Revizyon çubuğu, önceki versiyonda yapılan güncellemeleri göstermektedir. Kullanım Amacı İnsan serumu veya plazmasındaki Hepatit A Virüsüne (HAV) özgü IgM antikorlarının kalitatif tespiti için enzim immün testi. Enzim immün testi BEP III Sistemi, BEP 2000 Sistemi veya BEP 2000 Advance Sistemi ELISA işlemcileriyle işlenebilir. Testin otomatik olmayan şekilde çalışılması da mümkündür. Özet ve Açıklama Hepatit A virüsü 1 4 kaynaklı karaciğer enfeksiyonları oldukça yaygındır. HAV'nin bulaşması öncelikli olarak smear enfeksiyonu veya kontamine gıda ürünleri (örn. midyeler) yoluyla meydana gelir. İnkübasyon süresi ortalama 25 gündür. Hastalığın seyri genellikle hafiftir ve fulminan formlar nadirdir. Ateş, bulantı ve kusma hastalığın başlangıcında oluşabilir. Akut viral hepatit A'nın serolojik tanısı, hepatit A virüsüne karşı IgM sınıfının spesifik antikorlarının tespitine dayanır. Spesifik Anti-HAV IgM antikorlarının oluşumu, yakın zamandaki hepatit A enfeksiyonunun belirtisidir. Yöntem Prensibi Reaktifler Enzygnost Anti-HAV/IgM, katı fazda spesifik antijenler yerine μ-zincir spesifik anti-insan IgM antikorları kullanılarak yapılan μ yakalama prensibine dayanan enzim immün testidir. Test örneğinde bulunan HAV'ye karşı spesifik IgM antikorları, test plağının reaksiyon kuyucuklarında anti-insan IgM antikorlarına bağlanır. Önceden oluşmuş HAV antijen kompleksi ve POD işaretli anti-hav antikorları spesifik antikorlara bağlıdır. Kompleksin enzim kısmı Kromojen Çalışma Solüsyonunun maviye dönüşmesine neden olur. Bu reaksiyon Durdurma Solüsyonu POD ilave edilmesi yoluyla sonlandırılır ve rengin sarıya dönüşmesine sebep olur. Renk yoğunluğu, örnekteki IgM antikorlarının immünokimyasal reaktifliğinin bir ölçütüdür. Simgeler Sağlanan materyaller Enzygnost Anti-HAV/IgM MTP Enzygnost Anti-HAV/IgM test plağı 1 prç CONJUGATE Anti-HAV Konjugat (IgM) 1 x 0,4 ml ANTIGEN HAV Antijen (IgM) 3 x 5 ml CONTROL + Anti-HAV/IgM Kontrol Serumu, pozitif 1 x 0,25 ml CONTROL Anti-HAV/IgM Kontrol Serumu, negatif 1 x 0,4 ml COLOR BLUE Enzygnost a için mavi Renk Solüsyonu 1 x 12,5 ml WASH POD Yıkama Solüsyonu POD a 1 x 100 ml SUBSTRATE TMB Tampon/Substrat TMB a 1 x 30 ml CHROMOGEN TMB Kromojen TMB a 1 x 3 ml STOP POD Durdurma Solüsyonu POD a 1 x 100 ml EMPTY VIAL CHROM SOL Kromojen çalışma solüsyonu için boş şişe 1 prç OQEMG11C48 Rev. 03 TR 2015-04 1/11
Simgeler Sağlanan materyaller Yapışkan folyolar Polietilen torba Barkod Değer Tablosu Kullanım Talimatları 6 prç 1 prç 1 prç 1 prç a Bu bileşenler Enzygnost /TMB kit ( REF OUVP) için Yardımcı Reaktiflerde de mevcuttur. Test plağı, konjugat, antijen ve bunların yanı sıra Anti-HAV/IgM Kontrol Serumu, pozitif ve Anti HAV/IgM Kontrol Serumu, negatif, ambalaj üzerinde yazılı olarak temin edilen ve barkod değer tablosunda belirtilen sırayla 6 haneli lot numarası kombinasyonunda kullanılmalıdır. Aynısı, Kromojen TMB ve Tampon/Substrat TMB reaktifleri için de geçerlidir. Gerekli olan ancak sağlanmayan ek materyaller Bileşim İzotonik Salin (8,5 g NaCl/L distile veya deiyonize su) Enzygnost Anti-HAV/IgM test plağı: İnsan IgM'sine karşı poliklonal antikorlarla (keçiden) kaplı mikrotitrasyon plağı Anti-HAV Konjugat (IgM): HAV'ye karşı monoklonal antikorlar (fare), TRIS/HCl tamponunda peroksidaz ile konjuge Koruyucu: fenol ( 1 g/l) HAV Antijeni (IgM): İnsan fibroblastlarından deaktive edilmiş HAV antijeni Koruyucu: fenol ( 1 g/l) Anti-HAV/IgM Kontrol Serumu, pozitif: Fosfat tamponundaki HAV'ye karşı IgM antikorları içeren insan serumu Koruyucu: fenol ( 1 g/l) Anti-HAV/IgM Kontrol Serumu, negatif: Fosfat tamponundaki HAV'ye karşı antikorlar içermeyen insan serumu Koruyucu: fenol ( 1 g/l) Enzygnost için mavi Renk Solüsyonu: TRIS/HCl tampon, mavi renk Boya: Patent Mavisi V 80 Koruyucular: amfoterisin (~ 5 mg/l) gentamisin (~ 100 mg/l) Yıkama Solüsyonu POD: Tween içeren fosfat tamponu Koruyucu: fenol ( 1 g/l) Tampon/Substrat TMB: Asetat tamponu içinde hidrojen peroksit Koruyucu: n-butanol (%< 1) Kromojen TMB: Tetrametilbenzidin dihidroklorür Durdurma Solüsyonu POD: Sülfürik asit (0,25 mol/l) Uyarılar ve Önlemler Yalnızca in-vitro tanı amaçlı kullanım içindir. Test, toplu örnekler için değil ayrı ayrı örneklerin test edilmesi için geliştirilmiştir. 2/11 2015-04 OQEMG11C48 Rev. 03 TR
Uyarı! STOP POD H290, H314: Metaller için korozif olabilir. Ciddi cilt yanıkları ve göz hasarına neden olur. P280, P310, P301, P330, P331, P303, P361, P353, P305, P351, P338, P390, P501: Koruyucu eldiven/koruyucu giysi/gözlük/maske kullanın. Hemen bir ZEHİR DANIŞMA MERKEZİ'ni veya doktoru arayın. YUTULMASI HALİNDE: Ağızınızı çalkalayınız. Kusmaya ZORLAMAYIN. CİLT ÜZERİNDEYSE (ya da saç): Kontamine olmuş tüm giysiler acil olarak çıkarılmalıdır. Cildinizi suyla durulayınız. GÖZLE TEMAS ETMESİ HALİNDE: Suyla bir kaç kere dikkatlice çalkalayınız. Kontakt lens kullanıyorsanız, mümkünse çıkarınız ve gözlerinizi yıkamaya devam ediniz. Malzeme hasarını önlemek için dökülen sıvıyı emdirin. İçeriği ve kabı tüm yerel, bölgesel ve ulusal düzenlemelere uygun şekilde bertaraf edin. DİKKAT! POTANSİYEL BİYOLOJİK TEHLİKE In Vitro Tanı Amaçlı Tıbbi Cihazlara İlişkin AB Direktifi ile uyumlu veya ABD Gıda ve İlaç Dairesi (FDA) tarafından onaylanmış testler kullanılarak, insan immün yetmezlik virüsü (HIV) 1 ve 2, hepatit B virüsü (HBV) ve hepatit C virüsü (HCV) bakımından, her bir donör ya da donör birimi test edilmiş ve negatif olduğu bulunmuştur. Bilinen hiçbir test bulaşıcı etkenlerin var olmadığı konusunda tam güvence sunamayacağı için, insanlardan elde edilen tüm örneklerin gerekli dikkat ve özen gösterilerek kullanılması gerekmektedir. İnsan fibroblastlarından izole edilen HAV antijeni, geçerli virüs deaktivasyon prosedürü (β-propiolakton ile dönüşüm) aracılığıyla deaktive edilir. Yine de güvenliği sağlamak için HAV antijeni dikkatle kullanılmalıdır. Test prosedürünün tamamı boyunca koruyucu gözlüklerin takılması tavsiye edilir. Kullanılan eldivenlerin maruz kalınan materyallere karşı koruma sağlama yeterliliği bilgisi için lütfen üretici talimatlarına uyun. Güvenlik bilgi formları (MSDS/SDS) www.siemens.com/diagnostics adresinden edinilebilir. Tampon/Substrat TMB, Kromojen Çalışma Solüsyonu ve Durdurma Solüsyonu POD un ağır metal iyonları ya da oksidasyon maddeleri ile temasından kaçınılmalıdır (sıvı ile doğrudan temasa geçen metal parçaları bulunan pipetler kullanmayın). Substrat reaksiyon aşamaları, hipoklorit içeren dezenfektanların yakınında gerçekleştirilmemelidir. Kromojen Çalışma Solüsyonu test plağına aktarılmadan önce bir anda mavi renge dönerse solüsyon kontamine olmuş demektir; bu durumda temiz bir kap içinde yeni solüsyon hazırlanmalıdır. Yukarıda bahsedilen solüsyonların ciltle temas etmesinden kaçınılmalıdır. İmha etmek için, katı bulaşıcı malzemelerin en az 1 saat 121 C'de otoklavlanması tavsiye edilir. Aspire edilen tüm solüsyonlar seri olarak bağlanmış iki kapta toplanmalıdır. Her iki kap içinde patojenik insan virüslerini etkisizleştirebilecek dezenfektan bulunmalıdır. Üretici tarafından belirtilmiş olan konsantrasyonlara ve reaksiyon sürelerine uyulmalıdır. Reaktiflerin Hazırlanması Teste başlamadan önce tüm reaktifleri ve test örneklerini 18 ile 25 C ye getirin. Bu adımda test plaklarından folyo torbayı çıkartmayın. Testi işlemeye başlamadan önce gerekmeyen stripleri yuvadan çıkartın ve bunları daha sonra kullanmak üzere ambalajdaki polietilen torbaya koyun (Bkz. Tablo 1). Reaktifler ile reaktif çalışma solüsyonlarının karıştırılması gerekiyorsa, köpük oluşmasını engelleyin. Anti-HAV Konjugatını (IgM) 1+50 HAV Antijeni (IgM) ile seyreltin, örn., 0,1 ml Anti-HAV Konjugatını (IgM) orijinal HAV Antijen (IgM) şişesine pipetleyin (5,0 ml). Önemli: Anti-HAV Konjugatını (IgM) HAV Antijeni (IgM) içinde seyrelttikten sonra, spesifik konjugattan ve teste eklenen HAV antijeninden bir immün kompleks oluşur. Bu kompleks oluşumu 1 saat sürer ve ideal olarak örneklerin inkübasyonu sırasında meydana gelmelidir. Bu OQEMG11C48 Rev. 03 TR 2015-04 3/11
nedenle, Konjugat Çalışma Solüsyonunun hazırlanması test prosedüründen önce yapılmalıdır (fakat komplekslerin sınırlı stabilitesinden dolayı kullanmadan maksimum 4 saat önce). Örnekleri seyreltmek üzere, Enzygnost için 2,5 ml mavi Renk Solüsyonu ekleyerek 50 ml izotonik salin mavi-mor boyanabilir. Her test plağı için 20 ml Yıkama Solüsyonu POD u distile ya da deiyonize suyla 400 ml ye seyreltin. Önemli: Seyreltilmemiş Yıkama Solüsyonu POD aynı zamanda test plağındaki örnekleri seyreltmek için de kullanılır. En az 15 ml seyreltilmemiş Yıkama Solüsyonu POD test prosedürü için saklanmalıdır (adım 2). Her test plağı için, 1 ml Kromojen TMB'yi, 10 ml Tampon/Substrat TMB ile, temin edilen boş plastik şişe içinde seyreltin ve ışıktan koruyarak saklayın. Kullanıldıktan sonra şişeyi dikkatli bir şekilde distile su veya deiyonize su ile durulayın. Teknik nedenlerden ötürü (aşırı dolum), Kromojen TMB şişesi ile Tampon/Substrat TMB şişesinin tüm içeriklerinin bir araya toplanmasına izin verilemez. Saklama ve Stabilite Test kitinin bileşenleri açılmadan belirtilen sıcaklıkta saklandığı takdirde etiketlerin üzerinde belirtilen tarihe kadar kullanılabilir. Açılmış veya seyreltilmiş reaktiflerin kullanımı ile ilgili stabilite ve saklama verilerinin tamamı Tablo 1 de görülebilir. Gerekli Olan Donanım BEP III: Örnekleri ve kontrolleri manuel olarak dağıttıktan sonra testin otomatik olarak işlenmesi ve değerlendirilmesi için BEP 2000/BEP 2000 Advance : Testin tam otomatik olarak gerçekleştirilmesi ve değerlendirilmesi için Pipetler: Sabit veya değişken hacimli piston tipi pipetler veya hacmi ayarlanabilir tek veya çok kanallı pipetler Testin otomatik olarak işlenmemesi durumunda ek olarak aşağıdakiler de gereklidir: İnkübatör: Kaplanan su banyosu (37 ±1 C) veya benzer inkübasyon yöntemi Yıkama cihazı: Mikrotitrasyon plak yıkayıcı Fotometre: Mikrotitrasyon plakları için uygun fotometre, ölçüm dalga boyu 450 nm, referans dalga boyu 650 nm (uygun olduğunda 615 nm ile 690 nm arası). Testte kullanılan tüm ekipman onaylanmış olmalıdır. Örnek Toplama ve Kullanma Prosedür Uygun olan örnekler standart laboratuvar teknikleriyle elde edilmiş olan ayrı ayrı örneklerdir (insan serumları veya sitratlı/edta'lı/heparinize edilmiş plazma). Örnekler 2 ile 8 C'de 3 günden fazla saklanmamalıdır. Eğer örnekler daha uzun süreyle saklanacaksa dondurulmalıdır. 1. Örnek seyreltme Anti-HAV/IgM kontrol serumu, pozitif ve negatif dışında tüm örnekler, 1+100 (mavi-mor boyanmış) olarak izotonik salin ile seyreltilmelidir, örn. 10 µl örneğin test tüpüne pipetlenmesi ve 1 000 µl izotonik salinin eklenmesi. Nazikçe çalkalayarak karıştırın. 2. Konjugat/Antijen inkübasyonu (immün kompleks oluşumu) Konjugat Çalışma Solüsyonu, konjugatı dağıtmadan önce maksimum 4 saat fakat minimum 1 saatte hazırlanmalıdır (Reaktiflerin Hazırlanması kısmına bakın). 4/11 2015-04 OQEMG11C48 Rev. 03 TR
Enzygnost Anti-HAV/IgM Otomatik Çalışılmayan Test Prosedürü 1. Test şeması: Gereken test kuyucuğu sayısı, örnek sayısı alınarak ve Anti-HAV/IgM Kontrol Serumu, pozitif ve Anti-HAV/IgM Kontrol Serumu, negatif tayini sayısı (n=6) eklenerek belirlenir. 2. Yıkama Solüsyonu POD'yi önceden dağıtın: Test plakasının gereken her bir kuyucuğuna 100 µl seyreltilmemiş Yıkama Solüsyonu POD'yi dağıtın. Yıkamayın! 3. Örnekleri dağıtın: İlk 4 kuyucuğun (A1-D1) her birine 10 µl Anti-HAV/IgM Kontrol Serumu, negatif, sonraki kuyucuğa (E1) 10 µl Anti-HAV/IgM Kontrol Serumu, pozitif ve sonraki kuyucukların her birine 10 µl seyreltilmiş örnek dağıtın. Serinin sonunda, test plağı sırasına göre, son kuyucuğu 10 µl Anti-HAV/IgM Kontrol Serumu, pozitif ile doldurun. Yukarıdaki pipetleme şemasına alternatif olarak, Anti-HAV/IgM Kontrol Serumu, negatifi pipetledikten sonra Anti-HAV/IgM Kontrol Serumu, pozitifi iki kez pipetlemek de mümkündür. Alternatif pipetleme şeması: İlk 4 kuyucuğun (A1-D1) her birine 10 µl Anti-HAV/IgM Kontrol Serumu, negatif, sonraki 2 kuyucuğa (E1-F1) 10 µl Anti-HAV/IgM Kontrol Serumu, pozitif ve sonraki kuyucukların her birine 10 µl seyreltilmiş örnek dağıtın. Dağıttıktan sonra, pipet ile en az 4 kere çekip bırakarak iyice karıştırın. Her örnek, kendi pipet ucuyla pipetlenmelidir. Pipetleme adımları test plağı başına 15 dakika içinde gerçekleştirilmelidir. Pipetleme işleminin tamamlanmasından sonra test plağını folyo ile kapatın ve derhal inkübatöre koyun. 4. Örnekleri inkübe edin: İnkübasyonu 60 ±2 dakika süreyle 37 ±1 C'de yapın, ardından derhal yıkama adımına geçin. 5. Yıkama: Folyoyu çıkartın ve tüm kuyucukları emdirin. Her kuyucuğa yaklaşık 300 µl seyreltilmiş Yıkama Solüsyonu POD doldurun, plakayı emdirin ve yıkama döngüsünü dört kez tekrarlayın. Yıkama döngüleri tamamlandıktan sonra, derhal bir sonraki reaktifin dağıtılması adımına geçin (aksi takdirde kuyucuklar kuruyabilir). 6. Konjugatı dağıtın: Her bir kuyucuğa 100 µl Konjugat Çalışma Solüsyonu pipetleyin. Ardından test plağını kullanılmamış bir folyo ile kapatın ve derhal inkübatöre yerleştirin. 7. Konjugatı inkübe edin: İnkübasyonu 60 ±2 dakika süreyle 37 ±1 C'de yapın, ardından derhal yıkama adımına geçin. 8. Yıkama: Adım 5 te açıklandığı gibi. 9. Substratın dağıtılması: Her kuyucuğa 100 µl Kromojen Çalışma Solüsyonu pipetleyin ve mikrotitrasyon plağını yeni folyo ile kapatın. 10. Substratın inkübasyonu: Substrat dağıtma adımından hemen sonra 18 ile 25 C'de ışıktan koruyarak 30 ±2 dakika inkübe edin. 11. Reaksiyonun durdurulması: Folyoyu çıkartın. Substratın dağıtılması adımındaki ile aynı zamanlamayla kuyucukların her birine 100 µl Durdurma Solüsyonu POD ilave edin. 12. Ölçüm: Test plağını bir saat içinde 450 nm de okuyun. Önerilen referans dalga boyu 650 nm'dir (veya gerekli durumlarda 615 ve 690 nm arasıdır). BEP III Sistemi için prosedür BEP III kullanılırken test plakları örnek dağıtma adımına kadar hazırlanmalıdır ("Otomatik Çalışılmayan Test Prosedürü" bölümünde adım 1 ile 3 arası). Hemen ardından açık test plaklarını, yani folyo ile kapatılmamış olanları BEP III içine yerleştirin. Takip eden tüm işlem adımları analiz cihazı tarafından otomatik olarak gerçekleştirilir (bkz. BEP III Kullanım Kılavuzu). BEP III yazılımındaki inkübasyon süresi ayarları ve reaktif hacimleri, Otomatik Çalışılmayan Test Prosedürü bölümünde tarif edilen işlemlerdekinden teknik nedenlerden (sistem hızı) ya da sisteme özel ayarlardan dolayı farklı olabilir, ancak bunlar BEP III üzerinde Enzygnost için doğrulanmıştır. OQEMG11C48 Rev. 03 TR 2015-04 5/11
BEP 2000 Sistemi için prosedür Örnek dağıtma adımları ve bunu takip eden test işlemleri analiz cihazı tarafından tamamen otomatik olarak yapılır (bkz. BEP 2000 Kullanım Kılavuzu). Örneklerin BEP 2000 Sistemi ile işlenmesi Otomatik Çalışılmayan Test Prosedürü altında verilen bilgiden farklı olabilir, ancak BEP 2000 Sistemi üzerinde Enzygnost için doğrulanmıştır. İç Kalite Kontrol Sonuçlar Testin değerlendirilmesi için aşağıdaki kriterler karşılanmış olmalıdır: 1. Anti-HAV/IgM Kontrol Serumu, negatif: -0,010 A 0,150 2. Anti-HAV/IgM Kontrol Serumu, pozitif: A 0,7 Dört Anti-HAV/IgM Kontrol Serumu, negatif absorbans değerinden biri tanımlamaların dışındaysa bu değer yok sayılabilir. Anti-HAV/IgM Kontrol Serumu, pozitif absorbans değerlerinin her ikisi de tanımlamalarla uyumlu olmalıdır. Bu şartlar karşılanmadığı takdirde ilgili test değerlendirme için geçerli değildir. Bu durumda BEP III ve BEP 2000 yazılımı geçersiz test sonucu uyarısı verir. Geçersiz işleme yol açan nedenler araştırıldıktan sonra test tekrar edilmelidir. Değerlendirmeler otomatik olarak BEP III veya BEP 2000 Sistemleri ile yapılır. Lütfen ilgili Kullanım Kılavuzuna başvurun. Yazılım desteği olmadan değerlendirme işlemi yapılmaktaysa, aşağıda belirtilen noktalar dikkate alınmalıdır. Cut-off değeri kullanarak değerlendirme Cut-off değerini hesaplamak için, Anti-HAV/IgM Kontrol Serumu, negatifin geçerli absorbans değerlerinin ortalamasını kullanın ve 0,250 değerini ekleyin: A neg. + 0,250 = cut-off Cut-off değerine dayanarak örnekler aşağıda belirtildiği gibi sınıflandırılmıştır: Anti-HAV/IgM negatif A < cut-off değeri - %10 Anti-HAV/IgM pozitif A > cut-off değeri + %10 Anti-HAV/IgM şüpheli cut-off değeri -%10 A cut-off değeri + %10 Sonuçları şüpheli olan test örnekleri çifte tayin yapmak üzere tekrar test edilmelidir. Sonuç onaylanırsa örnekler şüpheli olarak, aksi takdirde pozitif veya negatif olarak sınıflandırılmalıdır. Sonuçların Değerlendirilmesi Şu an mevcut bilgilere göre, anti-hav/igm testinden alınan pozitif sonucun Hepatit A enfeksiyonu varlığını kanıtladığını veya negatif sonucun hepatit A enfeksiyonu varlığını kabul etmediğini garanti etmez. Prosedürün Sınırlamaları 1. Antikoagülanlar (sitrat, EDTA, heparin) test sonuçlarını etkilemez. 2. Lipemik, ikterik veya hemolitik veya romatoid faktörler, ANA veya sodyum azid içeren örnekler ve ısıyla deaktive edilen örnekler (1 saat, 56 C) testi etkilemez. 3. Kompleks oluşumu gerçekleştiğinde, konjugat çalışma solüsyonu 20 C'de dondurulabilir ve 4 haftaya kadar saklanabilir. Hızlı çözünmeyi takip eden konjugat çalışma solüsyonunun homojenizasyonunu dikkatli bir şekilde sağlayın. Dondurma/çözme döngüsü yalnızca bir kere uygulanabilir. Aynı zamanda, solüsyonun iki kez kullanıldığı zamanı kapsayan, çözünmüş haldeki 4 saatlik toplam stabilitenin aşılmadığı garantiye alınmalıdır ( 20 C'de dondurularak yarıda kesilmiş). 4. Kontrol serumları, doğal insan serumundan hazırlanmıştır. Bu nedenle bulanıklık meydana gelebilir, ancak bunun test sonucu üzerinde hiçbir etkisi yoktur. 5. Reaksiyonun durdurulması sırasında, yüksek düzeyde reaktif örneklerde boya çökelebilir. Bu durum fotometrik değerlendirmeyi etkilemez. 6/11 2015-04 OQEMG11C48 Rev. 03 TR
6. İnkübasyon evresinde test plağı titreşimden korunmalıdır. İnkübatör olarak su banyosu kullanılıyorsa, sağlam bir yüzdürme yardımcısı veya sirkülasyonsuz bir su banyosu kullanılmalıdır. Plağın kuyucukları, ısısı termostatla kontrol altında tutulan suyla temas halinde olmalıdır. Suyun mikrobiyal kontaminasyonunu önlemek için stabilizörler kullanıldığı takdirde, bu gibi bir kontaminasyon spesifik olmayan reaksiyonlara neden olabileceğinden, test plağının yüzeyinin ya da yuvaların sıvıyla temas etmemesi için dikkat edilmelidir. 7. Ürün performansını optimize etmek ve ürün özelliklerini karşılamak amacıyla Siemens Healthcare Diagnostics çeşitli analizörlerde bu reaktiflerin kullanımını onaylamıştır. Kullanıcı tarafından belirlenen değişiklikler sistem performansını ve test sonuçlarını etkileyebileceği için Siemens tarafından desteklenmemektedir. Reaktiflerin Siemens Uygulama Kitapçıklarında veya prospektüslerde belirtilenler dışındaki analizörlerde kullanımı veya kullanım talimatlarında yapılan değişikliklerin geçerliliği kullanıcı tarafından onaylanmalıdır. 8. Bu testin sonucu her zaman hastanın tıbbi geçmişi, klinik durumu ve diğer bulgularla birlikte yorumlanmalıdır. Performans Özellikleri Hassasiyet ve Özgüllük Hassasiyet tespiti için, toplam 251 Anti-HAV/IgM pozitif örnek test edilmiştir ve %99,2 ile 100 (başlangıç testi) sırasıyla %99,2 ile 100 (yeniden test etme) belirlenmiştir. Serokonversiyon örnekleri için testin reaktivitesi 12 serokonversiyon paneli ile test edilmiştir. Enzygnost Anti-HAV/IgM'ın serokonversiyonları saptamada benzer testlerle kıyaslanabilir hassasiyet gösterdiği bulunmuştur. İki bağımsız tesiste (K, M) hassasiyet çalışmaları gerçekleştirilmiş ve aşağıdaki sonuçlar alınmıştır: Örnek popülasyonu Örnek sayısı Başlangıç reaktif örnekleri (M) Anti-HAV/IgM pozitif 123 123 123 (K) Anti-HAV/IgM pozitif 128 127 127 Tekrar test edilen örnekler Serokonversiyon paneli 12 kıyaslanabilir testin hassasiyetine uyan hassasiyet Özgünlük tespiti için, toplam 1 328 Anti-HAV/IgM negatif kan örneği test edilmiştir ve %99,4 ile 100 (başlangıç testi) sırasıyla %99,4 ile 100 (yeniden test etme) belirlenmiştir. İki bağımsız tesiste (K, M) özgünlük çalışmaları gerçekleştirilmiş ve aşağıdaki sonuçlar alınmıştır: Örnek popülasyonu Örnek sayısı Başlangıç reaktif örnekleri (M) normal negatif serumlar 160 0 0 (M) normal negatif serumlar 320 0 0 (M) normal negatif plazmalar 160 0 0 (K) normal negatif serumlar 172 1 1 (K) normal negatif serumlar 516 0 0 Hassasiyet Kesinliği değerlendirmek için, örnekler 5 gün her seferinde 8 kat belirlemede değerlendirilmiştir. Varyasyon katsayılarının (CV) hesaplanması varyans analizi ile gerçekleştirilmiştir. Tekrar test edilen örnekler OQEMG11C48 Rev. 03 TR 2015-04 7/11
Örnek Ortalama absorbans değeri (A) Test içi CV (%) Testler arası Not F 1 0,099 10,9 26,1 F 2 0,468 7,0 7,3 F 3 0,994 4,7 7,0 F 4 2,165 3,2 4,9 F 5 0,066 15,0 30,5 F 6 2,226 3,4 6,7 Testlerin belirli performans özellikleri için belirtilen değerler tipik sonuçları gösterir ve Enzygnost Anti-HAV/IgM özellikleri olarak düşünülmemelidir. Bibliyografya 1. Purcell RH. Hepatitis viruses: changing patterns of human disease. Proc Natl Acad Sci USA. 1994; 91: 2401-6. 2. Mast EE, Alter MJ. Epidemiology of viral hepatitis: an overview. Virology. 1993; 4: 273-83. 3. Lemon SM, Robertson BH. Current perspectives in the virology and molecular biology of hepatitis A virus. Virology. 1993; 4: 285-95. 4. Lemon SM, Binn LN. Serum neutralizing antibody response to hepatitis A virus. J Infect Dis. 1983; 148: 1033-9. Simgelerin Tanımı Tekrar kullanmayınız YYYY-MM-DD Son kullanma tarihi LOT Lot Numarası REF Katalog Numarası Dikkat, ekteki dokümanlara başvurunuz Üretici EC REP Avrupa Birliği Yetkili Temsilcisi <n> sayıda test için yeterlidir Biyolojik Tehlikeler IVD In Vitro Diyagnostik Tıbbi Cihaz Saklama derecesi Kullanım talimatlarına başvurunuz Steril değil CE İşareti CONTENTS İçindekiler Sulandırma hacmi LEVEL Seviye Isı ve güneş ışığından uzak tutun 8/11 2015-04 OQEMG11C48 Rev. 03 TR
BEP, BEP 2000 Advance ve Enzygnost, Siemens Healthcare Diagnostics firmasının ticari markalarıdır. 2008 Siemens Healthcare Diagnostics Products GmbH. Tüm hakları saklıdır. 2015-04 Siemens Healthcare Diagnostics Products GmbH Emil-von-Behring-Str. 76 35041 Marburg/Germany www.siemens.com/diagnostics OQEMG11C48 Rev. 03 TR 2015-04 9/11
Tablo 1 Saklama ve Stabilite Materyal/Reaktif Durum Saklama Stabilite * Test plağı, kalan stripler açıldıktan sonra 2 8 C kurutucu madde içeren torbada 6 hafta Anti-HAV Konjugat (IgM) açıldıktan sonra 1+50 seyreltilmiş 2 8 C 18 25 C 20 C 4 hafta 1 ile 5 saat 4 hafta HAV Antijen (IgM) açıldıktan sonra 2 8 C 4 hafta Anti-HAV/IgM Kontrol Serumu, pozitif Anti-HAV/IgM Kontrol Serumu, negatif açıldıktan sonra 2 8 C 20 C açıldıktan sonra 2 8 C 20 C 4 hafta 3 ay 4 hafta 3 ay Kromojen TMB açıldıktan sonra 2 8 C son kullanma tarihine kadar Tampon/Substrat TMB açıldıktan sonra 2 8 C son kullanma tarihine kadar Kromojen Çalışma Solüsyonu 1+10 seyreltilmiş 2 8 C 15 25 C kapalı kutu ışıktan korunmuş 5 gün 8 saat Yıkama Solüsyonu POD açıldıktan sonra 1+19 seyreltilmiş 2 8 C 2 8 C 18 25 C son kullanma tarihine kadar 1 hafta 1 gün Enzygnost için mavi Renk Solüsyonu açıldıktan sonra 2 8 C son kullanma tarihine kadar Durdurma Solüsyonu POD açıldıktan sonra 2 8 C son kullanma tarihine kadar * her bileşeni en geç son kullanma tarihine kadar kullanın 10/11 2015-04 OQEMG11C48 Rev. 03 TR
Tablo 2 Test Prosedürü Reaktiflerin hazırlanması Örneklerin 1+100 oranında seyreltilmesi izotonda (boyalı). salin 100 µl Yıkama Solüsyonunu dağıtın POD (seyreltilmemiş) Transfer: 4 x 10 µl Kontrol Serumu, negatif 1 x 10 µl Kontrol Serumu, pozitif Her bir seyreltilmiş örnekten 10 µl (1+100) 1 x 10 µl Kontrol Serumu, pozitif İnkübasyon: 60 ±2 dakika (37 ±1 C) Yıkama 4 x 100 µl Konjugat Çalışma Solüsyonu İnkübasyon: 60 ±2 dakika (37 ±1 C) BEP 2000 tam otomatik test işleme Yıkama 4 x 100 µl Kromojen Çalışma Solüsyonu İnkübasyon (ışıktan korunmuş): 30 ±2 dakika (18 ila 25 ) BEP III otomatik test işleme 100 μl Durdurma Solüsyonu (maksimum 60 dakika sonra) Ölçüm: 450 nm ye karşı 650 nm Test sonuçları OQEMG11C48 Rev. 03 TR 2015-04 11/11