ÜRÜN KULLANIM KILAVUZU 1.0 Ürün bilgileri 1.1 Ürün adı : Peroksidaz (Miyeloperoksidaz), Lökosit Boyama Seti 1.2 Ürün Kodu : 5051-100 1.3 Ürün Marka adı : GBL 1.4 Ürün Tanımı: Kemik iliği ve kandaki polimorfonükleositlerin, sitokimyasal boyamasının ışık mikroskobisi ile incelenmesi amacıyla vücut dışında kullanılan (in vitro) tıbbi tanı setidir. 1.5 Ürün Kullanım amacı: Kemik iliği ve kandaki polimorfonükleositlerin, sitokimyasal boyamasının ışık mikroskobisi ile incelenmesi amacıyla kullanılır. 1.6 Ürün Kullanım Şekli: Hematoloji, onkoloji 1.7 Ürün Kullanım Konsantrasyonu: Konsantre ayıraçlar belirtilen usullerde sulandırılıp kullanılır. 1.8 Kullanım süresi: Yıkamalar dahil 16 etaptan oluşur. 1.9 Ürün Kullanım Şekli: Numune ve Hazırlama: Doku numunelerinin hazırlanması: Doku numuneleri formalin fiksatifleri kullanılarak tespit edilmiş olmalıdır. Bilinen usuller kullanılarak fiksatif dokudan uzaklaştırılır. Gömme ortamı olarak parafin kullanılabilir. Doku kesitleri 4-5 mikrometre civarında olmalıdır. Bilinen usuller kullanılarak parafin doku kesitinden uzaklaştırılır. Doku kesiti hidrate edilerek boyamaya hazır hale getirilir. Vücut sıvılarından elde edilen hücre numunelerinin hazırlanması EDTA, EDTA ikipotasyum tuzlu periferik kan numuneleri kullanılabilir. Numuneler alınmalarından itibaren 3 gün içinde incelenmelidir. Numunelerin alındığı kişilerde bulaşıcı bir hastalık mevcudiyeti bilinmediğinden, numuneler infekte materyal olarak kabul edilmeli ve buna uygun tedbirler alınmalıdır. Lama yayılarak havada kurutulan numuneler, 30 dakika içinde glutaraldehid tespitine alınmalıdır. Daldırma metoduyla boyama yapılacaktır. Buna uygun hazırlıklar yapılır. Boyama etaplarının çoğu oda sıcaklığında yapılabilir. 1
Yalnız Glutaraldehid fiksatifi etabı soğutucuda 2-8 C derece arasında yapılacaktır. Bu çözeltinin bulunduğu kap, daha önceden soğutucuya yerleştirilerek, çözeltinin bu sıcaklıkta olması sağlanmalıdır. Konsantre veya instant ayıraçların hazır hale getirilmesi Glutaraldehid fiksatifi 12,5 ml B- Aseton ve 37,5 ml A- Glutaraldehit çözeltisi uygun bir kap içine koyun. Kapağı kapatarak kısa bir süre karıştırın. Daha sonra boyama kabına yerleştirin kabın kapağı kapatın ve soğutucuya yerleştirin. Bakır nitrat çözeltisi Temiz bir kap alın. İçine 1 tüp F- Bakır nitrat ve 50 ml distile su koyun. Kapağı kapatarak karıştırın. Bakır nitratın tamamen erimesini sağlayın. Boyama kabına dökün. DAB tris tampon çözeltisi Temiz bir kap alın. İçine 5 ml C- Tris çözeltisi ve 45 ml distile su koyur. Kapağı kapatarak karıştırın. Çalışma başlayıncaya kadar bu şekilde saklayın. Çalışma başlamadan önce 1 tüp D- Diaminobenzidin ekleyin ve karıştırarak eritin. Boyama kabına dökün. Scott Çözeltisi Temiz bir kap alın. İçine 5 ml I- Scott s konsantre çözeltisi ve 45 ml distile su koyun. Kapağı kapatarak karıştırın. Boyama kabına dökün. % 1 lik hidrojen peroksit çözeltisi Temiz bir kap alın. İçine 1 ml E- Hidrojen peroksit ve 2 ml distile su koyun. Kapağı kapatarak karıştırın. Boyama Metodunun Uygulanması: 1. DAB tris tampon çözeltisi kabına, 0,5 ml tüpte hazırlamış olduğunuz % 1 lik hidrojen peroksit çözeltisi ni ekleyin. Bunun adı, Oksitlenmiş DAB tris tampon çözeltisi olsun. (DİKKAT!!! Lamı ilk önce buna daldırmayın!) 2. Soğutucunuzda bulunan Glutaraldehid fiksatifi çözeltisine preparatı daldırın. 1 dakika sonra silkeleyerek çıkarın. 3. Akar distile suyla 30 saniye civarında dikkatlice yıkayın. 4. Oksitlenmiş DAB tris tampon çözeltisi içine daldırın. 45 saniye sonra silkeleyerek çıkarın. 5. Akar distile suyla 30 saniye civarında dikkatli bir şekilde yıkayın. 6. Bakır nitrat çözeltisi kabına daldırın. Arada sırada daldırıp çıkarın. 2 dakika sonra silkeleyerek çıkarın. 7. Akar distile suyla 30 saniye civarında dikkatli bir şekilde yıkayın. 8. G- Hematoksilin çözeltisi Gill-3 kabına preparatı daldırın. Birkaç kez daldırıp çıkarın. 8-10 saniye kadar sonra silkeleyerek çıkarın. 9. Akar distile suyla 5 saniye civarında dikkatli bir şekilde yıkayın. 10. Scott çözeltisi kabına preparatı daldırın. Bir çok kez daldırıp çıkarın. 12 saniye sonra silkeleyerek çıkarın. 11. Akar distile suyla 5 saniye civarında dikkatli bir şekilde yıkayın. 12. H- Gill's EA çözeltisi kabına preparatı daldırın. 1 dakika sonra silkeleyerek çıkarın. 13. İki kez üçer saniye % 95 lik etanol kabına daldırın veya yıkayın. 14. İki kez üçer saniye absolu etanol kabına daldırın veya yıkayın. 15. Üç kez üçer saniye ksilen kabına daldırın veya yıkayın. 16. Sentetik reçine veya diğerleri ile örtün ve mikroskopta inceleyin. NOT: Boyama süresi olarak başlangıçta prospektüsü dikkate alınız. Daha sonraki çalışmalarınızda çıkan neticelere göre her etabın süresini farklı farklı azaltınız veya arttırınız. Her etapta kendi alışkanlıklarınıza 2
göre en uygun bulduğunuz görsel neticeyi elde ettiğiniz süreyi prospektüse not ederek, buna uygun boyama yapınız. 1.10 Risk faktörleri Ürün içeriğindeki A F ve G ayıraçları çevreye zararlı, tahriş edicidir. B ayıracı kolay alevlenirdir. C,D ve E ayıraçları tahriş edicidir. H ayıracı zehirli, tahriş edicidir. İlgili güvenlik kurallarına uyunuz. Üreticiden Malzeme Güvenlik Bilgi Formu 'nu talep ediniz. 1.11 Ürün raf ömrü : 12 ay (Bir yıl) 1.12 Ürün sınıfı : IVD-CE 1.13 Saklama Sıcaklığı : 2/8 O C Saklama Sıcaklığı Kullanım Süresi Saklama Koşulları Açıldıktan Sonra Kullanım Süresi 2/8 O C 1 Yıl Hemen 1.14 Ürün İçeriği : KOMPONENTLER 100 TEST A- Glutaraldehid çözeltisi 3x50 ml B- Aseton 1x50 ml C- Tris çözeltisi 1x50 ml D- Diaminobenzidin 10x25 mg E- Hidrojen peroksit çözeltisi % 3 1x20 ml F- Bakır nitrat 10x125 mg G- Hematoksilin çözeltisi Gill-3 1x100 ml H- Gill's EA çözeltisi 1x100 ml I- Scott s konsantre çözeltisi 1x100 ml 1.15 Ürün Fiziksel ve Kimyasal Özellikleri: A- Glutaraldehid çözeltisi siz 3
B- Aseton siz C- Tris çözeltisi siz D- Diaminobenzidin Katı toz E- Hidrojen peroksit çözeltisi % 3 siz F- Bakır nitrat Katı toz Mavi 4
G- Hematoksilin çözeltisi Gill-3 Kırmızımsı mor H- Gill's EA çözeltisi I- Scott's konsantre çözeltisi 1.16 Test sonuçları Nötrofil peroksidaz Lenfositler Monosit peroksidaz Eozinofiller Bazofiller Griden siyaha intrasellüler granülasyon Peroksidaz aktivitesi yok Daha zayıf griden siyaha intrasellüler granülasyon Turuncudan kırmızıya Mavi 1.17 Paketleme Bilgisi Ambalaj Türü HDPE; şişe damlalıklı Ambalaj birimleri 50 ml / 100 Test 5
1.18 Uyumlu cihazlar Gerekli olan ancak ürün ambalajında bulunmayan ekipmanlar: Işık mikroskobu, daldırma objektifi, örtme boyaması ünitesi, piset, mavi pipet ucu, 250-1000 μl otomatik pipet, lam kurutma aparatı, laboratuvar saati, kronometre, ısıtıcılı tabla veya bunsen beki, emici kağıt, lamlar, lameller, daldırma yağı. 1.19 Açıklama EA boyası istenirse uygulanmayabilir. Bu durumda alkoller ve ksilenlerden oluşan etap sayısı azaltılabilir. EA boyası kullanılacaksa, mutlaka susuzlaştırma ve temizleme etapları eksiksiz uygulanmalıdır. UYARILAR 1. Ürün ambalajını darbelere karşı koruyunuz. Kapağı açılmış, çatlak, delik, renk değişikliği oluşmuş ürünleri kullanmayınız. 2. Ürün sadece profesyonel kullanıcılar ve genel laboratuvar kullanımına uygundur. 3. Ürünü orijinal ambalajında, ışıktan ve ısıdan muhafaza ediniz. 4. Son kullanma tarihi geçmiş ürünleri kullanmayınız. Son kullanma tarihi geçmiş ürünü resmi yönetmeliklere göre bertaraf ediniz. 5. Buzdolabında 2/8 O C sıcaklıkta muhafaza ediniz. 6. Ürün ilaç değildir. Tedavi amaçlı kullanılamaz. 7. Kullanılan ürünü tıbbi atıkların kontrolü yönetmeliğine gore bertaraf ediniz. ÜRETİCİ: GBL Gül Biyoloji Laboratuvarı Sanayi ve Ticaret Limited Şirketi. İLETİŞİM BİLGİLERİ: Adres : İMES Sanayi Sitesi C Blok 305 sokak No: 16 Esenşehir Ümraniye İstanbul Şehir : İstanbul Ülke : TÜRKİYE Tel : +90 216 364 1500 Faks : +90 216 314 1569 Web : www.gbl.com.tr Email : info@gbl.com.tr 6
1.24 Sembol anahtarı: SEMBOL AÇIKLAMA Son Kullanma Tarihi Parti kodu sembolü Üretim tarihi sembolü Katalog numarası sembolü Dikkat kullanım kılavuzuna bakın Kaynaklar: 1. A. T. Brice. 1933. Three notes on biological stains; I. Combined peroxidase Wright s stain on blood films. Am. J. Clin. Path. 3. 381-383. 2. R. C. Graham. M. J. Karnovsky. 1966. Glomerular permeability. Ultstructural cytochemical studies using peroxidases as protein traces. J. Exp. Med. 124. 1123. 3. J. S. Hanker. J. Laszlo. J. O. Moore. 1978. The light microscopic demonstration of hydroperoxidase positive phi bodies and rods in leukocytes in acute myeloidleukemia. Histochemistry. 58. 241. 4. G. W. Gill. J. K. Frost. K. A. Miller. 1974. A new formula for a half oxidized hematoxylin solution that neither overstains nor requires differentiation. Acta. Cytol. 18. 300. 7