İnkübasyondan sonra ve saklama sırasında, tamamen kapatın. İnkübasyondan sonra, plaklar birleşik gelişim alanı gösterebilir. Sürme yöntemi ile ekim yapma prosedürü, aslında, bir seyreltme tekniği olduğundan, sürme yöntemi ile ekim yapılan alanlarda sınırlı miktarda mikroorganizma birikir. Dolayısıyla bu alanlardan bir veya daha fazlası, örnekte bulunan organizmaların izole kolonilerini göstermelidir. Ayrıca, her organizmanın gelişimi, sürme yöntemi ile ekim yapılan her alanda gelişim temelinde yarı kantitatif olarak puanlanabilir. Plağa dökme yöntemi: Uygun referanslara bakın. 1,2,6,7 Uygun inokülum ile inoküle edilmişse, yatık besiyerleri tüm yüzeyde gelişim gösterecektir. Tüpler kültür canlılığı kaybı olmaksızın birkaç hafta buzdolabında saklanabilir. Hayatta kalma süresi suşlara göre değişir. BD Tryptic Soy Agar dan (Şişe Besiyeri) hazırlanan tamamlanmış besiyerinde gelişen organizmaların sayısı ve tüpleri çok fazladır. Bu sebeple, burada görünüş hakkında hiçbir spesifik detay verilemez. Referanslara bakın. 4,9,10 Daha detaylı bir tespit ve belirlemeye olanak sağlamak üzere, besiyerlerinde elde edilen izolatlardan uygun alt kültürler oluşturulmalıdır. PERFORMANS ÖZELLİKLERİ VE PROSEDÜRÜN KISITLI OLDUĞU ALANLAR BD Tryptic Soy Agar çeşitli endüstriyel mikrobiyoloji prosedürlerinde örn., mikrobiyolojik sınır testi ve su ve gıda mikrobiyolojisinde kullanılmaktadır. 1-3,6,7 Zenginleştirilmemiş Tryptic Soy Agar birçok daha az güç üreyen bakterinin örn., Enterobacteriaceae, fermente edici olmayan Gram negatif çubuklar (Pseudomonas ve diğer birçoğu), enterokoklar, stafilokoklar, spor oluşturan bakteriler (Bacillus ve ilgili cinsler) ve benzer gelişim gereklilikleri olan diğer organizmaların kültivasyonu için kullanılır. Besiyeri Neisseria veya Haemophilus türleri gibi çok güç üreyen bakterilerin veya özel besin gereksinimleri olan diğer organizmaların izolasyonu ve kültivasyonu için uygun değildir ve güç üreyen katı anaerobların izolasyonu için optimum besiyeri değildir. Bu sebeple, klinik mikrobiyolojide kullanımı özel testler ile sınırlıdır, örn., X, V, ve XV faktör stripleri ile Haemophilus un ayrıştırılması. 8 Kan ile zenginleştirilmiş (örn., %5 koyun kanı) Tryptic Soy Agar, klinik mikrobiyolojide aerobik bakteriler için birincil izolasyon besiyeri olarak sık sık kullanılmaktadır. Ayrıntılar için referanslara bakın. 3-5,8-10 BA-256665.03-4 -
Zenginleştirilmemiş Tryptic Soy Agar dezenfektanlar veya koruyucuları aktif olarak nötralize eden bileşikler içermez. Buna benzer bileşikler içeren maddeler veya daha önceden dezenfekte edilmiş yüzeyler izlenecekse, Tryptic Soy Agar with Lecithin and Polysorbate kullanılması veya besiyerinin uygun bir şekilde zenginleştirilmesi önerilir. REFERANSLAR 1. U.S. Pharmacopeial Convention, Inc. The U.S. Pharmacopeia /The national formulary. U.S. Pharmacopeial Convention, Inc., Rockville, Md., USA (Refer to the latest edition) 2. Council of Europe. European Pharmacopoeia. European Pharmacopoeia Secretariat. Strasbourg/France. (Refer to the latest edition) 3. MacFaddin, J.F. 1985. Media for isolation-cultivation- identification-maintenance of medical bacteria, vol. 1, Williams & Wilkins, Baltimore. 4. Baron, E.J., L.R. Peterson, and S.M. Finegold. 1994. Bailey & Scott's diagnostic microbiology, 9th ed. Mosby-Year Book, Inc., St. Louis. 5. Nash, P., and M.M. Krenz. 1991. Culture media. In: A. Balows, W.J. Hausler, Jr., K.L. Herrmann, H.D. Isenberg, and H.J. Shadomy (ed.), Manual of clinical microbiology, 5th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 6. Eaton, A.D., L.S. Clesceri, and A.E. Greenberg (ed.). 1995. Standard methods for the examination of water and wastewater, 19th ed. American Public Health Association, Washington, D.C. 7. Downes, F.P., and K. Ito (ed.). 2001. Compendium of methods for the microbiological examination of foods, 4th ed. American Public Health Association, Washington, D.C. 8. Campos, J.M. 1995. Haemophilus. In: P.R. Murray, E.J. Baron, M.A. Pfaller, F.C. Tenover, and R.H. Yolken (ed.), Manual of clinical microbiology, 6th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 9. Chapin, K.C., and T.-L. Lauderdale. 2003. Reagents, stains, and media: bacteriology. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8 th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 10. Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). 2003. Manual of clinical microbiology, 8 th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 11. CLSI (formerly NCCLS) Document M22. Quality assurance for commercially prepared microbiological culture media (Refer to latest version) Clinical Laboratory Standards Institute. Wayne, PA, USA. AMBALAJ/TİCARİ TAKDİM ŞEKLİ BD Tryptic Soy Agar (kısmen tamamlanmış şişe besiyeri). Kat. No. 256665 cpu 10 250 ml şurup şişesinde 100 ml dolum hacmi Kat. No. 257105 cpu 12 500 ml düz şişede 250 ml dolum hacmi Kat. No. 257106 cpu 10 500 ml şurup şişesinde 500 ml dolum hacmi Kat. No. 257240 cpu 4 500 ml laboratuvar şişesinde 400 ml dolum hacmi EK BİLGİ Daha fazla bilgi için lütfen yerel BD temsilcinizle temasa geçin. Becton Dickinson GmbH Tullastrasse 8 12 D-69126 Heidelberg/Germany Phone: +49-62 21-30 50 Fax: +49-62 21-30 52 16 Reception_Germany@europe.bd.com http://www.bd.com http://www.bd.com/europe/regulatory/ ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection BD, BD Logo and all other trademarks are the property of Becton, Dickinson and Company. 2012 BD BA-256665.03-5 -